ANALISIS DE LAS COMUNIDADES

MICROBIANAS BASADOS EN TECNICAS DE

CULTIVO

Este proceso es muy importante por que nos

permite el estudio integro de la comunidad
microbiana, a este procedimiento se le conoce
como enriquecimiento. Este proceso es muy
importante porque se obtiene cultivos para
estudios detallados y controlados de laboratorio
y para su aplicación en biotecnología y
microbiología industrial que es la que nos
interesa más a nosotros.

Tomando en cuenta que una comunidad microbiana es la mayor unidad biología

en una jerarquía ecológica conformada por individuos y poblaciones; están viven
en un habitad determinado de ahí es donde podemos citar el proceso medio de
cultivo o enriquecimientos, ya que cada comunidad bacteriana solicitan un medio
especial para vivir ahí.

Un medio de enriquecimiento es un medio de cultivo que contiene los nutrientes

necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia variedad de
microorganismos. Ciertos organismos no crecen en medios de cultivo ordinarios.
Requieren ingredientes que promueven el crecimiento como la sangre, glucosa,
suero, huevo, entre otros.

Algunos ejemplos de medios de cultivo de enriquecimiento son:

 Agar sangre
 Agar CLED
 Agar McConkey
 Agar chocolate
 Agar sabouraud
 Caldo selenito
TECNICA DEL CULTIVO DE
ENRIQUECIMIENTO

Este método requiere que el medio de

cultivo y las condiciones de incubación
sean selectivos para el organismo que
se desea aislar y contra selectivos para
los organismos no deseados.

Por tanto se necesita reproducir lo más

fielmente posible los recursos y las condiciones que se dan en este nicho
ecológico y buscar luego los habitantes potenciales de aquel hábitat capaces de
desarrollarse en las condiciones de enriquecimiento seleccionadas.

Para que un cultivo de enriquecimiento tenga éxito es necesario contar con un

inóculo apropiado (una muestra que contenga el microorganismo). Por tanto, la
metodología del cultivo de enriquecimiento se inicia con la elección del hábitat
adecuado.

El cultivo de enriquecimiento suele establecerse sembrando el inóculo

directamente en un medio altamente selectivo; muchos de los procariotas más
frecuentes pueden aislarse de esta manera.

Tanto el medio de cultivo como las condiciones de incubación son críticos para
que tenga éxito un cultivo de enriquecimiento; es decir deben optimizarse tanto los
recursos como las condiciones para tener las mejores posibilidades de enriquecer
el microorganismo que interesa.

La Xylella Fastidiosa es una bacteria fitopatogena, de la clase protobacteria con

gran potencial de daño económico. Ataca sin curación en la actualidad a diversas
plantas de utilidad económica como el olivo, almendro, melocotón y el limonero asi
como otros que no producen frutos como el laurel la mecion de esta bacteria es
que este es uncaso de bacterias que es complica de aislar y cultivar de en
laboratorio, de donde deriva el adjetivo
de FASTIDIOSA.

Asi como la anterior bacteria

mencionada hay muchas que el ser
humano no puede controlar de ahí es
que tenemos enfermedades aun sin
cura, si no lo retrasan la enfermedad.
LA COLUMNA DE WINOGRADSKY

Este es un dispositivo simple que permite el cultivo de una

gran diversidad de microorganismos. Este aparato consiste
en una columna llena de agua y fango con una fuente de
carbono organico y otra de azufre. Incubando esta columna
bajo luz solar durante meses, se forma un gradiente de
oxigeno y otros de sulfuros, que determinan una amplia
variedad de ambientes en las que se disponen diferentes
especies de microorganismos.

El funcionamiento general de la columna de Winogradsky es una demostración

clásica de como los microorganismo ocupan microespacios altamente específicos
de acuerdo con sus tolerancias de acuerdo con sus tolerancias medioambientales
y sus necesidades vitales y que , además, ilustra como diferentes
microorganismos desarrollan sus ciclos , y la interdencia que llega a existir entre
ellos. Esta columna es un sistema completo y autónomo de reciclado, mantenido
solo por energía de la luz.

