EPITELIAL FDA.
En la actualidad, el rango de aplicaciones se ha
Epitelización inducida por células troncales derivadas
del tejido adiposo
RESUMEN
El tratamiento de lesiones con pérdida de tejido cutáneo
ha mejorado notablemente con el advenimiento de la
bioingeniería tisular. Una alternativa en desarrollo es la
utilización de sustitutos dérmicos combinados con células
troncales derivadas del tejido adiposo autólogo. Estudios
previos nos muestran que con esta técnica es posible
optimizar la angiogénesis y la síntesis de colágeno, sin
embargo potenciar la epitelización es un tema pendiente
por resolver. En el presente estudio evaluamos la
progresión y diferenciación epitelial en un período de
tiempo prologando.
Obtuvimos las células troncales a partir del tejido adiposo
(ASC) de la región inguinal de 4 ratas Sprague Dawley.
Cultivamos las células frescas en una matriz de
Integra® durante un período total de 48 horas, y las
marcamos con un vector lentiviral-GFP (proteína
fluorescente verde). Posteriormente, injertamos en las
mismas ratas la matriz dérmica con células troncales y un
implante contralateral sin células, como control. A las 4
semanas, evaluamos el avance epitelial mediante
planimetría de superficie e histología.
Los resultados macroscópicos muestran que el cierre de la
herida por contracción de los bordes no tiene diferencias
significativas (82,63% ± 3,4% vs. 80,66% ± 3,89%;
p=0,08), pero el cierre por epitelización fue
significativamente mayor en el lado intervenido con ASCs
(93,47% ± 5,98% vs. 79,88% ± 6,28%; p=0,0028). Todas
las muestras obtuvieron tinción positiva para el anticuerpo
anti-citoqueratina 34²E12 y el avance epitelial lineal
cuantificado por microscopía resultó significativamente
mayor en el lado con ASCs (6408 ± 275¼m vs. 5375 ±
250¼m; p < 0,001). Identificamos las células GFP
positivas formando parte de la dermis regenerada, no así
en la epidermis.
En conclusión, las células troncales derivadas del tejido
adiposo autólogo sembradas en una matriz de
Integra®aumentan la formación epitelial significativamente,
probablemente por un mecanismo de inducción más que
de diferenciación.
Introducción
La resolución de las lesiones cutáneas que involucran
pérdidas de tejido de espesor total es un desafío para el
cirujano plástico. La alternativa más frecuentemente
utilizada son los injertos dermoepidérmicos. Aunque el
resultado general es bueno, a largo plazo se generan una
serie de limitaciones, como una cicatriz dura, retráctil,
poco móvil, con pérdida glandular y pilosa.
Para evitar estas dificultades, la Bioingeniería Tisular
progresa constantemente para desarrollar sustitutos
dérmicos que permitan obtener mejores resultados
estéticos y funcionales con el menor tiempo de
regeneración posible (1).
Desde el año 1981, está descrito el uso de
Integra® (Integra Life Sciences Corp., Plainsboro, NJ,
EE.UU) en humanos con quemaduras mayores (2), y
desde el año 1996 está aprobada su utilización por la
extendido a otras situaciones clínicas, como la resección
de nevus gigantes o la cobertura de lesiones de cuero
cabelludo y tendones expuestos (3, 4). Integra® consiste
en una matriz de colágeno tipo I bovino y
glicosaminoglicanos de cartílago de tiburón que conforman
una estructura porosa cubierta con un lámina de silicona.
Cuando se injerta, esta matriz es colonizada
progresivamente por los fibroblastos locales y por nuevos
vasos, y el colágeno bovino va siendo reemplazado
progresivamente. Tras 15 a 20 días, se retira la lámina de
silicona para colocar un injerto de piel parcial.
Los beneficios en el uso de sustitutos dérmicos se
contraponen con el largo período de revascularización y la
necesidad de un segundo tiempo quirúrgico para
incorporar las células epidérmicas. Para resolver estos
problemas, y con el objeto de optimizar la regeneración, se
han incorporado células troncales a la matriz procedentes
principalmente de la médula ósea y del tejido adiposo (5-
8).
Las células troncales derivadas del tejido adiposo (ASCs)
comparten características básicas similares a las
obtenidas a partir de la médula ósea (9) y está descrito en
estudios preclínicos su capacidad para diferenciarse en
múltiples linajes y para potenciar la angiogénesis (10-12).
Estos estudios sugieren que la existencia de estas células
en los tejidos adultos reside en la espera de la necesidad
de reparación (13). Sin embargo, ante un daño tisular
excesivo por trauma o quemadura, la disponibilidad local
podría verse afectada.
Con anterioridad, presentamos una experiencia realizada
en un modelo experimental en ratas en el que
incorporamos ASCs en un segmento de Integra® con una
técnica simplificada, observando que a los 21 días de
regeneración en vivo existe un aumento significativo de la
angiogénesis en un 60% y de la síntesis de colágeno en
un 55% respecto a un control; sin embargo, el aumento de
la epitelización espontánea no fue significativo (14).
Estudios previos evidencian diferenciación epidérmica de
ASCs a la cuarta semana de regeneración en vivo,
existiendo un retraso respecto a la diferenciación
fibrovascular (5, 6).
Por este motivo nos planteamos como hipótesis de trabajo
evaluar el comportamiento de la cicatrización en un
período de regeneración de 4 semanas. Los objetivos del
presente estudio son la cuantificación del epitelio formado
sobre la matriz dérmica durante este período de tiempo y
la determinación del destino final de las ASCs en relación
a este neoepitelio.
Discusión
Los resultados de este estudio muestran exitosamente
como aumentó la formación epitelial sobre una matriz
dérmica injertada con ASCs en un modelo experimental en
ratas durante 4 semanas de regeneración. Estos
resultados son consistentes con lo que se venía
esbozando en nuestro estudio previo, que concluyó a la
tercera semana de injerto (14). De este modo,
presentamos una continuidad en cuanto a metodología,
destacando que hemos mantenido un procedimiento
simplificado de siembra de ASCs frescas, sin una
expansión previa, durante un período de 48 horas. La
única modificación técnica en esta oportunidad fue la
utilización de matrices de Integra®circulares en vez de
cuadradas; así la forma circular se adapta
geométricamente al fondo del pocillo de cultivo,
permitiendo que las células adherentes se incluyan en
mayor proporción en la matriz.
Nos parece importante recalcar que la utilización de un
procedimiento simplificado, en esta etapa experimental de
sólo 48 horas en total, genera una técnica reproducible y
con menor curva de aprendizaje para la traslación clínica.
Además, nuestros resultados previos en cuanto a
adhesión y viabilidad celular en la matriz dérmica Integra® ,
nos aseguran que ésta es una vía de transporte celular
adecuada para una terapia localizada.
Respecto a la cuantificación del progreso en la
cicatrización, es importante comentar lo importante de la
medición del avance epitelial sobre el injerto. Debido a que
éste es un parámetro más objetivo que la simple medición
del tamaño de la lesión, la cual depende de la actividad de
los miofibroblastos de los bordes de la herida (15), tal y
como se ve reflejado en el presente estudio en el que no
hubo diferencias significativas respecto al tamaño de la
lesión. Otros estudios experimentales que utilizan ASCs
transportadas en matrices (6, 16) o en geles de colágeno
(17), encuentran importantes diferencias a favor del cierre
de las lesiones tratadas con ASCs, pero utilizando como
parámetro final el tamaño final de las lesiones.
No podemos explicar en este estudio el beneficio obtenido
respecto al aumento de la epitelización sólo por
diferenciación de ASCs en queratinocitos, debido a que en
esta oportunidad no encontramos actividad GFP en el
epitelio. No discordamos con los resultados planteados por
otros estudios que reflejan en forma muy ilustrativa cómo
esta diferenciación existe a las 4 semanas (5, 6), pero
debemos plantearnos otras alternativas para explicar
nuestros resultados. Una alternativa poco probable es el
fallo en el procedimiento de infección letiviral y que éste no
haya sido del todo efectivo. La siguiente alternativa
planteada, siguiendo la lógica como sucede con la
estimulación angiogénica y fibroblástica (17, 18), es que
exista estimulación por efecto paracrino hacia el linaje
epidérmico mediante la secreción de factores de
crecimiento como el EGF, IGF, PDGF, entre otros. Más
aún, está documentado el crecimiento de pelo debido a la
estimulación paracrina de las ASCs (19, 20).
Encontrar este tipo de resultados nos hace analizar hacia
donde van dirigidos los beneficios de una cicatrización
más rápida. Lógicamente, un objetivo es su utilización en
situaciones donde existe cicatrización retardada, con
inflamación prolongada, baja infiltración celular,
disminución de matriz extracelular y reducción de factores
de crecimiento, como sucede en el pie diabético (21). Pero
otro objetivo, en pacientes sin problemas de cicatrización,
debe ser el encontrar la vía de regeneración cutánea más
corta, con menor tiempo de hospitalización y que requiera
la menor cantidad de intervenciones quirúrgicas.
Finalmente, para avanzar hacia el siguiente paso que es la
utilización de ASCs en ensayos clínicos, es importante
dejar claro que su desarrollo debe estar acorde a las
buenas prácticas de producción (GMP o Good
Manufacturing Practices), con la dotación de
infraestructura específica, con profesionales idóneos, de
acuerdo a las diversas autoridades reguladoras y con
apego estricto a un Comité de Ética de Investigación
Clínica (22, 23).
Conclusiones
En este estudio, las células troncales derivadas del tejido
adiposo autólogas sembradas en una matriz de
Integra®aumentan significativamente la formación epitelial,
probablemente por un mecanismo de inducción más que
de diferenciación.
La simplicidad del método empelado y los resultados
obtenidos, dan soporte para la utilización de ASCs en la
práctica clínica, dentro de un futuro cercano.
CONJUNTIVO
La matriz extracelular: un ecosistema influyente en la
forma y comportamiento de las células
RESUMEN Actualmente, la matriz extracelular (MEC) se
considera un componente que cumple diversas funciones,
como la supervivencia celular, desarrollo, interacciones
intracelulares e inmunológicas, cambiándose la
concepción en la que sólo se consideraba como parte del
tejido conectivo. La matriz extracelular suele proporcionar
sostén mecánico a los tejidos. Diferentes combinaciones
de componentes de la matriz extracelular la constituyen en
el material ideal para propiedades específicas: fuerza en
un tendón, diente o huesos; amortiguación en el cartílago
y adhesión en la mayoría de los tejidos. Además, la
composición de la matriz que puede variar según el sitio
anatómico y el estado fisiológico de un tejido, le permite a
la célula saber dónde está y que debe hacer. Tanto la
matriz extracelular como las moléculas de adhesión, son
consideradas componentes fundamentales para mantener
la estabilidad celular, del tejido, órgano y sistema; además,
participan en procesos vitales como: migración,
multiplicación, preservación, procesos bioquímicos y de
señalización celular. Algunas proteínas intracelulares
como: selectinas, súper familia de las inmunoglobulinas,
cadherinas e integrinas, se sobreexpresan por la ausencia
de proteínas de adhesión, lo cual genera efectos como la
proliferación desmedida, la invasión y las futuras
metástasis. En cuanto a las metaloproteasas de matriz,
tienen una participación compleja en la progresión del
cáncer; puesto que participan en la degradación de la
matriz extracelular permitiendo la migración de las células
endoteliales.
CARTILAGINOSO
Cultivo de condrocitos sobre una matriz acelular
derivada de membrana amniocoriónica
esumen
Introducción: El tejido cartilaginoso articular presenta
escasa capacidad regenerativa. Existe alta incidencia de
lesiones condrales en la rodilla, especialmente de grado
II/III (Outerbridge). El uso combinado de células autólogas
cultivadas con membranas biológicas es una posibilidad
terapéutica. El objetivo del presente trabajo es analizar las
características del desarrollo in vitro de condrocitos
humanos sobre una membrana amniocoriónica acelular
(MAC) desecada.
Materiales y métodos: Entre diciembre de 2010 y
diciembre de 2011 se procesaron 16 muestras de cartílago
de donante vivo, de las cuales se analizaron siete. Los
condrocitos fueron cultivados y amplificados sobre
plástico, a partir de lo cual se realizaron los siguientes
análisis: interacción entre células y MAC, capacidad de la
MAC como matriz para las células y comportamiento de
las células cultivadas sobre la MAC.
Resultados: Los condrocitos in vitro mostraron cambios
fenotípicos en presencia de MAC. Las células fueron
capaces de adherirse y permanecer en la región
esponjosa de la membrana. La microscopia electrónica de
las MAC cultivadas mostró la presencia de células,
organelas celulares bien conservadas, retículo
endoplásmico y uniones de tipo desmosoma.
Conclusiones: Este trabajo muestra la factibilidad de
cultivar condrocitos sobre MAC. Las células fueron
capaces de adherirse, permanecer y diferenciarse sobre la
membrana durante el tiempo del estudio.
Introducción
Las lesiones condrales en los pacientes jóvenes
representan un serio problema en la práctica ortopédica.
Diversos estudios de prevalencia, epidemiología y
etiología han demostrado que un 60% de los pacientes
sometidos a artroscopias padecen defectos condrales u
osteocondrales de rodilla, con mayor incidencia de
lesiones de grados II y III (Outerbridge).1-4
El tejido cartilaginoso articular (hialino) tiene muy escasa
capacidad regenerativa. Dado que carece de vasos, los
procesos inflamatorios y reparativos provenientes de la
circulación sistémica no pueden actuar en casos de lesión.
Por otra parte, a diferencia de otros tejidos, los condrocitos
no migran al sitio de la lesión desde sitios vecinos sanos,
porque están rodeados por una densa matriz extracelular.5
Con el objetivo de restablecer la superficie articular
dañada, se han utilizado técnicas reparativas y
regenerativas.6 Las técnicas reparativas, como la
estimulación de la médula ósea con microperforaciones,
tienen como objetivo reconstruir el defecto condral
aliviando los síntomas, pero sin restablecer la arquitectura
del cartílago articular hialino, ya que el tejido de reparación
está formado predominantemente por colágeno de tipo I
(fibro-cartílago) de diferentes características
biomecánicas, respecto del tejido nativo.7
Por otro lado, las técnicas regenerativas procuran la
restitución completa de la microarquitectura del tejido,
compuesto principalmente por colágeno de tipo II y
glucoproteínas (cartílago hialino). Estas técnicas
comenzaron usando el implante de condrocitos autólogos
cultivados preparados como suspensión (autologous
chondrocytes implantation, ACI) para el relleno de
defectos condrales, y se logró la formación de cartílago
hialino en mayor proporción que de fibrocartílago.8
Sin embargo, esta técnica presentó una importante
limitación relacionada con la migración y, por consiguiente,
la pérdida de los condrocitos del sitio del implante, a pesar
de los intentos de contenerlos colocando un parche de
periostio autólogo o de membranas de colágeno a modo
de bolsillo para contener las células.
Tiempo después se propuso la utilización de condrocitos
autólogos cultivados in vitro, pero no como suspensión,
sino asociados a una matriz y el implante de este conjunto
sobre la lesión (matrix-associated autologous
chondrocytes implantation, MACI) utilizando para ello
diversas matrices.9-11
El objetivo del presente trabajo es analizar las
características del desarrollo in vitro de condrocitos
humanos sobre una membrana amniocoriónica (MAC)
desecada acelular, procesada en nuestra institución, como
soporte para el desarrollo celular in vitro, analizando las
características fenotípicas y microscópicas.
Materiales y métodos
Entre diciembre de 2010 y diciembre de 2011, se
procesaron 16 muestras de cartílago hialino obtenidas de
segmentos óseos (cabezas femorales - platillos tibiales)
provenientes de donantes vivos sometidos a un
procedimiento de artroplastia. Los pacientes donantes del
tejido osteoarticular utilizado en este estudio firmaron un
consentimiento de donación y de autorización para el uso
en trasplante e investigación.
Todos los procedimientos, desde la extracción de la
muestra hasta las manipulaciones in vitro, se llevaron a
cabo cumpliendo con las normas de bioseguridad
correspondientes.
Los condrocitos se obtuvieron luego de 18 horas de
digestión de las muestras de cartílago en colagenasa de
tipo I 0,1%, a 37°C. La suspensión celular obtenida fue
filtrada con filtros de 70 um para eliminar restos de tejidos
sin digerir y centrifugada a 1500 rpm durante 10 minutos.
Luego del recuento celular y el cálculo de viabilidad, se
sembraron las células sobre una superficie plástica para
cultivo celular, con un inóculo inicial de 4 x
104 células/cm2.
Con el objeto de amplificar la población celular, cuando se
alcanzaba un 70%-80% de confluencia, se realizaban
como máximo cuatro subcultivos (P1, P2, P3 y P4) con un
inóculo de 0,3-0,8 x 104 células/cm 2.
De las 16 muestras ingresadas, se descartaron 9: 5 debido
a contaminación y 4 destinadas a la puesta a punto de la
técnica (optimización de la digestión enzimática del tejido,
elección de la superficie por cultivar, inóculos iniciales
sobre plástico y sobre MAC). Las 7 restantes se usaron
para los experimentos mostrados en este trabajo.
Las MAC se obtuvieron a partir de placenta humana y se
procesaron según los procedimientos operativos
estandarizados bajo estrictas normas de bioseguridad,
mediante diversos tratamientos antibióticos, seguidos de
procesos de descelularización, desecación y esterilización
por radiación gamma.
Discusión
Las matrices biológicas son soportes adecuados para la
adhesión de condrocitos, sirven como barrera física para
mantener las células en la zona del defecto y limitan la
migración de proteínas inflamatorias al sitio de
reparación.12-15
Debe tenerse en cuenta que el fenotipo celular en cultivo
puede y suele ser distinto del de las células in vivo. El
ambiente que las células tienen in vitro no es fisiológico y
es frecuente que, en esas condiciones, cambien su
fenotipo, casi siempre hacia estadios menos
diferenciados.16
En este trabajo, se han podido cultivar in vitro condrocitos
de origen humano, y se observó el inmediato cambio del
fenotipo condrogénico de esas células hacia un fenotipo
fibroblastoide, producto del proceso de desdiferenciación
(Fig. 1).
Esta observación coincide con los resultados de otros
estudios.17 Zheng y cols., entre otros, mencionan que, en
los cultivos de condrocitos sobre estructuras
tridimensionales, se induce nuevamente la expresión de
proteínas específicas de cartílago y las células recuperan
el fenotipo de condrocitos diferenciados, con buena
integración a la matriz.17,18
La estrecha relación que se establece entre la matriz y las
células no es sólo producto del contacto directo entre
ellas, sino que se producen también señales que son
responsables de la dinámica de la relación entre ambas,
que provocan los cambios fenotípicos observados en las
células. Este efecto se ha mostrado en este trabajo
cultivando las células adheridas al sustrato plástico, y
cuando ya estaban desdiferenciadas, al agregar un
pequeño segmento de MAC flotando en el medio de
cultivo sin contacto directo con las células, se observó una
morfología más esférica, que sugiere un fenotipo más
diferenciado (Fig. 1). Este efecto de diferenciación-
desdiferenciación se observó cada vez que la membrana
fue agregada-quitada respectivamente del medio de
cultivo.
A fin de optimizar los resultados, es importante que las
matrices utilizadas para los procedimientos de MACI
cuenten con determinadas características, como
biocompatibilidad, biodegradabilidad y capacidad de
soportar el cultivo celular, permitiendo la diferenciación y
maduración de los condrocitos. Las membranas más
usadas hasta ahora a nivel clínico son las derivadas de
colágeno y de ácido hialurónico.8
Hace ya algunos años, en los bancos de tejidos, se
comenzó a procesar la MAC, es decir, las membranas
amniótica y coriónica en su conjunto como una unidad,19lo
cual le otorga a este material una estructura de mayor
espesor y resistencia que la membrana amniótica sola,
que también se ha utilizado en diversas aplicaciones
clínicas.20,21 Se atribuyen a la MAC propiedades
antimicrobianas y antifúngicas, baja inmunogenicidad,
biodegradabilidad y biocompatibilidad, lo que la hace
sumamente atractiva para aplicaciones de ingeniería de
tejidos.22
En este estudio, se evaluó la capacidad de la MAC de
sostener la adhesión y permanencia de condrocitos
humanos sobre ella. Los resultados muestran que la MAC
es una buena matriz de soporte (scaffold) para el cultivo
de condrocitos, ya que las células pudieron adherirse y
permanecer sobre su estructura tridimensional durante el
tiempo que duró el estudio. Cabe destacar que no hay
datos en la bibliografía acerca del cultivo de condrocitos
humanos sobre MAC.
En los primeros experimentos de siembra de las células
sobre MAC, esta se realizaba sobre el lado coriónico o
amniótico. La observación en el microscopio óptico mostró
que, independientemente del lado de siembra inicial, las
células se ubicaban siempre en la capa esponjosa
intermedia de la MAC (Fig. 2), con resultados similares.
