ASOCIACIÓN COSTARRICENSE CONGRESOS ODONTOLÓGICOS
20 EFECTO ANTIPROLIFERATIVO
DE LA PETIVERIA ALLIACEA EN
FIBROBLASTOS GINGIVALES HUMANOS.
ANTIPROLIFERATIVE EFFECT OF PETIVERIA
ALLIACEA IN HUMAN GINGIVAL FIBROBLASTS.
EFECTO ANTIPROLIFERATIVO P. ALLIACEA EN FGH.
RESUMEN
El propósito de este estudio experimental
fue analizar el efecto del extracto etéreo y el
etanólico de la planta Petiveria alliacea en
la proliferación de fibroblastos gingivales
humanos (FGH) in vitro. Se sometieron
FGH de un paciente sano entre el cuarto
y octavo pase a dosis de 10 a 50 mg/ml de
ambos extractos durante 24, 48 y 72 horas.
El extracto etanólico inhibió la prolifera-
ción en todas las dosis en las primeras 24
horas. Sin embargo, el efecto del extracto
etéreo se produjo hasta 48 horas, pero en
concentraciones menores a 30 mg/ml. La
acción del extracto etéreo y el etanólico
de la Petiveria alliacea sobre FGH, en las
concentraciones utilizadas en este estudio,
no comprometen la viabilidad celular, es
dependiente de la dosis y del tiempo de
exposición, siendo el extracto etéreo más
efectivo.
PALABRAS CLAVE
Fibroblastos gingivales humanos, Petiveria
alliacea, proliferación celular.
ABSTRACT
This experimental study proposes is analy-
ze the effect of the extracts from the plant
Petiveria alliacea in human gingival fibro-
blasts (HGF) in vitro. HGF from a sane
patient between the fourth and eighth pas-
se wore submit to both extracts in doses of
10 to 50 mg/ml for 24, 48 and 72 hours.
The ethanolic extract inhibited the proli-
feration in all doses on the fist 24 hours.
Although the ethereo extract effect was
produced on the 48 hours, but only in con-
centrations down of 20mg/ml. The Petive-
ria alliacea ethanolic and ethereo extract
action on HGF, with the concentrations
used on this study, do not compromise the
cell viability; it depends of the doses and
the time of expose, with more effectiveness
of the ethereo extract.
KEY WORDS
Human gingival fibroblast, Petiveria allia-
cea, cell proliferation.
INTRODUCCIÓN
La Petiveria alliacea es una planta conoci-
da en la medicina popular americana por
supuestas propiedades anticancerígenas,
en especial para tumor de estómago, leu-
cemia, nódulos mamarios, además por su
efecto abortivo. 1 Ha sido estudiada con
este propósito en diferentes investigaciones
en estado de prefase I, caracterizado por
pruebas en cultivos celulares in vitro.
La relación entre la fitoquímica y las cien-
cias de salud ha permitido el desarrollo de
un sin número de sustancias capaces de in-
ducir un efecto curativo en diversas patolo-
gías que afectan a nuestros pacientes.2 Los
fibroblastos y las células del neuroblastoma
fueron estudiados comparativamente por
Lombardero y colaboradores, quienes con-
EFECTO ANTIPROLIFERATIVO DE LA PETIVERIA ALLIACEA EN FIBROBLASTOS GINGIVALES HUMANOS.
