Microbiología

Ciencia que estudia los microorganismos

Teodor Experimentos
Leeuwenhooek
Schwann de Pasteur
 Teodor Schwann indica que las levaduras son
responsables de la fermentación alcohólica.

Louis Pasteur

Cada proceso de fermentación

es realizado por un
microorganismo distintos.

Demuestra la falsedad de la
teoría de la generación
espontánea demostrando que
los microbios estaban en el aire.
Métodos de estudio de los microorganismos

Microorganismos
En la naturaleza

Para estudiarlos
Cualquier ambiente
Mezcla de especies
Condiciones
Cultivos controladas y
óptimas

Métodos de aislamiento
Identificación
Asepsia y esterilización
Individuos genéticamente
homogéneos (cultivo puro)
 Medios de cultivo de los microorganismos

Complejos (no definidos)

Composición
Sintéticos (comp. definida)

Líquidos
Medios de Estado físico
cultivo Sólidos

Medios de enriquecimiento

Utilidad Medios de aislamiento

Medios de diferenciación
1. Se pasa un asa de siembra por
el medio de cultivo
2. Por la ultima estría se vuelve a
pasar el asa (sin recargar)
3. Se pasa nuevamente por la
última zona

En la zona 3 deberían aparecer

colonias aisladas
Métodos de aislamiento de los microorganismos

Aislamiento por agotamiento de asa en superficie.

Con un asa bacteriológica, se pasa una porción de la muestra a la

superficie de un medio de cultivo hecho a base de agar y se siembra en
el medio por estrías en cuadrantes.
 Métodos de aislamiento de los microorganismos

2. Siembra en estrías

Se esteriliza el asa y
luego se toma una Crecimiento de colonias confluentes
muestra del tubo al comienzo de la siembra por estría
Colonias aisladas
al final de la
siembra por estría

1. Dilución y siembra por

extensión en superficie

Se realiza una siembra

por estría en una placa de
agar con medio estéril.
Después de una estría inicail 3. Dilución y siembra
Se hacen estrías en ángulo en profundidad
Métodos de estudio de los microorganismos

Aislamiento por dilución y siembra en profundidad

Métodos de estudio de los microorganismos

Aislamiento directo
Para los microorganismos de mayor
tamaño (algas, protozoos) que se
pueden aislar utilizando pipetas Pasteur
y una lupa binocular.
Colonias de bacterias

Serratia marcescens
Cultivada en Agar
MaConkey

Pseudomonas aeruginosa
Cultivada en
Agar Tripticasa-soja
Shigella flexneri
Cultivada en
Agar MacConkey
Colonias de Bacillus subtilis que han
crecido en medios con pocos nutrientes
Métodos de esterilización
Comprende todos los procedimientos físicos y químicos, que se emplean
para destruir los microorganismos de un medio de cultivo o material de
laboratorio.

Métodos físicos Métodos químicos

Calor oxido de etileno

Tyndalización Aldehídos

Peróxido de
Filtración
Hidrógeno

Radiaciones

Ultrasonidos
Métodos físicos

Es el más utilizado. Se emplea un autoclave (120ºC-

Calor
20’)

Tyndalización Esterilización por acción discontinua del vapor de

agua.

Se usan membranas filtrantes con poros de un

Filtración
tamaño determinado. Se usan si el calor afecta al
medio de cultivo.

Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para

Radiaciones
esterilizar materiales termolábiles. Muy usadas a
escala industrial. Afectan a los ácidos nucleicos
Agentes Temperaturas elevadas eliminan a los microorganismos.
físicos Influye la temperatura, el tiempo y la humedad

•Esterilización a altas temperaturas. Cientos de grados.