La cara coriónica se seleccionó entonces arbitrariamente
para estandarizar los experimentos de observación por
microscopia electrónica.
El análisis por microscopia electrónica mostró que las
células podían permanecer dentro de la estructura de la
MAC durante todo el tiempo del estudio (entre 2 y 14
días), con organelas bien conservadas y formación de
estructuras de novo, como uniones de tipo desmosoma.
Estas características ultraestructurales, sumadas a las
imágenes por microscopia óptica, muestran la capacidad
de la MAC para sostener la permanencia de las células
sobre ella y, por lo tanto, su utilidad como
andamio (scaffold). Las vacuolas citoplasmáticas con
microfibras contenidas en su interior podrían corresponder
a fibras de colágeno sintetizadas por las células. Este
hallazgo ha motivado un próximo estudio de investigación
para su análisis e identificación.
Conclusiones
La MAC aparece como un material atractivo y novedoso
para la aplicación de tecnologías de ingeniería de tejidos.
Este trabajo muestra la factibilidad de cultivar condrocitos
sobre MAC, permitiendo su adhesión y diferenciación. En
el futuro, esta membrana con los condrocitos cultivados
podría redundar en el desarrollo de tratamientos para
lesiones condrales que aún no tienen soluciones
satisfactorias.
ÒSEO
Regeneración ósea por medio de células madre en
combinación con beta-fosfato tricálcico
Resumen Objetivo: Estudiar si las células madre adultas
mesenquimales en combinación con beta-fosfato tricálcico
contribuyen significativamente a la regeneración en una
lesión ósea traumatizada. Material y método: Se utilizó un
modelo de defecto traumático en el fémur de ratas Wistar
(n=39). Fueron diseñados dos grupos: el grupo 1 (control),
con nueve ratas a las que se les realizó un defecto óseo
vacío; y el grupo 2 (experimental), con tres subgrupos de
10 ratas cada uno, a las que se les administró beta-fosfato
tricálcico (β-TCP) y β-TCP en combinación con células
madre mesenquimales (MSC). Se valoraron resultados a
las tres, seis y nueve semanas de evolución,
respectivamente. Resultados: Se observó el 65% de las
fracturas en los fémures derechos de las ratas, que en
grupo experimental corresponde a la zona donde se
implanta el carrie en combinación con las MSC, aunque
sólo el 35% de éstas coinciden exactamente con esta
zona. No existen diferencias de comportamiento biológico
significativas, aunque se demuestra actividad osteogénica.
Conclusión: El uso de β-TCP en combinación con células
estromales mesenquimales no genera resultados
significativos en la regeneración ósea. Todavía es
necesario potenciar la investigación en fase experimental.
Introducción Las carencias de tejido óseo en el organismo
que requieren del uso de injertos normalmente son
consecuencia de defectos postraumáticos [1], secuelas
derivadas de cirugía oncológica [2] o patología
degenerativa como la osteoporosis [3]. Los procedimientos
clínicos disponibles tienen un uso limitado debido a la
morbilidad del lugar donante, en el caso de los
autoinjertos, o bien, por el rechazo autoinmune o la baja
capacidad regenerativa, en el caso de los aloinjertos o
xenoinjertos. Todas estas limitaciones han dado lugar a la
búsqueda de nuevas formas de restituir los procesos
biológicos que han resultado dañados, bien mediante el
aporte de precursores celulares sanos, en procesos
conocidos como terapias celulares, o bien mediante la
aplicación de factores de crecimiento producidos
normalmente por células [4]. La medicina regenerativa
sustituye o regenera células humanas, tejidos u órganos
con la finalidad de restaurar o establecer una función
normal [5]. El uso de células madre (Stem Cells, SCs)
representa una opción prometedora para resolver muchos
de los defectos orgánicos mencionados anteriormente,
asegurando un número suficiente de células específicas
en el tejido y eliminando los problemas de rechazo
inmunológico y morbilidad [6]. En los últimos años ha
habido un creciente interés por las células estromales
mesenquimales (Mesenchymal Stromal Cells, MSC) por
ser las primeras células no hematopoyéticas aisladas de la
mé- dula ósea y más ampliamente caracterizadas [7].
Tienen capacidad de auto-renovación, proliferación y
capacidad para diferenciarse de distintos linajes de tejido
mesodérmico, que incluye el hueso, el cartílago, la grasa,
los tendones, el músculo y el estroma medular [8]. El
propósito del presente trabajo es estudiar la capacidad de
las células estromales mesenquimales en combinación
con beta-fosfato tricálcio (β-TCP) para transformase in vivo
en células osteoblásticas y permitir la regeneración en un
modelo de lesión traumática en el fémur de ratas.
Discusión Los resultados obtenidos no permiten afirmar
diferencias de comportamiento biológico significativas en
este modelo experimental entre los animales a los que se
les administró un sustitutivo óseo (KeraOs®) y el mismo
sustitutivo en combinación con MSC, ni tampoco al
comparar estos mismo grupos con los controles de defecto
óseo vacío. Aunque se demuestra actividad osteogénica
en el caso de la asociación del trifosfato cálcico con MSC,
los resultados histoló- gicos no permiten afirmar que esta
actividad sea especialmente relevante. Por otra parte, no
se han observado fenómenos inflamatorios marcados, a
excepción de los macrófagos encontrados en las primeras
etapas, a las tres y seis semanas, y tampoco se han
evidenciado células multinucleadas. El hueso neoformado
en torno al sustitutivo óseo administrado no presenta
actividad sintética en la etapa más tardía, correspondiente
a las nueve semanas. Estos hallazgos están en
consonancia con algunas de las últimas publicaciones
[10,11], donde Vahabi et al. recogen que no existen
cambios en la regeneración ósea obtenida en un modelo
canino en alveolos post-extracción, tanto con células
madre en asociación con beta-fosfato tricálcico, como
empleando hidroxiapatita bovina Bio-Oss®, siempre en
comparación con un grupo control con un defecto óseo
vacío. Sin embargo, los resultados iniciales de este
estudio orientan hacia la utilización de un sustitutivo óseo
en condiciones distintas a las empleadas, tal y como se
afirma en otras publicaciones [12-15], que muestran cómo
la actividad regenerativa de las células madre en el fémur
de la rata es significativa cuando se utilizan asociaciones
con factores de crecimiento y plasma rico en plaquetas.
HEMATOPOYETICO
Eriptosis, la muerte suicida de eritrocitos: mecanismo
y enfermedades asociadas
Resumen
La muerte suicida de eritrocitos o eriptosis, similar a la
apoptosis de células nucleadas, está caracterizada por
disminución del volumen celular, vesiculación de la
membrana y traslocación de fosfolípidos de la membrana
plasmática con exposición de fosfatidilserina en la
superficie celular. Una amplia variedad de drogas,
contaminantes ambientales, sustancias endógenas,
condiciones clínicas y enfermedades disparan el proceso
de eriptosis, entre los que se pueden enumerar cationes
como Hg+2, Cd+2, sepsis, síndrome urémico hemolítico,
enfermedad de Wilson y depleción de fosfato, entre otras.
Este proceso es estimulado por la activación de canales
iónicos y la formación de ceramida, desencadenando la
activación de una compleja red de señalización. Los
desencadenantes del proceso de eriptosis, así como las
moléculas involucradas en la señalización del mismo,
estarían también involucrados en la regulación de la
apoptosis, por lo que en ambos casos, la ruta de
transducción de señales involucradas serían similares. Es
por eso, que los resultados obtenidos del análisis del
proceso de eriptosis podrían ser potencialmente tomados
como modelo en el estudio de la patogénesis de la muerte
suicida de células nucleadas.
Eritrocitos: modelo para el estudio de la fisiopatología
celular
Los eritrocitos circulantes son las células más abundantes
en un organismo adulto, constituyendo un 10% del
volumen celular total. Además, son células de fácil
obtención y sus funciones pueden ser estudiadas ex vivo.
Esto hace que los eritrocitos sean un excelente modelo
para estudiar la fisiopatología celular.
Sin embargo, estas células poseen funciones limitadas, ya
que, al diferenciarse y madurar, pierden su núcleo, los
ribosomas y las mitocondrias, perdiendo al mismo tiempo
su capacidad de sintetizar proteínas. Producen ATP
exclusivamente por degradación de glucosa. Es por todo
esto que los eritrocitos han sido considerados como sacos
de hemoglobina (1).
Los eritrocitos circulantes están expuestos regularmente a
condiciones de estrés, como a estrés oxidativo en el
pulmón y a condiciones hiperosmóticas al ingresar varias
veces por hora al riñón.
Además, debido a la alta tensión de O2 en sangre arterial y
al contenido de Fe, continuamente se producen dentro del
eritrocito especies de oxígeno reactivas ROS, (por sus
siglas en inglés Reactive Oxigen Species) tales como O2(-
), H2O2, HO. Existen evidencias que indican que muchas
condiciones fisiológicas y patológicas, como
envejecimiento celular e inflamación, se desarrollan a
través de la acción de ROS. Por esto, los eritrocitos
poseen una potente acción antioxidante que consiste de
rutas enzimáticas y no enzimáticas que modifican las
especies altamente reactivas en intermediarios menos
reactivos (2).
Los eritrocitos experimentan senescencia, resultando en la
eliminación de los eritrocitos envejecidos de circulación
(3). Recientemente se ha demostrado que, al igual que las
células nucleadas, desarrollan un proceso de muerte
suicida o eriptosis (4).
Eriptosis fisiológica: Senescencia
Los eritrocitos humanos tienen una vida media útil de
aproximadamente 120 días, y como otras células, la
generación y destrucción del eritrocito tiene que estar
estrictamente regulada.
En condiciones fisiológicas, los eritrocitos senescentes
tienen IgG autóloga unida a su superficie, favoreciendo así
su fagocitosis, principalmente por células de Kupffer en el
hígado. El plasma contiene anticuerpos
eritrocitoespecíficos que se unen a proteínas intracelulares
como actina y espectrina y a dominios intra o
extracelulares de proteínas de membrana, como banda 3
(5).
La IgG se une a banda 3, específicamente a eritrocitos en
estadios finales de su vida, siendo suficiente un número de
aproximadamente 200 moléculas de IgG unidas al
eritrocito para su fagocitosis. Sin embargo, aún no se
conoce si es un agregado o la ruptura de la banda 3 la
entidad reconocida por IgG. La proteólisis de banda 3
ocurre por proteasas (calpaínas) que se activan por Ca +2,
el que ingresa a través de canales sensibles a cambios de
volumen del eritrocito. La agregación de los productos de
proteólisis de banda 3 induce un aumento en la curvatura
de la membrana que desencadena el proceso de
vesiculización. Por lo tanto, el proceso de envejecimiento
del eritrocito va acompañado por la generación de
vesículas que se desprenden de los mismos, en
circulación. Cualquiera sea la hipótesis correcta, ambas
explican la pérdida de la interacción entre la membrana y
el citoesqueleto, con un incremento en la movilidad de
banda 3 y una disminución en el número de sitios de alta
afinidad por la anquirina, con la formación de
neoantígenos (6).
La CD47, una proteína de membrana asociada a integrina
cuya función es mediar procesos de adhesión, también
está involucrada en el reconocimiento de eritrocitos
envejecidos por macrófagos (7). Por otro lado, durante el
envejecimiento existe una disminución del volumen
celular, con un incremento en la densidad de hemoglobina
en las primeras etapas y una disminución en el contenido
de hemoglobina en las últimas. Estos cambios se
encuentran asociados a una disminución en el contenido
de colesterol y fosfolípidos, con una disminución en el área
de aproximadamente 20% durante el envejecimiento (8) .
Esta pérdida se correlaciona con el proceso de formación
de microvesículas, las que contienen IgG unida en su
superficie, exponen fosfatidilserina (PS) y contienen
productos de ruptura de banda 3, las que desaparecen
rápidamente de circulación al ser removidas por células de
Kupffer (9).
Mecanismos moleculares involucrados
Los principales mecanismos moleculares involucrados en
el inicio de la eriptosis son: la disminución de la carga
energética, del poder reductor y del estrés osmótico,
siendo, alguna o todas estas señales, puntos de
convergencia de factores que pueden provocar eriptosis.
El evento clave en los tres casos anteriormente citados es
el incremento en la concentración de Ca2+citosólico,
aunque las vías por las cuales esto ocurre en cada caso
sean diferentes.
En la Figura 1 se esquematizan todas las vías que se
explican a continuación.
En el caso de estrés energético, la reducción de ATP
disminuye la actividad de la Ca2+- ATPasa y en
consecuencia disminuye la salida de Ca2+ con el
consiguiente incremento de Ca2+ intracelular. Esto produce
la activación de PKC (proteína quinasa C, dependiente de
calcio) fosforilando proteínas de membrana que permiten
la entrada de Ca2+ (10).
En el estrés oxidativo, la disminución de glutatión reducido
incrementa la permeabilidad a Ca2+ a través del canal de
cationes, permitiendo una mayor entrada de Ca2+ al
interior del eritrocito.
En cuanto al estrés osmótico, éste activa fosfolipasa A2,
que libera ácido araquidónico de fosfatidilcolina. Este
ácido araquidónico se convierte por acción de la
ciclooxigenasa en prostaglandina E2 (PGE2), que activa los
canales de Ca2+. La entrada de Ca2+ a través de canales
catiónicos activaría los canales de K+sensibles a
Ca2+ (canales Gardos) presentes en la membrana del
eritrocito (11), con la consecuente pérdida de KCl del
eritrocito (12), favoreciendo de esta manera la
hiperpolarización y la disminución del volumen celular
o cell shrinkage (13).
Estos procesos disparan la vesiculización de la membrana
celular (14) y estimulan la traslocación (en
inglés, scrambling) de fosfolípidos de la membrana (15),
produciendo la exposición de PS por medio de una
escramblasa sensible a Ca+2 y/o por inhibición de una
aminotraslocasa sensible a Ca+2 y dependiente de ATP
(16)(17).
Un segundo estimulador de la traslocación de fosfolípidos
de la membrana celular es la ceramida (18). La acción de
fosfolipasa A2 genera además de ácido araquidónico,
lisoderivados, los que son transformados en el factor
activador plaquetario (PAF). PAF estimula a la
esfingomielinasa que genera ceramida por hidrólisis de la
esfingomielina (SM), capaz de estimular a la escramblasa.
El Ca2+ estimula también a la calpaína, una endopeptidasa
cisteínica que degrada las proteínas del citoesqueleto y
por lo tanto, inicia la vesiculización de la membrana celular
(19).
El Ca2+ puede ingresar también vía canales catiónicos no
selectivos (20) como TRPC6 (21) y canales catiónicos
activados por ATP extracelular como P2X7 (22). Los
canales son estimulados por shockhiperosmótico (23),
estrés oxidativo (24) y pérdida de Cl- (23).
Impacto de los canales catiónicos en el
envejecimiento de eritrocitos
Es posible especular que los canales catiónicos sensan la
edad celular. Así, en los eritrocitos envejecidos, la pérdida
de las defensas oxidativas incrementan la actividad de los
canales catiónicos provocando un ingreso de Ca2+,
aumentando la actividad de la bomba de Ca2+ y
produciendo la activación de la escramblasa. Por este
motivo, los eritrocitos envejecidos exponen PS en su
superficie, lo que contribuye a la eliminación de estas
células senescentes (25).
Todos estos hechos son también eventos típicos de la
apoptosis de células nucleadas (26).
Inductores de la eriptosis
La eriptosis es un mecanismo empleado fisiológicamente
por el organismo para destruir eritrocitos envejecidos sin
daño necrótico, evitando de esta manera la hemólisis
dentro del sistema circulatorio, lo que traería aparejado
cambios similares a un proceso inflamatorio, con daños
renales y alteraciones en la coagulación. Al mismo tiempo,
una amplia variedad de drogas (27), contaminantes
ambientales (28) y sustancias endógenas (27) pueden
estimular la muerte prematura de los eritrocitos.
Los iones Hg+2 se encuentran entre los contaminantes
ambientales más tóxicos. Entre las secuelas de la
intoxicación crónica con Hg+2 se pueden mencionar
desórdenes neuronales, anemia y falla renal (29). En
cuanto al efecto sobre los eritrocitos, el Hg+2 en
concentraciones micromolares, induce alteraciones en la
membrana plasmática típicas de la eriptosis (30). La
activación de los canales Gardos en este caso, no es
debida a un incremento en la actividad de Ca+2 sino a una
interacción directa con estos canales (31). En resumen, la
exposición a Hg+2 lleva a una activación transiente de los
canales Gardos, pérdida de K+ del eritrocito, eflujo de
agua, disminución del volumen del eritrocito, activación de
la esfingomielinasa y exposición de PS en la superficie del
eritrocito. Efectos similares han sido encontrados para el
Zn+2 en un rango de concentraciones detectadas en
plasma humano (32).
La exposición de eritrocitos a Bi+3 (≥500 mM) empleado en
el tratamiento de enfermedades gastrointestinales (33) o
AuCl (≥0,75 μg/mL), comúnmente usado en el tratamiento
de la artritis reumatoidea y contra tumores (34), produce
efectos similares. Sin embargo, a diferencia de lo
encontrado por efecto de Hg+2 y Bi+3, no se registró
formación de ceramida por exposición de eritrocitos a AuCl
(35).
En el caso de las sales de aluminio utilizadas para impedir
la absorción de fosfato intestinal en la falla renal crónica,
éstas causan como efecto colateral anemia como
resultado de una eliminación acelerada de eritrocitos de
circulación vía un proceso eriptótico. La eriptosis
producida por Al+3 se produce en paralelo con la liberación
de hemoglobina, demostrando que existe en este caso
una pérdida de integridad de la membrana plasmática. El
Al3+ causa una disminución de ATP llevando a la
activación de canales catiónicos permeables a Ca2+ con el
ingreso de Ca2+ a la célula, estimulación de la traslocación
de PS y disminución del volumen celular. Además, se
observa pérdida de hemoglobina, un evento característico
de la hemólisis. El aumento de volumen (swelling)
asociado con la hemólisis contrarresta la disminución de
volumen (shrinkage) asociada a la eriptosis. De hecho, es
posible observar una resistencia a la hemólisis hipotónica
en eritrocitos tratados con Al+3. De todos modos, ambos
efectos, hemólisis y eriptosis, disminuyen el tiempo de vida
de los eritrocitos en circulación, contribuyendo a la anemia
observada durante la intoxicación con dicho catión (36).
Inhibidores de la eriptosis
La eriptosis es inhibida por amiloride y
etilisopropilamiloride (EIPA) (37) así como por
catecolamina, dopamina, isoproterenol y epinefrina (38), al
ser todos estos inhibidores de los canales catiónicos
permeables a Ca2+.
Enfermedades asociadas a eriptosis
La eriptosis ha sido observada en una amplia variedad de
condiciones clínicas o enfermedades, incluyendo síndrome
urémico hemolítico (39), sepsis (40), malaria (41), anemia
falciforme (42), beta talasemia (43), deficiencia de
glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD) (43) y depleción
de fosfato
Sepsis
Es una condición comúnmente asociada a la infección con
una amplia variedad de patógenos (52). Entre las secuelas
características de la sepsis se puede nombrar el desarrollo
de una rápida anemia, no por una disminución en la
formación de eritrocitos sino por una eliminación acelerada
de los mismos de circulación (53).
Cuando eritrocitos de voluntarios sanos se exponen a
plasma de pacientes sépticos o sobrenadantes de
patógenos, se incrementa la exposición de PS. El efecto
del plasma de pacientes sépticos sobre la concentración
de Ca2+ es modesto como para ser responsable de la
fuerte estimulación de la exposición de PS. En este caso,
es probable que la formación de ceramida por ruptura de
SM mediada por esfingomielinasa sea el factor más
importante. Varias bacterias patógenas producen
esfingomielinasas, que estimulan la formación de
ceramida (18). Por ejemplo, la beta hemolisina
de Staphylococcus aureuses uno de los agentes más
frecuentes causantes de sepsis, y es una toxina que tiene
actividad esfingomielinasa (54). Por otro lado, existe la
posibilidad que esfingomielinasa de otro origen, como por
ejemplo producida por leucocitos, sea liberada al plasma
de pacientes sépticos. Independientemente del origen de
la esfingomielinasa estas enzimas están críticamente
involucradas en la fisiopatología de la sepsis (55).
La hemólisis inducida por determinados patógenos puede
de manera similar contribuir a la eliminación acelerada de
eritrocitos y producir anemia en pacientes sépticos, como
se ha demostrado luego de la infección por Clostridium
perfringens (52).
La ceramida (56) y el Ca2+ (57) también han sido
implicados en disparar la apoptosis de células nucleadas,
así como los componentes del plasma que disparan la
apoptosis de células hepáticas, renales y endoteliales,
contribuyendo al efecto pleiotrópico de la sepsis.
