Tinciones

El termino tinción significa simplemente colorear los microorganismos con un

colorante que destaque ciertas estructuras, sin embargo antes de teñir los
microorganismos se debe fijar (adherir) al portaobjetos. Cabe mencionar que existen
distintos tipos de tinciones en las que podemos encontrar las siguientes:

Tinciones simples
Es una solución acuosa o alcohólica y de un colorante único y básico; el propósito
principal de una tinción simple es destacar el microorganismo completo para que se
vean las formas y las estructuras celulares básicas. El colorante se aplica al
extendido fijado durante un tiempo determinado y luego se lava, a continuación el
portaobjetos se seca y se examina. Algunas de las tinciones simples utilizadas con
frecuencia en el laboratorio son el azul de metileno, la carbolfocsina, el violeta de
genciana (cristal violeta) y la safranina. (Observar en la figura 1.1)

Tinciones diferenciales
Reaccionan de modo diferente con las distintas clases de bacterias y por lo tanto
pueden ser empleadas para establecer una distinción entre ellas. Las tinciones
diferenciales más utilizadas con más frecuencia para las bacterias son la tinción de
Gram y la tinción de ácido-alcohol resistencia. (Observar en la figura 1.2)
Tinción de gram

Fue desarrollado por el bacteriólogo danés Hans Christian Gram en 1884 y es uno
de los procedimientos de tinción más útiles porque permite clasificar las bacterias
en dos grandes grupos: gram positivas y gram negativas.

Se lleva a cabo:

1. Un extendido fijado con calor, se cubre con un colorante violeta básico, por
lo general violeta de genciana ( colorante primario)
2. Después de un breve lapso se escurre el colorante violeta, se lava el
extendido y se lo cubre con yodo, un mordiente.
3. A continuación se lava el portaobjetos con alcohol o con una solución de
alcohol acetona (agente decolorante).
4. Se elimina el alcohol con agua y se tiñe el portaobjetos con safranina
(colorante básico). Luego se vuelve a lavar el extendido, se lo seca con papel
absorbente y se examina con el microscopio.

El colorante violeta y el yodo se combinan en el citoplasma de cada bacteria y lo

colorean de violeta oscuro o purpura. Las bacterias que conservan este color
después de haberles agregado el alcohol para decolorarlas se clasifican como
grampositivas (retienen el colorante y permanecen de color violeta) y las bacterias
que pierden el color violeta obscuro después de la decoloración se clasifican como
gramnegativas (no retiene el colorante). (Observar en la figura 1.3)
Tinción de ácido- alcohol resistencia
Esta tinción se fija de modo firme solo a las bacterias que poseen ceras en las
paredes de las células, con esta tinción se pueden identificar todas las bacterias de
genero mycobacterium que comprende dos patógenos importantes mycobacterium
tuberculosis, agente causal de la tuberculosis y mycobacterium leprae el agente
causal de la lepra. Para llevarse a cabo esta tinción se aplica el colorante rojo
carbolfucsina a un extendido fijado y se calienta suavemente el portaobjetos durante
varios minutos (el calentamiento aumenta la penetración y la retención del
colorante), luego se enfría el portaobjetos y se lava con agua.

A continuación el extendido se trata con ácido- alcohol, un decolorante que elimina

el color rojo de las bacterias que no son acido-alcohol resistentes. Luego del
extendido se colorea con azul de metileno que actúa como colorante de contraste
(las bacterias que no son acido-alcohol resistentes aparecen azules después de la
aplicación del colorante contraste). (Observar en la figura 1.4)

Tinción negativa para capsulas

La tinción de capsula es más difícil que otros tipos de procedimiento de tinción
porque los materiales capsulares son hidrosolubles y pueden desprenderse o
eliminarse durante los lavados rigurosos, para llevar a cabo esta tinción, se mezclan
las bacteria en una solución que contenga una suspensión coloidal fina de partículas
coloreadas (tinta china o nigrosina) que proporcione un fondo que contraste y luego
teñir las bacterias con un colorante simple , como la safranina , debido a su
composición química las capsulas no aceptan la mayoría de los colorantes
biológico, como la safranina y así aparecen como halos que rodean cada célula
bacteriana teñida. (Observar en la figura 1.5)
Tinción para endosporas (esporas)
Una endospora es una estructura especial, resistente, y latente que se forma dentro
de una célula y que protege a una bacteria de las condiciones ambientales
adversas, no se tiñen con los métodos comunes, porque los colorantes no
atraviesan sus paredes. La tinción utilizada es la de schaefferfulton para
endoesporas y para ello se aplica el colorante primario verde de malaquita a un
extendido fijado con el calor y se calienta hasta la emisión de vapores durante
alrededor de 5 minutos (el calor ayuda a que el colorante atraviese la pared celular).
Luego se lava el preparado con agua durante cerca de 30 segundos para eliminar
el verde de malaquita de todas las paredes de las células salvo las endoesporas. A
Continuación se aplica sobre el extendido safranina para teñir las porciones de las
células distintas de las esporas (las endoesporas aparecen verdes dentro de células
rojas o rosadas). (Observar en la figura 1.6)

Tinción para flagelos

Los flagelos bacterianos son estructuras de locomoción demasiado pequeñas. El
procedimiento de tinción se basa en el empleo de un mordiente (aditivo) y el
colorante carbolfucsina para aumentar los diámetros de los flagelos hasta que se
tornen visibles con el microscopio óptico como ayudas diagnosticas adicionales los
microbiólogos utiliza la cantidad y la disposición de flagelos. (Observar en la figura
1.7)
Anexos

Figura 1.1 (Tinción simple) procedimiento y tinción en el que se observa la

bacteria Micrococcus luteus teñida con azul de metileno para destacar el
microorganismo completo y ver las formas y las estructuras celulares
básicas.

Figura 1.2 (Tinciones diferenciales) observación de la bacteria clostridium

perfringens y escherichia e.colli. Esta técnica sirve para diferenciar
microorganismos de manera más explícita.
Figura 1.3 (Tinción de Gram) a) procedimiento b) micrografía de bacterias
teñidas con Gram los bacilos y los cocos (de color violeta) son Grampositivas
y los vibriones (de color rosado) son Gramnegativos.
Figura 1.4 (Tinción ácido- alcohol resistentes) las bacterias del genero
Mycobacterium especie leprae que infectaron este tegido se tiñeron de rojo
con una tinsion de acido- añcohol resistencia. Las celulas que no son ácido –
alcohol resistentes se tiñen con el colorante de contraste azul de metileno.

Figura 1.5 (Tinción negativa para capsulas) la tincion de la capsula

propoprciona un fondo que contrata de modo que las capsulas de estas
bacterias(klebsiella pneumoniae) se ven como areas claras alrededor de las
celulas teñidas.
Figura 1.6 (Tincion para endoesporas) con la tincion para endoesporas
schaeffer-fulton las endoesporas se visualizan como ovalos verdes en estas
celulas bastoniformes de bacillus cereus.

Figura 1.7 (Tinción para flajelos) los flajelos aparecen como extenciones
ondulantes de los extremos de estas celulas de la bacteria spirillum volutans,
en relacion con el cuerpo de la celula los flajelos son mucho mas gruesos que
lo normal debido a la acumulacion de capas de colorante para el tratamiento
de las muestras con mordiente.
Referencias bibliográficas

Tortora, G. J., Funke, B. R., y Case, C. L. (2007) Introducción a la Microbiología.

Novena Edición. Editorial Panamericana. México.pp.68 -72.