La columna se enfoca sobre todo al ciclo del azufre, pero podría desarrollar
igualmente la reproducción de otros ciclos biogeoquímicos equivalentes para
nitrógeno, carbono y otros elementos.
En una columna de Winogradsky típica se desarrolla una mezcla de organismos.

Las algas y cianobacterias ocupan rápidamente la parte superior y al producir O 2

ayudan a mantener esta zona óxica.

El proceso de descomposición en el sedimento lleva rápidamente a la producción

de ácidos orgánicos, alcoholes y H2, sustratos adecuados para las bacterias
sulfato reductoras. El sulfuro producido por las bacterias sulfato reductoras
provoca el crecimiento de bacterias rojas y verdes del azufre.

Estos organismos aparecen generalmente como zonas de crecimiento en el lodo

de la columna, pero también pueden desarrollarse profusamente en el agua si los
fotótrofos oxigénicos son escasos.

Para el muestreo de bacterias fototróficas de la columna se introduce una pipeta

larga con la que se recoge un poco de lodo o agua coloreada. Estas muestras se
pueden usar para microscopía y para inocular medios de enriquecimiento para
aislamiento y caracterización.
SESGO EN EL ENRIQUECIMIENTO

Aunque el cultivo de enriquecimiento

es una herramienta poderosa, en
muchos casos se produce un sesgo
en el enriquecimiento.

En los cultivos líquidos de

enriquecimiento típicos, el organismo
más adaptado a las condiciones
escogidas puede convertirse en la
población dominante.

Desgraciadamente, el organismo mejor adaptado en los cultivos de laboratorio a

menudo es sólo un componente minoritario del ecosistema microbiano, en lugar
de ser el mayoritario o el más relevante desde el punto de vista ecológico.

El sesgo en el enriquecimiento puede demostrarse cuando se comparan los

métodos de dilución con el clásico enriquecimiento en líquido.

La dilución del inóculo seguida de un enriquecimiento a menudo da lugar a un

organismo diferente que cuando se enriquece un inóculo sin diluir.

Se cree que la dilución elimina aquellas poblaciones minoritarias pero de rápido

crecimiento, dando de este modo la oportunidad de desarrollarse a otros
miembros de la comunidad. Por tanto, la dilución del inóculo es una práctica
común en el cultivo de enriquecimiento en la microbiología actual.

AISLAMIENTO EN CULTIVO AXÉNICO

Los cultivos axénicos (o puros) se pueden obtener de muchas maneras a partir de

un enriquecimiento, un cultivo axenico consiste en una sola especie microbiana
proveniente de una sola celula; los métodos empleados más frecuentes son la
siembra por estría en superficie (en placa
petri), la siembra en profundidad (agar shake)
y la dilución en líquido. Para aquellos
microorganismos que crecen bien en medio de
cultivo sólido (con agar), el método de elección
es la siembra por estría.

A partir de una población mixta, mediante la

siembra por estría se obtienen colonias
separadas; repitiendo esta técnica con una de
estas colonias aisladas se consigue un cultivo
axénico, que puede ser transferido a un medio líquido.

Las placas sembradas de este modo e incubadas en las condiciones adecuadas

(por ejemplo en una jarra anóxica para anaerobios) nos permiten aislar tanto
microorganismos aerobios como anaerobios.

Proedimiento para una siembra por estrías:

SIEMBRA EN PROFUNDIDAD Y NÚMERO MÁS PROBABLE

El método de siembra en profundidad consiste en la dilución de un cultivo mixto en

tubos de agar fundido; cuando el agar solidifica, las colonias se desarrollan
embebidas en el tubo de agar en vez de en la superficie, como ocurre en la
siembra por estría en placa.

