MATERIALES Y MÉTODOS

Este estudio se llevó a cabo en las instalaciones de la planta piloto de la universidad de Sucre
sede granja el perico. Se utilizo almidón soluble como sustrato y solución enzimática de alfa
amilasa. Primeramente, como medio se preparó una solución de almidón al 18% p/p, se
estabilizó el pH utilizando NaOH al 0,1N dependiendo del pH inicial obtenido en las muestras,
hasta lograr un valor de 5, así mismo se procedió a estabilizar la velocidad de agitación a 400
rpm y de igual forma la temperatura, las cuales fueron de 42, 49, 56, 63, 70 y 77ºC. Se adicionó
100 μL de enzima en cada uno de los biorreactores agitando continuamente. Se tomaron
muestras de 500 μL de cada biorreactor cada 25 minutos, desde el tiempo 0 hasta los 75 minutos,
se inactivó la enzima en agua hirviendo a 100ºC durante 5 minutos con posterior choque térmico
en baño de hielo a -4ºC. Para la determinación de la concentración de azucares reductores
(Producto) presente en cada muestra para cada tiempo se utilizó la técnica del DNS.

Se procedió a calcular los parámetros de la función de Arrhenius linealizada. Primero se calculó

las velocidades para cada una de las temperaturas de trabajo (42, 49, 56, 63, 70 y 77ºC)
requeridas para el cálculo de la constante de velocidad (K) usando la siguiente formula:

[𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛]𝐼𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 − [𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛]𝐹𝑖𝑛𝑎𝑙
𝑣=
𝑇𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜𝐵𝑖𝑜𝑟𝑒𝑎𝑐𝑐𝑖ó𝑛

Luego, se graficó Ln (v) vs 1/T, partiendo de la fórmula:

𝐸𝑎
𝐿𝑛(𝑣) = − + 𝐿𝑛(𝐴)
𝑅𝑇

𝐸𝑎
Donde la pendiente equivale a − 𝑅𝑇 y el intercepto es igual a 𝐿𝑛(𝐴)