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“facultad de bioquímica y farmacia”

TEMA: MÉTODOS ANALÍTICOS DE LOS


ALIMENTOS

UNIVERSITARIA: SILVIA PATRICIA


GANDARILLAS UGARTE

DOCENTE: Dra. fabiana loma

SEMESTRE: 8° SEMESTRE

ORURO - 2010

TÉCNICA DE SOXHLET
El contenido en lípidos libres, los cuales consisten fundamentalmente de grasas neutras
(triglicéridos) y de ácidos grasos libres, se puede determinar en forma conveniente en los
alimentos por extracción del material seco y reducido a polvo con una fracción ligera del petróleo o
con éter dietílico en un aparato de extracción continua. El tipo Soxhlet dá una extracción
intermitente con un exceso de disolvente reciente condensado. La eficiencia de estos métodos
depende tanto del pre-tratamiento de la muestra como de la selección del disolvente.

Fundamento: Se basa en la extracción de la grasa de cualquier sustancia mediante un


disolvente orgánico en forma continua, en el que la solubilidad de la grasa en el
disolvente es cuantitativa porque éste siempre actúa al estado puro.
Para esta determinación empleamos el Extractor Soxhlet. El equipo de extracción consiste en
tres partes: el refrigerante, el extractor propiamente dicho, que posee un sifón que acciona
automáticamente e intermitente y, el recipiente colector, donde se recibe o deposita la grasa.

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS


Equipo de extracción Soxhlet.
Papel de filtro Whatman # 41.
Equipo de destilación.
Balones de extracción.
Eter etílico.
Estufa.
Hornilla.

DETALLES EXPERIMENTALES
1.- Pese 2 gr de muestra. Hacer con el papel de filtro un paquete de tal forma que la
muestra quede segura. Coloque el paquete en la cámara de extracción.
2.- Pese el balón vacío, en el cual posteriormente se depositará la grasa, anote el peso.
Fije el balón a la parte inferior del Soxhlet en forma segura, con la finalidad de evitar la fuga
del éter etílico.
3.- Por la parte superior del Soxhlet vierta el éter etílico hasta que por diferencia de presión
baje a través del cuello del Soxhlet al balón, luego añada éter etílico hasta cubrir el
paquete. Fije bien el Soxhlet a la parte inferior del refrigerante.
4.- Empezar la extracción durante cuatro horas, evitando todo tipo de fuego tal como mechero,
cigarrillo encendido, etc., por esta razón se utiliza hornilla debido a que el éter etílico es altamente
inflamable. Controle que el flujo de agua en el refrigerante no se interrumpa, si esto ocurriese,
detener la extracción hasta que se regule el flujo adecuado del agua.
5.- Después de las cuatro horas de extracción recuperar el solvente a medida que se
condense en la cámara de extracción. Evite que la grasa depositada en el balón se queme, deje
enfriar el balón conteniendo la grasa para luego colocarlo en la estufa durante una hora, con la
finalidad de que el éter etílico se evapore completamente y sólo se tenga grasa.
6.- Después de estar una hora en la estufa, deje enfriar a temperatura ambiente. Pese el balón
conteniendo la grasa y anote el peso.

CALCULOS

BG - B
% GRASA = ---------- x 100 %
W
Donde :

B = Peso del balón vacío.

BG = Peso del balón más la grasa.

W = Peso de la muestra.

TÉCNICA DE KJELDAHL
En 1883 el investigador danés Johann Kjeldahl desarrolló el proceso básico del conocido
método actual de análisis de proteínas por el método Kjeldahl, más propiamente, para analizar
nitrógeno orgánico. Este método ha sufrido varias modificaciones. Así, Kjeldahl usó
originalmente permanganato de potasio para llevar a cabo el proceso de oxidación, sin
embargo, los resultados no fueron satisfactorios, de manera que este reactivo se descartó. En
1885 Wilforth encontró que se podía acelerar la digestión con ácido sulfúrico añadiendo algunos
catalizadores. Gunning en 1889 sugirió la adición de sulfato de potasio para elevar el punto de
ebullición de la mezcla de la digestión para acortar la reacción. Por lo tanto, el procedimiento
de esta técnica es más correctamente conocido como Método Kjeldahl-Wilforth-Gunning.

