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Métodos cromatográficos
-Cromatografia de troca-iónica: a separação é baseada na
carga das proteínas, a qual varia em função do pH do meio
em que a proteína está solubilizada. Podem usar-se colunas
de troca catiónica ou de troca aniónica.
-Cromatografia de crivagem molecular (gel permeation ou
size exclusion): a separação é baseada no tamanho das
proteínas. As moléculas de menor dimensão, são capazes de
entrar nos poros da fase estacionária, apresentando maior
tempo de retenção. As proteínas de maior dimensão não
entram nos referidos poros e são eluídas mais rapidamente.
-Cromatografia em fase reversa: A separação é baseada na
afinidade da proteína para a fase estacionária,
nomeadamente das porções mais hidrofóbicas das moléculas.
Exemplo da separação das proteínas de soro de leite
10.0E+05
β-IgB
8.0E+05 leite de
6.0E+05
bovino
4.0E+05 α-la
2.0E+05
5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00
0.0E+00 (min)
10.0E+05
β-IgB leite de
8.0E+05 β-IgA ovino
6.0E+05
4.0E+05 α-la
2.0E+05
5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00
0.0E+00
10.0E+05 (min)
4.0E+05 α-la
2.0E+05
5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00
0.0E+00 (min)
β
k
α
β
Cromatograma
após prensagem e
sem adição de sal (T0). kα
Cromatograma
60 dias de maturação
Métodos electroforéticos
-Apresentam elevada sensibilidade e não requerem
reagentes especiais, nem equipamento muito dispendioso.
-Detecção de misturas de proteínas baseando-se na
diferença de mobilidade com base na relação carga massa.
-Electroforese nativa
-Electroforese na presença de dodecilsulfato de sódio
(SDS) análise de proteínas desnaturadas
-Focagem isoeléctrica (separação das proteínas usando o
ponto isoeléctrico) em geis de poliacrilamida contendo
ureia, é possível a diferenciação das proteínas.
-Electroforese capilar
Eficiente na análise das proteínas e na avaliação da
qualidade dos produtos lácteos. O princípio de separação
é a diferença de carga e tamanho e o ponto isoeléctrico
das proteínas.
Tipos de electroforese capilar mais utilizados:
electroforese capilar de zona (capillary zone
electrophoresis - CZE),
a electroforese capilar em gel (capillary gel electrophoresis
- CGE)
- a focagem isoeléctrica capilar (capillary isoelectric
focusing - CIEF).
Métodos imunológicos
Exemplos:
- Aminoácido limitante
- Complementaridade proteica