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revisión

El papel de la glucógeno fosforilasa en el hígado metabolismo del glucógeno

Loranne Agius *
Institutos de Medicina Celular y el Envejecimiento y la Salud, Facultad de Medicina, Universidad de Newcastle, Newcastle upon Tyne NE2 4HH, Reino Unido

ARTÍCULO INFO ABSTRACTO

Historia del artículo: glucógeno hepático se sintetiza después de una comida en respuesta a un aumento de la concentración de glucosa en
Recibido el 10 de septiembre de el año 2015 Aceptado
sangre en la vena portal y las señales endocrinas y neuroendocrinas, y se degrada a la glucosa entre las comidas para
el 11 de septiembre de el año 2015 Disponible en
mantener la homeostasis de glucosa en sangre. la degradación del glucógeno y la síntesis durante el ciclo diurno son
línea
mediados por los cambios en las actividades de fosforilasa y glucógeno sintasa. Fosforilasa está regulada por la
fosforilación de serina
palabras clave:
14. Sólo la forma fosforilada de la fosforilasa hepática (GPa) es catalíticamente activo. La interconversión entre GPa y GPb
Fosforilasa hepática
(no fosforilado) es dependiente de la activ yo lazos de fosforilasa quinasa y la fosfatasa de la fosforilasa. El último
de glucosa
comprende proteína fosfatasa-1 en combinación con una proteína de la glucógeno-focalización (G-subunidad) de la familia

Glucosa 6-fosfato de glucógeno PPP1R3. Al menos dos de seis G-subunidades (GL y PTG) expresa en el hígado están involucrados en GPa
proteínas PPP1R3B PPP1R3C insulina desfosforilación. GPa a GPb interconversión depende del estado conformacional de la fosforilasa que pueden ser relajada
(R) o tenso (T) en función de las concentraciones de efectores alostéricos tales como glucosa, glucosa 6-fosfato y
nucleótidos de adenina y en el estado de acetilación de residuos de lisina . El G-subunidad, GL, codificada por el gen
PPP1R3B se expresa en altos niveles en el hígado y puede funcionar como una fosfatasa fosforilasa y una fosfatasa
sintasa y tiene un sitio para GPa unión en el extremo C-terminal que inhibe la actividad sintasa fosfatasa alostérico.

© 2015 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

Contenido

1. Introducción ................................................. .................................................. .................................................. .................................................. ....................... 2

2. Fosforilasa ................................................. .................................................. .................................................. .................................................. ................... 2
2.1. Tres isoformas PYGL, PYGM, PYGB ........................................... .................................................. .................................................. ....................... 2
2.2. estructura isoforma fosforilasa ............................................... .................................................. .................................................. ...................... 3
2.3. La actividad catalítica y la homología de los músculos y fosforilasa hepática isoformas ........................................ .............................................. 4
3. La interconversión de GPb y GPa ............................................. .................................................. .................................................. ....................................... 5
3.1. La conversión de GPb a GPa por fosforilasa quinasa (Phk) ....................................... .................................................. ................................ 5
3.2. La conversión de GPa a GPb por PP1c unido a un G-subunidad ..................................... .................................................. .................................... 5

abreviaturas: DAB, 1,4-didesoxi-1,4-imino-D-arabinitiol; G-subunidades, de glucógeno proteínas de la familia PPP1R3A-G; G1P, glucosa 1-fosfato; G6P, glucosa 6-fosfato; GPa, forma fosforilada de la glucógeno
fosforilasa; GPb, forma no fosforilada de la glucógeno fosforilasa; GPI, glucógeno fosforilasa inhibidores; GL, el glucógeno proteína codificada por PPP1R3B focalización; GS, glucógeno sintasa; GSD, enfermedad por
almacenamiento de glucógeno; GSK3, la glucógeno sintasa quinasa-3; Phk, fosforilasa quinasa; Pi, fosfato inorgánico; PKB, la proteína quinasa B, también conocida como Akt; PP1c, subunidad catalítica de la fosfatasa 1
de proteína; PTG, proteína de segmentación a glucógeno, codificada por PPP1R3C.

* Institutos de Medicina Celular y el Envejecimiento y la Salud, Facultad de Medicina, Universidad de Newcastle, Newcastle upon Tyne NE2 4HH, Reino Unido. Tel .: 441 912 087 033.
Dirección de correo electrónico: loranne.agius@ncl.ac.uk

http://dx.doi.org/10.1016/j.mam.2015.09.002
0098-2997 / © 2015 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

Por favor citar este artículo en prensa como: Loranne Agius, Papel de la glucógeno fosforilasa en el metabolismo del glucógeno en el hígado, los aspectos moleculares de la Medicina (2015), doi: 10.1016 /
j.mam.2015.09.002
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3.3. El sitio GPa alostérica de GL: el control recíproco de GPa y GS ..................................... .................................................. ........................ 6
3.4. La regulación de los G-subunidades de hormonas, ritmo circadiano y la glucosa ...................................... .................................................. ........ 6
4. La conversión de GPa a GPb y activación GS en el hígado y hepatocitos ...................................... .................................................. ........................ 6
4.1. Efectos de los análogos de la glucosa y de glucosa ............................................ .................................................. .................................................. .......... 6
4.2. Efectos de ligandos GPI que estabilizan la T-estado o R-estado .................................... .................................................. .................................... 7
4.3. El efecto indirecto de la glucosa sobre GPa: papel putativo de G6P ...................................... .................................................. ............................... 7
4.4. La insulina promueve la conversión de GPa a GPb través de la activación PKB ........................................ .................................................. ...................... 8
4.5. Major papel de GPa en la señalización de insulina y la resistencia a la insulina ........................................ .................................................. ........................ 8
4.6. El agotamiento de GPa por ligandos de receptores de neurotransmisores .......................................... .................................................. ........................... 8
5. Papel de la acetilación de la fosforilasa en el agotamiento de GPa por la glucosa y la insulina ..................................... .................................................. ... 9
6. Perspectivas ................................................. .................................................. .................................................. .................................................. ........................ 9
Agradecimientos ................................................. .................................................. .................................................. .................................................. ......... 9
Referencias ................................................. .................................................. .................................................. .................................................. ........................... 9

1. Introducción proteína de la proteína fosfatasa-1 (PP1c) que regula positivamente la actividad de GS y

tiene un sitio inhibidor alostérico para la fosforilasa activada (unión Bollen et al., 1998 ). De
El glucógeno es un polímero ramificado de residuos de glucosilo presentes en la acuerdo con ello, la activación de la fosforilasa determina no sólo la tasa de degradación
mayoría de células de mamífero, donde funciona como una tienda de hidratos de carbono de glucógeno, sino también la inhibición de la activación de GS. Por lo tanto, la
que pueden ser rápidamente degradada por fosforolisis para generar glucosa 1-fosfato regulación de la fosforilasa es un hecho previo importante en el control de la facturación
(G1P). Los residuos de glucosilo en el polímero ramificado están unidos por alfa de glucógeno tanto por señales extracelulares e intracelulares.
1-4-bonos a lo largo de las cadenas lineales y por a-enlaces 1-6 en los puntos de
ramificación ( Roach et al., 2012 ). Síntesis de glucógeno está catalizada por las enzimas
glucógeno sintasa (GS) y el glucógeno enzima de ramificación que catalizan la
transferencia de residuos de glucosilo desde UDP-glucosa a la molécula de glucógeno y
la formación de α-1-4 y α-enlaces 1-6. la degradación del glucógeno está catalizada por 2. La fosforilasa
la acción de la fosforilasa (1,4-α-D-glucano: α-Dglucosyltransferase ortofosfato), que en
presencia de fosfato inorgánico (Pi) libera el residuo glucosilo terminal de las cadenas 2.1. Tres isoformas PYGL, PYGM, PYGB
a-1-4 como glucosa 1-fosfato (G1P), y por la enzima de desramificación (AGL,
amilo-α-1,6-glucosidasa, 4-αgluconotransferase) que tiene dos actividades catalíticas, Hay tres isoformas de fosforilasa codificadas por 3 genes PYGL, PYGMand PYGB, y
una transferasa que transfiere una unidad de triosa terminal desde una α-1- 6 rama a una designan hígado, músculo y cerebro después de los tejidos inwhich que se expresan.
cadena α-1-4 para la catálisis por fosforilasa y una glucosidasa que elimina la α-1-6 Hay una alta identidad de secuencia (~ 97%) entre los respectivos isoformas de roedores
residuo restante como glucosa. 80% de identidad humana y, y entre la isoforma del hígado y el músculo o del cerebro
isoformas. Esta última cuota de identidad de 83% ( Hudson et al, 1993a, 1993b.; Newgard
et al., 1989 ). Fosforilasa es un dímero compuesto de monómeros de 846 (PYGL), 841
(PYGM) o 862 residuos (PYGB) con fosfato de piridoxal, un cofactor esencial, en el
centro de cada monómero unido covalentemente a un residuo de lisina.