Fundamento: En esta técnica se digieren las proteínas y otros componentes orgánicos de los
alimentos en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores. El nitrógeno
orgánico total es convertido en sulfato de amonio. La mezcla digerida se neutraliza con una
base y se destila posteriormente en una solución de ácido bórico. Los aniones del borato así
formado se titulan con HCl estandarizado, lo cual se convierte en el nitrógeno de la muestra. El
resultado del análisis representa el contenido de proteína cruda del alimento ya que el nitrógeno
también proviene de componentes no protéicos

El método de Kjeldahl consta de tres partes fundamentale

PRIMERA PARTE: Disgregación de sustancia orgánica y su transformación en amoníaco.


SEGUNDA PARTE: Destilación del amoníaco.
TERCERA PARTE: Titulación.

Entendemos per proteína bruta el nitrógeno total de la muestra expresado como proteína. El
método no es apto para aquellas substáncias que presentan enlaces N-N, NO y NO2.

DIGESTION:

catalizadores
n - C -NH2 + mH2SO4 CO2 + (NH4)2 SO4 + SO2
proteína calor

NEUTRALIZACIÓN Y DESTILACIÓN

(NH2)SO4 + 2 NaOH 2NH3 + Na2SO4+ 2H2O

NH4 + H2BO3- (ión borato) NH3 + H3BO3 (ácido bórico

TITULACIÓN
El anión borato (proporcional a la cantidad de nitrógeno) es titulado con HCl estandarizado:

H2BO3- + H+ H3BO3

MATERIAL
Matraz de digestión Kjeldahl con capacidad de 125 ml, matraz de Erlenmeyer de 10 ml, matraz
volumétrico de 100 ml, mechero de Bunsen, pinzas (nueces), soporte universal, pipetas, pinzas
largas, embudo de cristal chico o mediano.
EQUIPO
Aparato digestor Kjeldahl (1 para todo el grupo).
1 aparato destilador micro Kjeldahl (1 por equipo).

REACTIVOS
Verde de bromocresol al 0.1% diluido en alcohol al 95%.
Rojo de metilo al 0.1% diluido en alcohol al 95%.
Ácido bórico al 2%.
Ácido clorhídrico 0.01N (solución valorada).
Hidróxido de sodio al 30%.
Ácido sulfúrico concentrado.
Mezcla catalizadora para la digestión: 2.5 g de dióxido de selenio + 100 g de sulfato de potasio
+ 20 g de sulfato de cobre pentahidratado (proporcionada por la coordinación de laboratorios).

MÉTODO

ELABORACION DE REACTIVOS
1.- Mezcla Indicadora.- Prepare por separado los indicadores verde de bromocresol al 0.1% y
el rojo de metilo al 0.1% diluidos en alcohol al 95%. Mezcle 10 ml. de verde de bromocresol
con 2 ml. de la solución de rojo de metilo en un frasco gotero.

2.- Ácido Bórico al 2%.- Disuelva 10 g de ácido bórico (en cristales) en 500 ml. de agua
destilada hirviendo. Después de que se enfríe transfiera la solución a un frasco tapado. Se
conserva indefinidamente.

3.- Ácido Clorhídrico 0.01N.- Prepare un litro y valórela con una solución de NaOH de la
misma normalidad.

4.- Hidróxido de Sodio al 30%.- Disuelva 150g de perlas de hidróxido de sodio en 350 ml. de
agua destilada. Almacene la solución en un frasco ámbar con tapón de vidrio.

5.- H2SO4 concentrado.

6.- Catalizadores para la Digestión.- Mezcle 2.5g de dióxido de selenio (SeO2), 100g de sulfato
de potasio (K2SO4) y 20 g de sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4 . 5H2O).

