Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
AUTORES:
M. en C. REYNA DEL CONSUELO ALMIRAY PINZÓN
M.E.C. ANA BERTHA ESCOBEDO LOPEZ
M. en C. GLORIA LEÓN TELLO
M. en C. MARÍA SUSANA PERÉZ FERNÁNDEZ
M. en C. PATRICIA GUADALUPE SUÁREZ ALBORES
2013
1
ÍNDICE
Práctica No. 9 Infecciones del aparato genital (Exudado cervico vaginal y exudado 45
uretral)
2
BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
PRÁCTICA No. 1
INFECCIONES GASTROINTESTINALES
COPROCULTIVO
Introducción
El estudio de las bacterias responsables de cuadros clínicos gastrointestinales se realiza
fundamentalmente mediante el cultivo de la materia fecal (coprocultivo). Las enfermedades
diarreicas agudas representan una de las principales causa de defunción en nuestro país.
Las vías gastrointestinales son el hábitat natural de una extensa variedad de
microorganismos, la mayoría de las bacterias de la flora entérica residente corresponden a
miembros de la familia Enterobacteriaceae (E.coli, Proteus etc.) aunque también son
abundantes Enterococcus faecalis, diversas especies de Staphylococcus, Mycobacterium y
especies anaerobias. Siendo de mayor relevancia diagnóstica las enterobacterias patógenas como:
Shigella, Salmonella, Yersinia, Escherichia coli, esta última aunque se considera parte de la
flora algunos serotipos denominados enteropatógenos son capaces de producir gastroenteritis,
principalmente en lactantes en forma de brotes epidémicos. Además de otros géneros de
importancia médica como Vibrio, Campylobacter y Helicobacter que pertenecen a otras familias.
El objetivo principal de realizar el coprocultivo es que éste sirva como apoyo al
diagnóstico clínico en caso de gastroenteritis.
Objetivo
El alumno aprenderá la técnica para la realización del coprocultivo así como conocerá las
diferentes pruebas bioquímicas que se utilizan para la identificación de los patógenos intestinales.
3
Material
Placas de Petri con Agar Mac Solución salina isotónica en tubos de
Conkey 13x100 con 2mL.
Placas de Petri con Agar S.S. Tubos con medio: TSI, LIA, MIO,
Placas de Petri con Agar, XLD urea de Christensen, citrato de
Placas de Petri con Agar Sulfito de Simmons para pruebas bioquímicas
Bismuto Solución de Iodo
Placas de Petri con Agar Entérico de Juego de colorantes de Gram.
Hecktoen. Portaobjetos
Placas de Petri con Agar EMB Cubreobjetos
Placas de Petri con Agar Campy- Colorante de Azul de Metileno
BAP Gradillas
Placas de Petri con Agar TCBS. Aceite de inmersión.
Placas de Petri con Agar Gelosa Frasco con benzal
sangre de Carnero. Algodón
Caldo selenito o tetrationato en tubos Taxos de oxidasa
de 13x100 con 2 mL. Tubos con caldo soya tripticasa
Agua peptonada Alcalina (APA) a Baño maría
pH 9. Marcador de vidrio.
Buffer de PBS
4
Desarrollo
Toma y transporte de muestra para coprocultivo
Las muestras se deberán obtener al inicio del cuadro clínico antes de iniciar el tratamiento
antimicrobiano.
1. La muestra de heces se puede tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y
con tapa hermética de preferencia debe usarse estéril y desechable, cuando se trata de
lactantes la muestra se toma directamente del recto usando sonda K31 conectada a una
jeringa estéril, e introduciéndole solución salina isotónica. Si la muestra se toma en el
mismo laboratorio donde se va a procesar el aislamiento, no es necesario usar medio de
transporte hay que sembrar de inmediato.
2. En estudios de campo o cuando el laboratorio no está cercano, la muestra se toma con
un hisopo que debe quedar bien impregnado de materia fecal. El hisopo se coloca en un
medio de transporte como el de Cary-Blair o el de Stuart-Amies.
3. Sólo en ocasiones extremas se puede refrigerar la muestra.
Procesamiento de la muestra
1. Hacer la observación directa de las heces, si presenta moco, sangre o si son líquidas,
pastosas o de diferente color.
2. La tinción de Gram en frotes de materia fecal es importante para corroborar la presencia
de Campylobacter en sus formas vibriónicas y helicoidales, la presencia de células
indicativas de inflamación, eritrocitos, etc.
3. La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de muestra depende del
tipo de medio de cultivo utilizado. El método usado es por la técnica de estría cruzada
esterilizándola en cada sección de la placa y separando la estría.
4. Las placas se incuban a 37° C durante 18 a 24 h
5. Al mismo tiempo de sembrar las placas, sembrar un tubo de enriquecimiento con muestra
fecal usando una cantidad pesada de inóculo, como caldo tetrationato o caldo selenito. Si
se sospecha de Vibrio sembrar un tubo con agua peptonada alcalina (APA), incubar a
37°C de 12 a 18 h y posteriormente sembrar en un medio selectivo.
6. 7.- Del tubo de enriquecimiento después de incubado se siembran medios selectivos y
diferenciales y se identifican las colonias de interés.
DIAGRAMA DE TRABAJO
Heces
Enriquecimiento
SSI al 0.5%
Caldo tetrationato
o
Caldo selenito
Agar Mac Conkey
Agar EMB
Azul de metileno Agar SS
Agar ENDO Agar verde Brillante
Agar XLD Agar sulfito de bismuto
Agar tergitol 7 Agar XLD
Identificación
bioquímica
IDENTIFICACIÓN DE Vibrio cholerae
Cuestionario
1. Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces.