Hornos, llama. Se puede hacer si el material lo resiste
•Calor seco. Hacen falta más de 100ºC durante periodos
Temperatura
prolongados para asegurar la esterilización
•Calor húmedo. A 100ºC durante varios minutos

Algunos microbios y formas de resistencia son resistentes a las

altas temperaturas. Por fortuna no suelen ser patógenos ni
competidores
Radiaciones Rayos X, ultravioletas y gamma
ionizantes Destruyen los microorganismos de superficies expuestas
Filtración de Se hace pasar el líquido por un tamiz de diámetro inferior al del
medios líquidos microorganismo
Agentes Desinfectantes y esterilizantes para superficies.
químicos Suelen oxidantes enérgicos o pH extremos:
Sustancias
Lejía, amoniaco...
químicas
Antisépticos para la piel.
inorgánicas
Yodo, Mercurocromo, Alcohol, Agua oxigenada en bajas
concentraciones
Sustancias específicas para tipos concretos o grupos de
Antibióticos
microorganismos.
Utilización de un asa de cultivo como método de
transferencia aséptica
 Pasteurización

• No es un proceso de esterilización
• Es un proceso que reduce la población microbiana de un líquido.
• La leche, nata y ciertas bebidas alcohólicas (cerveza y vino), los zumos, se
someten a tratamientos de calor controlado que sólo matan a ciertos tipos
de microorganismos pero no a todos.
• La temperatura seleccionada para la pasteurización se basa en el tiempo
térmico mortal de microorganismos patógenos. Es el tiempo más corto
necesario para matar una suspensión de bacterias a una temperatura
determinada.
• Hay tres tipos

– Pasteurización tradicional: 63 a 65°C por 30 min.

– Pasteurización Flash: el líquido se calienta a 72ºC por 15 seg y
rápidamente se enfría. Puede ser adaptada a flujos continuos.
– Ultrapasteurización: 150ºC por 1-3 seg
Métodos de identificación

Estudios de microscopía
• Diferencian por la morfología
• Se utilizan tinciones (Gram)

Métodos bioquímicos
• Según la utilización de diferentes sustratos

Técnicas de biología molecular

• Cada vez más usadas
• Tecnicas de hibridación con sondas marcadas
 Clasificación de los microorganismos
Bacterias

Protozoos

Algas

Hongos (levaduras)
 Bacterias

Características:

• Organismos procariotas
• Tamaño entre 0.1 y 50 µm
• Autótrofas o heterótrofas. Anaerobias, aerobias o anaerobias
facultativas.
• Se encuentran en cualquier tipo de ambiente sobre la tierra.
• Pueden estar solas o formar colonias.
• La forma es un criterio de clasificación (cocos, bacilos, vibrios y
espirilos)
• Hoy en día se clasifican por comparación de secuencias de ARN
ribosómico.
• Se distinguen dos grandes grupos: Eubacterias y arqueobacterias
 eucariotas
Dominio
Eukarya

Dominio
Dominio Archea
Bacteria

procariotas

PROGENOTE

(Antepasado universal)
Eubacterias • Grupo amplio, con varias ramas
evolutivas.
• Gran capacidad adaptativa.
Bacterias purpureas y verdes • Son la mayor parte de las bacterias
conocidas
Cianobacterias

Proclórofitas

Bacterias nitrificantes

Bacterias fijadoras de nitrógeno

Espiroquetas

Bacterias del ácido láctico

Micoplasmas
 Arqueobacterias

Halofílicas

Termofílicas

Metanógenas

• Mayoría de anaerobias
• Membranas sin ac. grasos
• Pared sin peptidoglucanos
 Morfología bacteriana
• Organización procariota
• Unicelulares
CARACTERÍSTICAS • Ausencia de membrana nuclear
GENERALES • Ausencia de orgánulos membranosos
• ADN circular y no unido a histonas
• Ribosomas 70 S

• Capsula
• Pared bacteriana
• Membrana plasmática
ESTRUCTURAS PRESENTES • Citoplasma
o Ribosomas
EN LAS BACTERIAS o Inclusiones
o Vesículas
• Material genética
• Pili y fimbrias
• Flagelos
 Cápsula bacteriana