PROCEDIMIENTO
DIGESTIÓN
1.- Pese exactamente 0.15g de la muestra en un matraz de micro-Kjeldahl cuidando que la
muestra no se adhiera a las paredes o al cuello del matraz.
2.- Añada 2.5 ml. de H2SO4, dos perlas de ebullición y aproximadamente 1.0 g de mezcla
catalizadora.
3.- Someta a digestión la muestra en el aparato de microKjeldahl bajo una campana de
extracción, con el matraz ligeramente inclinado usando baja temperatura al inicio y aumentando
el calor a medida que procede la digestión, rotando los matraces de vez en cuando para
asegurarse de que se digiera toda la muestra. La digestión terminará cuando el color de la
muestra sea azúl-verde claro. El proceso tomará aproximadamente 90 minutos.
4.- Enfríe el matraz durante unos 4 minutos para que no se endurezca al solidificarse la
muestra.
5.- Añada 7 ml. de H2O cuidadosamente, poco a poco, a la muestra digerida. Mezcle y
permítale enfriarse.
DESTILACIÓN
6.- Encienda la unidad destiladora.
7.- Si es posible ajuste la velocidad de destilación a aproximadamente 5 ml. por minuto
8.- Abra la llave del agua para tener H2O circulando por el refrigerante todo el tiempo.
9.- Añada la muestra a la cámara de ebullición por medio de un embudo (para recuperar las
perlas de ebullición) y enjuague el matraz con aproximadamente 5ml. de H2O destilada.
10.- Coloque 1 frasco Erlenmeyer con 10 ml de ácido bórico y 2 gotas de indicador bajo la
salida de destilación.
11.- Añada aproximadamente 10 ml. de la solución de NaOH a la cámara de ebullición
LENTAMENTE. La mezcla digerida se tornará oscura (azúl-gris o café oscuro). Si no cambia
de color añada más NaOH.
12.- Deje un poco de NaOH en la copita superior del destilador.
13.- Colecte aproximadamente 20 ml. del destilado (4-5 minutos). El destilado estará listo para
ser titulado cuando se torna verde en el matraz receptor.
14.- Retire el matraz de Erlenmeyer y limpie la unidad destiladora enjuagando la cámara de
ebullición varias veces con agua destilada. Cada vez que se añada agua destilada hasta llenar
la copita superior de la unidad destiladora para el enjuague deje que ésta hierva primero.
Luego abra la llave de la parte que permite salir las muestras hacia fuera de la unidad
destiladora. Una vez vacía la parte en donde se procesa la muestra asegúrese de que esté
bien vacía. Si queda todavía un poco de agua en el fondo permita que hierva para que se vaya
toda hacia esa segunda parte de la unidad destiladora. El matraz estará listo para recibir la
segunda cantidad de agua destilada para lavar la unidad destiladora. Esta operación se repite
al menos unas 4 veces.
NOTA: La llavecita de la segunda parte de la unidad destiladora (que conduce la muestra
procesada hacia el vasito permanece cerrada (en posición horizontal) durante el procesamiento
de la muestra. Sólo se abre cuando se enjuaga el destilador.
TITULACIÓN
15.- Titule la muestra con 0.1N de HCl. Un color violeta indica el punto final de la titulación.
Compárese este color con el del blanco. Cada equivalente del HCl usado corresponde a
un equivalente de NH3 o a un equivalente de N en la muestra original. El peso del N en
mg está dado por miliequivalentes del ácido X 14 (el peso equivalente del N).
RECUPERACIÓN DEL AMONÍACO
Una posible fuente de variación en este método es la pérdida del gas amoníaco o una
falla en atrapar el amoníaco en el ácido bórico. Esto puede ocurrir en diferentes pasos del
proceso. Una técnica para buscar la recuperación del amoníaco consiste en destilar cantidades
conocidas de amoníaco líquido y titularlo con HCl. Se obtendrá otra vez el color púrpura en el
ácido bórico.
Mientras se digieren las muestras, se puede destilar una solución de sulfato de amonio. Añada
5, 10 ó 15 ml (mediante una pipeta) de solución de sulfato de amonio a la cámara de ebullición
de la unidad destiladora. Enjuáguela después con agua destilada y, si es posible, desionizada.
Coloque inmediatamente la punta de la unidad destiladora en 10 ml de ácido bórico +
indicador. Colecte aproximadamente 20 ml. de destilado.
Titule la muestra con el HCl estandarizado, registre los ml. de HCl empleados y calcule el peso
del nitrógeno en el (NH4)2SO4.
Cálculos

Moles de HCl = Moles de NH3 = Moles de N en la muestra

% N = NHCl x Volumen de ácido corregido x 14 g N x 100


g de muestra mol

en donde:
NHCl = Normalidad del HCl en moles/1000ml.
Volumen del ácido corregido = (ml. del ácido estandarizado para la muestra) - (ml. de ácido
estandarizado para el blanco).
14 = Peso atómico del nitrógeno.

Se utiliza un factor para convertir el porcentaje de N a porciento de proteína cruda. El


porcentaje de N en proteína para el harina de trigo es de 18% y su factor de conversión es de
5.70.

