NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 1 6i68 RAPPORTO. N° 45/2017 VALUTAZIONE DI VACCINI INFANRIX EXA (GlaxoSmithKline SpA) e PRIORIX TETRA (GlaxoSmithKline SpA) TRAMITE INDAGINE NANODIAGNOSTICA DI MICROSCOPIA ELETTRONICA A SCANSIONE E MICROANALISI A RAGGI X. Materiale in esame : N. 2 VACCINI: INFANRIX HEXA e PRIORIX TETRA Responsabile: Dott.ssa Antonietta Gatti Firma: Data: 20 novembre 2017 Il presente rapporto si compone di 68 (sessantotto) pagine eccetto la copertina. Nota: | risultati sono da riferirsi solo al materiale esaminato ¢ per il tipo di applicazione richiesta. In caso di riproduzione del presente documento, il Committente s impegna a farlo solo in modo integrale. Un’eventuale riproduzione parziale deve essere autorizzata per iscritto da Nanodiagnostios srl.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 2 ci 68 INDICE Introduzione ... Material. Preparazione dei campiori.. Tipi di analisi eseguite.... . Risultati ... Reperto 1. INFANRIX — Lotto A21CC678B — scadenza 02/2018... Reperto 2 . PRIORIX Tetra - Lotto A71CB207A — scadenza 09/2018. 6. Conclusioni ARE NRSs 7. Riferimenti bibliografici : : : 65NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 3.di 68 1. Introduzione Nanodiagnostics srl @ un’azienda di consulenze scientifiche nei settori della medicina, dell'industria agroalimentare, cosmetica, farmaceutica e dell'ecologia. L’attivita principale @ lo studio di campioni bolo, microscopia elettronica ambientale con possibile identificazione di micro- e nanoparticelle inorganiche, cio@ di corpi estranei derivanti da un’esposizione ambientale subita dal paziente. Lo studio pud essere esequito in qualsiasi mezzo (tessuti biologici, alimenti, farmaci, cosmetici, campioni ambientali, ecc.) e/organici mediante tecnica innovativa di Liindagine si avvale principalmente di un microscopio elettronico a scansione a emissione di campo di tipo ambientale (Field Emission Gun-Environmental Scanning Electron Microscope, Quanta 200, FEI Company, Paesi Bassi). La metodica sviluppata permette di osservare campioni biologici senza alcuna ricopertura di carbone oppure di metalli preziosi quali 'Oro e il Palladio, al fine di renderli elettroconduttivi; cosa indispensabile con i normali microscopi elettronici a scansione. Applicando protocolli da adattare ad ogni tipo di osservazione, la tecnologia sviluppata in questo tipo di microscopio consente di esaminare campioni biologici, comprese cellule vive, senza intaccarne T'integrita, e per alcuni tipi di campioni di ripetere l'osservazione ogni volta lo si desideri. || principale obiettivo dell'indagine, lindividuazione di micro- e nano-particolato inorganico eventualmente contenuto nell’esemplare in studio, viene quindi raggiunto senza alcun processamento del campione. Ognuno dei preparati viene osservato in tutta la sua estensione sotto il microscopio. in diverse modalita: SED (elettroni secondari) e BSE (elettroni retrodiffusi), in basso vuoto (0,98 Tor), a 10-30 KV e con spot vari a seconda dell’ingrandimento (da 6 a 4), con una distanza dal campione di 10 mm. Sul particolato rilevato si punta la sonda microanalitica a raggi X per determinarne la composizione chimica. Una microanalisi a raggi X a dispersione d’energia (EDS, cioé Energy Dispersive Spectroscopy della EDAX, USA), misurando l'energia caratteristica che i vari elementi costituenti il campione restituiscono sotto forma di radiazioni X dopo essere stati colpiti dal fascio elettronico emesso dalla sorgente, fornisce la composizione chimica elementare del particolato rinvenuto. Ogni reperto @ stato debitamente fotografato ed archiviato insieme con lo spettro degli elementi individuatiNANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 4 ci 68 Lanalisi non @ distruttiva ed @ ripetibile, con la sola eccezione dei fluidi, spesso impossibili da recuperare. Lindagine pud essere svolta su campioni di origine biologica come biopsie, autopsie, liquidi organici o alimenti, ma é eseguibile anche su molt altri tipi di material quali, ad esempio, campioni ambientali, farmaci o cosmetici. Essendo 'oggetto principale dell'indagine di natura inorganica non biodegradabile, non ci sono difficolta nellindividuare particolato del genere sia in campioni freschi sia in campioni d’archivio. 2. Materiali Sono pervenuti al laboratorio due confezioni integre dei seguenti vaccini da parte del Committente: 1 - INFANRIX HEXA della ditta GlaxoSmithKline Biologicals s.a. (lotto A21CC678B - scadenza 02/2018) commercializzato in Italia. La confezione contiene un flaconcino con polvere, una siringa preriempita con una sospensione da 0,5 ml e due aghi sterili per somministrazione intramuscolare. Si tratta di un vaccino esavalente antidifterico, antitetanico, antipertossico (componente acellulare), antiepatite B (rDNA), antipoliomielitico (inattivato) e anti- Haemophilus influenzae tipo b coniugato. Alcuni di questi antigeni sono adsorbiti su fosfato di Alluminio [AIPOs] (0,32 mg Al°*) e Alluminio idrossido idrato [Al(OHs)] (0,5 mg Al**). Viene inoltre dichiarata la presenza di lattosio anidro, cloruro di Sodio, Medium 199 (aminoacidi, sali minerali, vitamine) e acqua per preparazioni iniettabili I campione @ stato ricodificato presso il nostro laboratorio come STD 1270,NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: r ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 5 di 68 Infanrix Lotto/Scad. Aza 02-2018 2 - PRIORIX TETRA della ditta GlaxoSmithKline S.p.A. (lotto A71CB207A - scadenza 09/2018) commercializzato in Italia. La confezione contiene un flaconcino con polvere, una