Todas las 3 isoformas de fosforilasa están reguladas alostéricamente por la unión de

En la mayoría de los tejidos, el glucógeno sirve como una fuente de glucosa
6-fosfato (G6P) para la glucólisis. Sin embargo, en el hígado sirve como una fuente de
glucosa para mantener la homeostasis de glucosa en sangre en el intervalo entre
comidas. glucógeno hepático se sintetiza después Ameal en respuesta a un aumento de
la concentración de glucosa en la vena porta, un aumento en las señales de relación y
neuroendocrinos insulinto-glucagón activados por los sustratos en la vena portal ( Cherrington,
1999; Moore et al., 2012 ). En el estado de post-absorción, la G1P formado a partir de la
degradación de glucógeno se convierte a G6P por fosfoglucomutasa y se transporta en el
retículo endoplasmático y hidrolizada a glucosa por la glucosa 6-phosphatasewhich se
expresa en alta actividad en el hígado.
Los cambios en el almacenamiento de glucógeno de hígado durante el ciclo diurno
se asocian con cambios en las actividades de fosforilasa y GS que regulaban de manera
recíproca ( Udoh et al., 2015 ). cambios recíprocos en las actividades de la fosforilasa y
GS están mediadas en parte por un objetivo glucógeno
varios efectores de metabolitos y por la fosforilación reversible de la serina-14 ( Newgard
et al., 1989 ). Fosforilasa fue la enzima primer demostrado ser regulada por la
fosforilación covalente ( Krebs y Fischer, 1956 ). Su regulación por acetilación fue
descubierto recientemente ( Zhang et al., 2012 ). Las formas fosforiladas y desfosforilado
se designan, respectivamente, GPa y GPb ( Fletterick y Madsen, 1980; Johnson, 1992;
Newgard et al., 1989 ).
Fosforilasa existe como un equilibrio de estados conformacionales, representada por
la conformación activa (Relajado o R-estado) y una conformación inactiva (tenso o
T-estado). El estado-R tiene un alto un nidad FFI para sustratos y ciertos efectores
alostéricos tales como AMP. El T-estado tiene un infinito bajo un FFI para los sustratos, el
glucógeno y Pi ( Johnson, 1992 ; Figura 1 ). La fosforilación de la serina-14 y AMP unión a
un “sitio de activador alostérico” favorecen el estado-R. Este “sitio activador alostérico
AMP”, que es adyacente al sitio de fosforilación se puede unir varios ligandos de fosforilo

Por favor citar este artículo en prensa como: Loranne Agius, Papel de la glucógeno fosforilasa en el metabolismo del glucógeno en el hígado, los aspectos moleculares de la Medicina (2015), doi: 10.1016 /
j.mam.2015.09.002
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A PAG ADP

Phk
GPa
GPb RR
PAG
(R-estado)
(R-estado) PAG
Activo
Inactivo

(DO) (DO)
(DO) (DO)
LENGUADO Glucosa Glucosa LENGUADO

(PAG) (PAG)
El ácido úrico El ácido úrico
cafeína cafeína

(UN)
(UN) (UN) (UN) AMP GL
AMPERIO G6P G6P
C-terminal
(IC) (IC)
IC IC

A PAG ADP

Phk

GPb TT PÁGINAS GPa

TTRR
(T-estado) (T-estado)
Inactivo Inactivo
PP1c

G-subunidad
Pi

Figura 1. Control de la fosforilasa por la fosforilación y las interacciones alostéricas. La fosforilasa quinasa (Phk) promueve la conversión de GPb a GPa por la fosforilación de una serina residir en el extremo N-terminal
de cada subunidad del dímero. ligandos alostéricos estabilizan ya sea una conformación relajada (R) o tenso (T) ( Johnson, 1992 ). Los ligandos que estabilizan la T-estado incluyen glucosa que se une al sitio catalítico
(C), la cafeína y el ácido úrico que se unen a un sitio de purina nucleósido (P) y G6P que se une a un sitio de solapamiento con el AMP-sitio (A). AMP y también la cola C-terminal de la proteína se unen GL al sitio AMP y
estabilizar el estado-R. inhibidores de glucógeno fosforilasa pueden estabilizar o bien el estado R (por ejemplo DAB que se une al sitio catalítico) o el Estado-T (por ejemplo, indol carboxamidas). En el T-estado, el
N-terminal que contiene el phosphoresidue es desordenada y accesible a desfosforilación por PP1c en conjunción con G-subunidad.

incluyendo G6P, fructosa 1-P, ATP, ADP, IMP ( Fletterick y Madsen, 1980 ), Todos los
cuales estabilizar la T-estado. La unión de AMP y G6P es mutuamente excluyentes
porque los grupos fosforilo se unen a los mismos residuos aunque a sitios que se
solapan parcialmente y la estabilización de la R y conformaciones T, respectivamente ( Johnson
y Barford, 1993; Johnson et al., 1993 ). Este sitio también se une a la cola C-terminal de
la proteína GL, que es uno de los G-subunidades que se dirige PP1c a la partícula de
glucógeno ( Pautsch et al., 2008 ). El sitio catalítico se une los sustratos Pi y G1P, ambos
de los cuales estabilizan el estado-R y se une glucosa que estabiliza la T-estado. la unión
a un sitio alostérico o “almacenamiento de glucógeno” glucógeno favorece el estado-R.
Un “sitio de inhibidor de purina alostérica” cerca del sitio catalítico se une la cafeína y
otros ligandos de purina incluyendo AMP. la unión en este sitio ligando estabiliza el
T-estado sinérgicamente con la glucosa de unión en el sitio catalítico.
2.2. estructura isoforma fosforilasa
fosforilasa muscular fue primer cristalizó a alta resolución en 1974 ( Johnson et al.,
1974 ), Y las estructuras de cristal para GPb muscular y GPa en el estado o el estado R
(T-estado T- GPB, GPa T-estatales GPb, R estatales y R estado-GPa) se han descrito
con varios ligandos (para revisiones, ver Fletterick
y Madsen, 1980; Johnson, 1992; Johnson y Barford, 1993 ). hígado humano GPa se ha
cristalizado por Rath y sus colegas en la conformación activa en conjunción con AMP y
glucosa y en la conformación inactiva con un análogo de la glucosa potente,
N-acetil-β-D-glucopiranosilamina solo o en combinación con amidas de ácidos
carboxílicos de indol que se unen a la interfaz de la subunidad ( Rath et al., 2000a, 2000b ).
Liver GPa y GPb se han cristalizado con inhibidores del sitio purina combinedwith
carboxamidas indol ( Ekstromet al., 2002 ).
La subunidad se compone de dos dominios. El dominio N-terminal contiene varios
sitios de regulación. Una de ellas es la serina-14 que es modi fi por la fosforilación y se
encuentra dentro de una región (residuos 5-22) que adopta una conformación ordenada o
desordenada a través de la interfaz de subunidad en función del estado de fosforilación.
Otra es la alostérica “sitio activador AMP” que se une AMP y varios otros ligandos de
fosforilo incluyendo G6P, ATP y fructosa 1-fosfato. Este dominio también tiene el
almacenamiento sitio alostérico glucógeno y componentes de los sitios de unión para las
purinas y glucosa, así como los residuos en la interfaz de la subunidad que se requieren
para la propagación de los efectos alostéricos. El dominio C-terminal contiene el sitio de
unión de cofactor y junto con los residuos del dominio N-terminal contiene el sitio
catalítico en una grieta profunda,

