Aspectos generales de la Fermentación.

Crecimiento Microbiano y modelación

matemática del cultivo por Lotes.

Factores ambientales que inciden en el

crecimiento.

Fuentes de nutrientes y factores Limitantes.

CRECIMIENTO MICROBIANO
2016

1
 Aspectos generales del proceso en un
Bioreactor

BIOMASA SUSTRATOS

AGUA

PRODUCTOS
MICROORGANISMOS

METABOLISMO
2
Efectores Internos y Externos

MEDIO AMBIENTE
MICROORGANISMO
BIOREACTOR

CRECIMIENTO
MICROBIANO

 EFECTORES INTRACELULARES Y EXTRACELULARES

3
Efectores Internos
 Modificación por
influencia de los
 Dotación genética del
efectores Externos
microorganismo
previamente
seleccionado.  Aumento de
Productividad por
mutaciones inducidas.
 Mecanismos de
regulación Metabólica
del microorganismo.  Físicas y/o Químicas

4
 Efectores Externos
Condiciones de pH, Tº, pº,
Son de Naturaleza
Operación Agitación, entre
Física
Reactor otros

EFECTORES
INTERNOS
(Dotación Genética) E
P
X
R
P
O
EFECTORES R
D
QUIMICOS CELULA E
U
S
(Nutrientes) C
I
T
Ó
O
(Tº, pH, Aireación, Agitación) N
EFECTORES FÍSICOS
5
Proceso Industrial
1. Propagación de Cultivos Microbianos.
2. Fermentación:
a) Esterilización Caldo en tanque inoculador.

b) Siembra el tanque de inoculo con volúmenes de 50, 500 ó

1000 (L) según la escala industrial posterior.

c) Del tanque de inoculo se pasa posteriormente al

fermentador industrial cuyo volumen, que varía de acuerdo al
producto a obtener y a su concentración, está comprendido
comúnmente entre 10.000 y 100.000 (L)

6
Proceso Industrial
3. Operaciones y procesos de separación y purificación de
los productos;
a) Separación de insolubles por filtración, centrifugación, o
decantación.

b) Separaciones primarias por extracción, absorción, adsorción,

ultrafiltración.

c) Purificación por extracción líquido-líquido, o extracción a dos

fases acuosas, o cromatografía de afinidad.

d) Aislamiento del producto

7
Proceso Industrial
4. Tratamiento de efluentes:
a) Relación indirecta con el producto.

b) Razón de ser de la industria de fermentación, representa una

etapa imprescindible porque es fundamental controlar la
calidad del efluente que sale de la fábrica.

c) Condiciones de producción amigables con el medio

ambiente.

8
Proceso Industrial
PROPAGACIÓN PROCESOS Y TRATAMIENTO
FERMENTACIÓN
DE LOS CULTIVOS OPERACIONES EFLUENTES

SEPARACIÓN

EFLUENTES

ESTERILIZACIÓN SEPARACIÓN

PREPARACION TRATAMIENTO
MEDIOS
PRODUCTO
MATERIAS
PRIMAS
9
Crecimiento Microbiano
¿Qué es el Crecimiento
MICROBIANO?

En organismos Propiedades de los

unicelulares el seres vivos asociadas
crecimiento conduce al crecimiento
a un aumento en el microbiano
número de células
más que un aumento REPRODUCCION y
en el tamaño celular. CRECIMIENTO

10
BIOMASA
Modalidades de Crecimiento Microbiano
 Biológicamente existen múltiples modalidades de
crecimiento microbiano.
Microbiología industrial convencional.
 FISION BINARIA. Alimentos.
Salud.
Farmacéutica.
 GEMACIÓN. Ambiental

 DIMORFISMO SEXUAL.
Microbiología Industrial Avanzada.
Principalmente el área Ambiental y
 BIOPELÍCULAS. Farmacéutica.

11
Crecimiento Microbiano: Fisión Binaria

 Cultivo homogéneo,
todas las bacterias
poseen la misma
edad, generaciones.

12
Crecimiento Microbiano: Gemación

 1 Levadura puede gemar 36 veces y después pierde su

capacidad reproductiva.
 Cultivo heterogéneo con diversidad de edades.

13
Fases del Crecimiento Microbiano

14
Fases del Crecimiento Microbiano
 Fase Latencia (Lag):
 Procesos de Aclimatación y aumento de volumen de la
célula.
 Fase Exponencial:
 Reproducción, en el menor tiempo posible dotado por su
condición genética.
 Fase Estacionaria:
 Supervivencia, medio paulatinamente inhóspito.
 Fase Muerte:
 Muerte celular.