siringa preriempita con una sospensione da 0,5 ml e due aghi sterili per somministrazione intramuscolare. Si tratta di un vaccino tetravalente contro morbillo, parotite, rosolia e varicella. Alcuni di questi antigeni sono adsorbiti su fosfato di Alluminio [AIPO,] (0,32 mg Al) @ Alluminio idrossido idrato [Al(OHs)] (0.5 mg Al’*). Viene inoltre dichiarata la presenza di lattosio anidro, cloruro di Sodio, Medium 199 (aminoacidi, sali minerali, vitamin) e acqua per preparazioni iniettabil Il campione @ stato ricodificato presso il nostro laboratorio come STD 1271NANODIAGNOSTICS sri Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Rapporto n°45/2017 Pag 6 di 68 Priorix TetrO'aas Polvere e solvente per soluzione iniettabile in siringa preriem Vaccino (vivo) antimorbillo, antiparotite, antirosola e antivaricelia 1 dose (0,5 ml) 1 flaconcino con polvere 4 siringa preriempita con solvente 2aghi Dopo ia ricosttuzlone, 1 dose (0,5 mip contione ‘rus de! morbilo coppo Schware (vivo, aan) ‘dela parotite coppo FT 4385, derivato dal coppo Jory! Lynn (vivo, atteneth 4 po BA27/3) (vivo, attonuato) on mani 1089 COIDy ‘an meno 1044 CAO from nero 1088 CCID, ‘hon mene di 1089 PFUNANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: nano ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 7 di 68 3. Preparazione dei campioni Presso il laboratorio Nanodiagnostics i vaccini sono stati conservati in frigorifero fino alla procedura di allestimento. Prima della preparazione é stata ulteriormente verificata l'integrita della confezione. Successivamente la confezione @ stata aperta da personale idoneo all'interno di una cappa a flusso laminare. Dopo avere connesso la siringa all’ago, il reperto @ stato agitato orizzontalmente per due minuti al fine di rendere la soluzione omogenea all'interno della siringa e per simulare la procedura suggerita sulla confezione prima della somministrazione ai pazienti. E stata poi depositata una goccia di liquido (circa 30 microl) su filtro in nitrocellulosa montato su un disco di Carbonio adeso ad un supporto d’Alluminio per la microscopia elettronica. 11 campione cosi preparato @ stato posto in adeguato contenitore pulito lasciato asciugare a temperatura ambiente sempre all'interno della cappa a flussoNANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 8 di 68 laminare nel contenitore chiuso. Nello stesso tempo si é preparato un identico supporto su cui non @ stato depositato niente sempre all'interno dello stesso contenitore come riferimento e controllo. Dopo circa 24 ore si 6 proceduto allanalisi al microscopio elettronico senza nessun ulteriore trattamento. Tutte le procedure di allestimento sono state eseguite in ambiente protetto da inquinamento ambientale e condotte con strument pulit . Tipi di analisi eseguite Lo studio del reperto in esame ha verificato 'eventuale presenza di corpi estranei nel tessuto biologic, mediante tecnica di microscopia elettronica a scansione ambientale (FEG — ESEM Quanta 200, FE!), mentre la microanalisi a raggi X (EDS) ha valutato la composizione chimica come descritto al paragrafo 1. Nessun processamento é stato eseguito sulla sezione del reperto che é stato, quindi, esaminato tal quale. La metodica, risultato del progetto comunitario europeo QLRT-2002-147 (Nanopathology), permette di valutare anche la presenza di particelle di dimensioni nanometriche (vedi riferimenti bibliografici 1- 39). 5. Risultati Le analisi di microscopia elettronica hanno messo in evidenza la presenza nella sezione di particolato con composizione chimica diversa (vedi Tabelle). | tisultati_ morfologici e chimici del campione sono mostrati nelle immagini successive. | picchi dello spettro che non riportano indicazioni dell'elemento a cui si riferiscono sono picchi secondari di un elemento gia segnalato in coincidenza del picco principale. Nota: l'elenco degli elementi nelle tabelle osserva il criterio di maggior rappresentativita dell'elemento nello spettro EDS. La successione degli elementi inizia da quelli con il picco EDS pil alto.NANODIAGNOSTICS sri Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Rapporto n°45/2017 Pag 9 ci 68 Reperto 1. INFANRIX — vaccino commercializzato in Italia Lotto A21CC678B — scadenza 02/2018 La tabella riassume tutte le analisi pid significative eseguite sul campione. Tabella |. Analisi EDS del reperto 1. i vaccino su filtro, parte chiara - 63x ‘AIOPCINaCK vaccino su filtro, parte scura - 63x OAICCIPNa 2 63x immagine morfologica 3 2113x immagine morfologica 4 250x immagine morfologica 5 particella da 6 um - 4182x TiAIONaCPC 6 particella da 7 um - 3825x OsiMgCNaCiFe 7 particelle - 554x AIOCPCINaS 8 particelle - 2433x OAICCIPNa 9 particelle - 1024x OAICCIPNa 10 particelle - 427% AIOCIPNaCS ita ageregato - 3928x COAISiCaSCl 2 particelle - 937x AIOCIPNacs TOAICNNaPCI 2B particella da 1 um - 12187x TICNONaAIPCI 14 particella da 1 um ~ 7699 ‘OAICNaPCI COCINaNAIPS 15 sferula 0,2 um — 2909 COCIFeNaSiNAl 16 nanoparticella 0,2 4m - 59362x COCIFEeNASINAI 7 0.1m 224258x COCINaAUSi 18 vaccino su filtro - 80x immagine morfologica 19 materiale organico su AICIPNa - 300x immagine morfologica 20 particella da § um - 4417x OSiMgCCINaFe 21 sferule da 2,5 ym -6379x COCINaN 22 100x immagine morfologica 23 particella da 10 um - 3941x OCMC! particella da 7 um e AuCOCuCIAgZnN o particelle da 3 e 5 um -1826x SOcAINaE 25 particella da 4 um - 12284x AuCOCUCIAgAIZnN particella 30 um e oeeens 26 nanoparticella - 2696x CCIONaAIPSISKCaFe OCCINaAIP.