TÉCNICA DE VOLHARD
En este método los iones plata se titulan con una solución patrón de tiocianato:
Ag+ + SCN-  AgSCN(s)
El indicador hierro (III), y la solución se vuelve roja con un ligero exceso de ion tiocianato.
La titulación debe llevarse a cabo en medio ácido para evitar la precipitación del hierro (III)
como óxido hidratado.
La aplicación más importante del método de Volhrad tiene lugar en la determinación indirecta
de halogenuros. A la muestra se le añade un exceso conocido de solución estándar de nitrato
de plata. El exceso de ion plata se determina en una retro-titulación con una solución patrón de
tiocianato. El medio fuertemente ácido que se requiere en el método de Volhard representa una
ventaja sobre cualquier otro método de análisis de halogenuros, puesto que los iones
carbonato, oxalato y arseniato no interfieren formando sales. El cloruro de plata es más soluble
que el tiocianato de plata, y debido a esto, en las determinaciones de cloruros por el método de
Volhard, la reacción
AgCl + SCN- AgSCN(s) + Cl-
Se completa considerablemente cerca del punto final durante la re-titulación del exceso de ion
plata. Esta reacción ocasiona que el punto final se decolore y, por lo tanto, haya un mayor
consumo de ion tiocianato, de tal forma que se obtienen resultados bajos en el análisis de
cloruros.
MÉTODO
En vaso de capacidad apropiada colocar 5 gr. de muestra, agregar 50 ml. agua destilada tibia
mas 10 ml. NaOH al 4%, agitar hasta disolución total, dejar enfriar, añadir 50ml.
de HNO3 concentrado, aforar a 100 ml. con agua destilada y filtrar. Tomar entre 20 a 50 ml.
de filtrado, añadir 10 ml. de AgNO3 0.1 N más 1 ml. de solución de sulfato férrico amónico
al 8% y de bureta dejar caer la solución de KCNS 0.1N hasta la obtención de una
coloración rosada persistente. Anotar el número de ml. gastados y realizar los cálculos.

CALCULOS

ml. AgNO3 0.1N colocados – ml. KCNS 0.1N gastados


ml. AgNO3 0.1N combinado

1 ml. AgNO3 0.1N………………………. 0.00585grs. NaCl

DETERMINACIÓN DE CALCIO
Una de las aplicaciones más universalmente conocida de las complexometrías con AEDT
(ácido etilendiaminotetracético) es la determinación de calcio.

MÉTODO COMPLEXOMÉTRICO.
FUNDAMENTO: Se basa en que la murexida o purpurado de amonio, indicador metálico
sensible, en un medio amortiguado apropiado (pH 11-13) forma con los iones metálicos,
complejos coloreados poco estables; por ejemplo con el calcio forma el complejo calcio
murexida de color rosado. La complexona EDTA, extrae el calcio del complejo color rosado
de calcio-murexida, el cual se rompe dando lugar a la formación de un complejo incoloro
tipo quelato de complexonato de calcio, más estable que el anterior complejo coloreado.
Después que todo el calcio forma su complejo con el EDTA la solución de color rosa vira
al color azul violeta color de la murexida a pH alcalina, lo cual indica el final de la titulación.

Reactivos:
1. Indicador Murexida: Purpurato de amonio……………..1.00 g.
Cloruro de sodio Q.P…………….500.00 g.

2. Solución de NaOH 2N: Hidróxido de Sodio………80.00 grs.


Agua destilada c.s.p…………1.000 m

3. Solución patrón de cloruro de calcio 0.02N:


Se secan en estufa unos gramos de carbonato de calcio pulverizado a 105ºC, por una
noche o un tiempo prolongado. Se pesa un gramo y se lleva a un matraz erlenmeyer de 500 ml.
Se añade 15 ml. de agua destilada y 5 ml. de HCl para disolverla sal de calcio. Se agrega 200
ml. de agua destilada y se hierve unos minutos para eliminar el CO2. Se enfría y se ajusta a
pH 6.8 usando amoniaco concentrado. Se trasvasa a una fiola de 1.000 ml., y se afora
con agua destilada.

4. Solución de EDTA sodica 0.02N:


EDTA sódica……..4.00 g.
MgCl2 6H2O……...0.10 g.
Formol al 40%........4.00 ml.
Agua destilada c.s.p………750.00 ml
Una vez preparada esta solución se titula de la siguiente manera; en un erlenmeyer se colocan:
25 ml. de la solución patrón de calcio
25 ml. de agua destilada
1ml. de NaOH 2N
0.2g. de indicador para calcio
Luego se añade la solución EDTA lentamente, con agitación continua, hasta laobtención de una
coloración azul violeta característica. Se diluye el resto de la solución de manera que 1 ml.
de ella sea igual a 1ml de solución de cloruro de calcio.