Por favor citar este artículo en prensa como: Loranne Agius, Papel de la glucógeno fosforilasa en el metabolismo del glucógeno en el hígado, los aspectos moleculares de la Medicina (2015), doi: 10.1016 /
j.mam.2015.09.002
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que comprende los residuos del dominio N-terminal (280-285 residuos). El sitio de
inhibidor de purina está en la entrada al sitio catalítico.
El dímero tiene dos caras: una con acceso al sitio catalítico que estaría en contacto
con glucógeno y una cara reguladora que contiene la cola N-terminal y el sitio
AMP-activador expuesta al citoplasma. El sitio catalítico está en la interfaz de dímero
andhas el cofactor piridoxal unido covalentemente. El acceso de substrato está protegido
por una puerta que tiene una posición abierta en la R-estado y una posición cerrada en el
T-estado que se estabiliza por la glucosa. El inhibidor de purina está formado por los
contactos entre la puerta y el dominio C-terminal ( Fletterick y Madsen, 1980; Johnson,
1992 ).
Las transiciones entre la R y conformaciones T implican movimiento de los bucles de
la puerta que controla el acceso de sustrato y también la rotación de las 2 subunidades
resultantes en un mayor número de contactos y en los cambios estructurales en el sitio
catalítico. En contraste con las estructuras de cristal para la isoforma muscular donde
existen claras diferencias estructurales entre GPa estatales T frente a T-estado GPb ( Fletterick
y Madsen, 1980 ), Para el T-estado isoforma hepática GPa es prácticamente idéntica con
T-estado GPb conformación, lo que sugiere que el estado inactivo de la isoforma
hepática es independiente de la fosforilación ( Ekstrom et al., 2002 ).
El péptido N-terminal que contiene el residuo de fosfato está desordenada en el
T-estado haciéndolo accesible a PP1c, pero el fosfopéptido adopta un estado ordenado
en la conformación R activo a través de interacciones con su sitio de unión en la interfaz
de la subunidad. Aunque los residuos que se unen AMP en el sitio alostérico se
conservan en hígado y músculo isoformas, la estabilización de GPa hígado por AMP
carece de muchas de las interacciones con AMP que se producen con la isoforma
muscular, con los consiguientes diferencias en la interfaz de la subunidad de la
AMP-bound hígado y músculo isoformas ( Ekstrom et al., 2002; Rath et al., 2000a, 2000b ).
La unión de G6P tomuscle GPb es competitivewith unión de AMP, pero también
estabiliza una conformación que es más tensa que el T-estado nativo GPb ( Johnson y
Barford, 1993; Johnson et al., 1993 ). Comparación del complejo G6P cristalográfica al
músculo GPb con el R-estado GPa sugiere que G6P puede ser “acomodado” en el
mismo sitio en GPa por los contactos a través de sus grupos fosfato ( Johnson y Barford,
1993; Johnson et al., 1993 ). Esto es consistente con la evidencia para la inhibición de la
actividad muscular GPa por G6P que es aditivo con la inhibición por glucosa ( Melpidou y
Oikonomakos de 1983 ), Y para el aumento de la desfosforilación de GPa musculares por
PP1c en presencia de G6P ( Cadefau et al., 1997 ). No se han descrito estructuras de
cristal para fosforilasa hepática con G6P. Sin embargo, GPb hígado y en un grado menor
hígado GPa son inhibidas por G6P ( Stalmans y Gevers, 1981 ).
2.3. La actividad catalítica y la homología de músculo y el hígado isoformas
fosforilasa
La isoforma del músculo de la fosforilasa se activa por fosforilación (GPb a GPa
conversión) y por AMP unión al “sitio activador alostérico”. Tanto GPa y GPb se activan
por AMP. La activación de GPb por AMP corresponde a aproximadamente 80% de la
actividad de GPa. Este mecanismo es fisiológicamente importante, porque GPb puede
mediar Gly-
Por favor citar este artículo en prensa como: Loranne Agius, Papel de la glucógeno fosforilasa en el metabolismo del glucógeno en el hígado, los aspectos moleculares de la Medicina (2015), doi: 10.1016 /
j.mam.2015.09.002
cogenolysis cuando AMP es elevada durante el ejercicio. También es útil analíticamente
en ensayos bioquímicos, porque la actividad fraccionada (es decir, GPa / GPa + GPb) en
extractos de músculo se puede determinar a partir de ensayos sin o con AMP. Muscle
GPa se inhibe por la glucosa que se une al sitio catalítico y se inhibe por metabolitos
fosforilo incluyendo G6P y ATP que compiten con AMP para el sitio activador y que es
inhibida por la cafeína que se une al sitio de inhibidor alostérico. La inhibición de la GPa
musculares por la glucosa, G6P y cafeína es aditivo y contrarrestada por AMP ( Kasvinsky
et al., 1978; Melpidou y Oikonomakos de 1983 ). De estos efectores alostéricos, AMP es
considerado como el más importante en el músculo ( Newgard et al., 1989 ). A pesar de
un alto grado de conservación de los residuos entre las isoformas andmuscle de hígado
en el ligando de residuos en los sitios catalíticos y alostéricos de unión ( Hudson et al.,
1993a, 1993b ), Las propiedades cinéticas de fosforilasa hepática difieren de la isoforma
muscular ( Newgard et al., 1989 ). Una diferencia importante es que AMP causa poca
activación de hígado GPb excepto en condiciones de altas concentraciones de sulfato y
otros aniones ( Kobayashi et al., 1982; Maddaiah andMadsen, 1966; Stalmans y Hers,
1975 ). fosforilasa hepática se une AMP con menor un nidad FFI que la isoforma del
músculo y mientras AMP aumenta su un nidad FFI para G1P este efecto es menor que
para la isoforma muscular ( Kobayashi et al., 1982 ). Los estudios realizados por Stalmans
y Gevers (1981) sobre la actividad del hígado GPb se ensayó en la dirección de la
glucogenólisis a concentraciones de sustrato fisiológicos apoyan la conclusión de que el
hígado GPb carece de actividad catalítica en vivo y en consecuencia la activación de la
enzima de hígado es totalmente contingente sobre la conversión a GPb a GPa. Aunque
GPb es esencialmente catalíticamente inactiva en el hígado, los diversos efectores
alostéricos que estabilizan la T-estado o R-estado ( Kasvinsky et al., 1978 ) Determinaría
la interconversión de GPa y GPb a través de la accesibilidad alterada del
phosphorresidue a PP1c ( Figura 1 ). Un efecto opuesto de AMP que estabiliza el estado
R en la glucosa inducida GPa agotamiento fue mostrado por Stalmans et al. (1974b) .
Aunque se ha asumido generalmente que la glucosa es el principal ligando fisiológico
que promueve la conversión de GPa a GPb en el hígado Bollen et al., 1998 ), Estudios
celulares sugieren que el efecto de la glucosa sobre la conversión de GPa a GPb es al
menos en parte (en alrededor de 50%) depende de la fosforilación de la glucosa ( Aiston
et al., 2003a, 2004 ) Que implican a otros metabolitos o mecanismos. Liver GPa se inhibe
por glucosa y varios ligandos de la “sitio inhibidor alostérico”, tales como la cafeína,
riboflavina y ácido úrico, y esta inhibición es contrarrestado por AMP ( Kasvinsky et al.,
1978, 1981 ). fosforilasa hepática (GPa y GPb) también se inhibe por la G6P
competitivamente con AMP ( Maddaiah y Madsen, 1966; Stalmans y Gevers, 1981 ) Y es
más sensible a la inhibición por los ligandos de fosforilo (relativos a AMP) que la enzima
muscular ( Kobayashi et al., 1982; Maddaiah y Madsen, 1966 ). Curiosamente, un estudio
de la evolución de la fosforilasa mostró que el sitio G6Pbinding se conserva mejor que el
sitio de unión de AMP-a pesar de la superposición de estos dos sitios ( Hudson et al.,
1993a, 1993b ). Hay sitios de unión de AMP once, uno de los cuales (Cys318) no se
conserva en el hígado humano o un roedor (Cys / Ser). Hay ocho residuos que
interactúan con G6P, tres de los cuales están involucrados en la unión de AMP. Estos
residuos se conservan en hígado, músculo y cerebro. El sitio de la G6P
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(A diferencia del sitio AMP) también está altamente conservada en la levadura, Escherichia
coli y patata. Además, los residuos en la interfaz de dímero que interactúan con el sitio de
AMP y ser14 (P) están mal conservadas, mientras que los sitios de contacto de dímero