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 10 di68 Analisi 1 della tabella |. La microfotografia mostra una zona del campione a basso (63x) ingrandimento in cui @ visibile il vaccino applicato su filtro. L'analisi EDS mostra che la parte apparentemente chiara @ composta da Alluminio, Ossigeno, Fosforo, Cloro, Sodio, Carbonio e Potassio (A) e la parte apparentemente scura @ composta da Ossigeno, Alluminio, Carbonio, Cloro, Fostoro e Sodio (B)..NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: r ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 11 di68 Analisi 2 della tabella |. La microfotografia mostra una zona del campione a basso ingrandimento (63x). Le frecce indicano il bordo della goccia depositata sul filtro. Analisi 3 della tabella |. Lmmagine mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (2.113x). Sono evidenti delle crescite di cristalli di Sodio e Cloro.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: r ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 124168 Anali i 4 della tabella |. La figura mostra una zona del campione a basso ingrandimento (250x) ove sono visibili crescite di cristalli di cloruro di Sodio (da soluzione salina).NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 13 di68 Analisi 5 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (4.182x) in cui é visibile una particella da 6 micron. L'analisi EDS mostra che essa é composta da Titanio, Alluminio, Ossigeno, Sodio, Carbonio, Fosforo, Cloro.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 14 di68 Analisi 6 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (3.825x) in cul visibile una particella da 7 micron. L’analisi EDS mostra che essa 6 composta da Ossigeno, Silicio, Magnesio, Carbonio, Sodio, Cloro e Ferro.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 15 di68 Analisi 7 della tabella |. La figura mostra una zona del campione a medio ingrandimento (54x). L’analisi EDS mostra una composizione di Alluminio, Ossigeno, Carbonio, Fosforo, Cloro, Sodio e Zolfo. Questo spettro rappresenta il contenuto inorganico del vaccino, cio fosfato di Alluminio, cloruro di Sodio e Zolto.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 16 di 68 Analisi 8 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (2.433x) in cui sono visibili particelle. L’analisi EDS mostra che esse sono composte da Ossigeno, Alluminio, Carbonio, Cloro, Fosforo e Sodio.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel. +89 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: nfo@nanodiagnostics.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 17 di 68 Analisi 9 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (1.024x) in cui sono visibili particelle. L’analisi EDS mostra che esse sono composte da Ossigeno, Alluminio, Carbonio, Cloro, Fosforo e Sodio.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 18 di 68 i” =m =~ SCmeSCaSmeSSmk Analisi 10 della tabella |. La figura mostra una zona del campione a medio ingrandimento (427x) in cui sono visibili particelle. L’analisi EDS mostra che esse sono composte da Alluminio, Ossigeno, Cloro, Fosforo, Sodio, Carbonio e Zolfo. Si tratta ancora di elementi dichiarati dal Produttore.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 19 di68 Analisi 11 della tabella |. Si tratta di un aggregato forse proteico e, dunque, organico che contiene micro- e nanodetriti. L'analisi EDS mostra che essi sono composti da Carbonio, Ossigeno, Alluminio, Silicio, Calcio, Zolfo e Cloro.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 20 di 68 Analisi 12 della tabella |. La microfotografia mostra una zona del campione a medio ingrandimento (937x) in cui é visibile un substrato omogeneo. L’analisi EDS mostra una composizione di Alluminio, Ossigeno, Cloro, Fosforo, Sodio, Carbonio e Zolfo.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798776 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: inlo@nanodiagnostics, ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 21 di68 Analisi 13 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (12.187x) in cui é visibile all’interno del substrato omogeneo di Analisi 12 una particella da 1 micron. L'analisi EDS mostra che essa & composta da Titanio, Ossigeno, Aluminio, Carbonio, Azoto, Sodio, Fosforo Cloro (A). Lo spettro B @ la sottrazione matematica degli spettri precedenti ed identifica la particella come composta di Titanio, Carbonio, Azoto e Ossigeno.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 22 di 68 iam ~=~sa~SCm SCS] Analisi 14 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (7.699x) in cui @ visibile una particella da 1 micron. L’analisi EDS mostra che essa & composta da Ossigeno, Alluminio, Carbonio, Sodio, Fosforo ¢ CloroNANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 23 di 68 Analisi 15 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (2.909x) in cui é visibile una sferula di 0,2 micron. L’analisi EDS mostra che essa @ composta da Carbonio, Ossigeno, Cloro, Sodio, Azoto, Alluminio, Fosforo, e Zolfo (A) mentre la zona circostante ¢ composta da Carbonio, Ossigeno, Cloro, Ferro, Sodio, Silico, Azoto, Alluminio (B). Si tratta di una particella di natura ferrosa.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 24 i 68 Analisi 16 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (59.362x) in cui é visibile una nanoparticella da 0,2 micron. L’analisi EDS mostra che essa € composta da Carbonio, Ossigeno, Cloro, Ferro, Sodio, Silicio, Azoto e Aluminio.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 25 di 68 Analisi 17 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (224.258x) in cui é visibile una nanoparticella di 0,1 micron. L’analisi EDS mostra che essa @ composta da Carbonio, Ossigeno, Cloro, Sodio, Oro e Silicio.