INSTRUCTIVO

LABORATORIO
Técnica: Detergentes (SAAM)

PRINCIPIO Y ALCANCE
Definición y principio:
Las sustancias activas para el azul de metileno (SAAM) llevan a cabo la transferencia
del azul de metileno, un tinte catiónico, de una solución acuosa a un líquido orgánico
inmiscible, hasta equilibrio. Esto ocurre mediante la formación de un par iónico entre el
anión SAAM y el catión azul de metileno. La intensidad de color azul resultante en la
fase orgánica es una medida de la SAAM. Este método es relativamente simple y
preciso. Comprende tres extracciones sucesivas en cloroformo (CHCl3) a partir de
medio acuoso ácido que contenga azul de metileno en exceso, seguidas de lavado por
contracorriente con agua, y la determinación del color azul en el CHCl3 por
espectrofotometría a 652 mn.
Método aplicable a aguas y efluentes.

Aparatos:
1) Espectrofotómetro
2) Ampollas de decantación de 1000 ml.
3) Tubos de Nessler de 50 ml.
4) Material de vidrio común.

Reactivos:
1) Solución stock de alquilsulfonato lineal (LAS): pesar 1 g de LAS, sobre una
base activa 100%, y llevar a 1000 ml. con agua destilada. Esta solución contiene
1,00 mg. LAS/ml.
Guardar en la heladera para evitar la biodegradación, preparar semanalmente.
2) Solución estándar de alquilsulfonato lineal (LAS): Diluir 10.00 ml. de la
solución stock a 1000 ml. con agua destilada. Esta solución contiene 10.0 µg
LAS/ml. Preparar diariamente.
3) Azul de metileno: disolver 100 mg. de azul de metileno en 100 ml de agua
destilada. Transferir 30 ml. a un matraz de 1000 ml. agregar 500 ml de agua
destilada, 6,8 ml de ácido sulfúrico concentrado y 50 g. de fosfato diácido de
sodio monohidratado. Agitar hasta disolución completa y enrasar a 1000 ml.
4) Solución de lavado: Agregar 6,8 ml de ácido sulfúrico concentrado a 500 ml. de
agua destilada. Agregar 50 g. de fosfato diácido de sodio monohidratado,
disolver completamente y diluir a 1000 ml.
5) Fenolftaleína, solución al 5%

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6) Hidróxido de sodio 1N.

7) Acido sulfúrico 1N.
8) Cloroformo, calidad p.a.

Interferencias:
Sustancias orgánicas: aquellas que formen complejos con el azul de metileno, como
fenoles, carboxilatos, etc. (interferencia positiva)
Sustancias inorgánicas: los cloruros, nitratos y tiocianatos forman pares iónicos con el
azul de metileno pudiendo producir interferencias de tipo positivo.
Materia coloreada: interfiere todo el material coloreado que pueda ser extraíble con
cloroformo, y absorber en la misma longitud de onda que se trabaja.

Procedimiento:
1) Tomar un volumen de muestra según tabla Anexo 1.
2) Colocar la muestra en la ampolla, alcalinizar con hidróxido de sodio 1N. usando
fenolftaleína, agregar ácido sulfúrico 1N. hasta desaparición del color.
3) Adicionar 10 ml. de cloroformo y 25 ml. de azul de metileno, agitar, no excesivamente
para evitar emulsión, dejar reposar, arremolinar y dejar reposar nuevamente.
4) Traspasar la capa de cloroformo a otra ampolla. Extraer 3 veces con 10 ml. de
cloroformo cada vez. Si el color azul desaparece de la capa acuosa repetir la
determinación con menor volumen de muestra.
5) Combine todos los extractos de la segunda ampolla, agregar 50 ml de agua de lavado,
agitar 30 segundos, descargar la capa de cloroformo en un tubo de 100 ml., repetir el
lavado 2 veces más y enrasar con cloroformo a 100 ml.
6) Leer la absorbancia contra un blanco de cloroformo, a 652 nm.

Cantidad mínima detectable.

Aproximadamente 10 µg LAS.

Recta de calibración
Preparar la recta de calibración de absorbancia vs. µg., en un rango de 0 – 90 µg,
usando un paso de luz de 5 cm, y 0 – 200 µg, usando un paso de luz de 1 cm.

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Cálculos
Determinar los microgramos de LAS, comparando con la recta de calibración.

𝐴
𝑚𝑔 𝐿𝐴𝑆⁄𝐿 = 𝑉

Donde:
A = microgramos leídos en la curva
V = volumen de muestra utilizado en mililitros
Los resultados se expresan en mg/l.

Anexo 1

mg/l Volumen
0,025 – 0,080 400 ml.
0,080 – 0,4 250 ml.
0,4 – 2 100 ml.
2 – 10 20 ml.
10 – 100 2 ml.

Bibliografía

Standard Methods for the examination of water and wastewater. Edición 1

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