MUSCULAR
Injerto de tejido conectivo subepitelial: tratamiento de
defecto alveolar en zona estética
Resumen El colapso del reborde alveolar es una
respuesta fisiológica ante elementos como traumatismo
quirúrgico durante extracción, lesiones traumáticas,
defectos de desarrollo y enfermedad periodontal
avanzada. Ante situaciones como ésta, la restauración
estética de la región anterior del maxilar superior, plantea
un reto. Descripción de casos clínicos. Primer caso: mujer
de 39 años con colapso del reborde alveolar por
extracción de OD. 2.1, al que se coloca injerto de tejido
conectivo subepitelial con la conformación del reborde
mediante un póntico ovoide para su posterior restauración.
Segundo caso: mujer de 42 años, con “absceso
periodontal crónico” en OD. 2.1. con una fisura en el
mismo, que condujo a su extracción, y preservación del
alvéolo con injerto bovino (BiOss) e injerto de tejido
conectivo. Éste último actuó como membrana, aumentó el
grosor alveolar, y obliteró el espacio de la extracción.
Discusión. En los casos con aumento de volumen ante un
reborde alveolar colapsado, debe tomarse en cuenta las
condiciones tisulares y disposición del paciente en el
discernimiento para la elaboración del plan de tratamiento.
En el presente trabajo se presentan dos opciones de
tratamiento y se discuten los elementos a tomar en cuenta
para la elección del mismo.
Discusión Teniendo en consideración los mecanismos de
cicatrización, y el tiempo que toman los mismos, el injerto
de tejido conectivo subepitelial representa un tratamiento
predecible. En el primer caso clínico se logró el aumento
del volumen del reborde edéntulo en sentido vestíbulo-
lingual, que acompañado del modelado gingival con
pónticos ovoides, otorgó una mayor naturalidad y estética
a la prótesis final. En el segundo caso, se aseguró la
estabilidad del volumen alveolar promoviendo la
homogeneidad en el color y la estética en la morfología del
sector anterior del maxilar. Como se puede ver, esta
técnica es un recurso valioso para el tratamiento de
colapsos alveolares, 5 mas no el único método que utiliza
tejidos blandos para esos fines, puede recurrirse a la
colocación de injertos onlay o al uso de matriz dérmica
acelular (aloderm). En el primer caso clínico se eligió el
injerto subepitelial sobre el onlay debido a algunas
desventajas que podrían presentarse en un procedimiento
de este tipo, incluyendo necrosis postoperatoria por
inadecuado suministro sanguíneo y discrepancias en el
color del tejido que generalmente lo acompaña con
resultados antiestéticos.6 El Aloderm está compuesto de
colágena y fibras elásticas, con dos presentaciones de
grosor, uno de 0.9 a 1.6 mm y otro de 0.5 a 0.9 mm, y ha
sido reportado en la literatura que tiene una buena
cicatrización y resultados estéticos, siendo su principal
ventaja el evitar la toma de tejido del paladar u otros sitios
quirúrgicos.7,8 Sin embargo, el impedimento principal por
el cual no se utilizó la matriz dérmica acelular en los casos
clínicos presentados, fue el aumento en el costo que
implica la utilización de este material. Por otro lado, y
siendo la mejoría en estética la motivación principal de la
utilización de técnicas de injerto para corregir un colapso
alveolar, los injertos de tejido conectivo subepiteliales
tienen resultados más predecibles. 5,6 Los procedimientos
post-extracción para preservar y aumentar el reborde
alveolar, disminuyen el colapso de tejidos blandos y duros
promoviendo una morfología adecuada. Como resultado,
se mejora el perfil de tejido blando y por ende la estética.
Normalmente, la indicación para aumento y preservación
de volumen óseo en los maxilares es a través de injertos
óseos, 9 aunque en algunos casos el aumento resulta
insuficiente. Por esta razón, se presenta la necesidad de
acompañarlos de técnicas de injertos libres o pediculados
de tejido blando, que pueden mejorar el pronóstico de los
aumentos de reborde alveolar. 10,11 De lo anterior
recalcamos la importancia de tomar en cuenta las ventajas
que aporta la técnica de injerto subepitelial a la
problemática relacionada con el colapso del sector anterior
del maxilar, para poder ofrecer al paciente soluciones de
manera adecuada y oportuna.
NERVIOSO
Neuroplasticidad: aspectos bioquímicos y neurofisiológicos
RESUMEN a neuroplasticidad es la potencialidad del
sistema nervioso de modificarse para formar conexiones
nerviosas en respuesta a la información nueva, la
estimulación sensorial, el desarrollo, la disfunción o el
daño. En general, la neuroplasticidad suele asociarse al
aprendizaje que tiene lugar en la infancia, pero sus
definiciones van más allá y tienen un recorrido histórico.
Hay diversos componentes bioquímicos y fisiológicos
detrás de un proceso de neuroplasticidad y esto lleva a
diferentes reacciones biomoleculares químicas, genómicas
y proteómicas que requieren de acciones intra y extra
neuronales para generar una respuesta neuronal.
CONCEPTOS GENERALES La neuroplasticidad es un
proceso que representa la capacidad del sistema nervioso
de cambiar su reactividad como resultado de activaciones
sucesivas (24). Tal reactividad permite que el tejido
nervioso pueda experimentar cambios adaptativos o
reorganizacionales en un estado fisiológico con o sin
alteración. Otros autores la definen de manera global
como toda respuesta cerebral que se origina frente a
cambios internos o externos y obedece a modificaciones
reorganizacionales en percepción y cognición (25). Este
grupo de definiciones aproxima la neuroplasticidad, como
uno de los sustratos que soporta procesos de gran
complejidad, tipo funciones cognitivas superiores,
entendidas desde una óptica conexionista y no
localizacionista
La neuroplasticidad es la base y fundamento de los
procesos experimentales y clínicos de neurorehabilitación.
Por tal motivo, en el año 2006 se definió la
neuroplasticidad como un proceso contínuo a corto,
mediano y largo plazo de remodelación de mapas
neurosinápticos, que optimiza el funcionamiento de las
redes cerebrales durante la filogenia, ontogenia y posterior
a daños del sistema nervioso
Mecanismos de plasticidad en las redes neuronales
• Recuperación de la excitabilidad neuronal (equilibrio
iónico celular y axónico, reabsorción del edema y residuos
hemáticos, diasquisis reversa transináptica)
• Actividad en vías neuronales parcialmente indemnes
• Plasticidad representacional con neuronas tipo ensamble
• Reclutamiento de redes paralelas no ordinariamente
activas
• Reclutamiento de subcomponentes en redes distribuidas
• Modulación de la excitabilidad de subredes por
neurotransmisores
Mecanismos de plasticidad en las sinapsis
• Plasticidad sináptica (modulación de la transmisión
basal, hipersensibilidad por denervación,
desenmascaramiento sináptico dependiente de actividad,
brotes dendríticos)
• Brotes axonales y dendríticos de colaterales ilesas
• Regeneración axonal (expresión genética de proteínas
de remodelación, modulación de factores neurotróficos)
• Modulación neuronal de la señalización intracelular
(dependiente de factores neurotróficos y de proteína
kinasas)
CONCLUSIONES El tejido nervioso se considera un
sistema dinámico, adaptable y plástico. La
neuroplasticidad es inherente al sistema nervioso y está
en comunión con las visiones localizacionistas y
conexionistas de la comprensión moderna del
funcionamiento cerebral. La neuroplasticidad es un
proceso fisiológico múltiple y generalizado a la biología
cerebral, pero a su vez particular de cada red o
microambiente neuronal; representa una temática
compleja que requiere involucrar procesos, productos y
componentes de la bioquímica básica y clínica, puesto que
tal proceso no obedece únicamente 126 Revista CES
MEDICINA Volumen 28 No. 1 Enero - Junio / 2014 a
modificaciones estructurales de un conjunto de dendritas,
sino a adaptaciones intra y extracelulares que ocupan más
de una ruta de señalización biomolecular. Los procesos
biomoleculares químicos, genómicos y proteómicos,
permiten que la respuesta neuronal frente a entradas o
señalizaciones no siempre se encuentre programada de
una manera constitutiva. La neuroplasticidad, por tanto, es
un proceso continuo de remodelación de mapas
neurosinápticos que se da, tanto en ausencia, como en
presencia de una noxa cerebral. Conocer este tipo de
temas constituye a mediano y largo plazo, blancos
farmacológicos en el manejo clínico referente a
prevención, tratamiento y rehabilitación de enfermedades
neurológicas y redefinen la biología cerebral desde una
perspectiva filogenética, básica y clínica. Los profesionales
de la salud involucrados en el área de la neuro-
rehabilitación clínica, tanto farmacológica como no
farmacológica, deben conocer el sustrato neurofisiológico
y neuroquímico de los fenómenos plásticos cerebrales, ya
que es una herramienta de incontable valor para respaldar
un plan dirigido, controlado, replicable e intensivo de
neuro-rehabilitación.
DEFINICIÓN DE TÉRMINOS Plasticidad neuronal:
cambios estructurales o funcionales de la neurona.
Capacidad del sistema nervioso para cambiar su
reactividad como el resultado de activaciones sucesivas
(8). Neurogénesis: formacion de neuronas que comprende
la proliferación, migración y la división de las células
madres en las cuales una o ambas células hijas llegan a
ser neuronas (69). Sinaptogénesis: proceso interactivo por
el cual se generan uniones especializadas donde una
neurona se comunica con una célula diana. Formación de
sinapsis entre las neuronas. En el ser humano comienza al
principio de la gestación, pero ocurre con mayor rapidez
desde dos meses antes del nacimiento hasta dos años
después del nacimiento (8). Desenmascaramiento
sináptico: el uso de sinapsis existentes pero poco o nada
funcionales hasta el momento que ocurre una lesión. Se
activan por receptores ácido α-amino-3-hidroxi-5-metil- 4-
isoxazolpropiónico (AMPA) (8). Neuronas tipo ensamble:
cuando un axón de una célula A está lo suficientemente
cerca de una célula B, como para excitarla y participa
persistentemente en su disparo, dando como resultado
algún proceso de crecimiento o cambio metabó- lico, en
una o en ambas células, de modo tal que la célula A excita
mas fácil a una célula B (69). Plasticidad intrínseca: forma
de plasticidad neuronal que implica la modificación de la
función del canal de iones en el axón dependiente de
canales iónicos de Ca2+ como receptores tipo AMPA,
NMDA, Kainato y RmGlu (69). Diasquisis: efectos distales
de una lesión neuronal más allá de la zona directamente
afectada. Es una alteración funcional que implica una
pérdida de excitabilidad en otras áreas cerebrales
interconectadas que no han sufrido la lesión de forma
directa (70). Factores de crecimiento neuronal: son
proteínas presentes en el sistema nervioso central y otros
sistemas del cuerpo humano, necesarias para la
supervivencia y desarrollo de las neuronas. También
sirven para dirigir el crecimiento de las vías nerviosas
hacía sus órganos efectores o dianas (71). Factores
neurotróficos: son proteínas segregadas que modulan el
crecimiento, la diferenciación, la reparación y la
supervivencia de las neuronas, como el factor de
crecimiento neuronal(FCN) y otras funciones en la
neurotransmisión y en la 127 Revista CES MEDICINA
Volumen 28 No. 1 Enero - Junio / 2014 reorganización
sináptica tipo sinapsina 1 que tiene lugar en el aprendizaje
y en la memoria (71). Matriz extracelular: conjunto
estructural formado por macromoléculas que se localizan
entre las células de un tejido; forman el medio donde las
células sobreviven, se multiplican y desempeñan sus
funciones (71). Brotes axónicos y dendríticos: respuesta
de crecimiento frente a un estimulo que puede ser o no el
primer paso para la formacion de nuevas sinapsis. Pueden
ser de dos tipos: Brotes terminales o ultraterminales y
brotes colaterales. Los terminales son prolongaciones del
terminal presináptico, los colaterales surgen como una
nueva rama del axón, independientes de otras
terminaciones nerviosas que hubieran ya (71). La
potenciación a largo término (PLT): definida como una
intensificación duradera en la transmisión de señales entre
dos neuronas que resulta de la estimulación sincrónica de
ambas, es el mecanismo principal de la formacion de la
memoria (8-72). Depresión a largo término (DLT):
entendida como una respuesta a un estímulo más corto en
la célula postsináptica, lo que viene acompañado por una
trasmisión de señales mas débiles y no duraderas (8-72).
Corriente localizacionista: teoría que indica que toda
función motora, sensorial y cognitiva posee una ubicación
específica, precisa y rastreable en la corteza cerebral (8).
Corriente conexionista: doctrina intermedia que sostiene
que si bien hay centros especializados en el encéfalo,
interconectados entre sí, la ruptura de dichas conexiones
produce alteraciones y modificaciones corticales para
suplir necesidades (8). Plasticidad adaptativa y mal
adaptativa: después de una lesión o noxa neurológica
puede aparecer una plasticidad favorable que induzca una
recuperación funcional, la plasticidad adaptativa es la
habilidad de sobrevivir y reproducirse en un ambiente
donde se presenta un daño y la plasticidad no adaptativa
incluye cualquier respuesta a una condición ambiental que
no aumente la adaptación de éste (73). Protein kinasa
(PK): enzima que modifica otras proteínas (sustratos),
mediante fosforilación, activándolas o desactivándolas.
Ocupan, por tanto, un lugar central en la cascada de
respuesta ante una señal química que llegue a la célula:
sirven de puente entre un segundo mensajero
(usualmente, AMPc). Tipos de PK: PK B (PKB/ AKT),PK C
(PKC),PK Mζ (PKMζ) y PK R (PKR) (74)
VASOS SANGUINEOS
ENDOTELINA-1: VASOCONSTRICTOR INTRÍNSECO
DEL ENDOTELIO VASCULAR
Resumen
La endotelina es un péptido vasoconstrictor aislado
inicialmente del cerdo de donde procede su denominación.
Es considerado como el más potente vasoconstrictor
conocido por el hombre, es incluso 10 veces más potente
que la angiotensina II. Existen tres isoformas y están
distribuidas en diversas células y tejidos interviniendo en la
modulación del tono vascular, proliferación celular,
producción hormonal, balance del sodio y como
neurotransmisor. Para la regulación del tono vascular debe
de haber un equilibrio de fuerzas vasoconstrictoras y
vasodilatadoras generados por el endotelio o que ejercen
influencia sobre el mismo, existen varios candidatos en la
categoría de los vasoconstrictores, pero el más importante
es la endotelina-1 por su potencia y su localización, ya que
su acción es ejercida sobre el músculo liso vascular.
1. Endotelina
El 1984, O'brien y McMurthy observaron que después de 6
horas una muestra de suero obtenida de un medio de
cultivo de células endoteliales de aorta de bovino lograba
producir una vasoconstricción de las arterias pulmonares
de bovino. Además, estudios realizados en 1985 por
Hickey et al. en arterias coronarias donde encontraron que
las células endoteliales producían incremento de la tensión
dependiente de volumen y que esta propiedad era abolida
por compuestos que desnaturalizaban proteínas, por esos
años se propuso que ésta sustancia debería ser un
péptido vasoactivo, y le denominaron factor contráctil
derivado del endotelio (1,2,3). Posteriormente en el
laboratorio del profesor Masaki de la Universidad de
Tsukuba en Japón, un grupo de investigadores
comandados por Masashi Yanagisawa y Hiroki Kurihara
iniciaron la purificación de este péptido contráctil, en el año
1998 logra ser aislada del sobrenadante del medio de
cultivo de células del endotelio vascular de aorta porcina y
le acuñaron la denominación de endotelina, porque
inicialmente fue aislada del cerdo. Este nuevo péptido
identificado como un péptido vasoconstrictor potente tiene
un peso molecular de 2492 Da. y es considerado como el
más potente vasoconstrictor conocido por el hombre (4,5).
Desde ese año y hasta la fecha se han realizado más de
18.000 publicaciones por diversos investigadores del
mundo con la finalidad de lograr conocer sus propiedades
biológicas y encontrar sus aplicaciones clínicas a favor de
la comunidad médica mundial (6).
Endotelina 1(ET-1)
Es un péptido de 21 aminoácidos con propiedades
vasoconstrictoras, considerado como el vasoconstrictor
más potente actualmente conocido incluso 10 veces más
potente que angiotensina II (7, 8, 9). Posteriores estudios
determinaron que las endotelinas son una familia y está
conformada por 3 péptidos de 21 aminoácidos ET-1, 2 y 3,
con una estructura peptídica muy similar. Las endotelinas
están distribuidas en una variedad de células y tejidos, con
diferentes niveles de expresión, donde actúan como
moduladores del tono vasomotor, proliferación celular,
producción hormonal, balance del sodio, neurotransmisión
y desarrollo de la cresta neural (10,11,12).
Estructura y biosíntesis de endotelinas
Estructura de endotelina -1(ET-1)
La endotelina-1, es un polipéptido que está conformado
por 21 aminoácidos. Hay 3 isoformas estrechamente
relacionadas: endotelina -1, endotelina-2 y endotelina- 3
(ET-1, ET-2, ET-3 respectivamente), que difieren en pocos
aminoácidos constitutivos. Existe una cuarta isoforma de
endotelina denominada ET-4 o péptido intestinal
constrictor (VIC) encontrado en ratas y ratones, que es
análogo a ET-2 de los humanos (13,14). La endotelina-
1(ET-1) está constituida por 21 aminoácidos con cuatro
residuos de cisteína, estableciendo dos puentes
intramoleculares de disulfuro y formando una estructura
semicónica inusual. Los puentes de disulfuro y el dominio
carboxiterminal son cruciales, tanto para la unión de la
endotelina con su receptor específico como para
conservar su actividad biológica (10).
Sí queremos comparar a la ET-1 con las otras endotelinas,
es decir, ET-2 y ET-3 y reconocer que estructuras
conservan entre sí, entonces se pueden mencionar que se
encuentran los 6 aminoácidos que se ubican en el terminal
carboxilo y los residuos de cisteína que forman puentes
disulfuro uniendo residuos 1-15 y 3-11. Estos residuos
podrían tener implicancias biológicas, particularmente en
relación con su estructura tridimensional y función
biológica (14). En cuanto a las diferencias entre estas
endotelinas estructuralmente se establece en el extremo
amino-terminal, tanto así que la ET-2 y ET-3 difiere de ET-
1 por 2 y 6 aminoácidos respectivamente (15). En la figura
1 podemos observar la estructura de la ET-1, se evidencia
la característica cónica de las mismas y la disposición de
los puentes disulfuro. Se ha reportado adicionalmente la
presencia de una endotelina-1 con una secuencia mayor
de aminoácidos (endotelina 1-31), cabe señalar que esta
endotelina conserva también la estructura de las otras
pero su diferencia radica en su potencia, se menciona que
es menos potente que su equivalente de 21 aminoácidos
(16).
Existe similitud entre la familia de las endotelinas y un
grupo de sustancias encontradas en el veneno de
serpientes de la familia Atractaspis Engadensis llamadas
sarafotoxinas (el veneno del áspid, con el cual se suicidó
Cleopatra), ocasionado un espasmo coronario, infarto y
fibrilación ventricular. Es decir "Cleopatra murió de una
sobredosis de endotelina" (17). La sarafotoxina 6B,
comparte una estructura química similar a ET-1,
diferenciada en 7 aminoácidos y una capacidad
vasoconstrictora potente y sostenida. La relación de
ambos péptidos en la escala evolutiva animal se ve
apoyada por el hecho de que posiblemente pertenezcan a
la misma familia genética, aunque el mRNA de la
sarafotoxina GB sólo ha sido identificada en las glándulas
exocrinas productoras del veneno de la serpiente, sin
relación alguna con el endotelio vascular (4,18).
Las características de la actividad biológica de las
endotelinas se debe a la secuencia heterogénica de la
región amino-terminal, probablemente la región de
aminoácidos de la secuencia desde treonina 2a lisina 7 es
importante para unirse con su receptor específico y
mantener su característica vasoconstrictora y vasopresora.
La apertura de un puente disulfuro también produce
disminución de su actividad vasoconstrictora. La
disminución de la actividad vasoconstrictora también se ha
visto cuando se cambian los aminoácidos en la región
carboxilo terminal del péptido, pero su efecto es menos
importante que el señalado en la región amino-terminal
(19,20).
Biosíntesis y regulación de la producción de endotelina-1
(ET-1)
La endotelina-1, (ET-1) es sintetizada en diferentes tipos
celulares como por ejemplo: las células del endotelio, las
del músculo liso vascular, del epitelio bronquial, los
leucocitos, los macrófagos, los cardiomiocitos y las células
mesangiales por mencionar algunas de ellas. Cada
endotelina es sintetizada en diferentes células, tejidos, y
órganos, cabe señalar que esta síntesis varía
dependiendo de la estructura, órgano y tejido en estudio.