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: nano ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 26 di 68 Analisi 19 della tabella |. La figura mostra una zona del campione a basso ingrandimento (00x) dello strato compatto dopo disidratazione.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 27 di 68 Analisi 20 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (4.417x) in cui @ visibile una particella da 5 micron. L’analisi EDS mostra che essa & composta da Ossigeno, Silicio, Magnesio, Carbonio, Cloro, Sodio, Ferro.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 28 di 68 Na t= 20 ~=C«am SCC Analisi 21 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (6.379x) in cui sono visibili delle sferule da 2,5 micron. L’analisi EDS mostra che esse sono composte da Carbonio, Ossigeno, Cloro, Sodio e Azoto. Potrebbe trattarsi di un artefatto del filtro sottostante.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: r ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 29 di 68 Analisi 22 della tabella |. La figura mostra una zona del filtro a basso ingrandimento (100x). | punti neri identificano zone che sono gia state analizzate dal fascio elettronico.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 90 di 68 Mg a Analisi 28 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (3.941%) in cui é visibile una particella da 10 micron. L'analisi EDS mostra che essa composta da Silicio, Ossigeno, Carbonio, Magnesio e Cloro. Si tratta di un vetro.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 31 dies Analisi 24 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (1.825x) in cui sono visibili una particella da 7 micron e alcune particelle da 3 e 5 micron. Lanalisi EDS mostra che esse sono composte da Oro, Carbonio, Ossigeno, Rame, Cloro, Argento, Zinco e Azoto (A) e da Silicio, Ossigeno, Carbonio, Alluminio, Sodio e Cloro (B)NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 92 di 68 100200200400 S00 an 74000900 100n 1100 t200 1800 MeV Analisi 25 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (12,284x) in cui é visibile una particella da 4 micron. L'analisi EDS mostra che essa é composta da Oro, Carbonio, Ossigeno, Rame, Cloro, Argento, Alluminio, Zinco e Azoto.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 39 di 68 Analisi 26 della tabella |. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (888x) in cui sono visibili una particella da 30 micron e una nanoparticella. L’analisi EDS mostra che la particella in altro @ composta da Ossigeno, Alluminio, Silicio, Calcio, Carbonio, Cloro e Sodio (A) mentre quella in alto @ composta da Carbonio, Cloro, Ossigeno, Sodio, Alluminio, Fosforo, Silicio, Zolfo, Potassio, Calcio e Ferro (B): Lo spettro C indica la composizione del substrato che @ composto da Ossigeno, Carboni, Sodio, Alluminio e Fosforo (C).NANODIAGNOSTICS sri Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel. +89 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: nfo@nanodiagnostics.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Rapporto n°45/2017 Pag 94 di 68 Reperto 2. PRIORIX Tetra — vaccino commercializzato in Italia Lotto A71CB207A — scadenza 09/2018 La tabella riassume tutte le analisi pid significative eseguite sul campione. Tabella Il. Analisi EDS del reperto 2. 1 vaccino su filtro - 70x immagine morfologica 2 aggregato - 3117x cuca COCIKCaNaAISi 3 particella da 50 yum - 1659x SiOCCaAICI 4 particella da 20 um - 4000x SiOCCaAICI 5 particella da 4 um - 6906x SIOCAIKNaCIBa/COCINaN 6 aggregato - 8295x COAISiCascl 7 ageregato - 2006x ‘COCaMgAlSiCISP 123x . 8 particolare - 2004x COCaMgAlsiCisP 9 9384x COCaAICINaMgsiPS 10 particella da 18 um - 3907x OSiMgCFe 1 207« immagine morfologica 12 particella da 15 yum - 5040x caOCAl INaP B particella da 5 um - 6345x OCAISICICaNaMeN 14 particella da 8 um - 4112x CaOCAISiCINaP 15, particella da 50 um - 2378x CaOCAISiCINaP 16 acex COSICICaAUAgAINaCUN nano 0,4 um 4537 caOCAl INaP 7 aggregato da 20 um - - 2813x = OCAIsiCICaNaMg 18 aggregato da 20 um - 5053x 19 177K immagine morfologica 20 particella da 8 um - 4109x COFeTISiCrCIMnNiNNaAlS ee particella da 2 um - 36987x COFeCrCISiNisNaMn 2 = (CFeOCrSiCIMNNiAISTIN 18 debris minore di 1 um - 3006x B vari detriti d'acciaio - 2000x CFeOCrSiCIMnNiAISTIN 24 vari detriti d'acciaio - 2098x CFeOCrSiCIMnNiAISTil 25, 90697 COCINaNANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: nano ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 95 di 68 575x - 2600x 26 _- COSiFeCrNicl 6064x 27 5927x COFeCrCISiNiSNaMn 28 3893x OcFecl Analisi 1 della tabella II. La figura mostra una zona del campione a basso ingrandimento (700x)NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 96 di 68 Analisi 2 della tabella Il. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (3.117x) in cui é visibile un aggregato di 40 micron contenente polveri submicroniche. Lanalisi EDS mostra che esso @ composto da Carbonio, Ossigeno, Calcio, Silicio, Alluminio, Cloro e Potassio (A) e da Carbonio, Ossigeno, Cloro, Potassio, Calcio, Sodio, Alluminio e Silicio (B). Si tratta di particelle esogene a base di Calcio.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 37 di 68 Analisi 3 della tabella Il. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (1.659X) in cui @ visibile una particella da 50 micron. L’analisi EDS mostra che essa @ composta da Silicio, Ossigeno, Carbonio, Calcio, Alluminio e Cloro.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 38 di 68 os = 1s 270 S360 SOS] 72790 Analisi 4 della tabella II. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (4.000X) in cui @ visibile una particella da 20 micron. L’analisi EDS mostra che essa é@ composta da Silicio, Ossigeno, Carbonio, Calcio, Alluminio e Cloro.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 39 di 68 Analisi 5 della tabella II. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (6.906x) in cui @ visibile una particella da 4 micron. Le analisi EDS mostrano che la particella & composta da Silicio, Ossigeno, Carbonio, Alluminio, Potassio, Sodio, Cloro & Bario (Fig. A) e che lo spettro del supporto @ composto da Carbonio, Ossigeno, Cloro, Sodio e Azoto (Fig. B).NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 40 di 68 Analisi 6 della tabella II. La figura mostra una zona de! campione ad alto ingrandimento (8.295X) in cui @ visibile un aggregato di 20 micron contenente polveri di Carbonio, Ossigeno, Alluminio, Silicio, Calcio, Zolfo e Cloro.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 41 dies Analisi 7 della tabella II. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (2.006X) in cui é visibile un aggregato da circa 50 micron. L'analisi EDS mostra che esso composto da Carboni, Ossigeno, Calcio, Magnesio, Alluminio, Silicio, Cloro, Zolfo e Fosforo.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 42 di 68 ca omega OFC Analisi 8 della tabella II. La figura mostra una zona del campione a basso (143x) e ad alto ingrandimento (2.004x) in cui é visibile un aggregato di circa 80micron. L’analisi EDS mostra che esso & composto da Carbonio, Ossigeno, Calcio, Magnesio, Alluminio, Silicio, Cloro, Zolfo e Fosforo.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties i ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 43 di 68 Analisi 9 della tabella Il. La figura mostra una zona de! campione ad alto ingrandimento (9.384X) in cui sono visibili due detriti rispettivamente da 5 e 7 micron. L’analisi EDS mostra che essi sono composti da Carbonio, Ossigeno, Calcio, Alluminio, Cloro, Sodio, Magnesio, Silicio, Fosforo e Zolfo.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel. +89 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: nfo@nanodiagnostics.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 44 di 68 Analisi 10 della tabella II. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (3.907X) in cui é visibile una particella da 15 micron. L’analisi EDS mostra che essa @ composta da Ossigeno, Silicio, Magnesio, Carbonio, Ferro.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: nano ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 45 di 68 Analisi 11 della tabella ||. La figura mostra una zona del campione a basso ingrandimento (180x). Si noti il bordo della goccia di vaccino depositata sul filtro.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 46 di 68 Analisi 12 della tabella Il. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (5.040X) in cui é visibile una particella da 20 micron. L’analisi EDS mostra che essa é composta da Calcio, Ossigeno, Carbonio, Alluminio, Silicio, Cloro, Sodio e Fosforo.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 47 di 68 em 1g ASO Sa] Analisi 13 della tabella Il. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (6.345X) in cui é visibile una particella da 5 micron. L’analisi EDS mostra che & composta da Ossigeno, Carbonio, Alluminio, Silicio, Cloro, Calcio, Sodio, Magnesio e Azoto.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 48 di 68 Analisi 14 della tabella Il. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (4.112X) in cui @ visibile una particella da 8 micron. L’analisi EDS mostra che essa @ composta da Calcio, Ossigeno, Carbonio, Alluminio, Silicio, Cloro, Sodio e Fosforo.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel. +89 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: nfo@nanodiagnostics.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 49 di 68 Analisi 15 della tabella Il. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (2.378X) in cui é visibile una particella da 60 micron. L’analisi EDS mostra che essa @ composta da Calcio, Ossigeno, Carbonio, Alluminio, Silicio, Cloro, Sodio ¢ Fosforo.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 50 di 68 20 40 10 0 10.10 1210 ev Analisi 16 della tabella Il. La figura mostra una zona del campione a basso (426x) e ad alto ingrandimento (4.537X) in cui @ visibile una nanoparticella da 0,4 micron. L’analisi EDS mostra che essa 6 composta da Carbonio, Ossigeno, Silicio, Cloro, Calcio, Oro, Argento, Alluminio, Sodio, Rame e Azoto.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 51 dies Analisi 17 della tabella II. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (2.813x) in cui @ visibile un aggregato di 30 micron. L’analisi EDS mostra che esso @ composto da Carbonio, Ossigeno, Calcio, Alluminio, Silicio, Cloro, Sodio e Zolfo (A) e da Ossigeno, Carbonio, Alluminio, Silicio, Cloro, Calcio, Sodio e Magnesio (B).NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: r ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 52 di 68 Analisi 18 della tabella II. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (6.053x) in cui é visibile un aggregato da 20 micron composto da polvere di dimensione micronica e submicronica.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: r ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 53 di 68 Analisi 19 della tabella II. La figura mostra una zona del campione a basso ingrandimento (177x). E' visibile un bordo della goccia.