• Este componente no aparece en todas las bacterias (en las patógenas si

suele estar presente).
• Mide entre 100 y 400 Å de grosor
• Está formada por polímeros glucídicos que no llegan a formar una
estructura definida.
 Propiedades de la Cápsula

o Mejora en las propiedades de difusión de nutrientes hacia la célula.

o Protección contra la desecación.
o Protección contra la predación por parte de protozoos.
o Protección contra agentes antibacterianos:
o Adhesión a sustratos:
• Sobre sustratos inertes: Esta propiedad tiene una serie de
importantes secuelas económicas:
• corrosión y obstrucción de cañerías
• formación de placa dental y caries
• formación de biopelículas en catéteres y prótesis quirúrgicas
• Sobre sustratos vivos (tejidos de organismos superiores):
• Efecto beneficicoso (microflora intestinal)
• Es uno de los factores de virulencia, de los que depende el
inicio de muchas infecciones por parte de bacterias
patógenas.
o Como receptores para ciertos bacteriófagos.
 Pared celular
Bacteria Gram
positiva.
1-membrana citoplasmática,
2-pared celular,
3-espacio periplásmico.
Bacteria Gram
negativa
4-membrana citoplasmática,
5-pared celular,
6-membrana externa,
7-espacio periplásmico.
• Cubierta rígida que rodea el protoplasma
• Poseen todas las bacterias excepto:
• Micoplasmas
• Thermoplasma
• Espesor entre 50 a 100 Å
• 20% del peso seco de la bacteria
• Sirve como criterio de clasificación según su
respuesta a la tinción de Gram (Gram +
/Gram -)
• Funciones:
• Protección ante cambios de presión
osmótica
• Regulación del paso de iones
• Mantenimiento de la forma celular
• Resistencia a antibióticos
Bacterias gram positivas

Gram +

Gram -
 Bacterias gram positivas

Ácido lipoteicoico Ácido teicoico

Pared formada por una capa gruesa

de mureína (peptidoglucano)
formado por NAG y NAM enlazados
por enlaces O-glucosídicos.
Peptidoglucano
Las moléculas de NAM se enlazan
con proteínas, polisacáridos y
ácidos teicoicos

Membrana
plasmática
Bacteria Gram-positiva.

1-membrana citoplasmática
2-peptidoglicano
3-fosfolípidos
4-proteínas
5-ácido lipoteicoico.
 Bacterias gram negativas

• Membrana citoplasmática (membrana LPS

interna) Porina
• Pared celular delgada de peptidoglucano
• Membrana externa

Entre la membrana citoplasmática interna y Lípido A

la membrana externa se localiza el espacio
periplásmico, que contiene enzimas
importantes para la nutrición en estas
Peptidoglucano
bacterias.
Membrana plasmática

La membrana externa contiene

proteínas como las porinas (canales
proteícos que permiten el paso de
ciertas sustancias) o diversos enzimas.

También presenta lipopolisacáridos.

Abajo: Bacteria Gram-negativa. 1-membrana citoplasmática
(membrana interna), 2-espacio periplasmático, 3-membrana
externa, 4-fosfolípidos, 5-peptidoglicano, 6-lipoproteína, 7-
proteínas, 8-lipopolisacáridos, 9-porinas.
 Membrana plasmática de las bacterias

Constituye una fina capa de unos 8 nm de espesor: mantiene la integridad celular y es altamente
selectiva.
ESTRUCTURA

Diferencias con la de eucariotas BICAPA LIPÍDICA Proteína

Fosfolípidos
• No tiene esteroles como el colesterol.
• El porcentaje de los distintos tipos de fosfolípidos es
diferente. Fosfolípidos
• Algunas bacterias como las arqueas tienen unidades de
isopreno en lugar de ácidos grasos.
• En algunas arqueas las cadenas hidrofóbicas de cada lado se
unen covalentemente entre sí formando una monocapa. MONOCAPA LIPÍDICA