que interactúan con el sitio de G6P están muy conservadas ( Hudson et al., 1993a, 1993b ).
Se propuso importante motivo de papel para la G6P en la promoción GPa a la conversión
GPb para la levadura ( Saccharomyces cerevisiae) ( Lin et al., 1996 ). Sin embargo, el
papel putativo para el sitio de la G6P en el hígado no ha sido explorado.
3. La interconversión de GPb y GPa
3.1. La conversión de GPb a GPa por fosforilasa quinasa (Phk)
La fosforilación de la serina-14 está catalizada por la fosforilasa quinasa (Phk), que
es un hexadecamer de 4 subunidades: α 4 β 4 GRAMO 4 δ 4. Las subunidades alfa y beta media
en la activación de Phk por fosforilación por cAMP dependiente de la proteína quinasa, la
GRAMO subunidad es la unidad catalítica, y la unidad δ es calmodulina y media de
control por los cambios en ion calcio. Hay músculo y el hígado isoformas de la subunidad
α (PHKA1 y PHKA2) y GRAMO subunidad (PHKG1 y PHKG2). Las hormonas que elevan
cAMP (glucagón) o calcio (vasopresina y los agonistas beta-adrenérgicos) causan muy
rápida (en segundos) de conversión de GPb a GPa, aumentando la concentración GPa
por ~ 5 veces. El efecto de glucagón pero no de hormonas dependientes de calcio está
asociada con la activación covalente de Phk ( van de Werve et al., 1977 ). La conclusión
de Stalmans y Gevers (1981) que la regulación de la fosforilasa hepática, a diferencia de
la isoforma muscular, es totalmente contingente sobre la conversión de GPb y GPa se
apoya en los fenotipos de defectos genéticos en el hombre de PYGM y PYGL y las
subunidades PHK. defectos gen relacionado con el fi hígado especí c isoformas PHK
(PHKA2, PHKG2) son associatedwith hipoglucemia infancia ayuno, retraso del
crecimiento y la cirrosis hepática ( Burwinkel et al., 1998 ), Similar al fenotipo de las
mutaciones PYGL (GSD VI, Hers enfermedad) ( Ozen de 2007 ). En contraste, los
fenotipos asociados con las isoformas del músculo (PHKA1, PHKG1) son muy raras ( Burwinkel
et al., 2003 ), A diferencia de las mutaciones PYGM (GSD V, enfermedad de McArdle)
que están asociados con intolerancia al ejercicio, fatiga rápida, mialgia y calambres. Esto
es muy probablemente debido a la activación de los músculos GPB por AMP.
3.2. La conversión de GPa a GPb por PP1c unido a un G-subunidad
La conversión de GPa a GPb por desfosforilación de serine14 es catalizada por la
proteína fosfatasa-1 (PP1c) en conjunción con una proteína de glucógeno (G-subunidad)
de la familia PPP1R3, que pertenece a una gran superfamilia (PPP1R1 a PPP1R16) de
PP1c unión proteínas ( Ceulemans et al., 2002 ). El G-subunidades son una familia de 7
proteínas codificadas por los genes PPP1R3A-G, que se caracteriza por un sitio de unión
(el motivo RVXF) para PP1c y un dominio de unión de glucógeno (con una variable de un
nidad FFI) y sirven para secuestrar PP1c en asociación con partículas de glucógeno.
PPP1R3A, B, C y D también son conocidos, respectivamente, como GM, GL, PTG y R6.
Con la excepción de PPP1R3A que se expresa en el músculo, todos los otros
G-subunidades se expresan en el hígado en diversos grados. expresión hepática de GL y
PTG en ARNm y proteínas descenso durante el ayuno y son inducidos por
Por favor citar este artículo en prensa como: Loranne Agius, Papel de la glucógeno fosforilasa en el metabolismo del glucógeno en el hígado, los aspectos moleculares de la Medicina (2015), doi: 10.1016 /
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realimentación ( Browne et al., 2001; Luo et al., 2011; Udoh et al., 2015 ), Mientras que
PPP1R3D y PPP1R3E muestran cambios más pequeños en ARNm y proteínas durante
el ayuno y alimentación ( Browne et al., 2001; Luo et al., 2011; Munro et al., 2005 ).
PPP1R3F se expresa en niveles bajos en el hígado ( Kelsall et al., 2011 ) Y PPP1R3G es
inducida notablemente por el ayuno y es reprimida rápidamente por realimentación ( Luo
et al., 2011 ). Estudios que sobreexpresan G-subunidades individuales en modelos
celulares o animales han demostrado que la mayoría de estas proteínas (PPP1R3, B, C,
D, G) promover el almacenamiento de glucógeno cuando se sobreexpresa en los
hepatocitos ( Arden et al., 2006; Berman et al., 1998; Danos et al., 2009; Gasa et al.,
2000; Green et al., 2004; Luo et al., 2011 ) U otros tipos de células ( Montori-Grau et al.,
2011 ). El grado de aumento en el almacenamiento de glucógeno durante sobreexpresión
experimental de PPP1R3B, C y G en los hepatocitos es notablemente alto en
comparación con la estimulación causada por la insulina o glucosa elevada. Esto implica
un papel para los cambios adaptativos en concentración de proteína de PPP1R3B,
PPP1R3C y PPP1R3G durante el ciclo diurno en control de almacenamiento de
glucógeno de hígado.
La sobreexpresión de GL ( Danos et al., 2009; Gasa et al., 2000 ) Y PTG ( Arden et
al., 2006; Berman et al., 1998; Green et al., 2004 ) En los hepatocitos está asociado con el
agotamiento de GPa, la activación de GS y el aumento de almacenamiento de
glucógeno. Ya sea PPP1R3G, que es inducida por ayuno y promueve la activación GS y
almacenamiento de glucógeno cuando se sobreexpresa ( Luo et al., 2011; Zhang et al.,
2014 ), Tiene un papel en la regulación GPa sigue siendo poco clara, debido a que la
relación de actividad - / + AMP no es una medida sensible del estado de activación de la
fosforilasa hepática. Al menos 3 tipos de mechanismmay contribuyen a los efectos
glucogénicos de G-subunidades: (i) desfosforilación de GPa y GS (la inactivación y
activación, respectivamente); (Ii) el aumento de la orientación de GS y GPa a la partícula
de glucógeno; (Iii) estabilización de la proteína GS ( Danos et al., 2009 ).
Tanto GPa y GS fosforilados sirven como sustratos para PP1c en asociación con
G-subunidades ( Browne et al., 2001; Munro et al., 2005 ). Sin embargo, si individuales
G-subunidades tienen un papel selectivo para GS o GPa ha sido más dif'ıcil de
determinar. Cohen y sus colegas utilizaron un ensayo de fosfatasa para la relación de GS
/ GPa sin o con un péptido de disociación que contiene el motivo RVXF ( Browne et al.,
2001 ). Este último mide la actividad total de PP1c con los dos sustratos y los antiguos la
influencia de la unidad G. Esto mostró una mayor relación de GS / GPa para GL, RD y
RE que para PTG, lo que sugiere que PTG puede funcionar como una fosfatasa GPa y
los demás como fosfatasas GS ( Browne et al., 2001; Munro et al., 2005 ). Los estudios
que implican titulada sobreexpresión de PTG en los hepatocitos son consistentes con un
papel para PTG como fosfatasa GPa ( Arden et al., 2006; Berman et al., 1998; Green et
al., 2004 ). Comparación de la activación de GS por PTG sobreexpresión con un GPI
selectiva que agota GPa sugiere que la activación de GS por PTG puede explicarse en
gran parte por el agotamiento de GPa ( Arden et al., 2006; Green et al., 2004 ) Que es un
inhibidor alostérico de la GS fosfatasa ligado a GL. Los estudios de GL sobreexpresión
en hepatocitos también demostraron agotamiento de GPa, lo que permite la conclusión
de que tanto GL y PTG median GPa a la conversión GPb ( Danos et al., 2009; Gasa et al.,
2000 ). Tareas para las PPP1R3D, E, F o G en el control de GPa a GPb conversión no
pueden ser excluidas.
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6 L. Agius / Aspectos moleculares de Medicina ■■ ( 2015) ■■ - ■■
3.3. El sitio GPa alostérica de GL: el control recíproco de GPa y GS
GL es único entre los G-subunidades en tener una-a alta sitio de unión FFI nidad
alostérico para GPa situado en el C-terminal ( Armstrong et al., 1998; Doherty et al., 1995 ),
Que es muy selectivo para GPa en comparación con GPb e inhibe la actividad de la
fosfatasa del complejo GL-PP1c tanto con GS y GPa como sustratos ( Alemany y Cohen,
1986; Danos et al., 2009; Doherty et al., 1995 ). Un péptido que corresponde a los últimos
5 residuos (L 280 GPYY 284) de GL tiene nanomolar un nidad FFI para GPa y la mutación de
la tirosina terminal (Y 284)
de GL interrumpe GPa unión a este sitio ( Kelsall et al., 2007 ). AMP (3 mM) elimina la
unión de GPa al sitio alostérico GL competitivamente ( Doherty et al., 1995; Kelsall et al.,