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 54 di 68 er er er er er eer rr Analisi 20 della tabella Il. La figura mostra ad alto ingrandimento (4.109X) una zona del campione in cui é visibile una particella da 8 micron. L’analisi EDS mostra che essa @ composta da Carbonio, Ossigeno, Ferro, Titanio, Silicio, Cromo, Cloro, Manganese, Nichel, Azoto, Sodio, Alluminio e Zolfo. Si tratta di un acciaio.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tel, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 55 di 68 a a a a cs Analisi 21 della tabella Il, La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (86.897) in cui é vi composta da Carbonio, Ossigeno, Ferro, Cromo, Cloro, Silicio, Nichel, Zolfo, Sodio & Manganese. Si tratta di una particella d’acciaio. ile una particella da 2 micron. L’analisi EDS mostra che essa &NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 56 di 68 100 2002004005] 00 700.009.0000 1.00ke Analisi 22 della tabella Il. La figura mostra una zona del campione a medio (605x) e ad alto ingrandimento (3.006X) in cui sono visibili 18 detriti di dimensioni inferiori al micron. Lanalisi EDS mostra che essi sono composti da Carbonio, Ferro, Ossigeno, Cromo, Silicio, Cloro, Manganese, Nichel, Alluminio, Zolfo, Titanio e Azoto. Si tratta di detriti di acciaio.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 57 di68 Analisi 23 della tabella Il. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (2.000X) in cui sono visibili vari detriti di acciaio di dimensioni di 2 micron. L’analisi EDS mostra che essi sono composti da Carbonio, Ferro, Ossigeno, Cromo, Silicio, Cloro, Manganese, Nichel, Alluminio, Zolfo, Titanio e Azoto.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 58 di 68 to 200 (smo) em)” Analisi 24 della tabella Il. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (2.098X) in cui sono visibili vari detriti di acciaio di dimensioni intorno ai 2 micron. L’analisi EDS mostra che essi sono composti da Carbonio, Ferro, Ossigeno, Cromo, Silicio, Cloro, Manganese, Nichel, Alluminio, Zolfo, Titanio e Azoto.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 59 di 68 Analisi 25 della tabella II. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (90,697x) in cui @ visibile un aggregato proteico contenente cristalli di Sodio-Cloro Lanalisi EDS mostra una composizione di Carbonio, Ossigeno, Cloro e Sodio.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 60 di 68 Analisi 26 della tabella II. La figura mostra una zona del campione a medio (575x) e ad alto ingrandimento (2.600X e 6.064x) in cui sono visibili molte particelle di dimensioni da 8 a1 micron. L’analisi EDS mostra che esse sono composte da Carbonio, Ossigeno, Silicio, Ferro, Cromo, Nichel e Cloro.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel. +89 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: nfo@nanodiagnostics.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 61 di 68 Analisi 27 della tabella ll. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (6.927%) in cui @ visibile una particella delle dimensioni di 8 micron. L’analisi EDS mostra che essa @ composta da Carbonio, Ossigeno, Ferro, Cromo, Cloro, Silicio, Nichel, Zolfo, Sodio e Magnesio.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L - 41087 San Vito di Spllamberto (Modena) Tel. +89 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: nfo@nanodiagnostics.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 62 di 68 ‘mo 2m ~~ «00 =Car Analisi 28 della tabella Il. La figura mostra una zona del campione ad alto ingrandimento (3.893x) in cui é visibile una particella delle dimensioni di 4 micron. L’analisi EDS mostra che essa @ composta da Ossigeno, Carbonio, Ferro e Cloro.NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°45/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 63 di 68 6. Conclu: | campioni hanno mostrato la presenza di elementi che fanno parte delle sostanze dichiarate nei bugiardini, Tra esse Sodio-Cloro e Alluminio, Si sono rilevati, tuttavia, numerosi corpi estranei solidi e inorganici non dichiarati. In dettaglio si é constatato che dopo deposizione della goccia di vaccino su un substrato, disidratandosi, si formano cristalli di sali di Cloro-Sodio e di Aluminio. Le immagini mostrano che, dopo disidratazione, la goccia di vaccino si trasforma in una sorta di tappeto di sali di Cloruro di Sodio e Fosfato di Alluminio. Per quanto riguarda 'Infanrix, occorre pensare che [Alluminio @ da sempre sospettato di essere una neurotossina legata a patologie come l'Alzheimer (3,4). Trattandosi di un prodotto destinato alla somministrazione parenterale, non @ chiaro se la quantita di Alluminio possa eccedere Ia soglia di sicurezza, e questo in particolar modo nei neonati ove il rapporto concentrazione/peso corporeo & molto sfavorevole. Inoltre, si @ valutata la presenza di corpi estranei. Polveri non dichiarate come quelle di Titanio (Analisi n. 5, 13, 18bis) 0 di Ferro-Silicio (Analisi n. 15, 16), di Silicio (Analisi n. 20, 23) e di Calcio-Silicio (Analisi n. 11). Rara e di assi difficile comprensione & la presenza di particelle di Oro-Rame-Argento, ecc. (Analisi n. 24, 25) II secondo vaccino, il Priorix, sostanzialmente diverso dal precedente vaccino Infarix. In questo non si presenta uno strato uniforme di sali di Sodio-Cloro e Alluminio- Fosforo. Sul filtro ove si @ depositata la goccia di vaccino si notano detriti ed aggregati di elementi non inclusi nella descrizione del bugiardino. Si notano detriti di : - acciaio (Analisi n. 21, 22, 23, 24, 27) - Ferro (Analisi n. 28) - Composti a base di Silicio, Alluminio e Calcio (Analisi n. 3, 4, 5, 6, 