La estructura de monocapa es más estable y resistente en

ambientes con temperaturas elevadas.
Mesosomas

1. Invaginaciones de la membrana
plasmática.
2. Incrementan la superficie de la
membrana.
3. Contienen enzimas realcionados con la
respiración o fotosíntesis (semejantes a
crestas mitocondriales o tilacoides)
4. Enzimas de fijación de nitrógeno y
asimilación de nitritos y nitratos
5. Sujeta el cromosoma bacteriano
6. Enzima ADN polimerasa
 Citoplasma

Agua

Proteínas

Material genético: ADN circular, bicatenario, plásmidos

Ribosomas: 70s, aparecen libres

Inclusiones. Pueden ser residuos metabólicos (no en todas las bacterias)

Vesículas: Para la flotación de bacterias fotosintéticas

 Material genético

• Circular
ADN • Bicatenario
bacteriano • Plegado
• Asociado a proteínas no histónicas

• Material extra cromosómico

• Puede haber varias copias
Plásmidos • ADN bicatenario
• Pueden intercambiarse
• Se replican de forma independiente
Pili y fimbrias

• Estructuras tubulares de bacterias gram

negativas.
• Sirven de anclaje.
• Las fimbrias son cortas y numerosas.
• Los pili atraviesan la membrana (las fimbrias
no) y permiten el paso de material genético.
 Flagelo bacteriano

Número y posición variable:

Monótricas

Partes del flagelo

Lofótricas • Cuerpo basal
• Filamento
Anfítrico

Perítricas
 Nutrición bacteriana

Fuente de carbono

Fuente de carbono Fuente de carbono

inorgánica orgánica
Fuente de
Luz Fotoautótrofos Fotoorganótrofos
energía
Energía
Quimioautótrofos Quimioorganótrofos
química
Reproducción bacteriana

Asexual Bipartición

Reproducción Conjugación

Parasexual Transformación

Transducción
 Bipartición

• Se obtienen dos células hijas, con idéntica

información en el ADN circular, entre sí, y
respecto a la célula madre,
• Las células hijas son clones de la
progenitora.
• Se produce cuando la célula ha aumentado
su tamaño y ha duplicado su ADN.
• El ADN bacteriano se une a un mesosoma,
que separa el citoplasma en dos y reparte
cada copia del ADN duplicado a cada lado.
Conjugación

• Una bacteria donadora (F+) pasa

plásmidos (ADN) a una bacteria
receptora (F-).

• Si el plásmido se integra en el
cromosoma bacteriano se llama
episoma y puede transportar genes
de este cromosoma.
Transformación

Las bacterias son capaces de captar del medio trozos de ADN procedentes de
otras bacterias o de otros organismos e integrarlos en su cromosoma
Transducción

• Cuando una célula es atacada por un virus bacteriófago, la bacteria genera

nuevas copias del ADN vírico.

• En la fase de ensamblaje se pueden introducir fragmentos de ADN

bacteriano en la cápsida del virus.

• Los nuevos virus ensamblados infectarán nuevas células. mediante este

mecanismo, una célula podrá recibir ADN de otra bacteria e incorporar
nueva información.
 Funciones de relación

• Muchas bacterias tienen movilidad,

ya sea por flagelos, contracción o
reptación, acercándose o alejándose
de los estímulos ambientales (luz,
alimentos…)
• Pueden responder modificando su
metabolismo, adaptándolo a las
condiciones concretas.
• Si no pueden moverse y el ambiente
es desfavorable originan formas de
resistencia, las endosporas, formas
de vida latente protegidas por una
gruesa membrana, capaces de
resistir condiciones extremas.
• Cuando el ambiente es favorable,
germinan y originan bacterias
funcionales.
 Protoctistas: Las algas
•Son Eukarya autótrofos fotolitótrofos.
•Algunas son móviles mediante flagelos y otras sésiles.
•Sus paredes celulares tienen principalmente celulosa.
•Viven en medios acuáticos o en medio terrestre con abundante humedad.
•Tienen importancia ecológica como productores de oxígeno y ser la base de
las cadenas tróficas en ecosistemas acuáticos (fitoplacton)
Protoctistas: Protozoos

