Informe N° 6: Extracción Y Separación De Pigmentos

Vegetales En La Espinaca
Pinto Mora C1*. Acuña Guerrero E1*. Castillo Lasprilla D1*
Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia. Programa de química.
Facultad de ciencias. Av Central 39-115, Tunja Colombia.

1. Objetivos

1.1 General
Extraer y separar los diferentes pigmentos que se encuentran en la espinaca.
1.2 Específicos

- Identificar cada uno de los pigmentos encontrados.

- Determinar el número de componentes de una mezcla.
- Separar las mezclas completas de una muestra.
- Conocer la técnica de cromatografía de capa fina como método para la
separación de pigmentos de una planta

2. Introducción

Entre las características más notables de los vegetales lo que logramos distinguir
con gran caracterización es el color llamativo y estrechamente ligado a las
características propias de dichos vegetales. En el reino vegetal es probable
encontrar tanto matices y combinaciones de colores del espectro predominando
generalmente los colores primarios tales como lo son: verde, amarillo, rojo y azul,
contenidos en los vegetales por determinados compuestos químicos llamados
pigmentos.
Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes colores: clorofila-
a (verde intenso), clorofila-b(verde), carotenos (amarillo claro) y xantofilas (amarillo
anaranjado) en diferentes proporciones. Estos pigmentos como los más importantes
para la naturaleza son insolubles en agua pero si son solubles en solventes
orgánicos.
Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad en disolventes
apolares, lo que permite su separación cuando una solución de las mismas
desciende por a través de una columna de cromatografía verticalmente sobre una
película de un disolvente orgánico, ya que las más solubles se desplazarán a
mayor velocidad, pues acompañarán fácilmente al disolvente a medida que éste
desciende. Las menos solubles avanzarán menos en la columna. Aparecerán, por
tanto, varias bandas de diferentes colores (hasta siete o más, dependiendo del
material utilizado) que estarán más o menos alejados de la disolución alcohólica
según la mayor o menor solubilidad de los pigmentos. Estas bandas poseerán
diferente grosor, dependiendo de la abundancia del pigmento en la disolución.
La cromatografía consiste en la separación de mezclas completas de los productos,
aislamientos y purificación de los componentes individuales.
Cromatografía capa fina: la fase estacionaria se encuentra depositada en una
capa fina de un espesor uniforme sobre una placa de vidrio, plástico o lamina
metálica, la mezcla a analizar se deposita con un capilar a una pequeña distancia
del borde inferior de la placa.
Se introduce en una cubeta de fase móvil, cuando el disolvente se encuentre a los
0,5 cm de la capa superior, se saca y se deja secar, se maca hasta donde llego la
muestra.
3. Materiales y métodos
Extracción de pigmentos
Se lavó 5 gr de espinaca, se aplastaron en un mortero con 20 mL de etanol, luego
se transfirió a un vaso de precipitado se filtró recogiendo el filtrado donde estaban
los pigmentos, se pasa a un embudo de decantación y se le adiciona 30mL de éter
de petróleo se agito suavemente hasta que se visualizaron dos capas eliminando la
capa inferior, se realizaron dos lavados con 50mL de agua. Después de los lavados
se añade 40mL de metanol se desecha la capa inferior formada y a la capa superior
se le agrega una disolución de hidróxido de potasio en metanol al 30%, se le agrego
agua y se separaron las capas en vasos de precipitado.
Cromatografía de los pigmentos
De los diferentes pigmentos obtenidos en el procedimiento anterior con un tubo
capilar recolectamos una pequeña cantidad de cada pigmento y lo colocamos en
una placa de cromatografía y esta se colocó en un vaso de precipitado que contenía
30% de acetona y 70% de ciclo hexano y se observa la separación de los pigmentos

4. Resultados y discusión
 EXTRACTO CAPA COLORACION TIPO DE DIAGRAMA DEL PIGMENTO
PIGMENTO

Eter de Superior Verde Clorofila a

petroleo Amarillento

Eter de Inferior Verde azulado Clorofila b

petroleo

Eter etílico Superior Amarilla Xantofila

Eter etílico Inferior Verde Clorofila a

oscura

Tabla Nº1 Datos De La Extracción De Los Pigmentos

ACLARACIÓN:

Para determinar el tipo de clorofila presenten en cada uno de los extractos, hicimos uso de la
siguiente tabla, comparando así la coloración presentada en cada uno de los extractos con la
coloración real de los pigmentos.

