AMINAS BIÓGENAS

DETERMINACIÓN DE
AMINAS BIÓGENAS EN
MUESTRAS DE
ALIMENTOS POR
CL-MS/MS
 Bibliografía
• A review of the liquid chromatographic methods for the
determination of biogenic amines in foods
Armagan Önal, Serife Evrim Kepekci Tekkeli, Cem Onal
Food Chemistry 138 (2013) 509–515

• A review: Current analytical methods for the

determination of biogenic amines in foods
Armagan Önal
Food Chemistry 103 (2007) 1475–1486
• Cromatografía de Líquidos con detector
de Fotodiodos con y sin derivatización.

• Cromatografía de Líquidos con detección

Fluorimétrica con derivatización (ántes de
la inyección o post columna).

• Cromatografía de Líquidos con detector

de Masas con y sin derivatización.
• PNTCNA_TDOO1_03. PNT PARA LA
DETERMINAGION DE HISTAMINA Y OTRAS AMINAS
BIOGENAS EN PESCADO POR CROMATOGRAFíA
LÍQUIDA DE ALTA EFICACIA (HPLC) CON
DERIVATIZACIÓN post-COLUMNA CON o-
FTALDEHIDO
Elaborado por: Teresa Mª Legarda
Aprobado por: Pedro A. Burdaspal
AESAN CNA

• MA/2/24240. PNT PARA LA DETERMINAGION DE

AMINAS BIOGENAS EN ALIMENTOS POR CL-FLD
Elaborado/rEVISADO por: A. SUÁREZ
Agencia de Salud Pública del Consorcio Sanitario de
Barcelona
Inconvenientes detectados en nuestro
laboratorio:
• Reactivos (Corrosivos, tóxicos, peligroso
para la salud y el medio ambiente, …).
• Atmósfera con malos olores a pesar de
utilización de campanas de gases.
• Inestabilidad de los compuestos
derivatizados (por ejemplo, derivatizados con
o-ftaldehído).
• Interferencias (modificación del gradiente).
• Tiempo de respuesta alto.
Cualidades requeridas:
• Método rápido con tiempo de respuesta lo
menor posible.
• Utilización del menor número de reactivos
y que presenten los menores peligros
posibles.
• Método seguro y preciso.
• Utilización de una técnica analítica robusta
y selectiva.
 Técnica: CL-MS/MS (directa)
• Simultaneous determination of eight underivatised biogenic
amines in fish by solid phase extraction and liquid
chromatography–tandem mass spectrometry G. Sagratini, M.
Fernandez-Franzon, F. De Berardinis, G. Font, S. Vittori a, J.
Manes.
Food Chemistry 132 (2012) 537–543

• High performance liquid chromatography/tandem mass

spectrometry determination of biogenic amines in typical
Piedmont cheeses
F. Gosetti, E. Mazzucco, V. Gianotti, S. Polati, M.C. Gennaro
Journal of Chromatography A, 1149 (2007) 151–157
 Partes del método
• Extracción de las aminas biógenas con un
disolvente (TCA).
• Dilución a un volumen adecuado.
• Análisis instrumental: Equipo WATERS
compuesto por Módulo de separación (Waters,
modelo 2790), Horno de columnas (Waters,
modelo Alliance), Espectrómetro de Masas
Quattro micro (Micromass) con sonda ESI+ y
Sistema Informático.
 Estudios de optimización
• Disolvente de extracción (mezclas
metanol-agua, metanol, ácido clorhídrico,
ácido fórmico, ácido tricloroacético, …)
• Purificación (evaporación y reconstitución,
extracción en fase sólida)
• Columna cromatográfica.
• Concentración del patrón interno (1,7-
diaminoheptane).
• Respuesta de cada amina biógena.
 Análisis de masas

• El pico base de todas las aminas biógenas

tienen un espectro de masas que
corresponde a la molécula protonada
[M+H]+

• Se registran dos transiciones.

• El análisis de masas se estructura en dos
funciones.
 Funciones de masa
Función 1: ESI + (0-5minutos). MRM de 9 canales.
Compuesto transición Dwell Voltage de cono Energía de colisión

Putrescina 89 > 55 0.2 15 20

Putrescina 89 > 72 0.2 15 14
Cadaverina 103 > 69 0.2 15 15
Cadaverina 103 > 86 0.2 15 13
Histamina 112 > 68 0.2 14 21
Histamina 112 > 95 0.2 14 10
1,7-diaminoheptano 131 > 114 0.2 15 10
Tiramina 138 > 77 0.2 15 30
Tiramina 138 > 121 0.2 15 15

Función2: ESI + (5-16minutos). MRM de 4 canales.

Compuesto transición Dwell Voltage de cono Energía de colisión

2-Feniletilamina 122 > 77 0.2 20 25

2-Feniletilamina 122 > 105 0.2 20 10

Triptamina 161 > 117 0.5 20 26

Triptamina 161 > 144 0.5 20 12

 Ion ratios
• Relación entre la señal de la transición de
menor dimensión dividido por la de mayor
dimensión. El software de Waters da el inverso.
• Cadaverina: 0,400 (2,5)
• Putrescina: 0,023 (43,7)
• Histamina: 0,321 (3,12)
• Tiramina: 0.481 (2,08)
• 2-Fenilalanina: 0,222 (4,50)
• Triptamina: 0,178 (5,62)
 Contrastes del método
• Materiales de referencia para histamina en
los análisis rutinarios.
No se conoce para las demás aminas.

• Ejercicios de intercomparación para

histamina.
No se conoce para las demás aminas.

• Buenos resultados.
Gracias por su atención

Francisco Palacios Pastor

• fpalacios@aragon.es
• Teléfono: 976 715070