Sarcodinos
• Tienen pseudópodos. Se alimentan por fagocitosis. Son de vida libre y
forman parte del plancton.
• Ejemplos: Foraminiferos, radiolarios, amebas

Flagelados
• Tienen flagelos. Pueden ser parásitos o formas libres.
• Ejemplos: Leishmania, Tripanosoma

Ciliados
• Cuerpo cubierto de cilios. Muchos disponen de dos núcleos. Realizan
procesos de conjugación
• Ejemplos: Paramecium, Vorticellas

Esporozoos
• Inmóviles, parásitos y se reproducen por esporulación
• Ejemplos: Plasmodium (malaria)
 Protoctistas: Hongos

•Son Eukarya heterótrofos, unicelulares o pluricelulares

•Sus paredes celulares tienen principalmente quitina.
•Viven en ambientes muy diversos, la mayoría terrestres.
•Tienen importancia ecológica como descomponedores (saprófitos)
•Se reproducen por esporas, que se forman en las hifas. El conjunto de hifas es el
micelio
•Dependiendo de la estructura formadora de esporas se dividen en Ascomycetes (ascas)
y Basidiomycetes (basidios).
 Grupos de hongos

HONGOS FILAMENTOSOS LEVADURAS

Hifas aéreas Conidios

• Son hongos filamentosos
(esporas)
unicelulares de forma
ovoide.
• Se reproducen
asexualmente por
gemación. Candida albicans es una
Hifas sustrato
levadura capaz de formar
• Son importantes en
procesos industriales de micelio.
• Son los típicos mohos de la fruta, el pan o el queso.
fermentación.
• Forman filamento o hifas que se agrupan para formar el
micelio.

SETAS HONGOS MUCOSOS

• Hongos filamentosos del grupo Basidiomycetes.
• Sus cuerpos fructíferos se denominan setas.
• La fusión de micelios haploides origina hifas dicarióticas
que formarán las setas.
• Filogenéticamente son muy distantes de los hongos (tienen
características entre hongos y protozoos)
• Se alimentan de microorganismos sobre materia vegetal en
descomposición.
• Se dividen en hongos mucosos celulares y acelulares.
 Los virus

Características generales

• Descubiertos por Pasteur (1884)

• Son parásitos intracelulares obligados que
utilizan metabolismo y reproducción del
huésped.
• Poseen ADN ó ARN como material genético
y una envoltura proteica que rodea el ácido
nucleico.
• Son metabólicamente inertes y carecen de
maquinaría para generar energía o
sintetizar moléculas.
• Fuera del huésped no tienen vida (viriones)
 Virus Otros microorganismos

Tamaño Generalmente < 200 nm Generalmente > 200 nm

Ácido nucleico ADN ó ARN ADN y ARN

Pared y membrana celular

Cubierta externa Simple y proteica
complejas

Reproducción Requiere huésped Generalmente independiente

Utiliza maquinaría metabólica Posee su propia maquinaría

Metabolismo
del huésped metabólica

No puede ser cultivado en Usualmente pueden ser

Cultivo
medios libres de células cultivados en medio sin células
Los virus: Clasificación

Según el organismo Según el material

Por su morfología
infectado genético

ADN doble
Bacteriofagos Helicoidales
cadena

Virus ADN cadena

Icosaédricos
animales simple

Virus ARN doble

Complejos
vegetales cadena

ARN cadena
Con envoltura
simple
Los virus: Clasificación
 Los virus: Morfología

• Cápsida proteica
Nucleocápsida
• Ácido nucleico Virión
• Envoltura (no siempre)

Las proteínas de la cápsida se llaman capsómeros y según se ordenen sirven como

sistema de clasificación de los virus

El ácido nucleico forma

una espiral. Los Cabeza icosaédrica y cuello
Helicoidales Complejos
capsómeros tienen helicoidal
simetría helicoidal

