PRACTICA N°6 “CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA (CCD/CCF)”

INTRODUCCIÓN

La cromatografía es una técnica de separación de solutos de una mezcla, que se

basa en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los solutos a través
de un medio poroso, arrastrados por un disolvente en movimiento. A este
disolvente se le llama fase móvil y el medio poroso puede ser la fase estacionaria,
o bien servir de soporte a esta fase. Se habla de cromatografía en columna
cuando la fase estacionaria o su soporte están contenidos en una columna.

Es una técnica muy importante para la separación rápida y el análisis cualitativo

de muestras en pequeña cantidad. El solvente asciende por capilaridad por un
soporte de vidrio (cromatoplaca) que tiene adherido el adsorbente de espesor
variable según la placa sea analítica o preparativa. En un extremo de la placa se
siembra la muestra: en forma puntual si es analítica y en banda si es preparativa.
En ambos casos pueden hacerse varias siembras superpuestas para aumentar la
cantidad de muestra. La placa se introduce en una cuba que contiene el solvente
de desarrollo el cual asciende y permite que se lleven a cabo los equilibrios de
adsorción- desadsorción. La placa se deja hasta que el solvente llegue al extremo
superior. Terminado el desarrollo, se retira la placa, se seca, revela y evalúa.

La separación cromatografía constituye un proceso dinámico que permite un

intercambio continuo por desplazamiento de una fase con respecto a la otra. El
diferente reparto de solutos entre las fases móvil y estacionaria es la causa de la
separación de los solutos. El soluto que tiene mayor afinidad por la fase
estacionaria se moverá con mayor lentitud.

La fase móvil se llama eluyente. Cuando emerge por la salida de la columna se

llama eluato. El proceso que consiste en hacer pasar un líquido o un gas a lo largo
de la columna de cromatografía se llama elución. El volumen de elución (ve) es el
volumen de fase móvil que se requiere para eluir un soluto dado de la columna
cromatografía.

Revelado: Si las manchas no son visibles hay que revelarlas. Luz UV: se
observará fluorescencia. Yodo: revelador universal. Se observarán manchas
marrones o amarillas. Al quitar la placa del contacto con los vapores las manchas
se decoloran.
OBJETIVOS

 Separar los metabolitos secundarios presentes en el extracto seco total.

 Reconocer con reactivos los compuestos aislados con la CCD.
 El aprendizaje de los términos, conceptos y fundamentos de la
cromatografía;
 Aprendizaje de las destrezas necesarias para realizar separaciones
cromatografías;
 Realizar la separación e identificación por cromatografía de papel de una
mezcla.
 Identificar las limitaciones y ventajas del uso de reveladores.
 Identificar las interacciones y reacciones de los iones estudiados y su efecto
sobre el desarrollo Cromatográfico.
 Predecir en base a los fenómenos observados el comportamiento de otras
mezclas de iones durante un proceso cromatográfico.

MARCO TEÓRICO

La cromatografía en capa fina se basa en la preparación de una capa, uniforme,

de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte. Los
requisitos esenciales son, pues, un adsorbente, placas de vidrio, un dispositivo
que mantenga las placas durante la extensión, otro para aplicar la capa de
adsorbente, y una cámara en la que se desarrollen las placas cubiertas. Es
preciso también poder guardar con facilidad las placas preparadas y una estufa
para activarlas.

La fase móvil es líquida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase

estacionaria será un componente polar y el eluyente será por lo general menos
polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen
con mayor velocidad serán los menos polares.

Polaridad de los compuestos orgánicos en orden creciente:

Hidrocarburos < olefinas < flúor < cloro < nitro < aldehído

Aldehído < Ester < alcohol < cetonas < aminas < ácidos < amida

Ventajas de la cromatografía en capa fina

La cromatografía en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros

métodos cromatográficos (en columna, en papel, en fase gaseosa,...) ya que el
utillaje que precisa es más simple. El tiempo que se necesita para conseguir las
separaciones es mucho menor y la separación es generalmente mejor. Pueden
usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruirían el cromatograma. El
método es simple y los resultados son fácilmente reproducibles, lo que hace que
sea un método adecuado para fines analíticos.

Adsorbentes

Al realizar la elección del adsorbente se debe tener en cuenta el tamaño de las

partículas del adsorbente, cuanto más finamente dividido esté mayor será su
adhesión al soporte, aunque también se le puede añadir un adherente. Algunos de
los adsorbentes más utilizados son:

 Celulosa
 Almidón
 Azucares
 Gel de sílice (silicagel)
 Óxido de aluminio (alúmina)
 Carbón activo (carbón en polvo)
 Kieselguhr

Los tres primeros se utilizan para extraer componentes poli funcionales de plantas
y animales.

Revelado del cromatograma

Una vez que el eluyente sobre la placa se ha secado se ha de proceder a la

visualización del cromatograma. En determinados casos, si los compuestos son
coloreados esto puede realizarse de forma directa. Sin embargo, para compuestos
incoloros es necesario utilizar diferentes técnicas de revelado.