PROCEDIMIENTO CON LA MUESTRA PROBLEMA


PREPARACIÓN DE LA MUESTRA : Se pesa 0.10 g. de cenizas, se le añade unas gotas
de HCl, diluir con agua destilada, filtrar y aforar a 100 ml

Procedimiento: Tomar 5 mls. de la muestra problema, diluir con agua destilada hasta 25 ml.,
se ajusta a pH 6.8 usando amoniaco concentrado, añadir 25 ml. de agua destilada 1ml.
de solución de NaOH 2N y 0.20 g. de indicador para calcio. Se titula con la solución de EDTA
sodica o solución de versenato hasta que el color cambie de rojo a rosa al azul violeta.
Anotar los mililitros de solución de versenato gastados y realizar los cálculos aplicando la
formula siguiente: meq./l de calcio =(20 * a) / b

En donde:
a: ml. de versenato consumidos.
b: ml. de muestra tomada

DETERMINACIÓN DE POTASIO
Reactivos
• Acido Clorhídrico concentrado.
• Solución estándar de Potasio: Para preparar solución stock (500 ppm), disuelva 0.477 g
de Cloruro de Potasio y llévelo a 500 ml con agua destilada. Para preparar el estándar de
trabajo (10 ppm), diluya 1:50.
• Aceite de oliva (puro)
Materiales y Equipo
• Crisoles de Sílice.
• Fotómetro de flama
• Mufla
Procedimiento
1. Seque 2 g de muestra en un crisol de sílice a 100°C para eliminar la humedad. Adicione
unas cuantas gotas de aceite de oliva y caliente sobre la flama hasta que deje de
producir flama.
2. Calcine a 500°C en la mufla por 24 h, enfríe y adicione 2 ml de HCI concentrado para
disolver el residuo.
3. Llévelo a 100 ml con agua destilada, tome 1 ml de la solución y haga una nueva dilución
a 100 ml con agua destilada.
4. Ajuste el fotómetro de flama para que de una lectura de 100 con el estándar de 10 ppm y
lea la solución muestra.
5. Si la lectura no se encuentra entre 50 y 100 haga una dilución al momento para dar una
lectura apropiada.
DETERMINACIÓN DE FÓSFORO

MÉTODO DE FISKE Y SUBBROW


FUNDAMENTO: Se basa en el desarrollo de una coloración azul por formación de un
compuesto de fosfomolidos o por reducción selectiva del fosfo-molibdato bajo la acción del
acido aminonalftolsulfónico.
La coloración obtenida es utilizada para la valoración fotocolorimétrica por comparación con una
solución estándar de fósforo.

APARATOS: Fotocolorímetro Klatt – Summerson. Filtro rojo de 660 mu

REACTIVOS:
a) Ácido tricloroacético al 5 %.
Sobre una luna de reloj se pesa 5 g. del ácido, se disuelve en agua y se afora a 100ml.
La solución se guarda en un lugar refrigerado.
b) Solución de molibdato de amonio al 2.5 %.
Pesar 12.5 g. de molibdato de amonio, colocarlos en una fiola de 500 ml. y disolverlos en 100
ml. de agua destilada. Agregar 150 ml. de ácido sulfúrico 10 N y aforar a 500 ml.
con agua destilada. Mezclar
c) Solución de sulfitos.
Disolver 59.5 g. de bisulfito de sodio y 2 g. de sulfito de sodio anhidro en agua hasta 250 ml.
Si la solución fuera algo turbia se filtra.
d) Solución de ácido 1,2,4 aminonaftolsulfónico al 0.25 %.
Se pesan 0.5 g. del ácido, colocarlo en una probeta, añadir 125 ml. de solución de sulfitos y
aforar a 200 ml. con agua destilada. Mezclar.
e) Solución patrón de fósforo.
Se pesan a 0.400 g. de fosfato monopotásico puro, se colocan en una fiola de1.000 ml. se
agrega una pequeña cantidad de agua destilada para disolver y luego aforar. Mezclar.

