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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE MEDICINA
DEPARTAMENTO CIENCIAS BÁSICAS MÉDICAS
CURSO DE BIOQUÍMICA

LABORATORIO 02:

DEMOSTRACIONDE LA NATURALEZA PROTEICA DE LAS


ENZIMAS Y ACTIVIDAD ENZIMATICA

AUTORES

ALVA CRUZ CHRISTIAN JOEL


AVALOS MENDOZA WILLIAM ERICK
AVILA RODRIGUEZ SUHEYLY
BECERRA ULLOA RENZO ALEJANDRO
BLAS CABRERA JESUS
IRIGOIN MENDOZA NICOLLE
LOYOLA GARCIA STEPANIE
MENDOZA SANTA CRUZ ROSITA
MONTOYA ROJAS ROBINSON
RODRIGUEZ MIÑANO ALAN
VARGAS CHICLAYO JONATHAN
VERDE AREDO ELVIS
VERGARA TAM RODRIGO

DOCENTE

DR: VALLADOLID ALZAMORA JUAN MANUEL

TRUJILLO – PERÚ
2018
DESARROLLO DEL CUESTIONARIO DE LA PRACTICA N` 2
DEMOSTRACIONDE LA NATURALEZA PROTEICA DE LAS
ENZIMAS
1. ¿Qué métodos conoce para determinar la actividad enzimática?

 Espectrofotométricos: En el método espectrofotométrico puede seguirse el curso


de una reacción observando cómo cambia la luz absorbida por la solución en la que
se está dando la reacción. Para poder utilizar un método de este tipo debe haber entre
los sustratos o los productos alguno que absorba luz a una longitud de
onda determinada, y que sea la única molécula de la mezcla de reacción que lo hace
a la misma; de esta forma, se puede observar el aumento o la disminución de
la absorbancia dicha longitud de onda.

 Fluorimétricos: En el fenómeno de la fluorescencia una molécula emite luz de una


longitud de onda determinada tras absorber luz a otra longitud de onda. Los ensayos
fluorimétricos usan la diferencia en la fluorescencia entre producto y sustrato para
medir la reacción enzimática.

 Calorimétricos: La calorimetría es la medida del calor liberado o absorbido por una


reacción química. Estos ensayos son muy generales, ya que muchísimas reacciones
llevan asociado algún cambio de calor y utilizando un microcalorímetro no es
necesario utilizar grandes cantidades de enzima o sustrato. Estos ensayos pueden
ser usados para medir reacciones imposibles de medir con otros métodos

 Quimioluminiscencia: La quimioluminiscencia es la emisión de luz por una reacción


química. Algunas reacciones enzimáticas producen luz y ésta puede ser medida para
detectar la formación de producto. Estos tipos de ensayo pueden ser extremadamente
sensibles, ya que la luz producida puede ser registrada en una película fotográfica por
días e incluso semanas, pero al mismo tiempo son de difícil cuantificación, porque no
toda la luz emitida por la reacción será detectada.
2. Explique la acción bioquímica de cada uno de los componentes en los pasos
seguidos para determinar la actividad enzimática

DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA


I. Sistema A:
TUBOS
COMPONENTES I II
Solución de almidón 1% pH 6.0 5 ml. 5 ml.
Solución de cloruro de sodio 0.1M 1 ml. 1 ml.
Agua destilada 4 ml. 3 ml.

Al tubo II se le añadió 1ml de enzima y luego se llevó a baño de agua a ambos tubos
a 37ºC.
 En el tubo I, al no haber enzima no se produjo reacción alguna de tal manera
que el almidón queda intacto.
 En el tubo II, la enzima reacciono con el almidón obteniéndose productos
como maltosa, glucosa.

CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR EL SUSTRATO RESIDUAL:


TUBOS
COMPONENTES I II
Ácido clorhídrico 0.05 N 5 ml. 5 ml.
De los tubos I y II: Etapa A 0.5 ml. 0.5 ml.
Solución yodada 0.5 ml. 0.5 ml.

La solución yodada permitió evidenciar la presencia de almidón.


 El tubo I se tornó de color morado, esto da muestra del sustrato residual
(almidón) que se acoplo con el Yodo.
 El tubo II tenía una coloración amarilla-naranja debido a que se encontraban
los productos de la hidrólisis del almidón los cuales no permiten el
acoplamiento del yodo.

CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR LOS PRODUCTOS FORMADOS


(Folin WU):

TUBOS
COMPONENTES I II
De los tubos I y II: etapa A 1ml. 1ml.
Solución Cúprica alcalina 1ml. 1ml.
Hervir 8 minutos
Enfriar
A continuación a los tubos I y II del sistema A se agregó solución cúprica alcalina
(color celeste) para demostrar el carácter reductor de los productos.
 El tubo I permaneció con el color celeste de la solución, esto demuestra que
el azúcar que se encuentra no es reductor (polisacárido almidón).
 El tubo II cambio de color a un anaranjado (color ladrillo) que se produjo por
la reducción del ion cúprico a ion cuproso (Cu2+- Cu1+); esto evidencia que
los azucares que se encuentran son reductores (maltosa, glucosa).