17bis) - Sllicio-Ferro-Cromo (Analisi n. 26) - Sllicio-Magnesi - abase di Calcio-Silicio-Alluminio (Analisi n. 7, 8, 9, 12, 13, 15, 17). forse talco (Analisi n. 10)NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°11/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 64 di 68 Sono degni di nota i detriti di Analisi 16 che sembrano essere dei silicati contenenti anche Oro e Argento e l'analisi n. 20 contenente Ferro-Silicio-Titanio, Cromo-Cloro, ecc. La composizione & molto particolare e si tratta di associazioni di elementi che non esistono nei manuali dei materiali conosciuti e che sembrano derivare da una combustion accidentale non controllata. Si ricorda che, per la loro composizione, questi non sono materiali biodegradabili. Sono, cioe, biopersistenti e, una volta iniettati, rimangono nel corpo, laddove il sangue li ha trasportati e depositati (5-19). E gia stato dimostrato che polveri microniche o submicroniche, se respirate, possono superare la barriera polmonare in tempi brevi e finire nel sangue da cui sono veicolate verso qualunque organo (20). A maggior ragione, polveri iniettate possono entrare direttamente in circolo. E' gia stato dimostrato come un accumulo di corpi estranei possa indurre una reazione biologica che esita in patologie di origine flogistica (21-35) caratteristiche, appunto, di questo tipo di entita. Cosi gli agglomerati identificati possono innescare reattivita biologiche. Le particelle di dimensione ridotta possono venire incamerate da cellule ed interagire direttamente con il DNA danneggiandolo. (32-35). Le polveri a base di Ferro-Cromo-Nichel, inoltre, possono andare incontro a corrosione, rilasciando in questo modo prodotti di ossidazione tossici. In particolare, la corrosione delle polveri di acciaio induce, oltre al rilascio di ioni Ferro, quello di ioni Cromo e Nichel la cui tossicita @ ben nota e ampiamente riportata dalla letteratura mondiale (36- 38). Non vi sono sufficienti test in-vivo che correlano i sali di Alluminio con patologie neurologiche e, soprattutto, non sono del tutto noti i meccanismi coinvolti. Rimane pur sempre il fatto che Alluminio @ un metallo che non appartiene al normale metabolismo umano. Per la loro tossicita le polveri di dimensione pari o inferiore ai 2,5 micron sono gia state definite dall'Organizzazione Mondiale della Sanita e dall'Agenzia Internazionale per la Ricerca sul Cancro (IARC) cancerogeni di classe 1, vale a dire induttori sicuri di malattie tumorali (39).NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°11/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 65 di 68 7. Riferimenti bibliografi 1. A.M. Gatti, S. Montanari “Nanopathology” Ed. Pan Stanford 2008, 1-212. 2. AM. Gatti, S. Montanari "Case studie in nanotoxicology and particle toxicology” Elsevier , USA, 015; 1-299. 3. Exley C’ What is the risk of aluminium as a neurotoxin? Expert Rev Neurother. 2014 Jun;14(6):589-91. doi: 10,1586/14737175.2014.915745. Epub 2014 Apr 30,)— 4. Klotz K, Weistenhéfer W, Neff F, Hartwig A, van Thriel C, Drexler H. The Health Effects of Aluminum Exposure.Dtsch Arztebl Int. 2017 Sep 29;114(89):653-659. 5. AM. Gatti, S. Montanari, A. Gambarelli, F. Capitani, R. Salvatori In-vivo short- and long-term evaluation of the interaction material-blood Journal of Materials Science Materials in Medicine, 2005, 16, 1213-19 6. A.M. Gatti, S. Montanari, E. Monari, A. Gambarelli, F. Capitani, B. Parisini Detection of micro and nanosized biocompatible particles in blood. J. of Mat. Sci. Mat in Med. 2004, 15 (4): 469-472. 7. AM. Gatti, S. Montanari, Retrieval analysis of clinical explanted vena cava filters J. of Biomedical Materials Research: Part B. 2006, 7B, 307-314, 8. AM. Gatti, S. Montanari, Risk assessment of micro and nanoparticles and the human health, capitolo di H.S. Nalwa - Handbook of Nanostructured biomaterials and their applications - American Scientific Publisher USA 2005, cap. 12, 347-369. 9. K. Peters, R. Unger, A.M. Gatti, E. Monari, J. Kirkpatrick Effects of nano-scaled particles on endothelial cell function in vitro: Studies on viability, proliferation and inflammation, J. of Material Science: Mat. in Medicine 2004, 15 (4), 321-325 10.A.M. Gatti, M. Ballestri, A. Bagni, Granulomatosis associated to porcelain wear debris, American Journal of Dentistry 2002, 15(6): 369-372. 11.A.M. Gatti Biocompatibility of micro- and nano-particles in the colon (part Il) Biomaterials 2004, vol.25, 3, Feb 385-392. - 12.8. Montanari, A.M. Gatti Nanopathology and nanosafety. Proceedings of the international School on advance material science technology VII Course, “Nanotechnologies for drug delivery and medical applications. lesi, settembre 2005NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°11/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 66 di 68 13.G. Barbolini, A.M. Gatti, Nanopatologia. Trattato di Istopatologia. Ed. Piccin Nuova Libraria Padova 2006, Cap.1.5 pag 75-80 14. G. Barbolini, A.M. Gatti, B. Murer, Pleura, Trattato di Istopatologia. Ed. Piccin Nuova Libraria Padova 2006, Cap 8.4 pag 1081-1098 15.K. Peters, R. Unger, A.M. Gatti, E. Sabbioni, A. Gambarelli, J. Kirkpatrick, Impact of ceramic and metallic nanoscaled particles on endothelial cell functions in vitro. Nanotechnologies for the life Sciences Vol.5 Nanomaterials- Toxicity, Health and Environmental Issues Ed. By Challa S.S. R. Kumar Wiley -VCH Verlag GmbH &Co. KGaA 2006. vol. 5, 108-125. 