En la Tabla grande dentro del cuerpo del artículo tabla
1 se presentan las diversas células implicadas en la
síntesis de cada endotelina, de esta tabla se destaca que
ET-1 se produce en mayor concentración en células
endoteliales, la ET-2 mayormente en células epiteliales
renales y células del estroma y ET-3 en el cerebro
fundamentalmente en las neuronas y células de la glía (3,
13, 21, 22, 23). Cada uno de los péptidos: endotelina-1
(ET-1), endotelina-2(ET-2) y endotelina-3(ET-3), es
codificado por un gen independiente en un cromosoma
determinado 6, 1 y 20 respectivamente (7).
Biosíntesis y regulación de la producción de ET-1
Biosíntesis de ET-1
Para el caso de la biosíntesis de ET-1, que es el más
caracterizado por cuanto interviene en la regulación del
tono vascular y que se produce en mayor concentración
en el endotelio por células endoteliales. Se puede señalar
que se desarrolla en el citosol de estas células y que los
más potentes estimulantes en la síntesis de esta
endotelina son la hipoxia, la isquemia y las alteraciones
hemodinámicas de la fuerza de rozamiento vascular
(shear stress). De forma opuesta, los inhibidores de su
síntesis fundamentalmente es acontecida por óxido nítrico,
vasodilatadores dependientes de nitratos, prostaciclina y
péptido natriurético auricular (25). En la tabla 1 se
exponen las células, tejidos y órganos que producen las
diversas endotelinas.
El mRNA de ET-1 humana codifica la Preproendotelina de
212 aminoácidos a través de la activación proteolítica de
una endopeptidasa la transforma en Big- endotelina-1 de
39 aminoácidos (Big-ET-1). Este fragmento posteriormente
sufre la acción de la enzima convertidora de endotelinas
(ECE-1) de las que existe en cuatro isoformas (a,b,c,d).
Fundamentalmente hay dos isoformas que intervienen en
el clivaje de Big- ET-1; la isoforma ECE-1aes expresado
en el aparato Golgi de las células que producen
endotelina, las células endoteliales poseen esta isoforma y
logra el clivaje de Big-ET-1 intracelular, también se debe
señalar que estas mismas células endoteliales poseen la
isoforma ECE1b, la que está localizada en la membrana
celular y su función es clivar Big-ET-1 extracelular (2,30).
La enzima convertidora de endotelina (ECE), es una
metaloendoproteinasa, que pertenece a la superfamilia de
la neprilisina (zinc metaloproteinasa unida a membrana),
cuya máxima acción es a pH de 7.40 (11). Esta enzima
rompe la unión en la posición triptófano 21-valina
22(Trp21-Val22), transformándola en endotelina -1 de 21
aminoácidos (ET-1), siendo este péptido activo.
(14,15,24). La ET-1 formada es un polipéptido 140 veces
más potente que Big-ET-1 (26) y es la que ejerce efectos
biológicos.
Adicionalmente a este mecanismo descrito para la
formación de ET-1, se ha descrito otro mecanismo
paralelo para la formación de endotelina-1, esta otra vía
contempla la presencia y acción de los mastocitos. Se ha
encontrado que estas células contienen gránulos
citoplasmáticos los cuales una vez que son estimulados
liberan varios autacoides como citoquinas, proteoglucanos
y unas enzimas denominadas proteínas serinas como la
quimasa, quimotripsina, catepsina G y caboxipeptidasa A.
La quimasa se ha encontrado localizada en el espacio
intersticial seguido a la de granulación de las células
cebadas sometidas a estímulos, esta enzima puede actuar
sobre Big ET-1 logrando clivarla a nivel de sus residuos
Tyr 31-Gly32, resultando una endotelina- 1(ET-1) de 31
residuos (1-31), esta enzima se ha descrito que tiene
efectos vasoconstrictores pero de menor potencia que su
homóloga de 21 aminoácidos, aún falta definir su exacta
fisiología y fisiopatología (16,28). En la figura 1 se expone
la estructura de las endotelinas- 1, así como las zonas de
clivaje y las enzimas que ejercen su función.
Cuando la célula endotelial es expuesta a un estímulo, la
liberación de endotelina-1 se presenta a los pocos minutos
y su tiempo de vida media plasmático es corto, para la
mayoría de los autores coinciden que es de 4 a 7 minutos,
aunque otros proponen que es menos de 2 minutos (28),
mientras que el mRNA de ET-1 alcanza un máximo de 15
a 20 minutos de vida media (14). El corto tiempo de vida
media de ET-1 se debe a la capacidad que tiene el
organismo en su degradación y posterior eliminación,
podemos señalar que los órganos mayormente implicados
en la extracción de ET-1 son el pulmón y el riñón, tanto es
así que en la primera pasada por el pulmón se extrae del
plasma más del 50% incluso algunos autores mencionan
que se extrae hasta 70% de ET-1. Los mecanismos que
logran un retiro efectivo a nivel pulmonar tienen que ver
con el receptor de ET-1 de tipo B (ETB), el mecanismo
íntimo de estos hechos aún no se han aclarado del todo,
pero los estudios han demostrado que depende de dos
vías; la primera explica que una vez que toma contacto la
ET-1 con su receptor ETB se produce una internalización
del complejo formado ET-1/ETB en el citoplasma de la
células endoteliales del pulmón y que posteriormente sufre
la degradación por acción de los lisosomas y la segunda
posibilidad es porque los receptores ETB están más
accesibles a las endotelinas que los de tipo ETA, por
cuanto el pool de ETB está en las células endoteliales
(3,24). A nivel renal la ET-1 puede ser degradada por la
endopeptidasa neutral (NEP), la cual están localizada
cerca de las vesículas que contienen ET-1 en el tubo
contorneado proximal, es por esta razón que la
concentración de ET-1 varía inversamente con la función
renal (3,16).
Liberación de ET-1 en los vasos sanguíneos.
Existen discrepancias en la literatura sobre su
almacenamiento en las células endoteliales, pero lo que sí
se ha logrado precisar es que hay dos formas de
liberación de ET-1, teniendo en cuenta el estímulo se
menciona que son dos vías; la primera, es la vía
denominada "vía constitutiva", por esta vía se libera
endotelina-1 constantemente, es sintetizada por ECE-1/
ECE-2 produce intensa constricción en el músculo liso
vascular adyacente y contribuye con el mantenimiento
endógeno del tono vascular, y la segunda es la llamada
"vía regulada", por esta vía la ET-1 esta almacenada en
los cuerpos de Weibel- Palade y se libera posterior a
estímulos fisiológicos o fisiopatológicos y produce una
marcada vasoconstricción (6,14,18,32,33). Las células
endoteliales liberan ET-1 como mínimo el 75% hacia la
capa media de los vasos sanguíneos sugiriendo un rol
paracrino/autocrino (28). Estudios en adultos sanos
muestran que los niveles basales de ET-1 son 0.7 a 5
pg/ml y que la excreción urinaria en 24 horas de ET-1 es el
mejor predictor del nivel de ET-1 plasmático, en adultos
normales la excreción urinaria de ET-1 está entre 1,7pg/ml
y 6,8ng/ml (8,34,35). En la figura 2 se hace una
representación de la liberación de endotelina -1 por las
células endoteliales, así también cómo se efectúa su
eliminación.
Receptores de endotelinas
Se han caracterizado dos tipos de receptores de alta
afinidad que pertenecen a la superfamilia de receptores
acoplados a Proteína G, a través de las cuales median sus
efectos las endotelinas (8,10). Los receptores de
endotelinas han sido clasificados como receptores de
endotelinas tipo A (ETA) y tipo B (ETB) por el Comité
Farmacológico Internacional de Nomenclatura y
Clasificación de Drogas (NC-IUPHAR), esta clasificación
proviene de estudios enfocados en la expresión de
receptores en varios tejidos de diferentes especies y el
desarrollo de antagonistas, particularmente no peptídicos
(18).
Receptor de Tipo A (ETA )
El receptor de tipo A (ETA) fue inicialmente clonado en
pulmón de bovinos y ratas. En humanos el receptor ETA
ha sido clonado y localizado en el cromosoma 4 (26). Este
receptor tiene una longitud de 427 aminoácidos, y tiene
una secuencia en 94% a 91% es idéntica a la obtenida en
bovinos. Es predominantemente expresado en las células
del músculo liso vascular y miocitos cardíacos, aunque
también se han descrito en la vía aérea, células
estrelladas hepáticas, hepatocitos, neuronas,
osteoblastos, melanocitos, adipocitos y células del sistema
reproductor. En la tabla 2se expone los lugares donde se
realiza la expresión de receptores ETA. Se ha establecido
que existen dos subtipos de receptores de ETA, es así que
tenemos dos subtipos; ETA1 y ETA2, estos al
interaccionar con ET-1 genera vasoconstricción y
proliferación celular (3,36).
Receptor de Tipo B (ETB)
Este receptor está codificado en el cromosoma 13 (21), y
está conformado por una secuencia de 442 aminoácidos,
esta secuencia es semejante en 89% y 88% a los
receptores ETB de bovinos y ratas respectivamente (35).
En humanos, es predominantemente expresado en las
células endoteliales y está unida a la Proteína G inhibitoria
(Gi). Los factores moduladores que logran incrementar o
disminuir su expresión están representados en la tabla 3.
Los receptores ETB tienen dos subtipos, el subtipo ETB1,
que media vasodilatación y ETB2 vasoconstricción (36).
Sin embargo, la vasoconstricción en respuesta al receptor
ETB es variable depende del tipo, tamaño y de la especie
en estudio (3).
Los receptores de endotelinas ETA y ETB han sido
clasificados sobre la base de su afinidad con las diversas
endotelinas. Los receptores ETA, tiene 100 veces más
afinidad para ET-1 si lo comparamos con ET-3. Los
receptores ETB tienen tiene afinidad semejante para los
tres endotelinas. En humanos, la secuencia de
aminoácidos para ETA y ETB exhibe una similitud en 59%
(14). En la tabla 2 se expone las funciones de los
receptores de endotelinas a nivel cardiovascular y la
afinidad de las endotelinas por cada receptor. En
situaciones patológicas la densidad de los receptores
varía, por ejemplo, en ratas con insuficiencia cardíaca
crónica la relación de ETA:ETB que en condiciones
normales es de 85:15 varía a 50:50, en estas condiciones
patológicas habría una mayor cantidad de receptores ETB
(38).
Función de las endotelinas
Endotelina -1 (ET-1)
La ET-1 ejerce su acción a nivel vascular en forma directa
sobre sus receptores de tipo A, (ETA) produciendo
vasoconstricción fundamentalmente y cuando hace
contacto con su receptor de tipo B produce vasodilatación.
También se ha descrito una acción indirecta sobre otros
vasoconstrictores conocidos haciendo que estos
incrementen su liberación.
Se puede mencionar entonces que la ET-1 ejerce su
función a nivel vascular de dos maneras: una de ellas que
depende de sí misma o de acción directa y otra lo hace
sensibilizando a estructuras intracitoplasmáticas para
mejorar o disparar su función constrictora, a esta forma se
le llama de acción indirecta, ahora haremos una
descripción de cada una de ellas:
Acción directa de ET-1 sobre receptor ETA.
En individuos sanos, los niveles plasmáticos de ET-1
medidos por radio inmunoensayo, es de 1.5 a 3.7 pg/ mL,
estos niveles son aproximadamente de 10 a 100 veces
más bajos que los necesarios in vitro para producir
vasoconstricción, la razón de esta baja concentración está
relacionada con la rápida remoción de ET-1 de la
circulación (15), pero el efecto vasoconstrictor se va
incrementando progresivamente y permanece por
aproximadamente una hora, estos hechos probablemente
derivan del ingreso de calcio extra citoplasmático (7,8). El
EC50 para que ET-1 produzca vasoconstricción esta entre
0.1 a 1nM, esta concentración ha sido obtenida de
preparados de células del músculo liso vascular (35). Su
efecto vasoconstrictor e inotrópico positivo se logra a
través del incremento del calcio en el citosol. Para este
efecto, la ET-1 se une a su receptor específico ETA en el
sarcolema, de la célula del músculo liso vascular activando
a la fosfolipasa C, esta activación induce hidrólisis de los
lípidos de inositol localizados en la membrana, formando
dos segundos mensajeros, inositol 1,4,5-trifosfato (IP3) y
diacilglicerol (DAG) (4,13,15). El IP3 hace contacto con su
receptor en la superficie del retículo sarcoplásmico, esta
unión logra liberar calcio del mismo hacia el citosol
produciéndose un incremento inicial y transitorio de calcio,
se ha descrito también que el retículo sarcoplásmico
puede libera calcio por la vía de la cafeína sensible (19).
Por otro lado, la vía del diacilglicerol (DAG) activa la
proteincinasa C (PKC), incrementa la sensibilidad del
aparato contráctil al calcio, ésta va a fosforilar a las
cadenas ligeras de miosina para iniciar la contracción de la
fibra muscular lisa, otras funciones que se asocia a PKC
es la activación de la compuerta Na+/ H+, aumentando
finalmente la entrada de calcio a la célula del músculo liso
(4,17, 25,34). En la figura 3, se esquematiza las diversas
vías de transducción de los receptores de endotelina y la
activación de PKC, vía necesaria para producir
constricción. La ET-1 causa un incremento bifásico de la
concentración de calcio al interior de las células del
músculo liso vascular, esto consiste en un incremento
transitorio seguido por un incremento sostenido del calcio
intracelular. El incremento transitorio está relacionado con
el movimiento del calcio intracelular por activación de la
fosfolipasa C (PLC) (2).
El incremento sostenido es debido al influjo del calcio
extracelular. El ingreso de calcio extracelular dependiente
de ET-1 está sujeto a la apertura de los canales de calcio
de tipo L, sin embargo, se ha sugerido que pueden estar
implicadas otras vías como los canales catiónicos no
selectivos para el calcio y los canales operados por
almacenamiento de calcio (SOCC) (2,15). La ET-1 activa a
fosfolipasa D (PLD) en varios tejidos. La PLD cataliza la
hidrólisis de fosfolípidos y produce ácido fosfatídico que
luego pueden ser convertidos a DAG así, la activación de
PLD puede guiar la producción sostenida de DAG.
Adicionalmente, ET-1 puede activar fosfolipasa A2,
favoreciendo la producción de prostaglandinas, las cuales
pueden contribuir con la acción contráctil de ET-1
(13,14,15,25). A nivel citoplasmático la ET-1 puede cumplir
con otras de las funciones como es la activación de la
cascada proteína quinasa activada por mitógeno (MAPK),
por esta vía contribuye con el control del crecimiento
celular, adhesión y migración en la vasculatura y el
corazón (13). En la figura 4, se hace una representación
gráfica del accionar en la formación de endotelina -1 y su
interacción con receptores ETA y ETB sobre la célula del
músculo liso vascular.
Acción directa de ET-1 sobre receptor ETB
Los receptores ETB son acoplados a Gq/G11 y su
posterior activación recluta vías dependientes de PLC,
PLA2, PLD, Intercambiador Na+/H+, adelinato y guanilato
ciclasa.
La movilización de calcio intracelular y la entrada del
mismo a la célula, así como las vías de señalización
dependientes de fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K) y la
subunidad β/ γ de la Proteína G, se producen posterior a la
interacción de ET-1 y ETB (13,22). Cuando ET-1 toma
contacto con receptor ETB a nivel de las células
endoteliales va a producir relajación del endotelio a
expensas del incremento del GMPc, esto producirá
liberación del óxido nítrico (NO) y EDHF. Este receptor va
a permitir modular la respuesta vasoconstrictora de ET-1
(9,35).
Acción indirecta de la ET-1
Esta acción la ejerce sobre otros vasoconstrictores
conocidos como norepinefrina, serotonina y angiotensina
II, haciendo que se liberen en mayor concentración y
logrando incrementar el tono vascular, este hecho se
denomina sensibilización de los vasos sanguíneos por
parte de ET-1 a otros vasoconstrictores. Esta acción se
produce a concentraciones de ET-1 menor que las
observadas para producir vasoconstricción directamente
dependiente de ET-1, estas concentraciones menores a
0.1 nM están relacionadas con esta acción indirecta de la
ET-1 (1,25,36). Este fenómeno puede ser exagerado en
condiciones patológicas como en los pacientes
hipertensos, particularmente en presencia de polimorfismo
del gen PreproET-1 (39). También se ha visto que ET-1
puede incrementar los niveles plasmáticos de aldosterona,
interviniendo en su biosíntesis a nivel de la zona
glomerulosa, la finalidad es incrementar el tono vascular
(29). En la tabla 4 se expresa la función que ejerce la
endotelina-1 sobre cada receptor, teniendo en cuenta el
órgano implicado y el tipo celular, donde se indica que las
células del músculo liso vascular estimuladas a través de
los receptores ETA ejercen el mayor efecto constrictor y la
célula endotelial activada por medio del receptor ETB
ejerce el mayor efecto que otras células con la que se han
comparado en este caso generando vasodilatación.
Comportamiento de ET-1 en células del músculo liso
vascular humano
La administración de ET-1 en infusión en seres humanos
produce incremento de la presión arterial, dosis
dependiente acompañada de una retención de sodio. La
presión arterial media se incrementa en aproximadamente
10 mmHg. La ET-1, produce un efecto inótropo negativo,
compromete el llenado diastólico de ambos ventrículos,
disminuye el gasto cardíaco y reduce la frecuencia
cardíaca. La circulación renal humana es extremadamente
sensible al efecto vasoconstrictor de ET-1, la
administración de pmol/Kg/min produce un decremento de
25% del flujo plasmático renal y un incremento en 45% de
la resistencia vascular renal estos efectos duran
aproximadamente 3 horas (7).
Se puede concluir que la vasoconstricción producida por la
ET-1 se debe a:
a. La vasoconstricción inducida inicialmente por ET-1
puede ser inducida por la liberación de calcio del retículo
sarcoplásmico mediado por la activación de la fosfolipasa
C.
b. El ingreso de calcio extracelular es necesario para el
mantenimiento de la contracción, este hecho es mediado
por la apertura de los canales calcio de tipo L, así como de
otros canales como los canales catiónicos no selectivos
para el calcio y canales operados por almacenamiento de
calcio (35).
En la figura 5 se expone la liberación de ET-1 y su
interacción con el receptor específico ETA y su accionar a
través de segundos mensajeros. En la figura 6 se expone
un resumen de todos los receptores que favorecen la
vasoconstricción dependiente del endotelio vascular, se
resalta la importancia del calcio como segundo mensajero
que ejecuta la función sobre el músculo liso vascular.
Aplicaciones clínicas de endotelina 1
La acción de ET-1 se describe en múltiples órganos y
sistemas con funciones especificas. En la tabla 5 se
describen las acciones biológicas que cumple ET-1 sobre
los vasos sanguíneos, corazón, riñón, sistema
neuroendocrino entre otros, cabe señalar que estos
efectos son en condiciones fisiológicas.
Endotelina -1 (ET-1) y enfermedad
Se ha demostrado que en condiciones patológicas la
concentración de endotelina-1 se incrementa y que la
relación proporcional en la expresión del número de
receptores varía, haciendo más acentuada la presencia de
los isotipos ETB. Estos hechos tendrían implicancias en la
presencia y perpetuación de los estados mórbidos. En
la tabla 6 se enumeran las principales patológicas donde
se ha demostrado que ET-1 está en mayor concentración.
Puntos clave para recordar
Endotelina-1: vasoconstrictor intrínseco del endotelio
vascular
• La endotelina-1 (ET-1) es el vasoconstrictor más potente
hasta ahora conocido por el hombre, incluso es 10 veces
más potente que la angiotensina II. Existen 2 tipos de
endotelina-1, siendo la endotelina de 21 aminoácidos la
que tiene mayor actividad y potencia biológica sobre la de
31 aminoácidos. Existen otras 02 isoformas de endotelina
denominadas ET-2 y ET-3.
• Los lugares de producción de endotelinas son diversos
en la especie humana, sin embargo, podemos señalar
como centros de mayor producción para ET-1 a las células
endoteliales, para ET-2 se ha señalado a las células
epiteliales renales y las células del estroma. Para ET-3 se
ha identificado como las células de mayor producción a las
neuronas glía e intestino.
• Los factores que estimulan la síntesis de ET-1 son
múltiples, pero la hipoxia, isquemia son los más
importantes. Siendo los inhibidores más importantes de su
liberación el óxido nítrico, prostaglandinas E2, I2, y el
péptido natriurético auricular y cerebral.
• Se han identificado dos tipos específicos de receptores
de endotelinas denominados receptores de tipo A y B. Las
células del endotelio expresan en mayor cantidad
receptores de tipo B, siendo su mayor acción sobre esta
célula la vasodilatación. La célula del músculo liso
vascular expresa mayor cantidad de receptores de tipo A,
logrando en estas células vasoconstricción.
• La potencia de ET-1 es mayor sobre los receptores de
tipo A que la ET-2 y ET-3. La potencia de ET-1 sobre
receptores de tipo B es igual a ET-2 y ET-3.