3. Elabore un grafica para demostrar la acción de una enzima sobre su sustrato, donde
se observe la energía de activación y el estado de transición.
ENZIMAS

Estado de transición

Energía libre de activación sin enzima

Energía libre de activación con enzima

Progreso de la reacción

Aceleran procesos biológicos (biocatalizadores). Son moléculas proteicas. Son muy


pocas las reacciones que no son catalizadas por enzimas. La reacción debe ser
termodinámicamente posible, la energía que tiene A es tal que permite transformarse
en B (que queda con menos energía). La condición energética se llama energía libre.
Se requiere una energía libre de activación. La enzima hace disminuir la energía de
activación del reaccionante. Si la energía de activación se reduce a la mitad, no implica
que el tiempo también se disminuye a la mitad.

4. Haga una lista de todos los componentes de un sistema enzimático y defínelos.


a) Sustrato:
Es cualquier compuesto químico. Que subyace a otro y sobre el cual está
en condiciones de Ejercer algún tipo de influencia. Por otra parte hace
referencia a una capa o nivel de algo. Es una molécula sobre la cual actúa
una enzima, dicho de otra forma, las enzimas se encargan de catalizar las
reacciones químicas que involucran a su sustrato. A unión entre enzima y
sustrato forma un complejo.
En la práctica se utilizó el sustrato de almidón
Figura#. Almidón
b) Enzima
Son proteínas complejas que producen cambios químicos específicos en algunas
sustancias, sin que exista un cambio en ellas mismas. Como por ejemplo: las enzimas
pueden convertir los almidones y azucares en sustancias que el cuerpo pueda utilizar.
La coagulación es otro ejemplo de las enzimas. Son esenciales para todas las
funciones corporales se encuentran en la saliva, estomago, intestinos cada órgano y
célula del cuerpo. La enzima utilizada es la amilasa salival.

Figura#. Enzima amilasa


c) Coenzimas
Las coenzimas son pequeñas moléculas orgánicas no proteicas que transportan
grupos químicos entre enzimas. A veces se denominan cosustratos. Estas moléculas
son sustratos de las enzimas y no forman parte permanente de la estructura
enzimática. En el metabolismo, las coenzimas están involucradas en reacciones de
transferencia de grupos (como la coenzima A y la adenosina trifosfato (ATP), y las
reacciones redox (como lacoenzima Q10 y la nicotinamida adenina dinucleótido
(NAD+).
Las coenzimas se consumen y se reciclan continuamente en el metabolismo; un
conjunto de enzimas añade un grupo químico a la coenzima y otro conjunto de
enzimas lo extrae. Por ejemplo, las enzimas como la ATP sintasa fosforilan
continuamente la adenosina difosfato (ADP), convirtiéndola en ATP, mientras que
enzimas como las quinasas desfosforilan el ATP y lo convierten de nuevo en ADP.
Las moléculas de coenzima son a menudo vitaminas o se hacen a partir de vitaminas.
Muchas coenzimas contienen el nucleótido adenosina como parte de su estructura,
como el ATP, la coenzima A y el NAD+.
d) Sustancias activadoras
Son sustancias o partículas que activan a proenzimas ( son enzimas inactivas).
Electrolitos, ácidos.
Figura#. Sistema Enzimático

5. ¿CÓMO SE PUEDE OBJETIVAR LA PRESENCIA DEL SUSTRATO RESIDUAL?

En los ensayos de aspecto fotométrico puede seguirse el curso de una reacción


observando cómo cambia la luz absorbida por la solución en la que se está dando la
reacción, para poder utilizar un ensayo de este tipo debe haber entre los sustratos a
los productos algunos que absorba luz a una longitud de onda determinado y que sea
de esta forma, se puede observar el aumento o la disminución de la observación a
dicha longitud de onda. Cuando la luz absorbida se muestra en el espacio visible
es posible observar un cambio en el color de la muestra y entonces
hablaríamos del método calorímetro.

6. ¿Cómo repercute la modificación de la estructura proteica, producida por


agentes físicos y químicos, sobre la actividad enzimática?
 La modificación de la estructura de las proteínas, es decir la desnaturalización,
ocasiona que esta enzima se inactive y no tenga una actividad enzimática normal.
 Algunos agentes son más desnaturalizantes que otros, por ende la actividad de la
enzima depende del agente que la desnaturalize.

Agentes físicos Agentes químicos


Calor Detergentes
Disolventes orgánicos
PH
Fuerza iónica

 Por ejemplo la enzima estará más inactivada si es sometida a altas temperturas


 La desnaturalizan afecta a los distintos niveles:

Desnaturalización de la estructura cuaternaria: las subunidades de proteínas se separan
o su posición espacial se corrompen.
Desnaturalización de la estructura terciaria implica la interrupción de: enlaces covalentes
entre las cadenas laterales de los aminoácidos, como los puentes disulfuros entre las
cisteínas; enlaces no covalentes dipolo-dipolo entre cadenas laterales polares de
aminoácidos; enlaces dipolo inducidos por fuerzas de Van Der Waals entre cadenas laterales
no polares de aminoácidos.
Desnaturalización de la estructura secundaria: se pierden todos los patrones de
repetición regulares como las hélices alfa y adoptan formas aleatorias.

Estructura primaria no es interrumpida por la desnaturalización

Desnaturalización
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. D'Ocon Navaza MC, García-Saavedra MJ, Vicente García JC. (1999). Análisis de
Muestras Biológicas. Madrid. Ed. Paraninfo.
2. Salve ML, Amich S, Prieto S, Casas A. (1994). Laboratorio Clínico. Madrid. Ed.
Interameericana•McGraw-Hill
ta
3. Berg J, Stryer L, Tymoczko J. Bioquímica. 6 ed. España: Reverte; 2008