Las placas de cromatografía comerciales portan un agente fluorescente inorgánico

en la fase estacionaria. Ello permite visualizar el cromatograma iluminando la
placa con una lámpara de luz ultravioleta UV. Los diferentes compuestos aparecen
en la placa como manchas circulares. Las distintas manchas deben de marcarse a
lápiz sobre la placa para su estudio posterior.

Diferentes reactivos orgánicos también permiten el revelado permanente de la

placa, obteniéndose manchas coloreadas en ella. De entre los métodos más
comunes puede destacarse la utilización del Iodo. Para ello la placa se introduce
en una cubeta que contiene cristales con Iodo y se deja estar en ella durante unos
minutos. Los vapores de iodo se disuelven en las manchas de los compuestos
orgánicos tiñéndolas de color marrón.
FACTORES QUE INFLUYEN EN LA SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFÍA:

Polaridad

La mayor o menor velocidad de desplazamiento a lo largo de la columna depende

directamente de la estructura de cada molécula así como de los grupos
funcionales que pueda poseer. El motivo principal es su diferente polaridad.
Moléculas más polares quedan más retenidas en la fase estacionaria, es decir
"corren menos”, mientras que las moléculas menos polares se ven
menos retenidas y avanzan a mayor velocidad arrastradas por eluyente.

Elección del eluyente

Eluyente

Utilizado es clave para obtener una buena separación.Eluyentes más polares

arrastran más fácilmente a los compuestos, es decir los compuestos "corren más"
en eluyentes más polares. Por el contrario, mezclas de disolventes con poca
polaridad desplazan los compuestos a través de la columna con mayor lentitud.

La polaridad relativa de los disolventes más usuales se encuentra relacionada en

una tabla denominada "serie eluotrópica" (polaridad creciente de izquierda a
derecha): hexano, ciclohexano, tolueno, éter, cloroformo, diclorometano, THF,
acetato de etilo, acetona, etanol, metanol, agua.

De nuevo, es importante recordar que en la elección adecuada de la mezcla de

disolventes radica el éxito de la separación en la cromatografía de revelado.

MATERIALES Y MÉTODOS

 Placas de vidrio

 Aspersadores

 Varilla de agitación

 Probeta

 Cuba para cromatografía

 Capilares

 Espátula
PROCEDIMIENTO:
1. colocaren un vial una pequeña cantidad de muestra y disolver con alcohol
de 70°.

2. si la solución está muy turbia o tiene polvo fino al fondo se debe de filtrar.
3. cuando la solución esta lista se hará la siembra en la placa de sálica gel.

FALTA FOTOS

Sembrar 20 o más
toques

4. colocar la placa dentro de la cuba, la cual permanente tiene un volumen

adecuado de fase móvil y tapar herméticamente.
 SATURAR LA CUBA
CON EL SOLVENTE POR
5 min ANTES DE
COLOCARR LA PLACA.

5. cuando termine de correr la muestra, retirar la placa. Dejar secar y

determinar de Rf de la mancha más significativa.

1cm

6cm

1 cm

Rf =

Rf =
FASES MOVILES EMPLEADO:

 MeOH: CHCl3 (2:1)

Conclusiones

 La cromatografía de capa delgada o capa fina presenta una elevada

sensibilidad, lo que significa que pequeñas cantidades de muestra son
suficientes para la obtención de resultados, además no requiere un
instrumental complejo, lo cual implica que no precise una manipulación
excesivamente especializada. Por su simplicidad y rapidez, la cromatografía
de capa fina es una herramienta muy valiosa en el análisis en el laboratorio
de química orgánica.

 La mayor o menor velocidad de desplazamiento a lo largo de la columna

depende directamente de la estructura de cada molécula así como de los
grupos funcionales que pueda poseer. El motivo principal es si diferente
polaridad. Moléculas más polares quedan más retenidas en la fase
estacionaria, es decir “corren menos”.

 Esencialmente hay dos características de la cromatografía en capa fina que

la hacen interesante para ser aplicada como técnica analítica auxiliar en el
campo de la conservación-restauración.

 Una es que presenta una elevada sensibilidad, lo que significa que

pequeñas cantidades de muestra son suficientes para la obtención de
resultados.

 Y la otra es que no requiere un instrumental complejo, lo cual implica que

no precise una manipulación excesivamente especializada, y también que
el coste de un análisis por TLC resulte relativamente baja.
BIBLIOGRAFÍA

http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/12%20CROMATOGRAF%C3%8DA%20DE%20CAPA%20FINA%20DE%
20L%C3%8DPIDOS.pdf

https://books.google.com.pe/books?id=WPYYF75dejsC&pg=PA405&lpg=PA405&d
q=cromatografia+revelado+uv&source=bl&ots=OCI5lRT_fU&sig=v4idAZhKS9qHK
TO7OwgEcule6JI&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwi2vv73w7bJAhVJYiYKHfWiD344C
hDoAQhOMAk#v=onepage&q=cromatografia%20revelado%20uv&f=false

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