• La ET-1 en condiciones patológicas se incrementa su
producción, tanto es así que se ha demostrado su
elevación en enfermedades agudas como crónicas,
podemos señalar como es el caso de la hipertensión
pulmonar, infarto agudo de miocardio, arterioesclerosis,
lupus, sepsis, cirugías, cáncer, diabetes mellitus,
insuficiencia cardíaca entre otras.
• La FDA ha aprobado el uso de Bosetan, un antagonista
no selectivo de los receptores de endotelina de
administración oral, para el tratamiento de hipertensión
pulmonar primaria.
CORAZON
Evaluación electroquímica de aleaciones con alta
resistencia a la corrosión: Nitinol para implantes
cardiacos
Resumen
Uno de los adelantos importantes de la medicina es el uso
de aleaciones con propiedades mecánicas adecuadas y
principalmente biocompatibilidad y alta resistencia a la
corrosión. Este es el caso del NiTiNOL, aleación
descubierta en los Laboratorios de la Marina de EEUU.
En Bolivia, PFM S.R.L. desde hace bastante tiempo viene
fabricando y exportando dispositivos médicos como el
 NitOccludASD-R, para cerrar la comunicación anormal
entre las aurículas del corazón, mediante la técnica
denominada cateterismo cardiaco.
En el presente trabajo, se describe el procedimiento para
verificar la resistencia a la corrosión de los dispositivos
médicos, cada vez que se realizan modificaciones de
composición, tratamiento térmico o diseño. Utilizando
curvas de polarización y espectros de impedancia, los
resultados obtenidos para muestras de NiTiNOL con
tratamiento térmico de nitrurado a diferentes tiempos,
mostraron que a pesar de existir efectos asociados al
tiempo de nitruración, los dispositivos presentaron
"Potenciales de Ruptura" por encima de los niveles de
oxidación aceptables por la FDA, EEUU
(aproximadamente 600 mV/ENH).
Antecedentes
En los laboratorios de la marina de los EE.UU., William
Beuhler descubrió una aleación de níquel (Ni) y titanio (Ti)
que presentaba propiedades de memoria de forma y
super-elasticidad, en un programa de investigación
encaminado a la obtención de una aleación con alta
resistencia a la corrosión [3, 6]. El equipo de
investigadores que lo descubrió bautizó el nuevo material
con el nombre de NiTiNOL (acrónimo de Ni-Ti-Naval
Ordenance Laboratory).
En investigaciones posteriores, se estableció que el
NiTiNOL, aparte de sus propiedades anticorrosivas, de
memoria de forma debida a una transición de fase entre
una estructura de tipo austenita y una de tipo martensita, y
super-elasticidad, presentaba también una elevada bio-
compatibilidad [3,6]. Esta última propiedad principalmente,
a dado origen al uso de esta aleación en implantes
médicos facilitando el desarrollo de varios dispositivos.
Uno de los usos más difundidos de esta aleación es la
fabricación dispositivos como cilindros-mallas
autoexpansibles para mantener permeabilidad de vasos
sanguíneos (stents), o dispositivos para oclusión de
defectos cardiacos [3].
Conclusiones
En base a los resultados obtenidos y el análisis de éstos,
se pueden emitir las siguientes conclusiones:
 Se ha establecido un efecto detectable del tiempo de
nitruración en el comportamiento electroquímico y las
propiedades del NiTiNOL,
 Se estableció que un tiempo de tratamiento térmico de
nitruración adecuado es de 90 segundos (Pruebas A2, B2
y C2), obteniéndose valores de ruptura entre 725 y 769
mV/ ENH.
Es posible obtener valores de Ep mayores a 700 mV/ENH
a tiempos mayores a 360 segundos de tratamiento
térmico,
 sin embargo, el costo que implica podría ser negativo en la
economía del proceso. Por otra parte, dependiendo del
espesor y tamaño de los dispositivos estos tiempos de
nitruración podrían ser tomados en cuenta como
referencia.
 Se confirmó mediante Espectroscopía de Impedancia la
existencia de una capa de productos de corrosión estables
y semiconductores donde se origina la protección anódica
del NiTiNOL.
GANGLIOS LINFATICOS
Los linfocitos B, células productoras de anticuerpos, tienen
la capacidad de producir citoquinas que operan de modo
anti-inflamatorio
Resumen: Loslinfocitos B, únicas células productoras de
anticuerpos (Acs) pueden ejercer su función a través de
mecanismos dependientes de Acs o independiente de
ellos. Las actividades independientes de Acs incluyen la
secreción de citoquinas proinflamatorias y quemoquinas y
la presentación de antígenos. Por estas actividades, los
linfocitos B son capaces de funcionar como células
accesorias y regulatorias del sistema inmune.
Últimamente, el papel de los linfocitos B en la respuesta
inmune celular recibió un interés renovado a partir de
datos clínicos, que muestran que las terapias de
eliminación de linfocitos B son efectivas para
enfermedades autoinmunes cuyas células efectoras
dañinas son los linfocitos T. Recientemente, identificamos
que linfocitos B murinos y de origen humano son capaces
de producir IL-17, una citoquina que ha sido reportada
posee funciones pro-inflamatorias. Sin embargo,
observamos que los linfocitos B productores de IL-17
actúan, en la infección experimental conTrypanosoma
cruzi, controlando una respuesta inflamatoria al reducir
altos niveles de IFN gamma y TNF. Reportamos que
loslinfocitos B, después de la exposición directa al T. cruzi
o a la enzima trans-sialidasa del parásito, que modifica
glicoproteínas presentes en la superficie de los mismos, se
activan de forma policlonal y en ellosse dispara una vía de
señalización, totalmente novedosa, dependiente de la
tirosin-fosfatasa CD45, de las kinasasSrc y Btk-TEC que
culminan en la expresión de IL-17A e IL-17F.
ORGANOS LINFATICOS
Aspectos actuales de la organogénesis. Función e
involución del timo
RESUMEN
El timo es un órgano linfoide central o primario localizado
en la parte anterosuperior del tórax. Constituye el principal
sitio de diferenciación y maduración de las células T. En
esta revisión se detallan aspectos actuales de la
embriología, la histología y la función tímica y en la
generación de los diferentes subtipos de timocitos y su
diferenciación a células T maduras efectoras, la inducción
de las células T tímicas reguladoras involucradas en el
mantenimiento de la tolerancia a lo propio y la involución
que sufre este órgano durante el proceso de
inmunosenescencia.
INVOLUCIÓN TÍMICA
La involución que sufre el timo en los humanos se inicia
durante la pubertad y se completa al final de la sexta
década de la vida, de modo que en la edad adulta gran
parte del parénquima tímico ha sido reemplazado por
grasa. 25
En este proceso disminuye su tamaño, peso y actividad
como resultado de la influencia que ejercen sobre él los
altos niveles de hormonas sexuales circulantes durante la
pubertad, el bajo número de células precursoras derivadas
de la MO y los cambios que sufre el microambiente
tímico. 26
Este fenómeno tiene implicaciones en el mantenimiento
del repertorio de linfocitos T vírgenes, lo cual provoca
numerosos defectos funcionales, incluido el acortamiento
de telómeros, un repertorio restringido de RCT, poca
producción de IL-2 y deficiencias en su diferenciación y
proliferación hacia células efectoras. 25,26
Se han descrito diversos cambios asociados con la
involución tímica. Entre los más estudiados, se encuentra:
la reducción en el número total de linfocitos T vírgenes que
expresan el fenotipo CD45RA+, CD62L+ CD27+, CD28+ y
CD11a+, por disminución en la timopoyesis; y el
incremento en el número de linfocitos T de memoria, como
una consecuencia de la experiencia inmunológica que se
adquiere durante la vida. El efecto de una reducción de
linfocitos T vírgenes en sangre periférica es el
empobrecimiento en el repertorio total de linfocitos T, lo
cual puede llevar a una limitada respuesta hacia los
nuevos antígenos. 27
Las células que recién emigran del timo, pueden ser
identificadas por la presencia de pequeños fragmentos de
ADN que permanecen durante el reordenamiento del RCT,
los cuales se denominan círculos de excisión de señales
de unión del RCT. La generación de linfocitos T que
expresan estos círculos, permanece relativamente
constante a lo largo de la vida y persiste en individuos
mayores de 50 años, aun después de haber recibido un
trasplante de MO.26,27
Experimentos de trasplante de tejido tímico y de MO
procedentes de ratones jóvenes a ratones viejos,
demuestran que la maduración de los protimocitos a
linfocitos T está severamente comprometida a partir de los
dos meses de edad del ratón. Por otro lado, el número de
protimocitos en la médula no parece variar con la edad,
aunque sí sufren un proceso madurativo diferente. Así, el
conjunto de precursores DN, que expresan CD44 pero no
CD25, no está alterado con la edad. Sin embargo, su
progenie inmediata (CD44+/CD25+, CD44-/CD25+, CD44-
/CD25) sufre una declinación con el envejecimiento. Estos
datos muestran cómo la maduración tímica en edades
avanzadas parece estar bloqueada en las primeras
etapas, justo en el momento previo al reordenamiento del
gen Vß del RCT, en los constituyentes de la línea
germinal. 25-28
El envejecimiento que sufre el sistema inmunitario genera
cambios en el repertorio de los linfocitos T. Diferentes
subpoblaciones de linfocitos T modifican su fenotipo
durante el envejecimiento, lo que incrementa la proporción
de linfocitos T de memoria. Este cambio se presenta tanto
en linfocitos T CD4+ como en linfocitos T CD8+ .25,26
La expresión de marcadores de memoria CD44 y CD62L
(L-selectina) también puede ser modificada. Aunque los
linfocitos T con fenotipo de memoria se incrementan con la
edad, existe poca evidencia que sustente que su función
esté disminuida. Uno de los cambios cualitativos más
relevantes existentes en la población de linfocitos T de
memoria es la aparición de múltiples expansiones clonales
dentro de los linfocitos T CD8+, así como la pérdida de
moléculas coestimuladoras como CD40L y CD28, con un
espectro de especificidad altamente restringido, de tal
forma que las células T deterioradas manifiestan poca
citotoxicidad y un desbalance en la producción de
citocinas, lo que genera condiciones proinflamatorias. 27-29
La involución del timo con la consiguiente disminución de
las células T cooperadoras, afecta además la función y la
diversidad de las células B, que conduce a una débil y
deficiente respuesta de anticuerpos y un incremento en la
producción de autoanticuerpos. 26,28
La atrofia del timo y la disminución de su actividad
constituyen procesos naturales que suceden a lo largo de
la vida, los cuales provocan alteraciones en las respuestas
de células T y B, que dan como resultado un aumento en
la susceptibilidad para adquirir infecciones debido a la
disminución en la capacidad para eliminar diferentes
patógenos, la disminución de la memoria inmunológica y
un alto riesgo de padecer enfermedades autoinmunes y
cáncer. 25-29
HIPOFISIS
Acción directa de la triyodotironina en la expresión
génica de cerebro y cerebelo en el período neonatal
Resumen
Las hormonas tiroideas tienen un papel fundamental en el
desarrollo y el funcionamiento de diversos órganos,
especialmente el cerebro. Las hormonas tiroideas ejercen
sus funciones mediante la interacción de la triyodotironina
(T3) con receptores nucleares y la regulación de la
expresión de genes. En este trabajo hemos estudiado los
efectos del hipotiroidismo y de la administración de T3 en
la expresión de genes de cerebro y cerebelo durante el
periodo posnatal en la rata. Se obtuvieron neonatos
hipotiroideos mediante la administración de antiroideos a
la madre durante la gestación y la lactancia. Se les
administró T3 a dosis diarias de 15ng/g de peso desde el
día posnatal 10 hasta el 15, y se los sacrificó 24h tras la
última inyección. El hipotiroidismo produjo un aumento de
las concentraciones de colesterol y disminución de la
expresión de D1 en hígado y de Serca-2 en corazón, que
fueron normalizados tras el tratamiento con T3. En el
encéfalo, el hipotiroidismo redujo la expresión de los
genes del núcleo estriado Ngrn y Rasd2, así como de los
genes de cerebelo que codifican sinaptotagmina
12 (Syt12), hairless (Hr), neurotrofina 3 (Nt3) y
RevErbAα (Nrd1d), que también se normalizaron tras la
administración de T3, lo que indica que durante el periodo
posnatal esta hormona llega directamente y tiene actividad
en el cerebro. En paralelo, se ha estudiado la posible
acción de un análogo de la T3, que se une in vitro
preferentemente al receptor tiroideo α (TRα). Sin embargo,
este compuesto no tuvo efecto alguno en los parámetros
estudiados. Para comprobar si la falta de acción de este
compuesto se debe a una rápida metabolización, se
comparó su actividad con la de la T3 en ensayos de
transactivación del gen indicador cloranfenicol
acetiltransferasa en células Cos7 que expresan de forma
transitoria, mediante transfección, TRα o TRα. Los
resultados indican que Kb430 carece de actividad.
TRODUCCIÓN
Las hormonas tiroideas (HT) triyodotironina (T3) y tiroxina
(T4) regulan el desarrollo y multitud de procesos
fisiológicos en la mayoría de los tejidos del organismo, y
especialmente en el sistema nervioso central (SNC). Las
HT ejercen sus funciones mediante la interacción de la
hormona activa, T3, con receptores nucleares (TR), que
son factores de transcripción regulados por ligando1-3. Los
receptores se unen a secuencias específicas
denominadas elementos de respuesta a HT (TRE),
situadas en regiones reguladoras de los genes diana,
principalmente en forma de heterodímeros con el receptor
de ácido 9-cis-retinoico (RXR). En ausencia de hormona,
el aporreceptor unido al ADN interacciona con un conjunto
de correpresores inhibiendo la transcripción de genes
diana. La unión del ligando (T3) produce un cambio
conformacional que permite que los correpresores sean
desplazados por coactivadores, con lo que se activa la
transcripción. Existen varias isoformas de TR que resultan
del procesamiento alternativo de dos genes TRα y TRβ.
La importancia de las HT en el desarrollo del SNC es bien
conocida, y aunque aún no se conoce con precisión los
fundamentos moleculares y celulares de sus acciones,
tienen efectos importantes en la migración y la
diferenciación de las células neurales, la génesis sináptica
y la mielinización4-7. El hipotiroidismo altera la
diferenciación de células piramidales, células de Purkinje,
precursores de las interneuronas gabaérgicas,
oligodendrocitos y astroglía. Como en el resto de los
tejidos, las acciones de las hormonas tiroideas en el SNC
se deben a la interacción de la T3 con los receptores
nucleares y la regulación de la expresión de genes
específicos8.
En este trabajo hemos analizado el efecto del
hipotiroidismo y de la administración de T3 en la expresión
de genes del cerebro y el cerebelo, en relación con otros
parámetros de acción de la T3 en el hígado y el corazón.
En paralelo, hemos analizado el posible efecto de un
análogo de la T3 que interacciona de forma específica con
la isoforma TRα.
DISCUSIÓN
En este trabajo mostramos los efectos del hipotiroidismo y
del tratamiento con hormona tiroidea en la expresión
génica de cerebro y cerebelo. El hipotiroidismo de
comienzo prenatal y prolongado durante las primeras 2
semanas de vida posnatal dio lugar a una disminución de
la expresión de Ngrn y Rasd2 en el núcleo estriado y
de Hr, Ntf3, Syt12 y Nr1d1 en el cerebelo. En el mismo
grupo de animales hemos evaluado el efecto del
hipotiroidismo y de la administración de T3 en otros
tejidos, como la concentración de colesterol en suero,
resultado de acciones de T3 en el hígado17, expresión de
D1 en ese tejido y de Serca2 en el corazón. En conjunto,
en este trabajo hemos descrito protocolos útiles para la
evaluación del estado tiroideo de ratas durante el periodo
neonatal. La mayoría de estos parámetros también
pueden ser aplicables al animal adulto, aunque en el caso
de los genes de respuesta a T3 en el cerebro y el
cerebelo, sólo RC3 se ha demostrado sensible a las
hormonas tiroideas después del primer mes de vida18.
En relación con el efecto de T3 en la expresión génica en
cerebro y cerebelo, no son muchos los genes regulados
por esta hormona, y para este trabajo hemos elegido los
que mejor se prestan a un estudio mediante PCR. La
regulación génica por T3 en el cerebro con frecuencia
depende de la región, por lo que para la evaluación de sus
efectos no es adecuado partir de ARN de todo el cerebro,
y es necesario utilizar regiones aisladas. En este trabajo
hemos usado el núcleo estriado y el cerebelo, porque su
complejidad celular es menor que en otras estructuras.
Las células que expresan RC3 y Rasd2 en el estriado son
las espinosas gabaérgicas de mediano tamaño15, que
constituyen el 95% de la población celular de esta región.
En el cerebelo, la mayoría de las células son granulares,
las que expresan los genes que hemos seleccionado para
el estudio.
Que la administración de T3 dé lugar a cambios en la
expresión génica en el cerebro indica que esta hormona
es capaz de llegar a las células diana a través de la
barrera hematoencefálica o de los plexos coroideos, es
decir, la acción de la T3, como hormona activa, en el
cerebro no depende exclusivamente de su formación local
a partir de T4 y catalizada por la desyodasa 2, como
parece ser el caso durante el período fetal en ratas 19 y en
humanos20. Efectivamente, en modelos de hipotiroidismo
maternofetal, tras la administración de T4 a ratas
gestantes, se puede detectar T3 en el cerebro de los fetos.
Sin embargo, tras la administración de T3, se puede
detectar esta hormona en el suero y diversos tejidos
fetales, pero no en el cerebro, lo que indica que el cerebro
fetal depende de la actividad Dio2. Nuestros resultados
indican que esto no es aplicable al periodo posnatal. No se
conocen las bases celulares de dicha discriminación, y es
posible que estén implicados transportadores específicos
de T4 y T321.
Para un mejor conocimiento de la acción de T3, tiene un
gran interés definir las isoformas de receptor implicadas
específicamente en sus acciones. Para el estudio de las
funciones específicas de las isoformas de TR, se han
seguido dos estrategias: por un lado, se han generado
animales mutantes deficientes en alguna de las isoformas
o que expresaran formas mutadas22,23. El uso de estos
animales ha permitido conocer algunas de estas
funciones, como la implicación de TRα1 en el control de la
actividad del miocardio y el desarrollo intestinal y la
implicación de TRβ en la regulación de la secreción de
TSH, la audición y el metabolismo hepático. Otro abordaje
ha sido la generación de compuestos análogos de la
hormona tiroidea con especificidad selectiva por alguna de
estas isoformas24. El estudio de dichos compuestos es de
gran interés terapéutico, porque serían selectivos para
determinadas acciones de las hormonas tiroideas que
pueden resultar beneficiosas en afecciones distintas de las
tiroideas25. En estudios previos hemos usado uno de estos
compuestos, GC-1, que actúa selectivamente a través de
TRβ, para identificar acciones de T3 mediadas por TRα o
por TRβ en el sistema nervioso central10,26.
En este trabajo hemos tenido la oportunidad de evaluar un
compuesto que, in vitro, se une con mayor afinidad a TRα
que a TRβ, aunque su actividad in vivo no había sido
explorada. Los experimentos realizados muestran que el
tratamiento con Kb430 en animales hipotiroideos no
consigue recuperar la expresión de los genes estudiados
con ninguna de las dosis. Es razonable que este
compuesto no haya tenido efecto en las respuestas
hepáticas, pues éstas dependen fundamentalmente de
TRβ; en el cerebro, una explicación a su falta de actividad
podría ser que no atraviesa la barrera hematoencefálica.
Sin embargo, este compuesto no tuvo actividad en la
regulación de Serca2 en el corazón, que dependería de
TRα.
Una razón para la falta de actividad in vivo podría ser una
rápida metabolización que no permitiera la ocupación del
receptor el tiempo suficiente. Sin embargo, los estudios de
transactivación en células en cultivo indican que el
compuesto carece de actividad. En esos experimentos se
usaron células Cos-7 que no expresan TR, por lo cual se
puede hacer que expresen transitoria y específicamente la
isoforma de interés mediante transfección con plásmidos
de expresión. Así, es posible estudiar en condiciones de
equilibrio la respuesta del sistema a T3 o al análogo de
interés mediante el uso de genes indicadores controlados
por un TRE. Mientras que T3 tuvo un claro efecto en TRα
o TRβ, el análogo de T3 no tuvo efecto alguno, lo que
indica falta de actividad biológica.
TIROIDES
Efecto del Láser Infrarrojo sobre Células Tiroideas
RESUMEN: Diez ratas Sprague Dawley de 4 meses de
vida y peso aproximado de 250 g fueron divididas en dos
grupos de 5 animales cada uno, el grupo A se mantuvo
como control y los animales del grupo B recibieron
estimulaciones con láser infrarrojo en la tiroides con dosis
de 16 J/cm2 durante 15 días consecutivos. Posteriormente
las ratas fueron sacrificadas, se extrajeron las respectivas
tiroides siendo procesadas para microscopía óptica y se
obtuvieron placas histológicas y micrografías de tiroides
con aumentos finales de hasta 1000X, las cuales fueron
sometidas a estudios morfométricos para determinar en
100 células foliculares: número, áreas y perímetro tanto
celular como nuclear, además de disposición coloidal y
presencia de vasos sanguíneos. El análisis de los
resultados entre las 100 células foliculares pertenecientes
a tiroides normal y estimulada revela que existen
marcadas diferencias en todos los componentes
analizados los que se podría traducir en distintas
funcionalidades en el metabolismo de las respectivas
glándulas.