2007 ), Porque la cola C-terminal de GL se une a GPa firmemente en la interfaz
sub-unidad en un sitio overlappingwith el sitio de unión AMP. La unión de péptidos GL o
GL a GPa provoca cambios conformacionales modestos a GPa ( Pautsch et al., 2008 ). El
carboxilato terminal de imita GL el residuo de fosforilo de ligandos del sitio AMP, y GL
cola análogos imitador AMP en la causa de la activación parcial del músculo GPb más
probable mediante la estabilización del estado-R ( Pautsch et al., 2008 ). Debido a
ligandos G6P y fosforilo también se unen en el sitio de activador alostérico ( Johnson y
Barford, 1993; Johnson et al., 1993; Oikonomakos et al., 1995; Zographos et al., 1997 ),
La unión de GL a GPa podría ser competitivo también con G6P u otros ligandos de
fosforilo en este sitio ( Fletterick andMadsen, 1980 ). Selectividad de GL unión a GPa a
diferencia de GPb ( Alemany y Cohen, 1986 ) Es más probable que se explica por el
estado R-conformacional de GPa ( Pautsch et al., 2008 ). La unión de GL a GPa se ve
interrumpida por una carboxamida indol (CP316819) ( Kelsall et al., 2007 ) Que se une a la
subunidad de interfaz en un sitio distinto del sitio de AMP, haciendo que la estabilización
de la T-estado ( Rath et al., 2000b ). carboxamidas de indol causan agotamiento de GPa
en hepatocitos como resultado de la desfosforilación ( Aiston et al., 2001; Latsis et al.,
2002 ). La interrupción de la interacción GL-GPa por las amidas de ácidos carboxílicos de
indol es más probable explica por la estabilización de estado T ( Rath et al., 2000b ).
ligandos farmacológicos han identificado fi para causar la interrupción selectiva de la
interacción del sitio GL-GPaallosteric sin promover GPa desfosforilación ( Zibrova et al.,
2008 ). Estos compuestos causan un aumento aparente en la actividad de GPa ( Zibrova
et al., 2008 ), Lo que sugiere que pueden actuar como AMP-miméticos. Comparación de
un disruptor GL-GPa con una carboxamida indol (CP320,626) en hepatocitos mostraron
una activación comparable GS pero la estimulación moremodest de la síntesis de
glucógeno por el disruptor GL-GPa que por la carboxamida indol que agota GPa ( Zibrova
et al., 2008 ). El efecto más fuerte glicogénica de carboxamidas de indol es más probable
que explica por agotamiento de GPa (conversión de GPa a GPb) en lugar de una
diferencia en la actividad glucogenolítica ( Aiston et al., 2001; Fosgerau et al., 2002 ). Los
cambios en la concentración GPa pueden competir con GS para el sitio de unión del
sustrato en el dominio C-terminal de PTG ( Fong et al., 2000 ).
Cohen y sus colegas generados amouse ronda inmodel (Y284F) para la interacción
interrumpido GL-GPa-alostérico ( Kelsall et al., 2009 ). Esto mostró que la actividad
marcadamente elevada GS consistentes con la interrupción de la alostérico GPa
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sitio inhibidor de GL ( Alemany y Cohen, 1986; Doherty et al., 1995 ), Pero también había
elevado la actividad de GPa. Themousemodel para la interacción interrumpido
GL-GPa-alostérico mostraron una mejor tolerancia a la glucosa en respuesta a la glucosa
desafío como también ocurre en amousemodel de la activación de GS ( Ros et al., 2010 ),
Pero con pequeños cambios en el hígado (glucógeno Kelsall et al., 2009 ), Muy
probablemente debido a la fosforilasa activada. Esto coincide con el efecto más fuerte de
glucogénico carboxamidas de indol que causan el agotamiento GPa en comparación con
los electivos GL-GPA disruptores sitio alostérico que no agotan GPa ( Zibrova et al., 2008 ).
El nuevo modelo de ratón para la interacción alostérica GL-GPa interrumpido proporciona
una fuerte evidencia de la importancia de este sitio alostérico en la activación de GS. Sin
embargo, el fenotipo leve de acuerdo con el papel crítico para el agotamiento GPa en la
promoción de almacenamiento de glucógeno ( Aiston et al., 2001 ).
3.4. La regulación de los G-subunidades de hormonas, ritmo circadiano y la
glucosa
En los hepatocitos, la insulina induce GL y PTG pero no PPP1R3D y PPP1R3E ( Petrie
et al., 2013 ). En contraste PPP1R3G es reprimida por la insulina y la inducida por el
glucagón y de glucocorticoides ( Luo et al., 2011 ). Los efectos opuestos de la insulina
sobre PPP1R3G comparación con GL y PTG coinciden con los cambios opuestos en la
expresión de estas subunidades G durante el ayuno y la realimentación ( Luo et al., 2011 )
E implicar funciones diferenciales de estos G-subunidades. Aunque los niveles de GL y
PTGmRNA muestran respuestas aparentemente similares a 24hfasting y 1 horas
realimentación ( Luo et al., 2011 ), Los cambios circadianos en estos genes son diferentes
( Zani et al., 2013 ). Se propuso un papel para la PER2, un miembro de la familia periodo
de genes, que es reprimido por el ayuno y inducida por la alimentación, para el control
tanto de GL y PTG en base a un PER2- / modelo ( Zani et al., 2013 ). El reclutamiento de
Bmal-1 a ​PTG pero no GL puede explicar los diferentes cambios circadianos de estos
dos G-subunidades ( Zani et al., 2013 ). Alta glucosa induce tanto a nivel de ARNm de GL
y PTG independientemente de insulina a través de los factores de transcripción Mlx y
Mondoa ( Ma et al., 2006; Petrie et al., 2013 ). Esto puede ser análogo a la inducción de
las enzimas aguas abajo de la glucólisis y la lipogénesis por exceso de hidratos de
carbono y puede servir para la homeostasis de la piscina phosphometabolite ( Agius,
2015 ). Dos conjuntos de pruebas son consistentes con esta función. En primer lugar, la
expresión de ambos GL y PTG se incrementó en los hígados de ratones C57BL6 / J
alimentados con una dieta de alta energía que contiene sacarosa ( Lu et al., 2014 ). En
segundo lugar, los ratones que sobreexpresan PTG en el hígado están protegidos de la
depleción de ATP por la dieta alta energía ( López-Soldado et al., 2015 ).
4. Conversión de GPa a GPb y activación GS en el hígado y hepatocitos
4.1. Efectos de los análogos de la glucosa y de glucosa
Después de una comida, el aumento de la concentración de glucosa en la vena
portal es uno de los tres principales determinantes de la transición metabólico de la
degradación neta glucógeno hepático para la síntesis neta de glucógeno ( Cherrington,
1999; Moore et al., 2012 ). Los estudios realizados por Stalmans y Hers (1975) , Utilizando
ensayos cuidadosamente caracterizados para el hígado determinación GPa, mostró
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L. Agius / Aspectos moleculares de Medicina ■■ ( 2015) ■■ - ■■
que la glucosa promueve la conversión de GPa a GPb, y después de un tiempo de
latencia durante el cual la cantidad de GPa desciende por debajo de un umbral, GS se
activa entonces por desfosforilación ( De Wulf et al., 1970; Stalmans et al., 1971, 1974a ).
Esta conversión glucosedependent de GPa a GPb y activación secuencial de GS se
muestra en lisados ​de hígado ( Stalmans et al., 1974a ) Y suspensiones de hepatocitos ( Hue
et al., 1975 ), Y se explica por la unión de glucosa al sitio catalítico de GPa la
estabilización de la T-conformación que libera la cola N-terminal a partir de su estado
ordenado en la ranura poco profunda a lo largo de la cara reguladora de la subunidad de
interfaz que permite acceder a PP1c ( Newgard et al., 1989; Rath et al., 2000a ). El
agotamiento de GPa libera la inhibición de la GL por GPa ( Alemany y Cohen, 1986;
Doherty et al., 1995 ) Que está en un estado inactivo cuando la cola C-terminal ( Armstrong
et al., 1998 ) Está unido a la AMP-sitio de GPa por el estado R ( Pautsch et al., 2008 ). La
activación de GS por la depleción inducida por glucosa de GPa se describe como el
“mecanismo secuencial”, ya que depende de agotamiento inicial de GPa ( Bollen et al.,
1998 ).
Otro mecanismo por el cual la glucosa alta activa GS es a través de la elevación de
G6P, un activador alostérico de la GS, lo que hace que la proteína de un sustrato mejor
para la desfosforilación por PP1c ( Ferrer et al., 2003 ). Este mecanismo fue apoyada por:
(i) evidencia que muestra una fuerte correlación entre la G6P celular y el estado de