La solución contiene por mililitro 0.1 mg. de fósforo

PREPARACIÓN DE LOS ESTÁNDAR.


a) Estándar Nº 1: Se mide 2 ml. de la solución patrón y se afora a 50 ml. con ácido
tricloroacético al 5 %.
1 ml. de la solución………………….. 0.004 mg. de P

b) Estándar Nº 2: Se mide 4 ml. de la solución patrón y se afora a 50 ml.con ácido


tricloroacético al 5 %.
1 ml. de la solución…………………... 0.008 mg.deP

c)Estándar Nº 3: Se mide 6 ml. de la solución patrón y se afora a 50 ml. con ácido


tricloroacético al 5 %.

1 ml. de la solución…………………... 0.012 mg.deP

d) Estándar Nº 4: Se mide 8 ml. de la solución patrón y se afora a 50 ml. con ácido


tricloroacético al 5 %.
1 ml. de la solución…………………... 0.016 mg. De P

OBTENCIÓN DE LA CURVA.
De cada uno de los standards preparados anteriormente, se toma 5 ml. y se colocan en 4
fiolas de 25 ml. Luego a cada una de ellas se agrega 1 ml. de la solución de molibdato
de amonio, 0.4 ml. de solución de ácido aminonaftolsulfónico, se mezcla y se afora
con agua destilada. Volver a mezclar. Se deja en reposo 10 minutos y se hace las lecturas,
con cuyos datos se traza la curva.

PREPARACIÓN DEL BLANCO.- Se sigue el mismo procedimiento pero sin el agregado de la


solución estándar.

PROCEDIMIENTO A SEGUIR CON LA MUESTRA EXAMEN

a) En una fiola de 100 ml. se colocan:


- Cenizas……………………………………….0.1 g.
- AC. Trioloracético al 5% c.s.p…………….100 ml
Se mezcla mediante agitación enérgica y se filtra a través de un papel de filtro fino. El filtrado
debe ser claro transparente.
b) Colocar en una fiola de 25 ml:
- Del filtrado obtenido anteriormente………………5 ml.-
Sol. de molibdato de amonio………………….....1 ml.-
Sol. del ácido aminonaftolsulfónico…………...0.4 ml.
Mezclar y aforar a 25 ml. con agua destilada. Volver a mezclar, se deja en reposo 10 minutos.
Luego se procede a la lectura, con la cual se consulta la curva. Al igual que el calcio, este
mineral es indispensable para el buen desarrollo de los organismos cultivados, debiendo estar
presente en las dietas en cantidades suficientes para satisfacer las necesidades metabólicas de
los organismos. Este elemento en proteínas de origen vegetal puede estar formando parte de
fitatos, por lo cual su disponibilidad puede estar limitada, por lo que se recomienda una
determinación de ácido fítico previa al uso de tales materiales.

Reactivos
• Reactivo de Molibdato. Disuelva 40 g de molibdato de amonio 4.H2O en 400 ml de agua
caliente y enfríe. Disuelva 2 g de metavanadato de amonio en 250 ml de agua caliente,
enfríe y adicione 450 ml de ácido perclórico al 70%. Gradualmente adicione la sol. de
molibdato a la sol. de vanadato con agitación y diluya a 2 1.
• Estándar de Fósforo. Prepare una solución stock disolviendo 8.788 g de Ortofosfato
dihidrógeno potasio en agua y llévelo a 1 1. Prepare la solución de trabajo diluyendo la
sol. stock 1 en 20 (Conc. de trabajo 0.1 mg P//ml).
Materiales y Equipo
• Espectrofotómetro para leer a 400 nm
• Matraces graduados de 100 ml

Procedimiento
1. Pase una alicuota como en la determinación de Ca a un matraz de 100 ml y adicione 20
ml del reactivo de molibdovanato. Aforelo, mezcle y deje reposar por 10 min.
2. Transfiera alícuotas del estándar de trabajo conteniendo 0.5, 0.8, 1.0 y 1.5 mg de P en
matraces de 100 ml y trátelos como al anterior.
3. Lea la muestra a 400 nm ajustando el estándar de 0.5 mg a 100% de transmisión.
4. Determine mg de fósforo en la muestra usando una curva estándar.
BIBLIOGRAFIA
http://www.xtec.es/~ffernan5/castellano/05001.htm
http://www.geocities.com/ResearchTriangle/System/8440/cuantitativo/volhard.html
http://www.scribd.com/doc/31311635/GUIA-DE-PRACTICAS-DE-BROMATOLOGIA-2DA-
EDICION
http://www.tutorvista.com/content/chemistry/chemistry-iii/organic-compounds/quantitative-
analysis.php