2. Cuáles son los principales patógenos que podemos encontrar en este tipo de muestra.
3. En una muestra sólida, ¿qué bacteria buscamos principalmente?
4. ¿Qué factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infección
gastrointestinal?
5. ¿Qué bacterias producen enterotoxinas?
BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
PRÁCTICA No.2
INFECCIONES DE VÍAS URINARIAS
UROCULTIVO
Introducción
Las infecciones de las vías urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al
tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo
femenino, considerándose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves,
como pielonefritis, presentándose en algunos casos de manera asintomática, o como enfermedad
aguda o crónica.
Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo, mientras
que las crónicas por varios microorganismos. Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de
la orina de pacientes son E. coli, Staphylococcus, Proteus, Enterococcus faecalis, Salmonella,
Pseudomonas, Mycobacterium, ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans.
Objetivo
El alumno aprenderá las diferentes tomas de muestra de la orina, así como la técnica para su
cultivo.
Material
Placas de Petri con Agar Mac Conkey.
Placas de Petri con Agar Sal y Manitol.
Placas de Petri con Agar sangre de carnero
Placas de Petri con Agar Thayer Martin.
Placas de Petri con Agar de DNAsa.
Tubos con medio de Biggy
Tubos con medios: TSI, LIA, MIO, Urea y Citrato para pruebas bioquímicas
Asa calibrada.
Juego de colorantes de Gram
Taxos de catalasa, oxidasa, PN, ESD. Bacitracina 0.04 U
Portaobjetos y cubreobjetos.
Placas estériles.
Pipetas estériles.
Tubos estériles.
Solución Salina Isotónica.
Matraz con Agar Nutritivo estéril.
Cuenta colonias.
Desarrollo
Toma de muestra
La muestra idónea es la primera micción de la mañana, ya que permite la multiplicación de
bacterias durante la noche.
Técnicas para mujeres
1. La paciente debe quitarse la ropa interior.
2. Se lavará las manos cuidadosamente con agua y jabón, las enjuagará con agua y las secará
con una toalla limpia.
3. Se separarán los labios mayores y menores, y los mantendrá separados en todo momento
hasta que se haya recogido la orina.
4. Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasándola de delante hacia atrás, se
repetirá el proceso un total de 4 veces.
5. Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jabón.
6. Se indicará a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros, tras lo cual y
sin interrumpir la micción, se recogerá el resto de la orina en el recipiente.
7. El frasco de boca ancha y estéril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna,
vulva o ropa de la paciente. Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie
interior.
Técnica para hombres
1. Lavado de las manos con agua y jabón.
2. Retraer completamente el prepucio, que se mantendrá así en todo momento, hasta que se
haya recogido la orina.
3. Limpiar el glande con jabón neutro.
Otros pacientes
1. En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por sí mismos, se
realizará sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas asépticas
oportunas.
Aspiración suprapúbica
1. Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal médico. Se usa para obtener
el diagnóstico exacto en los recién nacidos y en los niños pequeños, es una forma de
demostrar el origen de la infección de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se
originan más allá de la vejiga, así como la búsqueda de bacterias anaerobias.
2. Hacer una punción directa en la vejiga a través de la pared abdominal con aguja y jeringa.
3. Este tipo de métodos se considera muy agresivo.
Transporte de la muestra
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora. Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4ºC durante un tiempo máximo de 24 horas. El laboratorio debe controlar el
transporte, garantizándose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma,
siendo admisible, si no puede garantizarse el transporte correcto, la utilización de algún
conservante (ácido bórico al 2% o el sistema comercial con bórico-formiato).
DIAGRAMA DE TRABAJO
Primera micción
matutina
Chorro medio
Thayer Martin
(N. gonorrhoeae)
Agar Biggy
(Candida albicans)
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretación del resultado. El criterio de 100,000 o
más microorganismos por mL de orina para el diagnóstico de la bacteriuria significativa es
primariamente de índole operacional, cuando se emplea el método del vaciado aséptico para
recoger las muestras. Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera.
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1’000,000 de colonias por mL menos de 10,000 UFC/ mL se considera negativo. Sin embargo, es
muy importante el criterio del médico de acuerdo al estado clínico de su paciente.
Cuestionario
1. Menciona a partir de qué área del aparato urinario es estéril.
2. Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra.
3. ¿Qué es la bacteriuria?
4. ¿Por qué es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina?
5. ¿Por qué la orina debe procesarse lo más pronto posible?
BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
PRACTICA No. 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introducción
En los últimos años, las bacterias resistentes a los antimicrobianos, han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes. Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibióticos,
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables. La
información microbiológica y epidemiológica disponible ayudará a los clínicos a seleccionar el
agente microbiano más apropiado para tratar cada infección.
Plantear la necesidad de saber cuál es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que está provocando la infección, es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco éxito, principalmente en pacientes hospitalizados.
Para esto es necesario conocer:
1. La susceptibilidad del microorganismo “in vitro”
2. La relación de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie.
3. Las propiedades farmacológicas de los antimicrobianos, incluyendo su toxicidad,
distribución, absorción y excreción.
4. Experiencia clínica en el tratamiento
5. Historia natural del proceso patológico.
6. El estado inmune del huésped
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia, ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos “in vitro”, dará una pauta a seguir sobre cuál debe ser el
antimicrobiano que se debe usar, sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro.