INTRODUCCIÓN
La tiroides es una glándula endocrina localizada en la
parte anterior y a ambos lados de la tráquea en la base del
cuello a nivel de las vertebras C5T1 y su tamaño es muy
variable ya que suele pesar entre 1520 g en el adulto.
Posee una capsula delgada de tejido conjuntivo denso
irregular y colagenoso donde los tabiques de la cápsula
subdividen a la glándula en lóbulos izquierdo y derecho,
que están conectados a través de una delgada lámina, el
istmo (Silverthom, 2007).
La glándula tiroides está estructurada por miles de
folículos tiroideos, pequeñas esferas que miden en el
hombre de 0,2 a 0,9 mm de diámetro, compuestos por un
grupo de células foliculares, unidad estructural y funcional
de la glándula que presentan un epitelio simple cúbico que
limita espacios esféricos centrales llenos de sustancia
gelatinosa: el coloide, región en la cual se almacenan las
hormonas T4 y T3 unidas a una glucoproteina:
tiroglobulina (Junqueira & Carneiro, 2000).
En el hombre a las 12 semanas de gestación la glándula
sintetiza y segrega hormonas tiroideas, bajo la
estimulación del hipotálamo a través de la hormona TRH,
la que a su vez estimula la liberación de TSH por parte de
la hipófisis del feto (Silbernagl & Despopoulos, 2008).
Las células foliculares tienen la capacidad de sintetizar,
almacenar y secretar dos hormonas importantes, la
tiroxina y la triyodotironina, denominadas habitualmente T4
y T3 respectivamente. Estas hormonas aumentan el ritmo
basal de utilización de oxigeno y el índice metabólico
basal, así como la tasa correspondiente de producción de
calor, para adaptarlas a las alteraciones de las
necesidades energéticas, del abastecimiento calórico y del
ambiente térmico, igualmente esta glándula presenta las
células C o parafoliculares encargadas de secretar
calcitonina, una hormona importante que ayuda a
disminuir las concentraciones sanguíneas de calcio
(Gartner et al., 2008).
Esta glándula suele experimentar dos tipos de trastornos
endocrinos o metabólicos denominados como tirotoxicosis:
el hipertiroidismo generado por exceso en la función de la
tiroides que conlleva a una hipersecreción de Tiroxina (T4)
libre o triyodotironina (T3) libre o de ambas y niveles
plasmáticos anormales y elevados de las citadas
hormonas (Reid & Wheeler, 2005). Contrariamente a esta
afección, encontramos el hipotiroidismo generado por un
marcado déficit en la síntesis y secreción de hormonas
tiroideas producto básicamente de una insuficiencia en el
consumo de yodo (Raza & Mahmood, 2013).
Las células de los folículos tiroideos se sustentan sobre
una lámina basal y muestran toda las características de
aquellas que simultaneamente sintetizan, secretan,
absorben y digieren proteínas, por tanto, en su citoplasma
encontramos abundante retículo endoplásmico rugoso
(RER) y una cantidad moderada de mitocondrias. El
núcleo generalmente es esférico y situado en el centro de
la célula. En el polo apical se observa una zona de Golgi
discreta y gránulos de secreción con las características del
coloide folicular, además de un número moderado de
microvellosidades. En esta región se encuentra también
lisosomas y algunas vacuolas de gran tamaño (Junqueira
& Carneiro).
Por otro lado las células parafoliculares o célula C, se
encuentran en forma individual o pueden formar racimos
pequeños de células en la periferia de los folículos
tiroideos, poseen una pequeña cantidad de RER,
mitocondrias alargadas y complejo de Golgi prominente.
En su citoplasma se encuentran numerosos gránulos que
contienen calcitonina. El núcleo es generalmente redondo.
Estas células entonces poseen las típicas características
ultraestructurales de secreción polipéptidica (Junqueira &
Carneiro).
Nosotros hemos estudiado y demostrado que las
inducciones con láser infrarrojo (LIR) sobre hepatocitos de
rata genera una significativa activación de la función
celular determinada por notables diferencias en los
volúmenes de constituyentes celulares tanto
citoplasmáticos: retículo endoplasmático rugoso,
mitocondrias, gránulos de glicógeno, como nucleares:
poros nucleares, tipos de cromatina y nucléolos.
Igualmente en las áreas nucleares y celulares (Cornejo et
al., 2012).
En base a lo aquí presentado, el objetivo fundamental del
presente trabajo está orientado a determinar las distintas
modificaciones que en este tipo celular sintetizador y
secretor de la glándula tiroides se generan cuando son
estimuladas con el emisiones del LIR
DISCUSIÓN
Los resultados obtenidos en el presente trabajo describen
con claridad que las estimulaciones con una dosis de láser
infrarrojo equivalente a 16 J/cm2 generan una seria de
modificaciones tanto en las células foliculares, en su
número como en la consistencia del coloides tiroideo y en
la disposición de capilares en la glándula.
Con respecto a nuestros hallazgos cuantificando
importantes incrementos de áreas y perímetros tanto
celulares como nucleares y en el número de células
foliculares pertenecientes a tiroides irradiadas comparadas
con las normales, estos resultados son coincidentes con
los logrados por Parrado et al. (1999) los cuales cuando
estimulan tiroides con dosis de LIR de 46.8 J/cm2
visualizan aumento del volumen folicular y por ende del
coloides representado un incremento en la síntesis y
secreción hormonal. Situación semejante describe
Rajkovic et al. (2003) los que reportan que al someter
ratas a campos electromagnéticos se visualizan
significativos aumentos en la densidad de volumen de
folículos y coloide tiroideos. De igual manera, Hartoft-
Nielsen et al., (2005) plantean que existe equilibrio entre
cantidad de coloide y estructuración folicular.
Un nuevo ejemplo de efectos generados por inducciones
de laser infrarrojo sobre tiroides es el trabajo de Azevedo
et al. (2005) quienes describen incrementos en la síntesis
y secreción hormonales de T3 y T4 al estimular tiroides de
ratones con dosis de 4 J/cm2 . Sin embargo, Al-Mustawfi
et al. (2010) al estimular tiroides pertenecientes a conejos
hembras con dosis infrarrojas de 4 J/cm2 describen una
baja considerable en la síntesis y secreción de T3 y T4
describiendo señales de hipotiroidismo.
En lo relativo a la presencia de capilares de diámetro
dilatado descrito en tiroides estimuladas, nuestros
resultados son coincidentes con los emitidos por Parrado
et al. (1990) quienes estimulando la glándula con dosis de
46,8 J/cm2 visualizan un considerable aumento en el área
luminal del endotelio, un aumento en la densidad de
volumen de los capilares y una considerable reducción del
espesor de vasos. En directa relación con estas
observaciones, Vidal et al. (2002) irradiando tiroides de
ratas con dosis de 46,8 J/cm2 describen que como
resultados de dichas estimulaciones se genera crecimiento
y maduración de las células endoteliales, variaciones en
su espesor y reducción del lumen de dichos capilares.
Desde el punto de vista ultraestructural Vidal et al. (2000)
describen variaciones en las células foliculares producto
de las estimulaciones infrarrojas con dosis de 46,8 J/cm2
precisando cambios en los organelos relacionados a
síntesis y secreción hormonal destacando particularmente
en un aumento de gotas de coloides y lisosomas,
dilatación de las cisternas de retículo endoplasmático
rugoso y reducción del complejo de Golgi.
Dependiendo del grado de estimulación de la glándula
tiroides por acción de la hormona adeno-
hipofisiariatiroestimulante (TSH), las células foliculares
varían su altura de cúbicas bajas a cilíndricas. Cuando no
existe estimulación por TSH las células se aplanan y el
coloide se va acumulando aumentando el díámetro
folicular.
En tiroides con patologías como el caso de hipertiroidismo
(Bocio o enfermedad de Graves) aumenta la utilización del
coloides, las células se hacen cilíndricas y disminuye la
cantidad de coloide y el lumen de los folículos se hace
irregular. En el caso de la estimulación con láser también
aumenta la altura de las células lo que estaría indicando
una estimulación de la glándula. Por otro lado
encontramos que las células foliculares se hacen
irregulares en el borde apical que contacta con el coloide
lo que aumenta la superficie de contacto facilitando la
absorción de las hormonas tiroídeas. Los folículos
presentan contornos irregulares (Rubin et al., 2005)
Esta situación así planteada aparece claramente
representada en el caso de la estimulación con láser
puesto que se observa también aumento de altura de las
células foliculares lo que estaría indicando una
estimulación de la glándula. Por otro lado también
encontramos que las células foliculares se hacen
irregulares en el borde apical que contacta con el coloide
lo que aumenta la superficie de contacto facilitando la
absorción de las hormonas tiroideas y de igual manera los
foliculos también presentan contornos irregulares.
GLANDULAS SUPRARRENALES
La melatonina reduce la respuesta de cortisol al ACTH en
humanos
La neurohormona melatonina es un transductor
neuroendocrino del ciclo luz-oscuridad. Su secreción
aumenta con el inicio de la oscuridad, alcanzando su
máximo en la mitad de la noche y cayendo abruptamente
al amanecer, indicando tanto el comienzo y la duración de
la noche como las estaciones del año1. Así el ritmo diario
de melatonina es una señal cronobiótica, es decir, permite
al individuo ajustar sus funciones fisioló- gicas al ciclo luz-
oscuridad imperante2. La identificación de receptores de
melatonina en una variedad de tejidos en humanos y en
animales ha estimulado la búsqueda de otras funciones
fisiológicas de la melatonina3. Recientemente ha
despertado interés su posible acción sobre la
esteroidogénesis. La melatonina actúa a través de 2
receptores de membrana llamados MT1 y MT2. En
humanos, ambos receptores de melatonina están
presentes en tejidos esteroidogé- nicos como la placenta y
células de la granulosa4,5. Adicionalmente, estudios
realizados en animales demuestran la presencia solo del
receptor MT1 en las células de Leydig de la rata y hamster
y en la glándula suprarrenal de rata adulta y de fetos y
adultos de primates no humanos6-10. En esta última
glándula, la melatonina inhibe la expresión de genes
circadianos11 y también la producción de cortisol
estimulada por ACTH9,10. En humanos, los ritmos
circadianos de melatonina y de cortisol en plasma tienen
fases opuestas, es decir el alza nocturna de melatonina
coincide con los valores bajos del ritmo de cortisol y
viceversa12. Por otra parte, la supresión aguda de
melatonina producida por una breve exposición a luz
brillante al final de la noche se asocia con un alza brusca
del cortisol plasmático y salival13,14. Sin embargo,
estudios realizados en mujeres y hombres, tratados con
distintas dosis de melatonina, a distintas horas del día, en
una o varias ocasiones, o estudiando el efecto de la
administración de melatonina sobre la producción de
cortisol estimulada por ACTH, tanto exógena como
endógena, no han mostrado efectos claros sobre la
concentración plasmática de cortisol15-19. Dada la
compleja regulación de la corteza suprarrenal, es posible
que en estos estudios un potencial efecto inhibidor de
melatonina sobre la producción de cortisol haya sido
enmascarado por los mecanismos de feedback entre
cortisol y ACTH20. El presente estudio fue diseñado para
investigar la hipótesis de que la melatonina modula la
respuesta de cortisol a ACTH en humanos. Para ello
investigamos: 1) Si la glándula suprarrenal humana
expresa receptores de melatonina; y 2) Si una dosis única
de melatonina [6 mg, dentro de los márgenes usados
como agente cronobiótico2], tiene un efecto inhibitorio
agudo sobre la producción de cortisol estimulada por
ACTH en sujetos suprimidos con dexametasona para
evitar la interferencia del eje hipotálamo-hipófisis.
DISCUSIÓN Nuestro estudio demuestra la presencia del
receptor MT1 de melatonina en la glándula suprarrenal
humana y un efecto agudo de la melatonina disminuyendo
la producción de cortisol estimulada por ACTH en
voluntarios pretratados con dexametasona. Hasta ahora
no había sido investigada la presencia de receptores de
melatonina en la glándula suprarrenal humana. En este
estudio, encontramos por primera vez la expresión del
mARN del receptor MT1 en las 3 muestras analizadas de
tejido suprarrenal normal y en una de adenoma
suprarrenal. La expresión del mARN del receptor MT2 no
se detectó en ninguna de las muestras de tejido
suprarrenal, usando las mismas concentraciones de cADN
usadas para analizar el receptor MT1. En cambio
detectamos la expresión de mARN para el receptor MT1 y
MT2 en el tejido humano renal como ha sido previamente
publicado21 y fue usado como control positivo. Estos
resultados son similares a los observados por nosotros en
la corteza suprarrenal de la rata y del mono capuchino8-
10. En este estudio, las concentraciones de melatonina
alcanzadas en el plasma fueron más altas que las
descritas por Fischer30 dando una dosis similar, lo que
podría deberse a diferencias en las condiciones
experimentales, ya que nosotros administramos la
melatonina a las 08:30 h después de un ayuno de 12 h y
Fischer dio la melatonina (5 mg) a las 22:00 h sin
especificar la hora de la última comida. En las condiciones
en que se realizó este estudio, el tratamiento con
melatonina mostró un efecto agudo in vivo reduciendo la
producción de cortisol en respuesta al ACTH. Este efecto
fue ejercido sin afectar las concentraciones basales de
cortisol, suprimidas por la administración de
dexametasona la medianoche anterior. La disminución de
la respuesta del cortisol fue detectada a los 45 y 60 min
después de la inyección de ACTH, fue de magnitud
variable y se observó en 7 de los 8 sujetos seleccionados.
La melatonina no mostró efectos significativos en la
respuesta a ACTH sobre los otros esteroides
suprarrenales medidos: progesterona y aldosterona como
tampoco sobre cortisona. Las concentraciones
plasmáticas de estos esteroides al igual que las de cortisol
disminuyeron con el tratamiento con dexametasona
comparado con los valores obtenidos en las muestras
preestudio o con valores normales basales obtenidos en
estudios previos31. Como era esperable, dexametasona y
ACTH no indujeron cambios significativos en las
concentraciones de testosterona32. La concentración de
testosterona tampoco fue afectada por melatonina,
apoyando una acción específica de la melatonina sobre la
respuesta del cortisol al ACTH. La disminución de la
respuesta de cortisol a ACTH inducida por melatonina no
fue debida a un aumento del metabolismo a cortisona, ya
que la concentración de cortisona aumentó a valores
similares en los sujetos tratados con placebo o con
melatonina. Por otra parte, las concentraciones de
progesterona, medidas para identificar indirectamente un
posible efecto inhibitorio de melatonina sobre la enzima
3ß-hidroxiesteroide dehidrogenasa, aumentaron en
respuesta a ACTH, sin demostrarse diferencias entre el
grupo placebo y el tratado con melatonina. En cambio,
nuestros estudios previos realizados in vitro en corteza
suprarrenal de mono capuchino muestran que melatonina
inhibe la expresión de la enzima 3ß-hidroxiesteroide
dehidrogenasa estimulada por ACTH9,26. La diferencia
con el presente estudio puede ser atribuida a la duración
de los protocolos ya que in vitro la exposición a ACTH y a
melatonina fue de 48 h. La respuesta de la aldosterona al
ACTH fue similar entre el grupo placebo y el tratado con
melatonina, lo que sugiere que el efecto inhibitorio de
melatonina se ejerce específicamente en la línea
glucocorticoidea de la esteroidogénesis. Varios
investigadores han estudiado el efecto de melatonina
sobre la respuesta de cortisol inducida por ACTH tanto
endógena o como exógena. Perras y cols19 no detectaron
efectos de melatonina sobre la respuesta de cortisol a la
hipoglicemia por insulina al comienzo de la noche. Una
situación similar se observó cuando se estimuló con ACTH
exógena17-18. Considerando la complejidad de la
regulación de la corteza de la glándula suprarrenal in
vivo20 es posible que la presencia de un eje hipotálamo-
hipófisis-suprarrenal funcional haya enmascarado los
efectos de la melatonina sobre el cortisol plasmático en
estos experimentos, lo que explicaría las diferencias con
nuestro protocolo, en el que se frenó dicho eje con
dexametasona. Un segundo efecto agudo de la melatonina
observado en el presente trabajo fue la prevención de la
disminución fisiológica de la prolactina observada en el
grupo placebo entre las 08:00- 10:30 h, sin alcanzar
valores de hiperprolactinemia. Una disminución circadiana
de la prolactina a estas horas, similar a la observada en el
grupo placebo de nuestro estudio, ha sido descrita en
voluntarios no tratados con dexametasona33,34. Estos
resultados concuerdan con los de otros
investigadores15,17,19 y podrían atribuirse a las acciones
inhibitorias de la melatonina sobre la liberación de
dopamina hipotalámica, como ha sido descrita en la
rata35. En resumen, este estudio muestra por primera vez
la expresión del receptor MT1 de melatonina en la
glándula suprarrenal humana y muestra que la ingestión
de melatonina disminuye en forma aguda la producción de
cortisol estimulada por ACTH en sujetos suprimidos con
dexametasona. Aunque el diseño experimental del
presente estudio no permite establecer si la reducción de
la respuesta de cortisol a ACTH in vivo fue debida a
acciones directas sobre la glándula suprarrenal como
hemos demostrado anteriormente en otras especies9,10,
el hecho que esta glándula exprese el receptor MT1 de
melatonina abre esta posibilidad
TEGUMENTO
Resumen Con el tiempo las personas presentan
envejecimiento celular disminuyendo la síntesis de
moléculas tales como el ácido hialurónico, factor del
mantenimiento cutáneo, y el factor de crecimiento
epidérmico, fundamental para la regeneración epidérmica
al tener capacidad mitogénica sobre varias células
epiteliales y fibroblastos. Este envejecimiento provoca
pérdida de elasticidad y firmeza en la piel y aparición de
arrugas. Por esto, se desarrolló un complejo de ultra-
regeneración facial cuyos principios activos son el ácido
hialurónico y el factor de crecimiento epidérmico. Este
estudio pretende demostrar la eficacia del producto en
mujeres con signos de envejecimiento facial. Se analizó
una muestra aleatoria de 18 voluntarias dividida en 2
grupos (A y B). Al grupo A se le aplicó el producto con un
dispositivo y al grupo B se le aplicó manualmente.
Inicialmente las voluntarias fueron reunidas para
entregarles el producto, darles indicaciones y tomar datos
basales. El producto se aplicó a los 7 (primera sesión) y a
los 21 días (segunda sesión) siguientes. En la segunda
sesión y a los 15 días después de la segunda sesión (35
días) se volvieron a tomar datos de la piel para observar
efectos producidos a través del tiempo. El estudio
demuestra que el producto atenúa las arrugas reduciendo
su volumen, longitud, área y profundidad. Se encontró que
los beneficios se mantienen tras dos sesiones de
tratamiento. La aplicación con el dispositivo, produjo
efectos más rápido y fue el único que tuvo efectos sobre la
profundidad de las arrugas. Los testimonios de las
participantes fueron satisfactorios. Se puede concluir que
el producto desarrollado es efectivo para la eliminación de
arrugas, para devolver la elasticidad y la firmeza de la piel,
sus efectos son inocuos para la piel sana, se mantienen y
mejoran a través del tiempo.
CONCLUSIONES El presente estudio demuestra que la
fórmula del producto EGF y AH como principios activos, es
efectiva para el tratamien- to de los signos de la edad. El
efecto se ha demostrado por dos métodos: la aplicación
manual o utilizando la técnica de introducción
transdérmica digital a nivel dérmico (DTI System Solution).
En ambos casos se logró una acción rejuvenecedora
sobre el volumen, área y longitud de las arrugas tras dos
aplicaciones del producto, pero el efecto se obtuvo antes
mediante la aplicación con el sistema DTI. En cuanto a la
intensidad de los efectos con uno u otro mé- todo, no se
detectaron diferencias entre ambos métodos a los 35 días.
La principal diferencia entre ambos métodos radicó en la
rapidez de la aparición de los efectos y en que sólo
mediante la aplicación con el sistema DTI se observó
acción sobre la profun- didad de las arrugas. Además de
observar que el producto fue efectivo para el tratamiento
de los signos del envejecimiento, también se com- probó
que es un producto seguro ya que ninguna de las volunta-
rias presentó efectos adversos durante su aplicación.
Mediante una encuesta subjetiva, se concluyó que las vo-
luntarias quedaron satisfechas con los resultados ya que
todas consideraron que el producto cubría las necesidades
de su piel para el tratamiento del envejecimiento.