Dra. Patricia Lorz
cluyeron que los mecanismos de prolifera-
ción de estas células son similares, pudién-
dose utilizar estos resultados para futuras
investigaciones de neoplasias in vivo. 3,4,5
Distintas fracciones del extracto hidroeta-
nólico de las raíces de la Petiveria alliacea
se estudiaron en un modelo de huevos
de erizo de mar para evaluar la actividad
antimitótica.6 El efecto citotóxico de los
extractos metanólicos de distintas plantas,
incluyendo las hojas de la Petiveria alliacea,
fueron probadas en una línea de carcinoma
hepatocelular, sin embargo no se halló nin-
guna acción de inhibición de crecimiento
en células de Hep 62, en el rango de las do-
sis utilizadas.7 Rösner y colaboradores en-
contraron inhibición de los microtúbulos
de células de neuroblastoma y de fibroblas-
tos pulmonares con el compuesto dibenzil
trisulfide, que es extraído de la planta.8 El
extracto de éter de petróleo de las raíces
promovió la diferenciación celular de una
línea de células promielocíticas (HL-60).9
No se conoce el efecto de esta planta sobre
fibroblastos gingivales humanos in vitro
(FGH), que por ser células diploides de
origen mesenquimal ampliamente utiliza-
das para estudios del comportamiento ce-
lular in vitro, resultan ser un buen modelo
para la investigación de las propiedades
antiproliferativas de la Petiveria alliacea.
Además su patrón de crecimiento caracte-
rístico, hace de éstas células excelentes can-
didatas para pruebas de toxicidad y factores
similares. El descubrimiento de un factor
que pueda inhibir la proliferación en célu-
las de origen mesenquimal podría ser una
125
 ASOCIACIÓN COSTARRICENSE CONGRESOS ODONTOLÓGICOS
importante herramienta terapéutica contra
los procesos tumorales de este origen. Por
tanto, la intención de este trabajo es obser-
var el efecto de dos extractos de Petiveria
alliacea en una población in vitro de fibro-
blastos gingivales humanos, que provienen
de un origen embrionario común con los
tumores fibroblásticos.
MATERIALES Y MÉTODOS
Obtención del extracto etéreo y el etanóli-
co de Petiveria alliacea:
A partir de 500 g de material vegetal seco
y molido de hojas y tallos de Petiveria
alliacea, utilizando 4L de éter de petróleo,
mediante la extracción tipo Soxhleth, se
obtuvo el extracto etéreo. Utilizando el
material vegetal ya desengrasado, con el
mismo método de extracción y 4L de eta-
nol, se obtuvo el extracto etanólico, ambos
fueron concentrados en el rotaevaporador
Büchl 401. 10 El extracto etéreo fue pesa-
do y diluido en el Tween 80 al 0.02% (di-
solvente más apropiado para estas pruebas
biológicas) adicionando PBS hasta llegar
a concentraciones de 0 – 50 mg/ml. 8 El
extracto etanólico fue igualmente pesado,
y, diluido en DMSO al 0.02% (disolvente
adecuado por las características de alta po-
laridad del extracto) más PBS, hasta llegar
a las mismas concentraciones.
OBTENCIÓN DE LOS
CULTIVOS DE FGH:
Una muestra de tejido gingival de un do-
nante sano joven fue tomada y colocada
en frascos de cultivo de fondo plano de 25
mL, con medio completo, compuesto, por:
medio esencial mínimo (MEM), Eagle de
SIGMA Ref. M0643; agua bidestilada;
bicarbonato de sodio Sigma Ref. S5761 al
2,2%; suero fetal bovino al 10% GIBCO-
BRL Ref. 16000-044; 100µg/mL penici-
lina-estreptomicina SIGMA Ref. P0906.
Fueron cultivados en una incubadora de
CO2 (NAPCO series 5400), al 5% y 37
ºC; realizando pases sucesivos, con el des-
prendimiento de la monocapa mediante
tripsinización (tripsina 0.25% SIGMA Ref.
E8008) y Na2EDTA 1 mM TRITIPLEX
III) a 37ºC durante 2 minutos y lavado con
medio completo y luego centrifugados a 4
ºC y 2000 rpm por 5 minutos. 11,12, 13
126 EFECTO ANTIPROLIFERATIVO DE LA PETIVERIA ALLIACEA EN FIBROBLASTOS GINGIVALES HUMANOS.
PRUEBA DE
PROLIFERACIÓN CELULAR:
Se montaron experimentos por cuadripli-
cado en placas de 96 pozos de fondo pla-
no Falcon Microtest TM 96, sembrando
10.000 células entre el 4° y 9° pase con 100
mL de medio completo. 24 horas después
de sembradas, se verificó la monocapa por
microscopía invertida, se cambió el medio
y fueron aplicadas concentraciones de 0 a
50 µg/ml del extracto etéreo y el etanólico,
con un volumen estable de 100µl por pozo.