Para este tipo de estudios existen varios métodos como son:
1. Dilución seriada en tubo
2. Dilución seriada en placa.
3. Difusión en discos de papel filtro
4. Sistemas automatizados
La selección del método, va a depender de:
1. Número de pruebas que se procesen diariamente.
2. Tipo de microorganismo que se trata, del sitio que se aislé, tipo de patogenicidad, etc.
3. Equipo automatizado que se cuente.
Objetivo
Que el alumno realice la técnica de difusión en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patógeno “in vitro” ante determinados antimicrobianos
Material
1. Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diámetro
2. Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3. Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4. Hisopos estériles
5. Pinzas
6. Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7. Cepas control
8. Regla transparente
9. Alcohol
10.Tubo del Nefelómetro de McFarland al 0.5%
11.Solución salina isotónica estéril.
Desarrollo
1. Con un asa en punta se tocan 4 ó 5 colonias morfológicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton.
2. Incubar a 35ºC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h).
3. Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 0.5 del Nefelómetro de McFarland.
4. Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensión
bacteriana, se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo.
5. Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente. Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa.
6. Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automático, con una presión ligera.
7. Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ºC.
8. Se mide los halos de inhibición con la regla.
9. La interpretación de los diámetros de las zonas de inhibición de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante.
Diagrama de procedimientos
Reporte
1. Se informa la actividad de los antibióticos contra los microorganismos empleados.
2. Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibióticos.
3. Sí el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa.
4. Se reporta el nombre de la bacteria con su género y especie así como su comportamiento al
antibiograma.
Cuestionario
1. Describe las diferentes técnicas que se utilizan para la realización de los antibiogramas.
2. ¿A qué microorganismo le realizas el antibiograma?
3. ¿Cuál es la técnica que utilizaste en la práctica y qué nombre recibe?
4. ¿Qué medio de cultivo utilizaste para esta técnica?
5. ¿Por qué se calibra la muestra a una turbidez de 0.5 y a cuántas bacterias equivale?
BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
PRÁCTICA No. 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARÍNGEO Y NASOFARÍNGEO
Introducción
El estudio del exudado faríngeo y nasofaríngeo es importante para el diagnóstico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo. Dentro de las principales bacterias patógenas causantes de infección están los
estreptococos.
También es muy importante conocer la flora normal en las vías respiratorias altas y bajas
para un buen reporte, ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patógenos de los comensales con ayuda del cultivo.
El exudado faríngeo y nasofaríngeo son las muestras más empleadas para el estudio
bacteriológico de una infección de vías respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos.
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia médica
de vías respiratorias altas
EXUDADO NASOFARINGEO
Transporte de la muestra
1. En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberá depositar en medio de
transporte.
2. Es importante que el médico nos indique en base al cuadro clínico de que proceso infecciosos
se sospecha, para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente.
Material
1. Placas de Petri con. Gelosa sangre de carnero al 5%
2. Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3. Placas de Petri con Mac Conkey
4. Placas de Petri con medio de Thayer-Martin.
5. Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL).
6. Placas de Petri con medio de Biggy
7. Tubos con medios TSI, LIA, MIO.CS. y Urea para pruebas bioquímicas
8. Tubos con caldo Soya Tripticasa
9. Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10.Hisopos estériles
11.Abatelenguas estériles
12.Colorantes de Gram
13.Frasco con cloro
14.Sensidiscos de Bacitracina de 0.04 U
15.Sensidiscos de Optoquina
16.Sensidiscos de Novobiocina
17.Tubos con agar bilis esculina
18.Tubos de Caldo soya tripticasa con 6.5 % NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta práctica. Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la búsqueda de Streptococcus hemolítico.
1. Se toma la muestra como ya se indicó anteriormente, se siembra en los medios: agar sangre de
carnero, Thayer Martin, Sal y Manitol etc.
2. Se incuban 24 h a 37ºC
3. Hacer frotes y teñir por técnica de Gram, Ziehl Neelsen, Giemsa para investigar asociación
con fusoespirilar.
4. Sí en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo específico para su identificación así como el aviso inmediato a las autoridades de la
S.S.A.
5. Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patógenos.
Es importante en niños menores de cinco años la investigación de Haemophilus influenzae.
Es de gran trascendencia epidemiológica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis.
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama específico para su identificación
así como la notificación de los casos a la S.S.A.
Reporte
El reporte al médico es de acuerdo a nuestros resultados, es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente.
1. Se aisló Flora Normal
2. Se identificó el siguiente microorganismo, se pone género y especie
3. Es posible encontrar más de un microorganismo patógeno en un cultivo
4. De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma, si tiene más de una bacteria
patógena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Medio de
transporte Stuart
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de
carnero Agar sangre de
Candida albicans (CGP, BGN) carnero
GHBEL
(H. influenzae)
Colonias β-hemolíticas
Pruebas de identificación
Cuestionario
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
PRÁCTICA No. 5
INFECCIONES DE VÍAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIÓN)
Introducción
Las infecciones de las vías respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional. Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos, una de las más
frecuentes, se presentan tanto en gente joven y anciana, así como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco.
Que el alumno conozca la metodología para el manejo e identificación de los agentes etiológicos
de las vías respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos .
Toma de muestra
1.- Enjuagar la boca con agua destilada estéril o solución salina.
2.- Obtener el esputo tras una expectoración profunda, preferentemente matinal.
3.- De no producirse expectoración espontánea, puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisiológico estéril (15 mL durante 10 minutos), siendo útil además realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria.