Asimismo todas obser- varon arrugas y líneas de
expresión atenuadas en sus rostros
RESPIRATORIO
La célula de Clara: La biología celular y molecular con
implicaciones fisiopatológicas.
RESUMEN. Las células de Clara son una de las
principales poblaciones celulares que habitan los
bronquíolos, donde juegan un papel fundamental como
células progenitoras en caso de lesión del parénquima de
esta porción del árbol bronquial. Su principal función es la
producción de la proteína secretoria de la célula de Clara
(CCSP), un polipéptido con función principalmente
antiinflamatoria e inmunosupresora. Su utilidad en el
diagnóstico de múltiples enfermedades que afectan al
aparato respiratorio (como varias neumoconiosis, fibrosis
pulmonar idiopática, asma y sarcoidosis, entre otras) ha
sido estudiada desde hace años, aunque no se ha llegado
a un consenso universal en torno a su aplicación clínica. El
presente artículo constituye una aproximación general al
conocimiento morfofisiológico de este tipo celular y a las
implicaciones fisiopatológicas de la CCSP en algunas de
las enfermedades del aparato respiratorio.
La célula de Clara: ubicación topográfica y características
citomorfológicas Las células de Clara se encuentran
ubicadas principalmente en el epitelio que tapiza los
bronquíolos terminales y los bronquíolos respiratorios. En
estos conductos las células de Clara aumentan en
cantidad progresiva a medida que se avanza en sentido
distal, representando el 11 ± 3% del total de células
epiteliales en los bronquíolos terminales y el 22 ± 5% en
los bronquíolos respiratorios. Su presencia también ha
sido reportada en los bronquíolos, donde representan solo
el 0.4 ± 1% del total de células epiteliales.4-6
Morfológicamente las células de Clara tienen forma
cilíndrica o cuboide (en las vías aéreas más distales), se
caracterizan por presentar una superficie apical con forma
de domo (similar a una lengua) prominente hacia la luz, en
la cual hay presencia de microvellosidades y típica
ausencia de cilias. En el citoplasma se aprecia un núcleo
ovalado de ubicación basal, elongado en la dirección del
eje longitudinal celular que representa alrededor de 1/3 del
volumen celular total (figuras 1 y 2). Empleando
microscopía electrónica de transmisión (figura 3) se
aprecia un retículo endoplásmico rugoso de ubicación
basal bien desarrollado, un retículo endoplásmico liso
poco abundante, un aparato de Golgi prominente de
ubicación lateral o supranuclear y gránulos de secreción
electrondensos de contenido homogéneo ubicados en el
citoplasma apical que miden unos 500-600 nm de
diámetro y que se encuentran en número aproximado de
unos 20 por cada célula; ello refleja su función como célula
secretora en esta porción del árbol bronquial. Dicho
proceso de síntesis y secreción requiere un empleo de
adenosín trifosfato (ATP) y cofactores reducidos como
NADH y FADH2 , que se producen principalmente en la
mitocondria, por lo cual estas células cuentan con una
abundante cantidad de este organelo que se ubica en el
citoplasma basal o paranuclear. En la membrana
basolateral se puede destacar la presencia de uniones
ocluyentes muy cerca al borde apical de la célula, la
presencia de cortas prolongaciones citoplásmicas laterales
y la práctica ausencia de invaginaciones en la superficie
basal de la membrana celular.4,5,7-10 En la microscopia
electrónica de barrido se puede apreciar con más detalle
los aspectos morfológicos de la superficie luminal de la
célula
Otras proteínas secretadas por la célula de Clara Además
de la CCSP, la célula de Clara tiene otros productos de
secreción de naturaleza proteica que secreta en menores
proporciones que la primera, entre las que se cuentan: •
Proteína de 55 kDa de la célula de Clara: Una proteína
identificada en el líquido del lavado broncoalveolar en
ratas. Su función permanece desconocida • Inhibidor de la
proteasa leucocitaria: Proteína de 11.7 kDa capaz de
inhibir las enzimas elastasa y catepsina G presentes en
los gránulos primarios o azurófilos (lisosomas) de los
neutrófilos. • Proteína (lectina) fijadora de β-galactosidasa:
Una proteína identificada en el líquido del lavado
broncoalveolar en ratas.19 • Fosfolipasa A secretoria:
Enzima rica en disulfuros, de 14 kD de peso molecular que
hidroliza el enlace éster entre el glicerol y el grupo acilo en
posición 2 de los fosfolípidos de las membranas
bacterianas. La fosfolipasa A2 es especialmente eficiente
contra bacterias grampositivas. Probablemente, sea
también importante en el catabolismo del surfactante
pulmonar.19,87 • Triptasa de la célula de Clara: Proteasa
de peso molecular de 30 kDa con actividad enzimática
parecida a la de la tripsina. • Proteína del surfactante
pulmonar A (SP-A): Glicoproteína hidrofílica con peso
molecular de unos 650 kD, producida principalmente por
los neumocitos tipo II, crítica en la defensa del huésped
contra microorganismos invasores como el virus de la
influenza, herpes simple, virus sincitial respiratorio;
bacterias como Staphylococcus aureus, Streptococcus
pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa y Mycoplasma
pneumoniae; hongos como Histoplasma capsulatum y
Aspergillus fumigatus, a los que se une como opsonina e
incrementa su fagocitosis por parte de los macrófagos
alveolares, lo que asegura su eliminación del espacio
alveolar. • Proteína del surfactante pulmonar B (SP-B):
Proteína homodimérica altamente hidrofóbica, que consta
de 2 polipéptidos de 79 aminoácidos, con peso molecular
de unos 17.4 kD que hace parte esencial del surfactante
pulmonar. Es producida principalmente por los neumocitos
tipo II. • Proteína del surfactante pulmonar D (SP-D):
Lectina dependiente de calcio, producida también por los
neumocitos tipo II, que al igual que la SP-A juega un papel
importante como opsonina en la defensa inmunológica del
aparato respiratorio a nivel de los alvéolos
pulmonares.19,88 De este apartado se puede destacar
que la célula de Clara, como es popularmente conocido,
también ayuda a secretar el surfactante pulmonar,
específicamente sintetizando y secretando las proteínas
SP-A, SP-B y SP-D.
Digestivo I CAVIDAD ORAL
Cicatrización y regeneración periodontal
INTRODUCCIÓN El tratamiento de regeneración
periodontal engloba aquellos métodos destinados a
posibilitar una neoformación previsible de los tejidos de
soporte dentario (es decir, del cemento radicular, el
ligamento periodontal y el hueso alveolar) (figs. 1 y 2)1 .
Por regla general, el tratamiento periodontal convencional,
tanto quirúrgico como no quirúrgico, da lugar a una
reducción de la profundidad de sondaje y a un aumento de
la inserción clínica; sin embargo, a nivel histológico, la
cicatrización suele caracterizarse por la formación de un
epitelio de unión largo, sin que se produzca una
neoformación previsible del cemento radicular,
desmodonto o hueso alveolar1 . En las últimas décadas se
ha desarrollado un gran número de técnicas quirúrgicas y
materiales regenerativos, como por ejemplo, el
acondicionamiento de la superficie radicular, la
implantación de diferentes materiales de sustitución ósea,
la regeneración tisular guiada (RTG), las proteínas de la
matriz del esmalte, así como diferentes factores de
crecimiento, para su aplicación en el tratamiento
regenerativo periodontal1-3. No obstante, desde el punto
de vista clínico, muchos de los métodos y los materiales
disponibles para la regeneración no ofrecen los resultados
deseados. Este éxito clínico relativamente limitado puede
deberse, en parte, a la falta de un conocimiento integral
sobre los procesos biológicos más importantes en la
cicatrización de las heridas periodontales. El objetivo de
este trabajo de revisión es resumir los pasos biológicos
más significativos de la cicatrización periodontal y mostrar
cómo influyen en los resultados clínicos. NUEVA
INSERCIÓN FRENTE A UN EPITELIO DE UNIÓN LARGO
En la fase decisiva de la neoformación de tejido
periodontal a lo largo de la superficie radicular
instrumentada, se produce una verdadera competición
entre el ligamento periodontal y el tejido gingival. El
resultado de esta competición determinará si se produce
una nueva inserción de tejido conectivo sobre la superficie
radicular y en qué medida lo hará y qué funcionalidad
tendrá. A nivel histológico, se observan tres formaciones:
Epitelio de unión largo. Inserción de tejido conectivo sin
neoformación de cemento. Inserción funcional de tejido
conectivo con neoformación de cemento. De hecho, en un
mismo defecto pueden observarse histológicamente las
tres formas. La formación previsible del cemento radicular
sigue siendo el eslabón más débil en todo el proceso de
cicatrización y regeneración. Tal como ya se ha
mencionado, la falta de estabilidad de la herida favorece la
formación de epitelio de unión largo, lo que generalmente
se denomina como reparación periodontal. De forma
alternativa, el tejido conectivo periodontal de la encía
puede reconocer la superficie radicular trabajada como un
cuerpo extraño inerte. Este proceso es comparable a la
encapsulación del tejido conectivo de un cuerpo extraño,
en donde las fibras colágenas se orientan
mayoritariamente de forma horizontal a la superficie
radicular. Este tipo de cicatrización también se denomina
“adhesión colágena”
CONCLUSIONES Las evidencias biológicas existentes
muestran claramente el papel tan importante que
desempeñan las células del ligamento periodontal residual
en la regeneración periodontal. Otros factores que también
tienen una importancia primordial en la regeneración de
las estructuras periodontales son la estabilidad de la
herida, la creación y mantenimiento del espacio y el cierre
primario. La regeneración periodontal solo puede
demostrarse histológicamente y no a través de métodos
clínicos o radiológicos. Es absolutamente necesario que el
clínico conozca las bases biológicas más importantes para
poder elegir los materiales regenerativos correctos y las
técnicas quirúrgicas idó- neas, y así optimizar los
resultados de los tratamientos regenerativos
Digestivo II
Leptina, acercamiento hacia una hormona
RESUMEN INTRODUCCIÓN: la leptina tiene un
importante papel en la patogenia de la obesidad, al
informar al hipotálamo del contenido de grasa corporal y
regular la ingesta alimentaria, no obstante, esta hormona
constituye un elemental mediador de varias funciones
fisiológicas en nuestro organismo. MÉTODOS: se realizó
una revisión bibliográfica que incluyó un total de 32
documentos de la especialidad de Endocrinología, a fin de
describir el mecanismo fisiológico de la leptina y su
relación con diversos trastornos neuroendocrinos.
RESULTADOS: las concentraciones de leptina son
inferiores en el sexo masculino, lo que está en relación
con el incremento de testosterona, que ejerce un efecto
inhibitorio en su producción. Entre otros de sus efectos
fisiológicos, interviene también en la regulación del inicio
de la pubertad y participa en la respuesta inflamatoria.
CONCLUSIONES: actualmente las posibilidades de
tratamiento de la obesidad y otros trastornos de fertilidad
con el uso de leptina recombinante están abiertas.
Significado fisiológico La leptina, secretada por las células
adiposas, de acuerdo con las investigaciones más
recientes, actúa como una señal nutricional que se dirige
al SNC y se encarga de modular los mecanismos
neuroendocrinos que median entre las diversas
respuestas adaptativas y de comportamiento.13,14 El
receptor de la leptina es una proteína de membrana de
unos 1 200 aminoácidos con distintas isoformas. La
estructura de estos receptores es parecida a la de los
receptores de citoquinas (por ejemplo, receptor de la
hormona de crecimiento).15-17 Las funciones de los
receptores, en su forma larga, consisten en mediar las
acciones de la leptina a nivel del SNC, mientras que los
isoformas cortas se han relacionado con el transporte y
aclaramiento de la leptina con la regulación del sistema
inmune. Las restantes isoformas expresan el dominio
transmembrana, principalmente en los núcleos
hipotalámicos, donde la leptina parece ejercer sus
acciones más rápidas y potentes.18,19 La leptina también
modifica el metabolismo del glucídico. En ratones obesos
el tratamiento con leptina disminuye los niveles de glucosa
sin modificar los deinsulina y mejora la sensibilidad a esta,
es decir, aumenta la captación de glucosa por los tejidos.
Esta acción podrá ser beneficiosa en pacientes diabéticos
no insulinodependientes (NIDDM).20 Otras acciones de la
leptina Varios autores han sugerido que la ingesta
calórica, la composición corporal, o la reserva de tejido
adiposo, de algún modo, ejercen control en la secreción
hipotalámica de la hormona liberadora de gonadotropinas
(GnRH), y pueden constituir un factor permisivo en el inicio
de la pubertad y su completo desarrollo, tanto en roedores
como en seres humanos.21-23 García-Mayor y otros
demostraron en un estudio realizado con 789 niños
normales de ambos sexos de entre 5 y 15 años, que los
niveles circulantes de leptina se incrementan en unos y en
otros antes de que se eleven otras hormonas relacionadas
con el comienzo de la pubertad, acorde con el aumento
del IMC. Dicho incremento es similar en ambos sexos
hasta aproximadamente los 10 años de edad, en que los
niveles de leptina disminuyen en el varón a medida que se
elevan las concentraciones de testosterona. Resultados
similares reportan otros investigadores, al plantear que los
niveles séricos de leptina se incrementan en niñas y
disminuyen en varones después de alcanzar el estadio de
adolescente.24,25 En mujeres con anorexia nerviosa,
enfermedad psiquiátrica caracterizada por una disminución
de la ingesta calórica, bajo peso y grasa corporal reducida,
y con frecuencia, infertilidad y amenorrea, los niveles de
leptina son significativamente menores si se comparan con
mujeres con peso corporal normal y similar edad.26 La
leptina participa en la respuesta inflamatoria a la vez que
modifica la función inmune. En concreto, estimula la
proliferación de las células T CD4+ (hematopoyesis y
linfopoyesis) y la producción de citoquinas. Recientes
trabajos señalan, por otro lado, que la leptina actúa sobre
células endoteliales, estimulando la angiogénesis y su
posible participación en la regulación de la presión
arterial.27,28 También se ha demostrado que esta
hormona ejerce control en la secreción hipotalámica de
GnRH, y puede constituir un factor permisivo en el inicio y
mantenimiento del desarrollo puberal, y que en las
deficiencias posteriores, como ocurre en sujetos con
depósitos grasos escasos, trae como consecuencia
trastornos de la función reproductiva. Las concentraciones
de leptina son inferiores en el sexo masculino, lo que está
en relación con el incremento de testosterona, la cual
ejerce un efecto inhibitorio en su producción. Se ha
encontrado, además, que existe un pico agudo de leptina
que precede el principio de la pubertad en niños
DIGESTIVO III
EL RESVERATROL PROTEGE CONTRA LA
RESPUESTA INFLAMATORIA EN PÁNCREAS
SECUNDARIA AL ENVEJECIMIENTO
RESUMEN La respuesta inflamatoria secundaria al
envejecimiento está relacionada con la resistencia a la
insulina. Se sabe que las células endocrinas de los islotes
del páncreas pueden ser fuente de mediadores
inflamatorios en condiciones patológicas. Por ello hemos
investigado el efecto del envejecimiento sobre los
marcadores de inflamación en el páncreas de dos modelos
de ratones: SAMP8 y SAMR1, y la influencia del
Resveratrol (5mg/kg/día). El envejecimiento aumentó la
expresión de citoquinas pro-inflamatorias TNF-α, IL-1β y
IL-6 y del factor de transcripción NF-κB p52 en tanto que la
interleuquina IL-10 anti-inflamatoria mostró una
disminución. La administración de resveratrol significó una
menor expresión de TNF-α y IL-1 β, así como de NF-κB
p52 en los ratones viejos. No hubo diferencias
significativas en la expresión de IL-1β y IL-10. Estos
resultados plantean la asociación entre el envejecimiento y
la expresión de células pancreáticas de mediadores
inflamatorios y su mejoría tras administración de
resveratrol.
DISCUSION El envejecimiento está asociado con un
aumento crónico de los niveles de marcadores
inflamatorios circulantes. En concreto, TNFα y IL6 no solo
han sido descritos como marcadores inflamatorios, sino
también como causas de morbilidad y mortalidad en la
senescencia (Duby et al. 2004). Las citoquinas
proinflamatorias que producen las células beta del
páncreas como IL-1β, IL-6 y TNFα y el NF-κB están
implicados en la patogenia y progresión de la insuficiencia
de las células beta del páncreas. En este trabajo se ha
observado un aumento en la expresión proteica de IL-1β y
TNFα, y una disminución en IL-10. IL-1β y TNFα pueden
activar al NF-κB que a su vez induce la expresión de
dichas citoquinas, formando así un bucle de
retroalimentación positiva de amplificación llevando a
veces a la célula beta a la disfunción y muerte celular
(Bonizzi and Karin, 2004). Normalmente los complejos NF-
κB se encuentran en el citoplasma unidos a las proteínas
inhibidoras IkB (IkBα, IkBβ, IkBγ, IkB , and Bcl3). La
estimulación externa o interna fosforila IkB y entonces son
ubiquitinadas y degradadas por los proteosomas.
Secuencialmente, el complejo NF-κB es traslocado al
núcleo donde activa la transcripción de determinados
genes, especialmente los inflamatorios. De acuerdo con
estudios previos de nuestro grupo (Cuesta et al., 2011;
Forman et al. 2010) en este trabajo, hemos observado un
aumento de la expresión proteica de NF-κB p52 en
SAMP8 viejos. No se observaron diferencias en la
expresión de NF-κB p65. Como ya se ha comentado,
Numerosos estímulos extracelulares pueden activar NF-κB
mediante mecanismos de señalización intracelulares que
activan un complejo IKK que fosforila IKBα lo que conlleva
su ubiquitinación y degradación en el proteosoma. NF-κB
es entonces traslocado al núcleo donde activa la expresión
de genes que participan en mecanismos inflamatorios
(Grilli y Memo, 1999). De acuerdo con esto, en nuestro
estudio se observó un aumento de la expresión de la
proteína IKBα en SAMP8 viejos junto a una disminución de
IKBβ. En conclusión, estos resultados indican que el
envejecimiento está asociado con alteraciones
significantes en la expresión relativa de genes implicados
en la inflamación. La administración de resveratrol parece
proteger al páncreas frente al daño secundario al
envejecimiento
SISTEMAS URINARIO
Utilidad clínica de la reserva funcional renal
Resumen
La capacidad de los riñones para aumentar la tasa de
filtrado glomerular (TFG) en respuesta a ciertos estímulos
bajo condiciones fisiológicas o patológicas se denomina
reserva funcional renal (RFR).
La TFG varía de acuerdo a la dieta y otros factores,
incluso permanece normal a pesar de una disminución
importante del número de nefronas. Una vez que la TFG
es determinada, la RFR puede ser evaluada clínicamente
con carga oral de proteínas o infusión intravenosa de
aminoácidos.
La RFR se define como la diferencia entre el pico de TFG
alcanzado con «estrés» y la TFG basal. Gracias a los
mecanismos adaptativos, la RFR puede utilizarse parcial o
completamente para alcanzar una función renal normal o
por encima de lo normal en estados de hiperfiltración en
los que existe una TFG alta como en el embarazo,
hipertensión, nefropatía diabética, riñones únicos o
donantes renales.
La RFR podría ser más sensible y precoz que la TFG para
evaluar la pérdida y recuperación de la función renal. En
los casos en los que el riñón presenta recuperación
deficiente o fibrosis, la valoración clínica puede indicar
recuperación completa si se calcula con la TFG. Sin
embargo, la RFR podría estar reducida y representar un
signo de reparación deficiente o de masa funcional renal
disminuida. La reducción de la RFR puede representar el
equivalente de la fragilidad o susceptibilidad renal al daño
renal. El objetivo de este artículo de revisión sobre RFR es
dar a conocer los conceptos, utilidad clínica y perspectivas
de su uso.
GENITAL FEMENINO
La hormona antimülleriana como marcador de función
ovárica
Resumen
Por décadas, el significado clínico de la hormona
antimülleriana (HAM) ha estado limitado a su papel crítico
en el desarrollo sexual fetal. Sin embargo, en los últimos
20 años esta ha surgido también como marcador de
función ovárica.
La HAM tiene funciones específicas como regulador del
crecimiento folicular, desempeñando su papel como señal
de retroalimentación negativa. Jugaría un papel importante
tanto en la regulación del número de folículos en
crecimiento (inhibiendo el reclutamiento), como en su
selección para ser ovulados (inhibiendo a FSH).
La HAM es sintetizada como una pre-prohormona. En el
citoplasma cada monómero es clivado generando un
fragmento N-terminal: 110 KDa (región pro) y otro C-
terminal: 25 KDa (región madura o nativa), unidos en
forma no covalente por 2 puentes disulfuro. El dominio C-
terminal es el bioactivo, uniéndose al receptor, pero
necesita del fragmento N-terminal para desencadenar
respuesta biológica. En circulación podemos encontrar
una mezcla de la forma pro-HAM y del complejo C-
terminal/N-terminal, que serían medidos por los ensayos
disponibles.
