PRACTICA

No. 5
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA BIOLOGÍA

Tipos de SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

INTRODUCCION

Un cultivo es el crecimiento de poblaciones microbianas de forma controlada en un medio

artificial. En biología, y específicamente en microbiología, un cultivo es un método para la
multiplicación de microorganismos, tales como bacteria, hongos y parásitos, en el que se
prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado como un
método fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan
enfermedades en medicina humana, ambiental y veterinaria.

Un microorganismo se puede sembrar en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido

de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azúcares simples
hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar
una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se
siembra en un medio de cultivo sólido donde las células que se multiplican no cambian de
localización; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisión
binaria una colonia macroscópica compuesta por decenas de millones de células similares a la
original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecerá como cultivo
puro de un solo tipo de bacteria.

La principal diferencia entre un medio de cultivo sólido y uno líquido es que el medio de cultivo
sólido contiene un 1,5-2% de agar-agar, mientras que el medio líquido no contiene agar-agar.

Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfológicamente que es imposible

diferenciarlas sólo con el uso del microscopio. En este caso, para identificar cada tipo de
bacteria, se estudian sus características bioquímicas sembrándolas en medios de cultivo
especiales. Así, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayoría
de las especies bacterianas, pero no la del tipo que se desea averiguar si está presente. Otras
veces, el medio de cultivo contiene determinados azúcares especiales que sólo pueden utilizar
algunas bacterias. En algunos medios se añaden indicadores de pH que cambian de color cuando
uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos ácidos. Si las bacterias
son capaces de producir fermentación, generan gases que pueden ser detectados cuando el
cultivo se realiza en un tubo cerrado.

Con otros medios de cultivo se puede identificar si las bacterias producen determinadas enzimas
que digieren los nutrientes. Así, algunas bacterias con enzimas hemolíticas (capaces de romper
los glóbulos rojos) producen hemólisis y cambios apreciables macroscópicamente en las placas
de agar-sangre.

Los diferentes medios y técnicas de cultivo son esenciales en un laboratorio de microbiología de

un hospital, en una veterinaria, un laboratorio ambiental, …etc. pues sirven para identificar a las
bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibióticos a los que son sensibles
esas bacterias. Los cultivos suelen usarse en medicina para determinar la presencia de agentes
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Dr. Marco Antonio Loó pez Torres Luis Donaldo Colosio y Sahuaripa s/n
Telef/Fax: 6622592197 y 6622592185 y 6622592169
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patógenos en una gran cantidad de muestras como fluidos, orina, sangre, heces, suelo,
alimentos, agua, plantas, entre otras.

OBJETIVO:

Conocer los diferentes tipos de siembra de microorganismos en diferentes medios de cultivo y a

su vez su utilidad en la identificación del microorganismo, a través de la composición de los
medios de cultivo, sus características bioquímicas y los indicadores de pH que cambian de color
cuando uno de los nutrientes es fermentado.

MATERIAL Y EQUIPO A UTILIZAR

-Incubadora muestras de bacterias/ muestras contaminadas

-Asa de nicromo en punta
-Asa de nicromo en punta redonda
-Autoclave
-Gradilla Medios de cultivo
-Refrigerador Caldo nutritivo/ caldo lactosado
-Mechero y/o placa de calentamiento Agar plate count
-Pipeta serológica Agar Eosina Azul de Metileno (EMB)
-2tubos de ensaye con tapón de rosca Agar TSI
con medio de cultivo liquido Agar Citrato de Simmons
-2tubos de ensaye con tapón de rosca
con medio de cultivo en forma vertical
-2tubos de ensaye con tapón de rosca
con medio de cultivo en forma inclinada
-2 cajas petri
-1 botella con medio de cultivo sólido

PREPARACION:

Seleccione UNA CEPA de las proporcionadas por el maestro, anote el medio de cultivo y el
color de la colonia, o en su caso tome la muestra seleccionada para el analisis

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METODOS DE SEMBRADO

MEDIO LÍQUIDO, Técnica por agitación

Coloque una azada de la muestra problema en uno de los tubos con medio líquido, agite con el
asa.

Coloque 1 mL de la muestra problema en un tubo de medio líquido y agite en círculo.

MEDIO SÓLIDO

EXTENSIÓN DE SUPERFICIE
Use las placas de petri que preparo con medio de cultivo en la práctica de preparación de
medios de cultivo.
Realice la siembra como lo muestra la figura, iniciando en uno de los extremos con intensidad y
disminuyendo a medida que se disemina la muestra. Hasta dejar aislada la muestra.

SIEMBRA POR PICADURA (Medios sólido, vertical e inclinado)

Use los tubos de la práctica de preparación de medios de cultivo inclinado

y vertical

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Deslice el asa en forma de punta con muestra problema dentro del tubo
con medio de cultivo en forma vertical y sáquelo de la misma forma.

De la misma forma en el tubo inclinado deslice el asa en forma de punta

hasta el fondo del tubo

Saque el asa hasta la parte superior del fondo del medio de cultivo

Realice un zig-zag en la parte superior inclinada del

medio de cultivo lo más finamente que pueda y
sin romper el medio de cultivo

SIEMBRA POR PLACA VACIADA

Utilice la botella de medio de cultivo de la práctica anterior

Con una pipeta estéril coloque 1 mL de la muestra problema en el centro de la placa de petri.
Coloque la cantidad suficiente de medio en la caja de petri
Coloque la tapa
Gire en sentido de las manecillas del reloj e inversamente, para homogenizar la muestra (7
veces).
Deje reposar hasta que solidifique, en un lugar plano.

Coloque todos los tubos y placas sembradas en una incubadora a 37° C por 24-48 horas

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CUESTIONARIO

1.- Observe el crecimiento de microorganismos en cada una de las siembras

Anote sus observaciones.
a) Tipo de muestra utilizada en la siembra
b) Describa el tipo de siembra realizado en cada medio de cultivo otorgado
1.- Agar Bismuto sulfito __________________________________
2.- Agar TSI __________________________________________
3.- Agar Citrato de Simons _______________________________
4.- Caldo lactosado _____________________________________
5.- Agar Eosina Azul de Metileno _________________________
6.- Agar Plate Count ____________________________________

c) Mejor crecimiento según la siembra utilizada

d) Forma grosera de las bacterias obtenidas en cada medio de cultivo inoculado
e) Gram de al menos una de las bacterias obtenidas, mencione el medio de cultivo
seleccionado.

2.- Investigue cuando se usa cada una de las siembras realizadas en la practica
A) siembra por estría
b) siembra por bastón de Hook
c) siembra por estría y picadura
d) siembra por placa vaciada

3.- Cual es la diferencia entre un medio líquido y uno solido

4.- Cual es el motivo de utilizar en microbiología medios de cultivo en tubos de ensaye con
superficie inclinada

5.- El agar TSI contiene tres azucares, mencione cuales son y el orden en que se encuentran
distribuidos en el medio de cultivo

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