1. Este tipo de muestras solo son tomadas por un médico en condiciones asépticas.
2. Evitar la contaminación con la flora de la cavidad oral.
3. Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA, Cáncer o enfermedad obstructiva
crónica (EPOC).
4. La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio.
Volumen mínimo
De 2 a 10 mL, si es posible.
Transporte y conservación
Envío inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas). Si no es posible, conservar en
refrigeración 4ºC.
Observaciones
Material
1. Placas de Agar sangre de carnero.
2. Placas de Agar de Mac Conkey.
3. Placas de Agar Cetrimida.
4. Placas de Agar de Sal y Manitol.
5. Placas de Agar de Thayer Martin.
6. Placas de Agar Levinthal.
7. Placas de gelosa sangre en base Columbia con ácido nalidíxico y colistina.
8. Tubos con medio de Biggy
9. Tubos con medios TSI, UREA, CS, LIA y MIO para pruebas bioquímicas
10. Portaobjetos
11. Cubreobjetos
12. Microscopio
13. Juego de colorantes de Gram.
14. Tinta China
15. Aceite de inmersión
16. Taxos de optoquina y bacitracina de 0.04 U y 10 U
17. Tubos estériles de plástico desechable.
18. Pipetas Pasteur estériles
19. Centrífuga.
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad: Uso de campana de seguridad, guantes desechables, cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas.
Selección de la muestra
1. La muestra se examina microscópicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento así como el color de la misma.
2. Se toma de la porción más purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porción se hace
una tinción de Ziehl-Neelsen, tinción de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya.
3. Observar todo el porta-objetos para determinar la distribución de las células tipo.
4. Se examina por la óptica de Normarsky. Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el número y proporción de leucocitos y de células epiteliales de descamación.
Según los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIÓN DEL ESPUTO SEGÚN WELCH Y KELLY
I 0 <25 <25
1 >25 <10
2 >25 10-25
II 3 >25 >25
Reporte
1. Proporcionar un informe preliminar después de la observación de los cultivos.
2. La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada.
3. Si no se observan microorganismos al término de la incubación y la identificación de los
microorganismos patógenos ya se realizó .se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable. Se debe informar el cultivo p/e Negativo a búsqueda de S. pyogenes.
4. Si no hay crecimiento después de dos días el informe final es el siguiente: No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubación.
En el laboratorio se debe contar con pruebas rápidas para la identificación de antígenos que
ayudan al médico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible.
En paciente con fibrosis quística o en huéspedes comprometidos es semejante; sin embargo, es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra, y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el médico no lo solicite.
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
(Esputo)
37 °C /CO2 24 – 48 h
Pruebas de identificación
Cuestionario
1.- ¿Qué características debe tener una muestra de expectoración para poderla procesar?
2.- ¿Qué microorganismos pueden afectar las vías respiratorias bajas?
3.- ¿Cuál es el principal microorganismo que buscamos en una expectoración?
4.- ¿Mencione otras técnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae?
5.- ¿Cuál es el fundamento de la tinción de Ziehl-Neelsen?
BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
PRÁCTICA No. 6
BÚSQUEDA E IDENTIFICACIÓN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introducción
La tuberculosis en nuestro país, es actualmente uno de los problemas más importantes de salud en
los últimos 5 años y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo.
El diagnóstico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos biológicos
como son: esputo, orina, lavado gástrico, raspado laríngeo, lavado o cepillado bronquial, materia
fecal, sangre menstrual, heridas.
Objetivo:
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son:
1. Calidad de la muestra.
2. Cantidad.
3. Envase estéril y desechable.
EXPECTORACIÓN
1. La muestra debe ser de preferencia la primera de la mañana.
2. La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada, y disminuir el mal olor.
3. En caso de niños se puede usar el hisopo laríngeo o nasofaríngeo.
4. No olvidar usar frasco estéril biodegradable de boca ancha.
ORINA
1. Se debe obtener en un frasco estéril y de boca ancha, después de lavado estricto de genitales.
2. Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mañana.
3. En este tipo de muestras es posible que el médico lo solicite en forma seriada.
LAVADO GASTRICO
1. Este tipo de muestras solo las efectúa un médico
2. Se utiliza una sonda gástrica estéril y desechable
3. El contenido del lavado gástrico se pone en un frasco estéril
4. Se trabaja el sedimento.
5. Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo día que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL.
1. Este tipo de muestras es tomado por el médico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia.
2. Este tipo de muestras se reciben en un frasco estéril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente.
3. Se deben procesar el mismo día que se reciben.
4. Se trabaja con el sedimento de la misma.
HECES
1. Se recibe la muestra en un frasco estéril y desechable.
2. Se prepara una suspensión gruesa de materia fecal y solución salina.
3. Se agrega un volumen igual de éter. Se agita y se centrifuga a 3000 rpm/5 min.
4. Se elimina el sobrenadante.
5. Se utiliza la capa gelatinosa
6. Se realiza la tinción de BAAR.
7. El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4% se siguen los pasos igual que el esputo.
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO.
1. Este tipo de muestras las obtiene el médico en forma aséptica
2. Se reciben en tubos estériles.
3. Se centrifuga la muestra
4. Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5. La muestra se debe trabajar en forma inmediata el día que se recibe
TEJIDOS
1. Se recibe en un frasco estéril de boca ancha.
2. Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero estéril
3. Se hacen frotes delgados
4. Las demás muestra se siembra en forma directa.
Material
1. Tubos estériles de tapón de rosca de plástico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2. Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3. Frascos estériles
4. Agitador vortex
5. Equipo de Ziehl-Neelsen
6. Equipo de Auramina Rodamina
7. NaOH al 4%
8. Pipetas Pasteur estériles
9. Frasco con fenol al 10%
10.Pinzas
11.Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12.Microscopio
13.Aceite de inmersión
14.Portaobjetos.