Distintos autores han demostrado que la HAM es un
marcador precoz de la disminución y agotamiento de la
reserva ovárica. Muestra una estrecha correlación con la
reserva folicular y la capacidad reproductiva, más que la
FSH y el estradiol.
La revisión realizada no deja lugar a dudas sobre la
utilidad de la HAM en la etapa fértil. Ha mostrado ser una
excelente herramienta para caracterizar pobres
respondedoras en los procedimientos de fertilización
asistida, alertar precozmente en mujeres jóvenes sobre
reserva ovárica baja, en relación con su edad cronológica
y expresar un número de folículos en crecimiento elevado,
como en síndrome de ovario poliquístico, para evitar una
hiperestimulación ovárica. El creciente número de
pacientes que decidieron retrasar su maternidad y su
papel en la fisiología ovárica han posibilitado que la HAM
integre hoy la evaluación de mujeres con alteraciones de
la fertilidad
La hormona antimülleriana como marcador de reserva
ovárica
La reserva ovárica, representada por la cantidad de
folículos y la calidad ovocitaria, disminuye con la edad de
la mujer, resultando en la disminución de su función
reproductiva17.
Distintos marcadores hormonales y ecográficos han sido
utilizados para evaluar la reserva ovárica. El incremento
de FSH en mujeres de más de 35 años, la disminución de
la inhibina B, debida a la reducción del pool de folículos
antrales reclutados, la disminución de niveles de estradiol
y el recuento de folículos antrales por ecografía, están
entre ellos18-21. Hace algunos años se describió que la
HAM reflejaba el número de folículos que habían hecho la
transición de folículo primordial a folículo en crecimiento y
que, además, era independiente del control
gonadotrófico16. La HAM se expresa en los folículos que
ya fueron reclutados, pero que aún no fueron
seleccionados para ser dominantes. Previo y posterior a
estos 2 puntos, la HAM no se expresa.
Varios trabajos establecieron el papel de la HAM como
una señal de retroalimentación negativa sobre el
número de folículos en crecimiento presentes en el
ovario. Durante el proceso de selección, un grupo de
folículos es seleccionado desde el grupo de folículos
en crecimiento, productores de HAM, para continuar
su crecimiento hasta estadio preovulatorio. Dado que
la HAM afecta a la sensibilidad de los folículos a FSH,
desempeñaría un papel al determinar si los folículos
experimentan selección o son removiConclusiones
Si bien la HAM se conoce desde hace ya 40 años, en los
últimos años se ha confirmado su utilidad como marcador
de reserva ovárica. El conocimiento de la fisiología, el
mecanismo de acción, el metabolismo de HAM y la
estandarización y el cumplimiento de las condiciones
preanalíticas, son, sin duda, de vital importancia para el
diseño de técnicas más específicas y confiables, así como
para la correcta interpretación de los resultados.
Es necesario un importante trabajo de los organismos
competentes para poder contar con la estandarización
internacional que se requiere. La industria diagnóstica
tendrá por delante el desafío de mejorar sus sistemas de
medición, que permitan caracterizar solamente las formas
activas de la hormona.
Las numerosas ventajas que presenta respecto a otros
marcadores endocrinológicos utilizados y el surgimiento de
nuevas y mejores metodologías de medición sustentan,
además, su utilización en una gran diversidad de
situaciones clínicas. Entre ellas se encuentran patologías
endocrinas frecuentes, como el SOP, y patologías
infrecuentes, como los tumores de células de la granulosa.
La revisión realizada no deja lugar a dudas sobre la
utilidad de la HAM en el área de fertilidad. Ha mostrado
ser una excelente herramienta para caracterizar pobres
respondedoras en los procedimientos de fertilización
asistida, alertar precozmente en mujeres jóvenes sobre
reserva ovárica baja, en relación con su edad cronológica
y expresar un número de folículos en crecimiento elevado,
como en el SOP, para evitar una hiperestimulación
ovárica.
El creciente número de pacientes que han decidido
retrasar su maternidad y/o someterse a tratamiento de
fertilización asistida y su papel en la fisiología ovárica han
contribuido a que la HAM integre hoy el panel de
evaluación de mujeres con alteraciones de la fertilidad.
GENITAL MASCULINO
Papel del Sistema Ubiquitina Proteasoma en la
Espematogénesis
RESUMEN: La espermatogénesis consiste en una serie
de eventos que constituyen un programa de diferenciación
celular, con drásticos cambios en la morfología, en la
bioquímica y en la expresión de genes, los cuales son
temporal y especialmente regulados por mecanismos
endocrinos, paracrinos y autocrinos. Durante las distintas
fases de la espermatogénesis y especialmente durante la
fase de diferenciación de las espermátidas, existe
degradación masiva de proteínas citosólicas, nucleares y
de membrana debido a la eliminación de gran parte del
citoplasma que posee la espermátida redonda. Esta
degradación de proteínas ocurre dentro del epitelio
seminífero y está mediada por los sistemas celulares
descritos para este propósito. El proteasoma es un
complejo multienzimático encargado de degradar la mayor
parte de las proteínas nucleares y citosólicas, después de
que éstas son marcadas para su destrucción por unión
covalente de moléculas de ubiquitina. Esta destrucción
selectiva de proteínas celulares es un mecanismo esencial
en el proceso de espermatogénesis. En este artículo se
revisan los aspectos básicos del proceso fisiológico
gonadal del macho y los conocimientos actuales sobre el
rol del sistema ubiquitina proteasoma en el mantenimiento
funcional de la espermatogénesis.
Sistema Ubiquitina Proteasoma La ubiquitina es una
proteína monomérica de 76 residuos aminoacídicos y un
peso molecular de 8,5 kDa (Bebington et al., 2001;
Schlesinger et al., 1975), que constituye el elemento
esencial del sistema de proteólisis específica dependiente
de ATP o SUP (Ciechanover, 2005a). Esta proteína es
expresada por tres genes diferentes UBA, UBB y UBC
situados en diferentes regiones del genoma eucariota
(Grillari et al., 2006; Ryu et al., 2008). Esta proteína es
altamente conservada durante la evolución de los
eucariotes, de tal forma, que la ubiquitina humana y la de
levadura difieren en sólo 3 residuos de los 76 aminoácidos
(Pickart & Fushman, 2004). La ubiquitina, especialmente
las cadenas de poliubiquitina, son utilizadas como un
marcador universal de proteólisis y son usadas para este
propósito en todos los tejidos y organismos (Hershko &
Ciechanover, 1998). La ubiquitinación es una modificación
posttraduccional que experimenta una gran cantidad de
proteínas. Consiste en la unión covalente de una o varias
moléculas de ubiquitina a una proteína sustrato.
Actualmente, se han descrito tres enzimas que llevan a
cabo el proceso de ubiquitinación, las cuales actúan de
modo secuencial y son conocidas como E1, E2 y E3
Su actividad culmina con la unión de múltiples ubiquitinas
a los residuos lisina de las proteínas que deben ser
eliminadas (Hershko & Ciechanover). La E1 o enzima
activadora de ubiquitina tiene por función activar a la
molécula de ubiquitina generando con ella un enlace tiol-
éster entre una cisteína de su sitio activo y la glicina del
extremo carboxilo terminal de la ubiquitina, mediante el
consumo de ATP (Fang & Weissman, 2004; Kim et al.,
2011). Normalmente cada organismo eucariote presenta
un solo tipo de E1, aunque existen excepciones en plantas
(Pickart & Eddins, 2004). Las E2 o enzimas conjugadoras
de ubiquitina actúan como puente entre E1 y E3. Su
mecanismo de acción depende del tipo de E3 con el que
interaccione. Las E3 o enzimas ubiquitina ligasas son
enzimas que catalizan la unión de la ubiquitina a sustratos
específicos, por lo que han sido descritas algo más de 650
tipos de enzimas E3 (de Bie & Ciechanover, 2011). Las E3
tienen la capacidad de unirse tanto a E2 como al sustrato
y la interacción con el sustrato puede ser directa o
mediada a través de proteínas auxiliares (Glickman &
Ciechanover, 2002). La ubiquitinación de proteínas es un
proceso reversible. Las enzimas encargadas de remover
ubiquitinas se denominan deubiquitinasas (DUBs). Las
DUBs presentan actividad cisteína proteasa que hidroliza
de manera específica enlaces isopeptídicos entre el grupo
carboxilo de la glicina 76 de la ubiquitina y una proteína
diana (Glickman & Ciechanover). Las DUBs son muy
abundantes y diversas, lo que hace suponer que tienen
una alta especificidad de función y sustrato (Ventii &
Wilkinson, 2008). Sus funciones están relacionadas con
rescatar y reciclar las ubiquitinas que marcan a las
proteínas, antes de su ingreso al proteasoma (Nandi et al.,
2006), lo que permite el mantenimiento de niveles de
ubiquitina libres y la regulación de la estabilidad de los
conjugados de ubiquitina (Glickman & Ciechanover). El
proteasoma es un complejo multienzimático con actividad
proteolítica formado por múltiples subunidades (Jung et
al., 2009; Kloetzel, 2001). Este juega un papel central en la
degradación intracelular de proteínas y se encuentra tanto
en el núcleo como en el citoplasma de las células
eucariotas (Nederlof et al., 1995). El proteasoma más
sencillo de todos es el proteasoma 20S llamado así por su
coeficiente de sedimentación, que tiene un peso molecular
de aproximadamente 700 kDa (Orlowski, 1990) y al que se
pueden unir distintos complejos reguladores el 19S, PA28
α/ß, PA28γ y PA200 (Bousquet-Dubouch et al., 2011; Jung
et al.). El proteasoma 20S se encuentra en todas las
células eucarióticas, desde las levaduras al ser humano
(Arrigo et al., 1987), y tiene una estructura cuaternaria muy
conservada que, al microscopio electrónico, aparece con
la forma de un barril compuesto por 4 anillos apilados
(Hegerl et al., 1991, Jung et al.). Estos anillos forman un
cilindro que está compuesto por 28 subunidades, las
cuales tienen pesos moleculares que oscilan entre 23 y 32
kDa (Claverol et al.; Jung et al.). Estas subunidades están
organizadas en cuatro anillos alrededor de un canal
central donde tiene lugar la proteólisis. Cada uno de los
anillos externos contiene siete subunidades α, numeradas
de 1 a 7, cuya participación es necesaria para el
ensamblaje del cilindro. Cada uno de los anillos internos
contiene siete subunidades ß (ß1-ß7), tres de las cuales
están implicadas en la actividad proteolítica del complejo.
Específicamente, las subunidades ß1, ß2 y ß5 del
proteasoma poseen los sitios activos con actividades
proteolíticas que permiten, respectivamente, hidrolizar
uniones peptídicas por el extremo carboxilo-terminal de
aminoácidos ácidos con su actividad tipo peptidilglutamil
péptido hidrolasa o PGPH, de aminoácidos básicos con su
actividad tipo tripsina o de aminoácidos hidrofóbicos con
su actividad tipo quimotripsina (Wilk & Orlowski, 1980,
1983). De esta manera, cada proteasoma contiene seis
sitios activos (Jung et al.; Walz et al., 1998). La actividad
del proteasoma está modulada por los complejos
reguladores que se pueden unir a los anillos α. En
ausencia de estos complejos el canal del proteasoma está
cerrado por el extremo N-terminal de las siete diferentes
unidades a y por consiguiente la actividad proteolítica está
reprimida (Bajorek & Glickman, 2004; Rechsteiner & Hill,
2005). Cuatro complejos reguladores proteasomales han
sido identificados en células de mamíferos: 19S, PA28α/ ß,
PA28γ y PA200. El prototipo de proteasoma eucariótico
(Fig. 1), el proteasoma 26S está conformado por un
complejo proteolítico central, el “core”20S, más dos
complejos reguladores 19S (Pickart & Cohen). Regulación
del Proteasoma La localización celular del proteasoma
26S se modifica de acuerdo con las necesidades de la
célula y en particular en condiciones de estrés. Al
localizarse en diferentes compartimientos de la célula
interactúa con una gran variedad de proteínas, las que
podrían estabilizar y regular diferencialmente su actividad
proteolítica. La actividad proteasomal está regulada a
varios niveles. 1) Por modulación de la expresión de sus
subunidades constituyentes. 2) Por la distribución
intracelular y disponibilidad de las subunidades para
formar proteasomas funcionales, dado que algunas
subunidades presentan señal de localización nuclear
(Nederlof et al.; Sorokin et al., 2007). 3) Por la unión
diferencial de los complejos reguladores que se unen al
“core” 20S permitiendo abrir los extremos del proteasoma
para facilitar la entrada de la proteína que será degradada
(Savulescu & Glickman, 2011). 4) Por modificaciones
cotraduccionales y post-traduccionales como fosforilación,
N-acetilación, glicosilación, Nmiristoilación y S-
glutationilación de varias de las subunidades
(Konstantinova et al., 2008). Aunque la función de la
mayoría de estas modificaciones sobre las subunidades
del proteasoma todavía no está clara, su presencia no es
constante, y cambian según el estado fisiológico de la
célula, sugiriendo que estas modificaciones podrían estar
regulando la funcionalidad de este complejo catalítico
(Konstantinova et al.)
Conclusión y perspectiva Considerando los antecedentes
planteados en esta revisión, queda claro que el SUP juega
un papel importante en varios niveles de la
espermatogénesis. A la fecha, existe un gran número de
evidencias que demuestran la presencia y localización de
los componentes del SUP a nivel testicular (Tabla I). Sin
embargo, los estudios funcionales de la actividad
proteasomal son menos abundantes. El estudio de las
funciones del SUP es crítico, ya que la inactivación de
estos genes da como resultados una progresión anormal o
la detención del desarrollo de la espermatogénesis, lo que
conduce a la infertilidad. La especificidad del proceso de
ubiquitinación de proteínas está dada por la enzima
ubiquitina ligasa o E3. Por lo tanto, la identificación de las
E3 ligasas implicadas en los procesos de ubiquitinación de
proteínas en el epitelio seminífero proporcionará
información fundamental para comprender los
mecanismos celulares implicados en la regulación de la
espermatogénesis. La existencia de proteasomas
específicos de tejidos, como el espermatoproteasoma
podría estimular el desarrollo de inhibidores selectivos de
las subunidades que los diferencian de los proteasomas
somáticos, como la subunidad PSMA8, los cuales podrían
sentar las bases de la investigación para el desarrollo de
anticonceptivos masculinos
Vista
Ácido ascórbico: desde la química hasta su crucial función
protectiva en ojoSTA
Resumen La Vitamina C o ácido L-ascórbico (AA), es una
vitamina esencial y un importante agente antioxidante
hidrosoluble, que se sintetiza químicamente a partir de la
glucosa, mediante una serie de reacciones enzimáticas,
siendo la L-gulono-γ-lactona oxidasa (GLO) la última
enzima involucrada. La incapacidad de sintetizar AA por
ausencia de GLO ocurrió hace cientos de millones de años
y se manifiesta sólo en algunas especies. La degradación
del AA se lleva a cabo mediante procesos oxidativos que
involucran la hidrólisis del anillo lactona para producir
ácido 2,3-dicetogulónico (DCG), que posteriormente se
degrada por decarboxilación, generando productos
coloreados, encontrados en algunas patologías oculares.
Entre las diferentes propiedades del AA cabe mencionar
su capacidad de absorber radiación ultravioleta (RUV) y
evitar el daño fotoquímico en órganos expuestos. En
humanos, y en algunos animales (cobayos, ciertos
primates, etc.) el humor acuoso tiene mayor concentración
de AA que el plasma. Esto responde a un mecanismo de
transporte activo especializado en el cuerpo ciliar que se
encarga de transportar el AA desde la sangre hacia el
humor acuoso y desde allí al epitelio corneal,
transformando a la córnea en la estructura del ojo
responsable de la mayor absorción de RUV
FUNCIONES El AA es esencial en la síntesis del
colágeno, también interviene en la síntesis de lípidos,
proteínas, norepinefrina, serotonina, L-carnitina, y en el
metabolismo de tirosina, histamina y fenilalanina. En el
escorbuto el problema se produce en la síntesis del
colágeno, ya que el AA es un cofactor esencial en este
proceso (18). La deficiencia de AA se asocia con una
disminución en la síntesis de pro-colágeno y con una
reducida hidroxilación de los residuos prolina y lisina,
obteniéndose una molécula menos estable a la
temperatura corporal. Cobayos deficientes en AA
presentan cambios morfológicos en el endotelio y en la
capa muscular de los vasos sanguíneos debido a la baja
expresión de colágeno tipo IV y elastina (19). El AA facilita
la absorción del hierro en el tracto digestivo y regula la
distribución y almacenamiento del mismo. El ascorbato
(AH- ), forma químicamente estable a pH fisiológico, es un
gran agente reductor hidrosoluble debido a sus dos
hidroxilos (OH-) ionizables capaces de “limpiar” a los
tejidos de las especies reactivas del oxígeno (ERO)
responsables del stress oxidativo (18)(20). A pesar de que
en las vías degradativas del AA se producen EROs, no se
ha demostrado que estas especies participen en procesos
de oxidación ni peroxidación que sean perjudiciales (21).
El AA también posee la capacidad de regenerar vitamina
E, y de esta manera la mantiene en un estado activo
contribuyendo a la acción antioxidante. La vitamina C
protege de la oxidación a las lipoproteínas de baja
densidad (LDL), conjugándose con compuestos
hidrofóbicos (palmitato de ascorbilo, ácido acetal
ascórbico) e incorporándose a las LDL para cumplir su rol
antioxidante. Además de sus efectos antioxidantes se ha
demostrado que posee capacidad para absorber RUV y
debido a que está altamente concentrado en córnea,
humor acuoso y cristalino, protege a diferentes tejidos
oculares de dichas radiaciones
Oído
Uso de biomateriales como injertos para timpanoplastia
tipo I
RESUMEN Objetivo: comparar dos biomateriales
(bioplástico e injerto autólogo de fascia) como injertos para
el cierre de perforación timpánica en un modelo animal.
Material y método: estudio experimental, prospectivo, en el
que se incluyeron 26 cobayos adultos de sexo masculino,
en el centro hospitalario de tercer nivel, Bioterio de la
Universidad Panamericana, y en el que cada sujeto de
experimentación fue su propio control. Se realizó un
modelo de perforación timpánica crónica y timpanoplastia
tipo I, con cierre de perforación. Resultados: obtuvimos
tasas de cierre similares con ambos materiales. El análisis
histólogico mostró cualidades diferentes entre ambos
injertos. Conclusiones: el bioplástico (alfa, omega-
telequelico poli [epsiloncaprolactona] diol y hexametilen di-
isocianato [PCLDEGHDI]) es un biomaterial que puede
utilizarse como injerto en timpanoplastias. Se requieren
más estudios para valorar su eficacia y efectividad, así
como corroborar un adecuado perfil de seguridad para su
uso clínico.
DISCUSIÓN Una de las principales limitantes de este
estudio es su diseño como estudio piloto en un modelo
A pesar de existir múltiples estudios acerca del uso de
bioplástico en diferentes ramas de la medicina, existe poca
evidencia del posible uso de éste en injertos timpánicos.
Los poliuretanos son aptos para sustituir a la membrana
timpá- nica debido a su elasticidad y sus propiedades
vibratorias demostradas in vitro. Varios estudios han
demostrado resultados desalentadores con el uso de
bioplásticos; sin embargo, nuestro estudio demuestra un
adecuado cierre de la perforación timpánica. La
timpanoplastia tipo I es un procedimiento relativamente
frecuente en nuestro medio; no obstante, actualmente
existen diversas técnicas quirúrgicas con diferentes
resultados reportados, por lo que no sólo debemos poner
atención en el tipo de cirugía, sino también en el tipo de
injerto. Asimismo, demostramos que el cobayo es un
modelo animal barato, factible y distribuido fácilmente en
todo el mundo.
CONCLUSIONES En este trabajo demostramos que el
alfa, omegatelequelico poli (epsilon caprolactona) diol y
hexametilen di-isocianato (PCLDEGHDI) es un bioplástico
que puede tener uso como injerto timpánico; obtuvimos un
porcentaje de cierre similar al patrón de referencia (fascia)
y no aparecieron complicaciones al seguimiento a corto
plazo; asimismo, con el uso de este plástico, por no
requerir un abordaje adicional para obtenerlo como injerto
y por su posible aplicación con el endoscopio, podrían
reducirse los costos hospitalarios al realizarse este
procedimiento en el consultorio con anestesia local.
Proponemos las siguientes líneas de investigación,
derivadas de nuestro estudio: evaluar de manera objetiva
la posible ototoxicidad mediante emisiones otoacústicas,
estudiar, mediante seguimiento timpanométrico, las
propiedades biofísicas del injerto, comparar este material
con otros biomateriales biológicos (xenoinjertos), aumentar
el tamaño de la muestra para realizar comparaciones
estadísticas más exactas, evaluar el comportamiento del
injerto a largo plazo y valorar el costo-beneficio del posible
uso de este material como injerto