Es un método de gran utilidad para purificar determinados tipos de

microorganismos anaerobios, por ejemplo, las bacterias fototróficas del azufre y
sulfato reductoras de las columnas de Winogradsky.

Es posible obtener cultivos axénicos mediante diluciones sucesivas de una

suspensión de células en tubos de agar fundido. A partir de una colonia crecida en
el tubo de mayor dilución utilizada como inóculo, se puede volver a hacer otro
banco de diluciones, de tal manera que se acabe obteniendo un cultivo axénico.

Un procedimiento similar sin usar agar es la dilución seriada de un inóculo en un

medio líquido hasta que el tubo o tubos finales de la serie no muestran
crecimiento.
Utilizando diluciones seriadas de diez en diez, por ejemplo, el último tubo que
muestre crecimiento tiene que haberse originado a partir de 10 células o menos. Si
se repite varias veces este proceso se obtienen cultivos axénicos. Esta técnica se
conoce como la Técnica del Número Más Probable (NMP).

La Técnica del NMP se usa para estimar el número de microorganismos en

alimentos, aguas residuales y en otras muestras donde hay que evaluar
rutinariamente el número de células. Se puede hacer con medios altamente
selectivos y condiciones de incubación dirigidos a uno o a un pequeño grupo de
organismos, como por ejemplo un determinado patógeno, o usando un medio
complejo para obtener una estimación del número total de células.

Con independencia del método utilizado para purificar el cultivo, una vez obtenido
un supuesto cultivo axénico es esencial comprobar su pureza. Se utiliza para ello
una combinación de técnicas microscópicas, observación de las características de
la colonia en placas, o en siembras en profundidad en tubo, y comprobación del
crecimiento en medios donde el microorganismo que nos interesa aislar crece muy
poco, pero que favorecen el crecimiento de los microorganismos acompañantes.

La observación microscópica de un solo tipo morfológico de célula, junto con unas

características uniformes de la colonia y ausencia de contaminación en test con
diversos medios de cultivo, puede tomarse como prueba de que un cultivo es
axénico (puro).

Debemos tener en cuenta que este método se usa para contar microorganismos
difíciles de cultivar en medio solido, o para determinar el numero de células que
pueden crecer en un medio liquido determinado, como el análisis para determinar
la contaminación del agua potable, determinando el numero de bacterias
Escherichia coli que pueden crecer en un medio con lactosa. La presencia de E.
coli en el agua potable es una prueba de contaminación.

En microbiolagia , el método se emplea habitualmente realizando diluciones en

serie de un cultivo de bacterias en un medio de crecimiento, y luego divisiones
adicionales en serie hasta obtener partes alícuotas. Los cultivo son incubados y
evaluados a ojo, eludiendo el tedioso recuento de colonias, o caro y tedioso
recuento microscópico.

En biología molecular, una aplicaion habitual se da en las pastillas de ADN

diluidas para la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
A continuación procedimiento animado del NMP:
CULTIVOS AXÉNICOS DE ALTA
TECNOLOGÍA: LAS PINZAS DE
LÁSER

Además de los métodos clásicos

descritos, los avances tecnológicos han
permitido la utilización de nuevas
herramientas para la obtención de
cultivos axénicos; una de ellas son las
pinzas (ópticas) de láser.

Las pinzas de láser consisten en un

microscopio óptico invertido equipado
con un láser infrarrojo enfocado con
precisión y un instrumento de micro
manipulación.

Una célula individual del campo de visión es atrapada por el haz de rayos laser y
separada del resto de microorganismos. La célula queda atrapada por que la
fuerza creada por el láser que empuja hacia abajo los objetos pequeños (como las
células microbianas) y los mantiene en el lugar; cuando el haz de láser se
desplaza, las células atrapadas se mueven junto con él. Si la muestra está en un
tubo capilar, se atrapa una única célula que después se aísla rompiendo el tubo en
un punto entre la célula y el resto de la población.