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1. Hacer un frote de la porción purulenta, se puede usar un aplicador de madera.
2. Extender la muestra en forma uniforme.
3. El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra.
4. Se deja secar el frote al aire.
5. Se fija al calor.
6. Se tiñe por la técnica que se tenga para la búsqueda de BAAR.
INTERPRETACION.
El número de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente. La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparación.
Cuestionario
1. ¿Importancia médica de Mycobacterium tuberculosis?
2. En la búsqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo ¿qué tratamiento debes
darle a la muestra?
3. ¿En qué condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por qué?
4. Menciona algún medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis, cuánto tiempo
necesita incubarse y qué pruebas necesitas hacer para su identificación.
5. Menciona un método diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
PRÁCTICA No. 7
INFECCIONES OCULARES
Introducción
Las infecciones oculares se manifiestan comúnmente por el constante lagrimeo. Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad.
Considerándose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recién nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos.
Objetivo
Que el alumno conozca la metodología para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Desarrollo
1. La muestra se toma del sito de daño y se siembra en los medios de cultivo indicados.
2. Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran.
3. Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tinción de Gram.
4. Se identifica el crecimiento según el diagrama.
5. Para búsqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por métodos de
inmunofluorescencia.
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato.
1. Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificación.
2. Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Tinción de Gram
Medio de
transporte Stuart
Inocular :
Agar sangre
Agar chocolate
Agar sal y manitol
Agar Mac Conkey
Agar Dextrosa Sabouraud
Pruebas de identificación
Cuestionario
1. Esquematiza la anatomía del ojo.
2. Menciona las diferentes técnicas que se utilizan para la toma de muestra según el
problema que se presenta en el ojo.
3. ¿Qué flora podemos encontrar en el ojo?
4. ¿Cuáles son los principales patógenos que podemos aislar?
5. ¿Qué indicaciones le das al paciente para la toma de muestra?
BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
Práctica No. 8
INFECCIONES ÓTICAS
Introducción
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones más frecuentes están la de los
oídos ya sean por su forma crónica o aguda. El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas, en niños por la introducción de objetos extraños p/e botones, frijoles
etc.
Objetivo
Que el alumno conozca la metodología para el manejo de este tipo de muestra, e identifique las
bacterias que pueden causar daño en oído
Toma de muestra.
1. Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos.
2. Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar, indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo.
3. Se diferencia los tubos del oído derecho e izquierdo.
4. En las infecciones crónicas se limpia el oído con solución de cloruro de benzalconio 1:1000
para eliminar la flora contaminante.
5. Cuando se trata de perforaciones del tímpano debe ser tomada por el otorrinolaringólogo
Material
1. Guantes estériles desechables.
2. Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron.
3. Gasas estériles.
4. Placas de gelosa sangre de carnero.
5. Placas de Sal y Manitol.
6. Placas de Mac Conkey
7. Placas de agar de Levinthal
8. Placas con agar DNAsa
9. Tubos con medios TSI, LIA, MIO, CS y Urea.
10.Taxos de optoquina
11.Taxos con bacitracina.
12.Tubos con Biggy
13.Colorantes de Gram
14.Tubos con O/F con glucosa al 1%
15.Reactivo para catalasa
16.Reactivo para oxidasa.
Desarrollo
Después de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata. Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tinción de Gram y reportarla. La
identificación se realiza en base al diagrama.
Reporte
En el reporte al médico se debe indicar:
1. El resultado por separado de cada oído
2. Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra.
3. Si se encontró algún objeto extraño.
4. Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo.
5. Sí no se aísla ningún microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubación.
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Medio de
transporte Stuart
Inocular :
Agar sangre
Agar chocolate
Agar sal y manitol
Agar Mac Conkey
Agar Dextrosa
Sabouraud/Biggy
Pruebas de identificación
Cuestionario
1.- Esquematiza la anatomía del oído.
2.- De las diferentes partes del oído, menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas.
3.- ¿Cuáles son los principales patógenos que puedes encontrar en el oído?
4.- Menciona las diferentes técnicas que utilizas para la toma de muestra .
5.- ¿Qué indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oído?
BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
PRÁCTICA No.9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL, VULVAR Y URETRAL)
Introducción
Las enfermedades de transmisión sexual (ETS) son un problema importante en Salud Pública.
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus, bacterias, hongos, protozoarios y
ectoparásitos, los cuales están involucrados en varios síndromes, por lo que la participación del
laboratorio en el diagnóstico es relevante. Sin embargo los microrganismos también pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentación, es decir, presencia de aparatos extraños
al cuerpo los cuales pueden causar inflamación o irritación y favorecer la infección. Además la
madre puede contagiar al niño durante el embarazo o durante el parto.
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infección puede tener características metastásicas y transmitirse
por vía sanguínea a otros órganos y tejidos.
Objetivo
Aprenderá a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta, las siguientes recomendaciones:
1.- Es importante tomarlas cuando la sintomatología existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual.
2.- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano.
3.- Es importante que se cuente con el material adecuado como son. hisopos de alginato de calcio,
de dacrón o tratados con soluciones amortiguadoras.