16.T. Hansen, G. Clermont, A. Alves, R. Eloy, C. Brochhausen, J.P. Boutrand, A.M. Gatti, J. Kirkpatrick, Biological tolerance of different materials in bulk and nanoparticulate form in a rat model: Sarcoma development by nanoparticles J. R. Soc. Interface (2008) 3, 767-775 17. Antonietta M. Gatti, Daniela Quaglino, Gian Luca Sighinolfi, A Morphological Approach to Monitor the Nanoparticle-Cell Interaction International Journal of Imaging (ISSN 0974-0627) Volume 2 No. S09 Spring 2009 (Editorial 1) 2-21 18.A.M. Gatti, S, Montanari — Nanopathology: A Controversial Aspect of Nanomedicine — Nanomagazine — Nov. 2011 (17-21) 19. Antonietta M. Gatti, Paolo Bosco, Francesco Rivasi, Sebastiano Bianca, Giuseppe Ettore, Luigi Gaett, Stefano Montanari, Giovanni Bartoloni, Diego Gazzolo, Heavy metals nanoparticles in fetal kidney and liver tissues, Frontiers in Bioscience (Elite edition, £3) 2011;1 (January):221-6. 20.Nemmar A., Hoet P.H.M., Vanquickenborne B., Dinsdale D., Thomeer M, Hoylaerts M.F., Vanbilloen H., Mortelmans L., Nemery B. (2002). Passage of inhaled particles in to the blood circulation in humans, Circulation, 105 (4),pp.411-417. 21.Oberdérster G, Sharp Z, Atudorei V, Elder A, Gelein R, Kreyling W, Cox C., Translocation of inhaled ultrafine particles to the brain. Inhal Toxicol. 2004 Jun;16(6-7):437-45. 22.Elder A, Oberdérster G. Translocation and effects of ultrafine particles outside of the lung. Clin Occup Environ Med. 2008;5(4):785-96. Review. 23.Elder A, Gelein R, Silva V, Feikert T, Opanashuk L, Carter J, Potter R, Maynard A, Ito Y, Finkelstein J, Oberdérster G. Translocation of inhaled ultrafine manganeseNANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°11/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 67 di 68 oxide particles to the central nervous system. Environ Health Perspect. 2006 ‘Aug:114(8):1172-8. Erratum in: Environ Health Perspect. 2006 Aug;114(8):1 178. 24, Annette Peters, Bellina Veronesi, Lilian Calderén-Garciduefias, Peter Gehr, Lung Chi Chen, Marianne Geiser, William Reed, Barbara Rothen-Rutishauser, Samuel Schiirch, and Holger Schulz, Translocation and potential neurological effects of fine and ultrafine particles a critical update. Part Fibre Toxicol. 2006; 3: 13. 25.Kenneth W. RundellJay R. Hoffman, Renee Caviston, Ronald Bulbulian, and ‘Amanda M. Hollenbach, Inhalation of Ultrafine and Fine Particulate Matter Disrupts Systemic Vascular Function, Inhalation Toxicology, 19:133-140, 2007 26.PE Schwarze, J Ovrevik, M La‘g, M Refsnes, P Nafstad, RB Hetland and E Dybing, Particulate matter properties and health effects: consistency of epidemiological and toxicological studies Human & Experimental Toxicology (2006) 25: 559 -579 27. Andre Nel,1,2* Tian Xia,1 Lutz Ma‘dler,3 Ning Lit Toxic Potential of Materials at the Nanolevel SCIENCE VOL 311 3 FEBRUARY 2006 627. 28. Tran CL, Buchanan D, Cullen RT, Searl A, Jones AD, Donaldson K: Inhalation of poorly soluble particles. 1. Influence of particle surface area on inflammation and clearance. Inhal Toxicol 2000, 12:1113-1 126. 29.Schwartz J: What are people dying of on high air-pollution days. Environmental Research 1994, 64:26-35 30. Nemmar A, Hoylaerts MF, Hoet PH, Vermylen J. 2003, Size effect of intratracheally instilled particles on pulmonary inflammation and vascular trombosis. Toxic. Appl. Pharmacol. 186, 38-45. 31. Moeller W, Felten K, Sommerer K, Scheuch G, Meyer G, Meyer P, Haussinger K, Kreyling WG. Deposition, Retention and Translocation of Ultrafine Particles from the Airways and Lung Periphery. Am J Respir Crit Care Med. 2007 Oct 11; [Epub ahead of print] 32. Borm PJ, Robbins D, Haubold S, Kuhlbusch T, Fissan H, Donaldson K, Schins R, Stone V, Kreyling W, Lademann J, Krutmann J, Warheit D, Oberdorster E. The potential risks of nanomaterials: a review carried out for ECETOC. Part Fiber Toxicol. 2006 Aug 14;3:11NANODIAGNOSTICS sri Rapporto n°11/2017 ‘Sede operativa :Via E. Fermi, 1/L- 41087 San Vito di Spilamberto (Modena) Tol, +99 059 798778 ~ Fax +39 059 7579182 - E-mail: info@nanodiagnosties.it ‘Sede legale: Strada Contrada 309, 41126 Modena Pag 68 di 68 33. Frampton MW, Stewart JC, Oberdérster G, Morrow PE, Chalupa D, Pietropaoli AP, Frasier LM, Speers DM, Cox C, Huang LS, Utell MJ. Inhalation of ultrafine particles alters blood leukocyte expression of adhesion molecules in humans. Environ Health Perspect. 2006 Jan:114(1):51-8 34, Yuliang Zhao, Hari Singh Nalwa, Nanotoxicology - Interactions of Nanomaterials with Biological Systems, (2006); 35. A. Elder, |. Lynch, K. Grieger, S. Chan-Remillard, A.M. Gatti, H. Gnewuch, E. Kenawy, R. Korenstein, T. Kuhlbusch, F. Linker, S. Matias, N. Monteiro-Riviere, \V.R.S. Pinto, R. Rudnitsky, K. Savolainen, A. Shvedova — Human Health Risks of Engineered Nanomaterials: Critical Knowledge Gaps in Nanomaterials Risk Assessment - capitolo di |. Linkov e J. Steevens (eds.) — Nanomaterials: Risks and Benefits — Springer Science Business Media B.V. 2009 — pagg. 3 - 30 36. Urban RM, Jacobs W,, Gilbert JL, Galante JO, Migration of corrosion products from modular hip prostheses. Particle microanalysis and histopathological findings, The Journal of Bone and Joint Surgery. American Volume [1994, 76(9):1345-1359] 37. Kirkpatrick CJ, Barth §, Gerdes T, Krump-Konvalinkova V, Peters K., Pathomechanisms of impaired wound healing by metallic corrosion products. Mund Kiefer Gesichtschir. 2002 May;6(3):183-90,- 38. Lee SH, Brennan FR, Jacobs JJ, Urban RM,Ragasa DR, Giant TT, Human monocyte/macrophage response to cobalt-chromium corrosion products and titanium particles in patients with total joint replacements. J Orthop Res. 1997 Jan;15(1):40-9. 39. International Agency for Research on Cancer — World Health Organization — Press release n. 221/17-10-2013