activación de GS ( Ciudad et al., 1986 ); (Ii) los estudios que comparan la glucosa con
análogos de glucosa no metabolizables en el agotamiento GPa y la activación de GS; (Iii)
denti fi cación de los residuos de GS que determinan su respuesta a G6P, permitiendo de
ese modo la mutagénesis de GS para estudios celulares y animales ( von
WilamowitzMoellendorff et al., 2013 ). Las contribuciones relativas del mecanismo de
activación secuencial y GS por G6P eran discutible desde hace varios años ( Bollen et al.,
1998; Ferrer et al., 2003 ). Apoyo al mecanismo secuencial se basa en parte en la falta de
elevación en G6P hepática por la administración de glucosa intravenosa ( La suya, 1976 ).
Sin embargo, G6P se eleva de 2 veces post-prandial ( Fernández-Novell et al., 1996 ).
análogos de glucosa Nonmetabolisable, tales como 6-deoxylgucose ( Carabaza et al.,
1992 ); 2-desoxi-2- fl uoroalpha-D-glucopiranosil fluoruro ( Massillon et al., 1995 ) Y
N-acetil-beta-D-glucopiranosil ( Junta et al., 1995a ), Proporcionado evidencia de apoyo
para la conversión de GPa a GPb en los hepatocitos. Sin embargo, la activación de GS
era invariablemente menor que la causada por la glucosa alta. De acuerdo con ello, los
defensores del Mecanismo secuencial concedidos a la relevancia fisiológica de G6P en la
mediación del efecto de la glucosa elevada ( Massillon et al., 1995 ).
4.2. Efectos de ligandos GPI que estabilizan la T-estado o R-estado
El interés en fosforilasa hepática como diana para nuevos fármacos para la diabetes
tipo 2 condujo al descubrimiento de una amplia gama de inhibidores selectivos
phosphosphorylase (GPI) ( Treadway et al., 2001 ) Que eran herramientas muy útiles para
explorar el papel de la depleción de GPa en la activación de GS ( Agius, 2010 ). El P fi zer
grupo de investigación carboxamidas identi fi ed indol ( Martin et al., 1998; Treadway et
al., 2001 ) Que se unen a un sitio novedoso en la interfase de la subunidad estabilización
de la T-conformación ( Ekstrom et al., 2002; Oikonomakos et al., 2003; Rath et al., 2000b ).
Estos compuestos son muy poderosas herramientas a causa de su
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selectividad para fosforilasa sin interferir con la fosforilación de glucosa ( Aiston et al.,
2001 ). Las bajas concentraciones de la carboxamida indol, CP-91149, fueron más
eficaces que la glucosa 35 mM a ozono GPa y la activación de GS sin elevar G6P,
proporcionando así soporte de peso para el mecanismo secuencial ( Aiston et al., 2001;
Hampson y Agius, 2005 ). Debido a que el agotamiento de GPa por CP91149 era estable
después de 60 min, esta GPI activar determinación de la resistencia de control de GPa
en la tasa de síntesis de glucógeno. Este análisis mostró que GPa tiene una muy alta
resistencia control negativo, lo que indica que una pequeña disminución fraccionada en
la concentración GPa causa un aumento fraccional más grande en glucogénico fl ux ( Aiston
et al., 2001 ). La importancia de la “concentración de proteína GPa” en los mechanismwas
secuenciales apoyada adicionalmente por estudios con DAB
(1,4-didesoxi-1,4-imino-D-arabinitiol), un potente inhibidor de la fosforilasa y por lo tanto
la glucogenólisis ( Andersen y Westergaard, 2002; Andersen et al., 1999 ) Que estabiliza
el R-conformación mediante la unión en el sitio catalítico ( Oikonomakos et al., 2006 ).
DAB contrarresta los efectos de la glucosa alta sobre el agotamiento de GPa y sobre la
activación de GS, inhibiendo de este modo la síntesis de glucógeno en contraste con
carboxamidas de indol que estabilizan la T-estado y son altamente glucogénica ( Latsis et
al., 2002 ). DAB, como un ligando por el estado R, proporcionado la prueba de concepto
del papel crítico de la concentración de GPa en el almacenamiento de glucógeno como
actividad fromglycogenolytic distinta ( Fosgerau et al., 2002; Latsis et al., 2002 ).
4.3. El efecto indirecto de la glucosa sobre GPa: papel putativo de G6P
El descubrimiento de GPI selectivos que se unen al sitio carboxamida indol o la
AMP-sitio ( Oikonomakos et al., 1995,
2003, 2005; Treadway et al., 2001; Zographos et al., 1997 ) Que eran más eficaces en
ozono GPa de GPI unión al sitio catalítico ( Aiston et al., 2001; Parmenopoulou et al.,
2014 ) O en el sitio de la purina nucleósido ( Hampson et al., 2006 ), Planteó la cuestión de
si el agotamiento de GPa por la glucosa es un efecto directo de la glucosa en el sitio
catalítico ( Bollen et al., 1998; Newgard et al., 1989 ) O como consecuencia de metabolitos
aguas abajo ( Aiston et al., 2003a, 2004 ). Una hipótesis era que la glucosa puede actuar
sinérgicamente con G6P u otros metabolitos que se unen en el sitio alostérico ( Johnson y
Barford, 1993; Johnson et al., 1993; Martensen et al., 1973 ). Esta hipótesis fue probada
por la actividad de la glucoquinasa alterando con un inhibidor de la glucoquinasa potente
o por la sobreexpresión de la enzima ( Aiston et al., 2003a, 2004 ). Prevención de la
elevación de G6P atenuada agotamiento GPa inducida por glucosa por ~ 50% y
disminuyó la nidad un FFI para la glucosa, mientras que la elevación en G6P mejoró la
nidad un FFI para la glucosa ( Aiston et al, 2003a., 2004; Härndahl et al., 2006 ). En los
primeros estudios, GPa agotamiento por alta glucosa se mejoró mediante la sustitución
del medio de Na + por K +, lo que eleva G6P ( Hue et al., 1975 ).
Los estudios de hepatocitos proporcionado evidencia de sinergismo entre la glucosa
y un metabolito aguas abajo en la promoción de GPa a la conversión GPb, contingente
sobre la actividad de la glucoquinasa. G6P es un candidato plausible sobre la base de: (i)
correlación entre G6P celular y agotamiento GPa ( Aiston et al., 2004; Härndahl et al.,
2006 ); (Ii) inhibición de la actividad de la fosforilasa por G6P ( Maddaiah andMadsen,
1966; Melpidou
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8 L. Agius / Aspectos moleculares de Medicina ■■ ( 2015) ■■ - ■■
y Oikonomakos, 1983; Stalmans y Gevers, 1981 ); (Iii) estabilización de la T-estado de
músculo GPb por G6P ( Johnson y Barford, 1993; Johnson et al., 1993 ); (Iv) el alto grado
de conservación del sitio de unión G6P ( Hudson et al., 1993a, 1993b ). Además, debido a
la glucoquinasa es un determinante importante de G6P hepática ( Agius, 2008 ), La
sinergia entre la glucosa y G6P estaría de acuerdo con las altas resistencias de control
tanto de la glucoquinasa y GPa ( Aiston et al., 2001 ) En el control de almacenamiento de
glucógeno, y con la síntesis de glucógeno hepático deteriorado en pacientes con
mutaciones en el gen de la glucoquinasa en un único alelo ( Velho et al., 1996 ).
4.4. La insulina promueve la conversión de GPa a GPb través de la activación PKB
La inhibición de la producción hepática de glucosa por la insulina en vivo
implica múltiples mecanismos, incluyendo un efecto directo de la insulina en el hígado ( Edgerton y fue aditivo con insulina ( Aiston y Agius, 1999 ). La leptina se demostró para producir la
et al., 2006 ), Y la contribución de la insulina en glucógeno de almacenamiento
post-prandial es aproximadamente igual al efecto de la glucosa ( Cherrington, 1999 ). En
hepatocitos aislados, la insulina estimula la conversión de glucosa en glucógeno y la
acumulación neta de glucógeno por aproximadamente 2 veces en un amplio intervalo de
condiciones del sustrato ( Agius et al., 1990 ). Esta es la conversión associatedwith de
GPa a la activación de GPb y GS sin elevación en G6P ( Aiston et al, 2003b., 2006; Klein
et al., 2002 ). Estos efectos de la insulina están asociados con la fosforilación de PKB y
son antagonizados por los inhibidores de PI-3-quinasa y PDK-1 ( Aiston et al., 2006; Klein
et al., 2002 ). Un papel para PKB activación / Akt en el agotamiento de GPa se demostró
mediante la expresión de forma condicional de PKB que promueve el agotamiento GPa y
la activación de GS, no aditiva con insulina ( Aiston et al., 2006 ).
PKB fosforila una amplia gama de sustratos que contienen themotif RXRXX [S / T]
Hyrophobic-, que incluyen GSK3a, GSKβ, PDE3B (ser273) y PPP1c. GSK3a (ser21) y