4.- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata.
5.- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento.
6.- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatómicos,
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital, ano-genital y oro-anal.
Exudado vaginal
1.- Con la paciente en posición ginecológica se introducirá un espéculo "sin lubricante" (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada).
2.- Recoger la muestra bajo visión directa, con un hisopo, de la zona con mayor exudado, o en su
defecto, del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx).
3.- Repetir la operación con un segundo hisopo, hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI, para la posterior observación en fresco.
4.- Retirar el espejo y de la secreción que quedó en el espéculo medir pH y hacer la reacción de
aminas con KOH al 10%, se reporta positiva si desprende un olor característico a “pescado” el
cual se debe a aminas volátiles.
5.- Cuando se sospeche la infección por Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum, deberá enviarse muestra endocervical.
6.- Mantener la muestra a temperatura ambiente, o preferentemente, en estufa 35-37ºC hasta su
procesamiento, que deberá ser antes de 3-6 horas.
Figura .Toma de muestra vaginal
Observación en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secreción vaginal y en el caso de tricomoniasis, vaginosis bacteriana y candidiasis, así como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos.
Desarrollo
Exudado uretral
1. Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas estériles.
2. Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotación hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigación de Chlamydia
trachomatis). (figura) 3.- Repetir operación con un segundo hisopo.
3. Un hisopo será destinado al examen microscópico y el otro para al cultivo
4. La muestra deberá procesarse como máximo en un plazo de 6-12 h.
5. Cuando no haya suficiente exudado, puede estimularse mediante un masaje suave
prostático-vesicular.
Aislamiento
Tinción de Gram
Medio de
transporte
Thayer-Martin Stuart
V
Agar Mac Conkey
Agar Sangre de
Carnero Biggy
Neisseria
gonorrhoeae
Agar Chocolate
Enterobacterias
Agar Sangre Candida albicans
Humana
Streptococcus
Gardnerella vaginalis Staphylococcus Identificación
bioquímica
Solución salina
isotónica
Observación en
fresco
Trichomonas
vaginalis
Reporte
En el reporte se deberá informarle al médico lo siguiente:
1.- Edad del paciente.
2.- Sexo.
3.- Tipo de muestra.
4.- Fecha en el que se realizó el estudio
5.- Características del endocervix: si hay úlceras, cantidad de flujo, olor, etc.
6.- pH Vaginal
7.- Tinción de Gram.
8.- Examen en fresco
9.- Resultado del cultivo
10.- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Búsqueda de Chlamydia trachomatis.
Búsqueda de Treponema pallidum.
Firma del responsable.
Cuestionario
1. ¿Qué indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra cérvico vaginal?
2. ¿Para qué utilizas el tubo con solución salina y otro con medio Stuart?
3. ¿Cuál es la importancia de determinar el pH vaginal?
4. ¿En qué consiste la prueba del KOH y para qué es útil?
5. Menciona cuáles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina.
BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
PRÁCTICA No. 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introducción
Uno de los fenómenos que se observan con más frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formación de un exudado purulento a raíz de la invasión bacteriana de una cavidad, tejido u
órgano del cuerpo. Clínicamente puede ir desde un sencillo o inocuo “grano” hasta uno o varios
abscesos con múltiples bolsas de pus. El exudado está constituido por microorganismos
invasores, leucocitos, principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgánicos y
fibrina. En algunos casos, el exudado puede recubrir la superficie del órgano, en otros, el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de células tisulares (ántrax). Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta, que por ello suelta líquido espeso o pus.
Objetivo
Aprenderá a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1. Lavar cuidadosamente la superficie de la herida.
2. Recoger el pus mediante jeringa y aguja, aspirando preferentemente de zonas profundas.
3. Cuando la muestra sea insuficiente, instilar suero o solución de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa. Para muestras líquidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cm³.
4. Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podrá efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo.
5. La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extracción, debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte.
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tinción de Gram directa lo más pronto posible para
iniciar tratamiento.
Muestra
Hisopo Jeringa
Tinción de
Gram
Tioglicolato
Agar Mac Conkey
Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol Anaerobios
Agar Biggy
Pruebas de identificación
Cuestionario
1. ¿De qué microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel?
2. Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y qué probables
microorganismos podríamos aislar.
3. Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada.
4. ¿En qué casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuál es el método utilizado?
5. En la búsqueda de anaerobios ¿qué microorganismos buscarías y que medios utilizarías
para su cultivo?
BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
PRÁCTICA No. 11
DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES MENÍNGEAS
CULTIVO DE LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO (LCR)
Introducción
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la función primordial del líquido
cefalorraquídeo (LCR) era la de protección del sistema nervioso central (SNC) y la regulación de
su volumen, en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la “tercera
circulación”. Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposición.
Cushing plantea que el LCR constituye por sí mismo el medio interno del SNC, ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento, por otro lado, actúa como linfa cerebral ya que su continua circulación permite
la remoción permanente de materiales nocivos y de desecho.
Aún más recientemente, se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
través del encéfalo mediante diversas moléculas activas como hormonas y aminas de acción
neutral.
Dentro de las patologías que más comúnmente se presentan a este nivel está la meningitis,
que es la inflamación de las membranas que recubren el SNC, es decir, las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la médula espinal y una de sus causas puede ser por infección,
básicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma clínica pueden
alcanzar al SNC a través de la vía hematógena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis, fracturas de cráneo, etc.).