15
 Modelación matemática crecimiento
microbiano

4000

3500

3000
Concentración

FASE FASE
2500
LATENCIA EXPONENCIAL
2000

1500

1000

500

0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
Tiempo

1, 2, 2x2, 2x2x2x2, 25, ..., 2n Progresión Geométrica

16
 Modelación Matemática Crecimiento
Microbiano
 En la fase exponencial……

Nf = N 0 x 2 n
Nf = Número final de microorganismos
después del tiempo “t”. (g/L)

No= Número inicial de microorganismos

a tiempo 0. (Inoculo) (g/L)

n= Generación, Número de divisiones

celulares que ocurren en un determinado
tiempo

Esta ecuación nos permite determinar las generaciones, número inicial y/o final de células
17
Modelación Matemática Crecimiento
Microbiano
 Velocidad específica de Crecimiento: (µ)
 Cambio del número de generación por unidad de tiempo.

 Tiempo de Generación (Td o Tg)

 Tiempo necesario para la formación de dos células a partir de
una.
 Tiempo requerido para duplicar el número de células de una
población
Si el tiempo de generación es
CONSTANTE, entonces el
crecimiento es EXPONENCIAL

19
Modelación Matemática Crecimiento
Microbiano

Xf = Concentración Final de Microorganismos (g/L)

Xo = Concentración Inicial de Microorganismos (g/L)
µ = Velocidad específica de crecimiento. (1/t)
t = tiempo (h)

Si se aplica logaritmo Natural, para eliminar la exponencial se obtiene

20
 Modelación Matemática Crecimiento
Microbiano
Ln Xf = Ln X0 + µ t

Número de células
Ln número de células

Ln Xf = Ln X0 + µt

Y = B + mX

Reemplazando…
tG tiempo

21
Modelación Matemática Crecimiento
Microbiano

Reacomodando la ecuación……

De esta forma es posible obtener entonces los valores de la velocidad especifica de

crecimiento y el tiempo de generación, solo cuando se encuentra en FASE
EXPONENCIAL .

22
Variación de la velocidad específica de
Crecimiento (µ)
•Depende del microorganismo que se
Velocidad específica
trate. (DNA).
de Crecimiento (µ) • Parámetros ambientales del cultivo

 Ejemplo:
 Thiobacillus ferrooxidans : 0,01 h-1
 Escherichia coli: 1,2 h-1

Permite la modificación de µ.
Altamente costoso para la
Ingeniería Genética Microbiología Industrial
Depende del producto.

23
Variación de la velocidad específica de
Crecimiento (µ)

Parámetros Ambientales
Del Cultivo

Prop.
Term.
Tº H2O

Comp.
MC

pH Ag.
Tenso
eH Act.

24
Efecto Composición Medios de Cultivo
Componentes del Medio de Efectores Externos de
Cultivo Naturaleza Química

 Macronutrientes:
 g/L C,N,P,S,K y Mg
 Micronutrientes:
 mg/ L sales Fe, Mn, Mo, Ca, Zn, Co, entre otros
 Factores de Crecimiento:
 Componentes orgánicos no sintetizados ni metabolizados por
la célula.

25
Efecto Composición Medios de Cultivo

 Efecto de este parámetro puede ser de tipo

cuantitativo como cualitativo.

 La naturaleza de los nutrientes afectan a µ.

 Principalmente la fuente de Carbono y energía y el

Nitrógeno.

26
Efecto de la composición del medio de
cultivo
 Modelo de Monod (1949).

 Su modelo propone una relación entre la detención del

crecimiento microbiano con una condición fisicoquímica
del microorganismo.

 Restricción del nutriente limitante.

27
Efecto de la composición del medio de
cultivo

Concentración de Sustrato (S)

 Dependencia de la velocidad especifica de

crecimiento con la concentración de sustrato
28
Efecto de la composición del medio de
cultivo
• Dependencia entre μ y S a valores bajos de sustrato.
• Donde μmax nunca se alcanza ya que s ≠∞
• Al realizar un análisis matemático se tiene entonces
que:

Biomasa

Velocidad
de crecimiento

• Por lo tanto μ es función del nutriente limitante e

independiente de otras concentraciones que se
encuentren en exceso
29
Efecto de la composición del medio de
cultivo

 Experimentalmente Monod Observó:

µ
µmáx

Concentración de Sustrato (S)

30
Efecto de la composición del medio de
cultivo

 Donde:
 S= Sustrato Limitante (g/L)

 µmáx = Valor de la velocidad específica de crecimiento a la

cual tiene la concentración cuanto el sustrato es
infinitamente grande.

 Ks = Parámetro que establece que tan rápido se tiene a

µmáx , también es llamado constante de afinidad del
microorganismo por el sustrato.
Nota:
Mientras mas afín es el microorganismo con el sustrato
mas bajo es el Ks y la curva es mas pronunciada.
31
Efecto de la composición del medio de
cultivo

32
Efecto de la composición del medio de
cultivo

33
Efecto de la composición del medio de
cultivo

 Esta relación otorgada por Monod se aplica al caso de

crecimiento no Inhibido.

 Si el cultivo es afectado por concentraciones altas de sustrato o

producto la ecuación original se modifica agregando las
correspondientes constantes de inhibición.