GSK3-β (Ser-9) se han implicado en la señalización beenwidely PKB en glucógeno
metabolismo. La GSK3 fosforila cuatro sitios en la mitad C-terminal de GS ( Ferrer et al.,
2003 ). Por consiguiente, la inactivación de GSK3-α / GSK3-β por PKB mediada por
fosforilación se predijo para activar GS. Los estudios que utilizan litio, un inhibidor no
selectivo de GSK3 que no causa elevación en G6P o el agotamiento de GPa ( Bosch et
al., 1986 ), Y también el uso de inhibidores de GSK3 selectivos que también no agotan
GPa ( Aiston et al., 2003b ), Proporcionado una clara evidencia de la activación de GS. Sin
embargo, la estimulación de la síntesis de glucógeno fue remarkablymodest acción de la
insulina comparedwith que causó una menor activación GS que los inhibidores de GSK3
pero en asociación con el agotamiento GPa. Estos estudios de hepatocitos apoyan el
papel de la PKB pero no para GSK3 en la regulación de la síntesis de glucógeno hepático
por la insulina ( Aiston et al., 2003b, 2006 ). Se alcanzaron conclusiones similares que
apoyan un papel para PKB independiente de GSK3 en estudios usando modelos de ratón
que carecen de Akt2 o con knock-in de GSK3-α (Ser21A) y GSK3-β (Ser9A) ( Wan et al.,
2013 ).
4.5. Major papel de GPa en la señalización de insulina y la resistencia a la insulina
Comparación de la respuesta glucogénica a diversos efectores tales como insulina,
inhibidores de GSK3 y GPI como una función
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de GPa agotamiento mostró que la activación de GS en ausencia GPa agotamiento tiene
efecto insignificante en la síntesis de glucógeno ( Aiston et al., 2003b ). Sin embargo, la
activación de GS promueve la estimulación de la síntesis de glucógeno en condiciones
de agotamiento GPa. Estos estudios pusieron de relieve la función crítica de agotamiento
GPa por la insulina en causar tanto la activación de GS y la estimulación de la síntesis de
glucógeno. Sin embargo, el mecanismo (s) bywhich activación PKB causa el agotamiento
GPa siguen siendo desconocidos. Si la activación de PKB promueve la acetilación de la
fosforilasa que queda por determinar.
el Zucker fa / fa rata y la db / db ratón que havemutations en el gen receptor de
leptina son ampliamente utilizados como modelos animales de resistencia a la insulina y
se caracteriza por una actividad GPa elevada en el hígado pero no muscular ( Aiston et
al., 2000; Arden et al., 2006; Junta et al., 1995b ). La leptina mejora el almacenamiento de
glucógeno en los hepatocitos de ratas Wistar ( Aiston y Agius, 1999 ) y en vivo ( O'Doherty
et al., 1999 ). El efecto glicogénica en hepatocitos era associatedwith agotamiento de GPa
activación de PKB en presencia de glucagón, pero no en su ausencia ( Zhao et al., 2000 ).
Ya sea que la leptina reduce GPa través de la activación de PKB, la inducción de
PPP1R3D ( Arden et al., 2006 ) U otros mecanismos queda por determinar.
4.6. El agotamiento de GPa por ligandos de receptores de neurotransmisores
almacenamiento de glucógeno hepático después de una comida no se puede
explicar por las funciones de regulación de la glucosa y la insulina sola ( Cherrington,
1999 ). Un papel de los neurotransmisores o señales neuroendocrinos se infiere a partir
de estudios que implican la denervación quirúrgica del hígado, que marcadamente influye
en la eliminación hepática de glucosa ( Adkins-Marshall et al., 1992 ). neurotransmisores
candidato para este mecanismo incluyen agonistas adrenérgicos que promueven la
conversión de GPb a GPa ( van de Werve et al., 1977 ) Y la acetilcolina producido por los
nervios parasimpáticos ( Moore et al., 2012 ). La acetilcolina tiene efectos modestos en
ozono GPa y el aumento de la síntesis de glucógeno en comparación con la insulina ( Hampson
y Agius, 2007 ). hígado humano tiene un rico suministro de nervios serotoninérgicos ( el-Salhy
et al., 1993 ), Y un papel de la serotonina en la estimulación de la captación hepática de
glucosa y almacenamiento de glucógeno neto se demostró a partir de estudios de la
infusión intraportal de la serotonina en el perro ( Moore et al., 2004 ). Estudios sobre
hepatocitos en cultivo durante 18-24 h identi fi ed efectos estimuladores de las
concentraciones de serotonina nanomolares en el almacenamiento de glucógeno y la
inhibición por concentraciones micromolar. Los estudios utilizando agonistas y
antagonistas de los receptores de serotonina indican implicación de los receptores 5HT1
y 5HT2A en el mecanismo glucogénica ( Hampson y Agius, 2007; Hampson et al., 2007;
Tudhope et al., 2012 ). La serotonina puede funcionar como una hormona producida por
el intestino y se transporta en las plaquetas o como un neurotransmisor en los sistemas
nerviosos central y periférico ( Lam y Heisler, 2007 ). Hay receptores de serotonina
múltiples pertenecientes a siete familias (5HT1 a 7), varios de los cuales se expresan en
el hígado. Las familias 5HT1 y 5HT2 comprenden, respectivamente, de cinco y tres (A, B,
C) los genes (A, B, D, E y F) y. Los agonistas de los receptores de 5HT1 son muy fuertes
estimuladores de la síntesis de glucógeno en los hepatocitos recién aislados y este efecto
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disminuye sustancialmente durante 24 h de cultivo ( Tudhope et al., 2012 ). Los cambios insulina promover la acetilación de proteínas mediante la contratación de acetiltransferasas
en la expresión de los receptores adrenérgicos que implican una disminución de la o mediante el aumento de la acetil-CoA?
alfa-receptores y aumento de la ß-receptores sobre un curso de tiempo similar son
ampliamente documentadas ( Schwarz et al., 1985 ), y los niveles de mRNA de los
6. Perspectivas
receptores 5HT1B y 5HT2B apoyan cambios recíprocos en estos receptores durante el
cultivo ( Tudhope et al., 2012 ). Varios ligandos de receptores 5-HT1, incluyendo
Las estructuras cristalinas para GPa hígado en han sido reportados conformaciones
α-metilserotonina, son muy fuertes estimuladores de la síntesis de glucógeno por un
activas e inactivas ( Rath et al., 2000a, 2000b ). La disponibilidad de una amplia gama de
mecanismo mediado por la conversión de GPa a GPb. Sorprendentemente, estos
inhibidores de la fosforilasa selectivos que estabilizan la conformación inactiva de la
agonistas de receptores son mucho más eficaz que la insulina en la promoción de
fosforilasa hepática y promueven la conversión de GPa a GPb ( Ekstrom et al., 2002; Rath
agotamiento de GPa y el mecanismo es tan rápida como la causada por ligandos de
et al., 2000b ) Apoya el papel del estado conformacional de la proteína para permitir la
carboxamida indol T-estatales. A diferencia de acción de la insulina, los agonistas de los
desfosforilación por el estado desordenado del residuo de serina N-terminal. La
receptores de la serotonina no aumentan la glucólisis o activar PKB, lo que indica un
conversión de GPa a GPb por alta glucosa en las células hepáticas es al menos en parte
mecanismo distinto. Este mecanismo, a diferencia de la señalización de insulina, es
depende de metabolismo de la glucosa y consiste en la acetilación de residuos de lisina fi
sensible a los inhibidores de cdk2 / cdk5, tales como la roscovitina. Los enlaces
c específicas como un componente esencial ( Zhang et al., 2012 ). El sitio de unión G6P
moleculares entre esta vía y desfosforilación GPa permanecen siendo identi fi.
de la fosforilasa es un candidato atractivo para la exploración de la isoforma hepática por
mutagénesis dirigida al sitio porque G6P antagoniza AMP en ambas conformaciones
inactivas y activas y es altamente cooperativa ( Johnson y Barford, 1993; Johnson et al.,
1993 ) Y porque el sitio G6P ismore altamente conservada de Ser-14 o el sitio de unión
AMP ( Hudson et al., 1993a, 1993b ). Seguir avanzando en la regulación de la
comprensión de la fosforilasa hepática dependerá de la generación de mutantes knock-in
5. Papel de la acetilación de la fosforilasa en el agotamiento de GPa por la glucosa
estables con un G6P interrumpido sitio de unión o que carecen de los sitios de acetilación
y la insulina
de lisina.