El diagnóstico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea, tanto el
médico como el químico son responsables de la utilidad del examen. El médico desde la toma de
la muestra, la medición de la presión intracerebral, entre otras y el químico como realizador
directo de los análisis citoquímicos y microbiológicos del LCR.
Objetivo
El alumno conocerá la metodología a seguir para la realización del cultivo del LCR.
Material
1. Placas con gelosa sangre de carnero.
2. Placas con agar de Mac Conkey ,
3. Placas con Agar de Sal y Manitol
4. Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor).
5. Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6. Tubos con TSI, LIA, MIO, Citrato. Urea para pruebas bioquímicas
7. Tubos con base de CTA conteniendo glucosa, sacarosa, maltosa, fructuosa al 1%.
8. Portaobjetos.
9. Cubreobjetos.
10.Aceite de Inmersión.
11.Tinta china (Marca Pelikan)
12.Equipo de tinción de Gram
13.Taxos de bacitracina y optoquina.
14.Reactivo de Kovacs.
15.Pipetas Pasteur estéril.
16.Centrífuga.
Metodología
Toma de muestra
El LCR se obtendrá antes de instaurar cualquier terapéutica antibiótica.
LCR obtenido por punción lumbar:
1. Se localiza la zona elegida para la punción lumbar mediante palpación de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posición adecuada.
2. Se desinfecta con alcohol al 70% una zona de 10 cm de diámetro en el área elegida, la
aplicación del desinfectante se hace de forma concéntrica del centro a la periferia. Se
repite la operación con povidona yodada que se deja secar durante un minuto.
3. Realizar la punción entre los espacios intervertebrales L3-L4, LA-L5 o L5-S1, siguiendo
las normas de la más estricta asepsia (ver fig.9).
4. Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el líquido
cefalorraquídeo que se recogerá en tres tubos sin conservantes con tapón de rosca.
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquímico, el segundo para el estudio
microbiológico y el tercero para investigación de células (este suele ser el más transparente
aunque la punción haya sido traumática). No obstante, el tubo más turbio se enviará a
Microbiología.
Volumen mínimo
1. Para el estudio bacteriológico rutinario es suficiente 1 mL, aunque es preferible disponer
de volúmenes superiores.
2. Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales más por cada uno de
los estudios, siendo deseable llegar a los 10 mL.
3. Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL más.
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio, pues alguno de los agentes etiológicos
como S. pneumoniae, pueden lisarse rápidamente a partir de una hora tras su recogida. Si no es
posible se mantendrá en estufa a 35-37ºC y una parte se incubará en un frasco de hemocultivo
que se mantendrá en idénticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio. Si no se
dispone de estufas se mantendrá a temperatura ambiente. Nunca deberá refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N. meningitidis y H. influenzae.
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios. En caso de solicitar una
investigación se enviará en un medio de transporte de líquidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios.
Las muestras para el estudio de virus se enviarán en hielo, si el envío se retrasa más de 24
horas, se deberá de conservar a -70ºC.
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bacterémico se solicitarán simultáneamente
hemocultivos, pudiendo ser así mismo estudiadas las posibles lesiones metastásicas cutáneas.
Es necesario que el médico señale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales, micobacterias, anaerobios, hongos o virus).
Diagrama de trabajo
LCR
Sedimento Tinciones
Pruebas de identificación
Cuestionario
1. Describe las características físicas y químicas de un LCR normal.
2. ¿Cuáles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteración dependiendo del
microorganismo presente?
3. Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnóstico.
4. ¿Qué técnicas se utilizan para el cultivo del LCR?
5. ¿Cuáles son los principales patógenos que puedes encontrar en el LCR?
BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
PRÁCTICA No. 12
HEMOCULTIVO
Introducción
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios más solicitados en el laboratorio clínico
ya que de alguna manera apoya el diagnóstico de las infecciones sistémicas que presentan en su
evolución una etapa de bacteriemia o septicemia.
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infección activa y diseminada
en los tejidos. Esta situación puede originarse por:
a) BACTERIEMIA: Es un término que denota la presencia de bacterias en sangre, este
puede ser transitorio como un resultado de un fenómeno común como por ejemplo el
cepillarse los dientes, en la evolución de algunas enfermedades, en infecciones de vías
urinarias o en infecciones de heridas. La bacteriemia persistente o recurrente, es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenómeno, que en algunas
enfermedades da manifestaciones clínicas.
b) SEPTICEMIA: Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompañado por ataque al estado general, las bacterias se están multiplicando en forma
activa y liberando toxinas, originando manifestaciones clínicas de diversa magnitud (local
o sistémica).
c) PIEMIA: Formación de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano.
Objetivos
1. El alumno aprenderá los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre.
2. El alumno conocerá los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo.
3. El alumno desarrollará el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo, así como el
aislamiento e identificación del patógeno.
Material
1. Medio bifásico Ruiz Castañeda (frasco para hemocultivo)
2. Jeringas estériles y desechables de 5 o 10 mL
3. Agujas estériles calibre 21.
4. Torniquete y torundas con alcohol
5. Frasco con tintura de Iodo
6. Equipo de tinción de Gram
7. Placas de gelosa sangre de carnero
8. Placas de agar de Mac Conkey
9. Placas de Sal y Manitol.
10.Placas de Thayer- Martin.
11.Pruebas bioquímicas: TSI , MIO , LIA, citrato y urea
12.Microscopio.
13.Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina.
14.Taxos de oxidasa
Metodología
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra está indicado en casos de fiebre, hipotermia, sensación de enfriamiento,
escalosfríos, postración, hipotensión, fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible. Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril, antes de llegar al pico. El número e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
clínico del paciente así como de su gravedad.