La célula recogida se introduce entonces en un tubo pequeño de medio estéril

para iniciar su crecimiento como cultivo axénico.

La tecnología de pinzas de láser es especialmente útil para el aislamiento de

bacterias de desarrollo lento, que pueden ser superadas por el desarrollo rápido
de otras poblaciones en los cultivos de enriquecimiento típicos, o para los
organismos presentes en números tan bajos que podrían perderse con los
métodos de enriquecimiento a partir de la dilución. Y junto con el uso de tinciones
específicas capaces de identificar organismos determinados en un campo del
microscopio, las pinzas de láser se emplean para seleccionar organismos a partir
de una mezcla para su purificación y posterior estudio en el laboratorio.
LAS PINZAS DE LÁSER
LAS PINZAS OPTICAS APLICADAS AL
ESTUDIO DE LOS MOTORES
BIOLOGICOS

Actualmente existen un enorme interés

por parte de muchos físicos en estudiar
diversos tipos de sistemas biológicos. El
estudio de estos sistemas presentan un
enorme reto, ya que se trata de los
sistemas más complejos que puedan
encontrarse en la naturaleza. Esta
reciente incursión de los físicos en el
estudio de los sistemas biológicos
complejos involucra diversas ramas,
desde la biología molecular y celular,
hasta la ecología, pasando por la
genómica, las proteínas, el ADN, la
sincronización de ritmos biológicos, las
redes neuronales, los fenómenos de
auto-organización y las propiedades
emergentes en sociedades de insectos,
por mencionar algunos campos.

En particular, un avance reciente se refiere al estudio del transporte intracelular de

las llamadas proteínas motoras, o motores moleculares. Estos motores son
proteína que transportan diversas sustancias y vesículas dentro de las células
eucariontes y que llevan a cabo muchos tipos de funciones en el organismo. Como
ejemplos de proteínas motoras podemos citar a un tipo de miosinas, que son
responsables del movimiento de los músculos, o las cinesinas, que se encargan
de transportar sustancias dentro de las células y que se desplazan a lo largo del
citoesqueleto. Un motor molecular que ha despertado el interés de algunos físicos
es un tipo de cinesina que tiene una estructura con dos porciones, que simula una
especie de caminante a escala de nanómetros y que alterna las dos porciones,
dando como resultado una caminata a lo largo de los microtúbulos que forman
parte del citoesqueleto. La cinesina utiliza como fuente de energía la hidrólisis de
ATP y como todo sistema biológico, se encuentra fuera del equilibrio
termodinámico. Aun cuando el estudio de los motores moleculares ha tenido un
avance sorprendente, no es claro el mecanismo mediante el cual la cinesina logra
moverse preferentemente en una dirección, ya que las fuerzas que actúan sobre la
proteína no tienen una dirección particular, sino que se trata de fuerzas fluctuantes
de promedio cero. Desde la perspectiva de la física, estos motores nos llevan a
preguntarnos: ¿Es posible generar transporte unidireccional a partir de
fluctuaciones fuera del equilibrio? La respuesta es positiva ya que en un sistema
fuera de equilibrio es posible generar trabajo sin violar por ello la segunda ley de la
termodinámica. Además de tener un sistema lejos del equilibrio, es necesario
romper alguna simetría del sistema para poder rectificar las fluctuaciones.

Conclusiones

 Sin duda alguna el método del numero mas probable es una herramienta
muy valiosa para nosotros los profesionales ingenieros sanitarios, que
debemos manejar con un amplio conocimiento para poder dar soluciones a
nuestros problemas hídricos y por ende dar un buen uso a nuestros
conocimientos.
 Hoy en dia hemos desarrollado mucho nuestra tegnologia para poder
cultivar bacterias y poder dar solución a nuestras necesidades desde un
punto de vista microbilogico, pero aun no nos hemos enfocado del todo en
nuestras necesidades básicas ya que hay profesionales que usan estos
avances para obrar mal, como por ejemplo nuevas drogas .