Imagen Nº1 división de pigmentos teoría

Figura Nº2 división de pigmentos obtenida

En general, el color que presenta un determinado tejido u órgano vegetal, depende del
predominio de un pigmento o de la combinación de varios de ellos. A simple vista el color verde es
el mayoritario en las especies vegetales. Esta coloración es debida a la presencia de dos de los
principales pigmentos vegetales, la clorofila a y la clorofila b, que se encuentran en prácticamente
todas las plantas con semillas, los helechos, musgos y algas. La síntesis de la clorofila depende de
la presencia de la luz, por lo tanto, aunque podría fabricarse en diferentes órganos de las plantas,
su expresión dependerá de la exposición de cada tejido a la luz. Otros pigmentos también están
presentes en las plantas verdes, pero enmascarados por la clorofila. La síntesis, el tipo de
pigmento y su concentración en una planta pueden ir variando ya que responden a factores
externos como las condiciones climáticas o al estrés originado por el ataque de algún patógeno.
Esto explica la variación de color en especies forestales a lo largo de las estaciones del año. En el
otoño cuando la energía lumínica se reduce, disminuye también la producción de clorofila, por lo
cual se manifiestan los pigmentos naranja, morado y amarillo que estaban enmascarados por la
clorofila, ahora ausente.

CROMATOGRAFÍA

La muestra se aplica en disolución con un capilar de vidrio en un extremo de la placa, pero no

sobre el mismo borde. A continuación se introduce la placa en un tanque cerrado conteniendo un
disolvente o mezcla de disolventes (fase móvil), de manera que la placa quede apoyada sobre el
fondo y el punto con la muestra, por encima del nivel del líquido. El tanque contiene una
atmósfera saturada en el disolvente para lo cual se introduce un trozo de papel de filtro que debe.
La fase móvil asciende por capilaridad, de forma que se produce el mayor o menor avance de los
componentes de la mezcla, según su polaridad.

Para realizar el análisis de una muestra por CCF se utiliza un adsorbente sólido como gel de sílice
(SiO2. H2O) o alúmina (Al2O3), unido a una placa rectangular de vidrio o plástico. El adsorbente
sirve de fase estacionaria. La muestra se aplica en disolución con un capilar de vidrio en un
extremo de la placa, pero no sobre el mismo borde. A continuación se introduce la placa en un
tanque cerrado conteniendo un disolvente o mezcla de disolventes (fase móvil), de manera que la
placa quede apoyada sobre el fondo y el punto con la muestra, por encima del nivel del líquido. El
tanque contiene una atmósfera saturada en el disolvente para lo cual se introduce un trozo de
papel de filtro que debe. La fase móvil asciende por capilaridad, de forma que se produce el mayor
o menor avance de los componentes de la mezcla, según su polaridad.

CACULO DE Rf

Para hacer los siguientes cálculos los datos se tomaron de la placa mostrad en la Figura Nº2
𝐷𝐼𝑆𝑇𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝑅𝐸𝐶𝑂𝑅𝑅𝐼𝐷𝐴 𝑃𝑂𝑅 𝐸𝐿 𝑃𝐼𝐺𝑀𝐸𝑁𝑇𝑂
Rf =
𝐷𝐼𝑆𝑇𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝐷𝐸𝐿 𝐷𝐼𝑆𝑂𝐿𝑉𝐸𝑁𝑇𝐸
0,6
RfA = 5 = 0,12
1,3
RfB = 5 = 0,26
2,4
RfC = 5 = 0,48
 4,6
RfD = 5 = 0,92

Estos resultados nos indican que el pigmento a es el pigmento A es el más polar y este
corresponde a la clorofila b

5. Conclusiones

- Se vieron varias bandas de diferentes colores

que estuvieron más o menos alejados según la mayor o menor solubilidad
de los pigmentos en dicha disolución.
- Estas bandas tenían diferente grosor, dependiendo de la abundancia del
pigmento en la disolución.
- Se logró ver la separación de las capas al adicionarles los diferentes
reactivos para la obtención de cada pigmento

6. Bibliografía
[1] Nitración el benceno. Fecha de consulta: 04/11/2016. Disponible en:
http://www.quimicaorganica.org/benceno/277-nitracion-del-benceno.html
[2] Pigmentos Vegetales. Fecha de consulta: 26/11/2016. Disponible en:
http://blafar.blogia.com/2007/040901-los- pigmentos-vegetales.php
[3] Formulas químicas. Fecha de consulta: 05/11/2016. Disponible en:
http://es.webqc.org/balance.php