Un avance importante en la regulación de fosforilasa hepática en los últimos años

fue el elegante estudio de Zhang et al. (2012) la presentación de informes acetilación
reversible de los residuos de lisina fosforilasa 470 y 796 y el papel de este mecanismo en
la promoción de la conversión de GPa a GPb por el reclutamiento de GL (y PTG). La
acetilación de la fosforilasa es más bajo en el estado de ayuno y se aumentó por la alta
glucosa o insulina, de forma concomitante con la conversión de GPa a GPb. La
acetilación mejora la interacción de fosforilasa con el glucógeno dirigir proteínas GL. La Expresiones de gratitud

acetilación de GPa en K470 aumentó su unión a de longitud completa GL y también para

GL truncada (que carece del sitio alostérico C-terminal), confirmando un papel para la Los estudios realizados en el laboratorio del autor han sido financiados por la

acetilación de la GPa en la promoción de su interactionwith el sitio GL-sustrato (en Diabetes del Reino Unido otorga 11/0004231; 07/0003559; 07/0003489.

contraposición a C- terminal de iste alostérico) y permitiendo de este modo su conversión

a GPb por PP1c. Fundamentalmente, mutantes en los que la lisina se sustituyó por
arginina (de K470 y K796) fueron insensibles a la glucosa y el desafío insulina,
confirmando un papel esencial para la acetilación en la conversión GPa a GPb. La
exposición de las células a glucagón tuvo el efecto inverso y promovió desacetilación. Sin
embargo, esto ocurrió durante un transcurso de tiempo de horas, mientras que la
conversión de GPa a GPb por el glucagón es rápida y máxima en cuestión de segundos
tominutes ( van deWerve et al., 1977 ). Con base en los cursos de tiempo similares de
acetilación y desfosforilación (GPa a GPb) durante la insulina y la tolerancia a la glucosa
pero la más rápida fosforilación en comparación con desacetilación durante desafío
glucagón, parece que la función principal de covalente Modificación por acetilación es
promover la desfosforilación por PP1c por la mejora de la interacción de GPa con el sitio
de sustrato GL. Esta elegante papel ayuda a cubrir un espacio largo que se coloca en el
mecanismo (s) que une la glucosa y la insulina (y presumiblemente también otras
señales) a la contratación de GPa a GL y PTG (las principales subunidades que permiten
referencias
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moleculares entre la glucosa o insulina y la acetilación de la fosforilasa? ¿Los sustratos
que estabilizan el estado T, tales como glucosa o G6P hacen fosforilasa más accesible a
la acetilación? No glucosa y
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