34
Efecto de la composición del medio de
cultivo

35
Efecto de la composición del medio
de cultivo

 El modelo de Monod no siempre representa

adecuadamente los datos experimentales.
 Ej. Medio de Cultivo complejo.

 En estos casos resulta mas adecuado la aplicación de

otros modelos tales como el de la ecuación logística
modificada.

36
Diseño de medio de Cultivo
FINALIDAD
•Elección de los componentes
necesarios para logras el crecimiento.
•Formación de productos
correspondientes al proceso a
desarrollar

 Microorganismo, el proceso y los sustratos a ser

empleados como son los requerimientos nutricionales del
microorganismo y algunos específicos del proceso la
disponibilidad real de los componentes y consideraciones
sobre las materias primas.
37
Coeficiente de Rendimiento

38
Coeficiente de Rendimiento

39
Diseño de Medio de Cultivo

 Necesarios para la célula.

BIOELEMENTOS
C(Carbono)
N(Nitrógeno)  Caracterizaciones bioquímicas
P(Fósforo) propias y evolución de los
S(Azufre) parámetros de cada proceso.
Mg ( Magnesio)
Mn (Manganeso)
 Ej. pH, debido al uso de una sal de
amonio como fuente de nitrógeno,

40
 Diseño de Medio de Cultivo

 Los bioelementos no se
BIOELEMENTOS FUENTES encuentran libres en la
C(Carbono) C6H12O6 naturaleza.
N(Nitrógeno) NH4Cl
P(Fósforo) K2HPO4
 Se presentan en
S(Azufre) Na2SO4
“Compuestos” que son los
Mg ( Magnesio) MgSO4*7H2O
utilizados para la
Mn (Manganeso) MnSO4
formulación del medio de
cultivo

41
 Diseño de Medio de Cultivo
BIOELEMENTOS FUENTES
C(Carbono) C6H12O6  Del compuesto “Total”, se
N(Nitrógeno) NH4Cl debe calcular cual es el %
P(Fósforo) K2HPO4
del componente esencial
S(Azufre) Na2SO4
para el medio de cultivo.
Mg ( Magnesio) MgSO4*7H2O
Mn (Manganeso) MnSO4

Ej.: Glucosa. -Calculo PM:

-C6H12O6 = (12*6)+(1*12)+(16*6)= 180
-180 100%
-72 X%
X= 40%

42
Diseño de Medio de Cultivo

BIOELEMENTOS FUENTES PESO %

MOLECULAR FUENTE
C(Carbono) C6H12O6 180 40
N(Nitrógeno) NH4Cl 53,49 26,17
P(Fósforo) K2HPO4 174,17 22,9
S(Azufre) Na2SO4 142,03 22,6
Mg ( Magnesio) MgSO4*7H2O 246,36 9,75
Mn (Manganeso) MnSO4 151 36,35

 Del compuesto “Total”, se debe calcular cual es el % del

componente esencial para el medio de cultivo.
43
Diseño de Medio de Cultivo
BIOELEMENTOS FUENTES PM % %
FUENTE Célula
C(Carbono) C6H12O6 180 40 50
N(Nitrógeno) NH4Cl 53,49 26,17 32
P(Fósforo) K2HPO4 174,17 22,9 1,6
S(Azufre) Na2SO4 142,03 22,6 5,78
Mg ( Magnesio) MgSO4*7H2O 246,36 9,75 0,34
Mn (Manganeso) MnSO4 151 36,35 2,78

 % Célula, se encuentra tabulado para la mayoría de los

microorganismos.
44
Diseño de Medio de Cultivo
BIOELEMENTOS FUENTES PM % % RENDIMIENTO
FUENTE CELULA %Fuente
%Célula
C(Carbono) C6H12O6 180 40 50 40/50

N(Nitrógeno) NH4Cl 53,49 26,17 32 26,17/32

P(Fósforo) K2HPO4 174,17 22,9 1,6 22,9/1,6

S(Azufre) Na2SO4 142,03 22,6 5,78 22,6/5,78

Mg ( Magnesio) MgSO4*7H2 246,36 9,75 0,34 9,75/0,34

O
Mn (Manganeso) MnSO4 151 36,35 2,78 36,35/ 2,78

 Rendimiento: “Lo que se tiene para sobrevivir”

45
 Diseño de Medio de Cultivo
BIOELEMENTOS FUENTES PM % % RENDIMIENTO
FUENTE CELULA %Fuente
%Célula
C(Carbono) C6H12O6 180 40 50 40/50

N(Nitrógeno) NH4Cl 53,49 26,17 32 26,17/32

P(Fósforo) K2HPO4 174,17 22,9 1,6 22,9/1,6

S(Azufre) Na2SO4 142,03 22,6 5,78 22,6/5,78

Mg ( Magnesio) MgSO4*7H2 246,36 9,75 0,34 9,75/0,34

O
Mn (Manganeso) MnSO4 151 36,35 2,78 36,35/ 2,78

 Calculo del Sustrato:

•Definición de Inóculo.
•Definición de Concentración final.
•Se asume S= 0.
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