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la acción de los antimicrobianos así como el
complemento y la fagocitosis.
Puede usarse médula ósea lo que aumentaría las posibilidades de obtener un buen diagnóstico.
1. Se selecciona el sitio de toma de muestra, debe evitarse tomar muestras de catéter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopunción.
2. El sitio de venopunción debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70% o con tintura de iodo en alcohol.
3. Hay que esperar que seque sin soplar.
4. Por ningún motivo se debe tocar el sitio después de que fue desinfectado.
5. Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapón con alcohol-iodo.
6. Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre, el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada. El volumen recomendado es: Niños de 1 a 3 mL, adultos de 5 ml en adelante.
7. Una vez tomada la sangre, se inyecta a la botella con una aguja nueva. Se debe mezclar bien
en forma homogénea para evitar que se coagule.
8. La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte sólida hacia abajo durante 20
minutos.
9. Se incuba la botella a 37ºC durante 6 semanas. En forma vertical.
Fig. Toma de muestra sanguínea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser:
Hemocultivo líquido
1. Se toma la muestra como se indicó anteriormente, se le añade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporción de 1:10 de sangre a medio.
2. Se incuba a 37ºC en condiciones aerobias.
3. Se hace una inspección de las botellas cuando menos una vez al día durante 3 días y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 días.
Método de Fluorescencia
1. Se toma la muestra como se indicó anteriormente.
2. Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente, este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias, anaerobias y hongos., están adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar él o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra.
3. Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ºC y rotando
suavemente.
4. En cuanto se presenta desarrollo bacteriano, el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano; esto lo realiza cada 10 min. Una alarma avisa al químico, la posición de la botella
con producción de CO2.
5. Se realizan las resiembras en los medios ya descritos.
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o más especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre,
en la mayoría de los casos se trata de alguna contaminación y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra.
Sí no hay crecimiento a los 45 días, hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella.
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etiológico con las pruebas requeridas por
el mismo.
Es importante mantener informado al médico cómo va el Hemocultivo de sus pacientes,
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva.
DIAGRAMA DE TRABAJO
Sangre
Tinción de
Gram
Pruebas de identificación
Cuestionario
1. Menciona otra técnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo.
2. ¿Por qué es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril?
3. ¿Sería normal encontrar dos o más bacterias en un hemocultivo?
4. ¿Por qué se recomienda cultivar la sangre en un medio bifásico y en qué consiste éste?
5. El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo, ¿sería clínicamente
importante?
BIBLIOGRAFÍA
1. Allen, BW., and Baker F.J. 1976. Micobacterias, Aislamiento, identificación y pruebas de
sensibilidad. Ed. Manual Moderno, S.A. México , D.F. P. 29 ,54 , 55, 68, 71.
2. Bailey and Scott. 2003. Diagnóstico Microbiológico. 12a. edición. Ed. Médica Panamericana
3. Cowan, S. 1974. Manual for Identification of Medical Bacteria. 2nd. Cambridge University.
4. Hernández–Méndez, J.T y colbs. 2003. Bacteriología Médica Diagnóstica. Instituto
Politécnico Nacional. 2ª. edición. Ed. Cuéllar.
5. Jawetz, Melnick y Adelberg. 2001. Microbiología Médica. 25ª. edición. Ed. Mc Graw Hill
6. Manual de Bioxón No .1
7. Manual de Difco
8. Koneman, E.W., Allen, S.D, Janda, W. 2005. Diagnóstico Microbiologico. Ed. Panamericana.
9. Calvin, M. K. 1993. Infecciones de las Vías Urinarias. Ed. Panamericana..
10.INDRE.1994. Manual de Enfermedades Tropicales. S.S.A. México
11.INDRE. 1992. Manual para el procedimiento e Identificación de Haemophilus. S.S.A México.
12.INDRE. 1995. Manual de Técnicas del Laboratorio. S.S.A. México.
13.I.P.N. 1994. Manual de Bacteriología Médica. México D.F.
14.Morales del Razo, D. 1982. Investigación de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
niños hospitalizados del H.U.P. Tesis. U.A.P.
15.Pérez, M.A. 1976. Apuntes de Bacteriología Médica y Veterinaria I.P.N.
16.Pérez, O.T. 1984. Aislamiento e Identificación y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas. Tesis U.A.P
17.Pérez, S.F. y Rivera, Y. P. 1985. Búsqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa. Tesis U.A.P.
18.Navarro, A.R. 1985. Investigación de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares.
Tesis U.A.P.
19.Téllez, C.O. 1984. Campylobacter jejuni. Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
U.A.P.
20.Zinsser. Microbiología. 17ª. ed. Ed. Médica Panamericana.
21.Edwards, P.R., Ewing, W.H. 1986. Identification of Enterobacteriaceae, 4thed. Burgess
Publishing .Co.
22.Organización Mundial de la Salud. 1991. Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones entéricas agudas Ginebra.
23.Giono, C.S. 1993. Diagnóstico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal. En:
Bacteriología Médica de García, E. y S. Giono. México D.F.
24.Blancarte, L.M., Anzaldo, G., Balandrano, S. Manual de técnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis. Publicación técnica del INDRE S.S.A. 41992.
25.De León I, Hernández, J. 1992. El diagnóstico de Chlamydia Trachomatis. 2ª.ed, México
26. Ruiz-Castañeda, M. 1954. Brucelosis. Prensa Med. México