Capsómeros de dos tipos Envoltura membranosa

Icosaédricos Con envoltura
hexones y pentones con glucoproteínas víricas
Los virus: Multiplicación

El ciclo replicativo de los bacteriófagos pueden seguir dos caminos:

Lisis

CICLO
LÍTICO
Síntesis de proteínas y
Replicación del
ensamblaje de
ADN vírico
partículas víricas

Inyección del
ADN vírico

CICLO ADN Cromosoma Integración del ADN

LISOGÉNICO vírico bacteriano vírico en el cromosoma División celular
bacteriano
Ciclo lisogénico
 Fases de la multiplicación vírica
1. ADSORPCIÓN
La proteína de adhesión viral reconoce receptores específicos en el exterior de la
célula. Las células que carecen de los receptores apropiados no son susceptibles al
virus.
2. PENETRACIÓN
Los virus penetran las células de maneras diversas dependiendo de la naturaleza
misma del virus.
Virus envueltos
(A) Entran por fusión con la membrana plasmática.
(B) Entada vía endosomas en la superficie celular
Virus no envueltos o desnudos
Pueden cruzar la membrana plasmática directamente o pueden ser tomados en
endosomas. Si son transportados en endosomas, luego cruzan (o destruyen) la
membrana de dichas estructuras.
3. PÉRDIDA DE LA CÁPSULA (fase de ECLIPSE)
Perdura hasta que nuevos viriones infecciosos sean creados.
4. SÍNTESIS DE ÁCIDO NUCLEICO Y PROTEINAS VIRALES
5. ENSAMBLAJE/MADURACIÓN
6. LIBERACIÓN O DESCARGA
Virus envueltos

Virus desnudos
 Ciclo de un retrovirus: VIH

1. Penetración en la célula y perdida

de envoltura
2. Paso de ARN a ADN gracias a la
transcriptasa inversa
3. Formación de ADN de doble
cadena
4. Integración en el cromosoma
celular
5. Transcripción
6. Traducción de proteínas víricas
a. Envuelta
b. Capsulas
c. Transcriptasa inversa
7. Ensamblaje
8. Salida de la célula
 Viroides

• Son los agentes infecciosos más pequeños

conocidos.
• No poseen proteínas ni virus.
• Son secuencias de ARN circular que interfieren
con el ARN celular.
• Tienen una fases extracelular (metabólicamente
inactivos) y otra intracelular
• Se han encontrado sólo en núcleos de células
vegetales, sobre todo, en cítricos.
• Pueden actuar como ribozimas y catalizar su
propia replicación.
• Se las considera las secuencias más antiguas,
anteriores a las células más primitivas, es decir,
antes de la formación del primer ser vivo.
Plantas afectadas
por viroides
 Priones

• Son proteínas alteradas que actúan

provocando un cambio PrP
conformacional en proteínas
normales, transformándolas en
proteínas alteradas.

• Este cambio provoca la pérdida de

la función en la proteína, pudiendo
generar graves alteraciones en la
célula.

• Éste es el caso del síndrome de las

"vacas locas" o la encefalopatía
espongiforme bovina y su variante
en la especie humana.
PrPsc
1. La PrPsc, la forma molecular resistente a proteasa, actúa como ‘plantilla’.
2. Se asocia con la forma helicoidal permitiendo a esta última ser convertida a
la forma resistente de pliegues beta (presuntamente mediante la
disminución de barreras energéticas que normalmente previenen que esto
suceda).
3. Ahora hay dos moléculas de la forma resistente que pueden actuar como
plantilla y así el proceso se acelera.
Enfermedades causadas por priones
En el ser humano
• Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob
• Insomnio familiar fatal.
• Nueva variante de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob.
• Enfermedad de Gerstmann-Straüssler-Scheinker..
• Kuru

En especies animales
• "Tembladera" o Scrapie (prurito lumbar) en ovejas.
• Encefalopatía espongiforme bovina (llamada enfermedad de las vacas locas).