Al cumplir cada periodo de tiempo de ex-
posición a los extractos (24, 48 y 72 horas),
se cambió el medio y se dejó incubando 24
horas más, con el medio completo fresco.
Por último, se agregó el reactivo Cell Titer
96 TM Aqueous One solution Cell Proli-
feration (catálogo G3582 de PROMEGA),
siguiendo las indicaciones del fabricante, y
finalmente leídas en un lector de Elisa Hu-
manreader a 490 nm. 14 Pruebas de via-
bilidad se realizaron, utilizando el mismo
protocolo de las pruebas de proliferación,
pero montando por triplicado, en placas
de 96 pozos y analizadas con la técnica de
exclusión con azul Tripán (SIGMA Ref. T-
0776), en la cámara de Neubauer y micros-
copio de luz invertida a los mismos tiem-
pos de la prueba de proliferación.
RESULTADOS
Extractos etanólico y etéreo de la Petiveria
alliacea
Siguiendo el protocolo de extracción tipo
Soxhleth, se obtuvieron 3 g de extracto
etéreo y 34,99 g de extracto etanólico pu-
ros.15 A partir de 200 mg del extracto eta-
nólico puro y 1 mL de DMSO, se obtuvo
una solución stock a la cual se agregó PBS
en distintas cantidades hasta lograr concen-
traciones de 10 a 50µg/ml. A continuación
se tomaron 200 mg del extracto etéreo
puro y 1 mL de Tween 80, adicionando de
la misma manera PBS hasta lograr las mis-
mas concentraciones del extracto anterior.
Pruebas definitivas de proliferación y viabi-
lidad del efecto del extracto etéreo y etanó-
lico de Petiveria alliacea en FGH:
Para este estudio se obtuvieron cultivos de
FGH puros entre el cuarto y octavo pase
con homogeneidad de células fusiformes,
sin atipia nuclear o pleomorfismo, orga-
nizadas en una monocapa visualizadas y
monitoreadas con microscopio de luz in-
vertida en aumento de 40 X, según técnica
estandarizada y ya descrita (1A). 16
Debido a la inexistencia de estudios pre-
vios del comportamiento de FGH frente a
los extractos etéreo y etanólico de Petiveria
alliacea fueron realizadas pruebas prelimi-
nares, por este grupo de investigadores,
utilizando altas concentraciones, entre 0
y 300 µg/ml. Sin embargo hubo compro-
miso de la viabilidad celular de los FGH
por citotoxicidad del extracto etanólico en
concentraciones superiores a 50 µg/ml y
del vehículo Tween 80 en concentraciones
superiores a 0.03% (datos no mostrados).
Los resultados obtenidos con el extracto
etanólico, en concentraciones de 0 a 50 µg/
ml, mostraron inhibición de la prolifera-
ción en todas las concentraciones utilizadas
a las primeras 24 horas de exposición de
las células a este extracto, con disminución
significativa de ésta con la p<0.05 (gráfico
1). Las concentraciones de 30 a 50 µg/ml
generaron el mayor efecto inhibitorio, re-
velando los menores valores de absorbancia
con promedios de 0,74 y 0,75 respectiva-
mente en este tiempo (figura 1N a 1T).
Los resultados a las 48 horas de exposi-
ción al extracto etanólico generaron una
disminución del efecto inhibitorio de los
FGH, comparando los resultados con los
valores encontrados a las 24 horas ya que
las concentraciones de 10, 20 y 40 µg/ml
fueron las únicas en causar inhibición, con
valores de absorbancia disminuidos signifi-
cativamente con la p<0.05 (figuras 1H, 1L
y 1R).
En el mayor tiempo de exposición, de 72
horas, el extracto etanólico reveló ser aún
menos efectivo que los otros dos tiempos,
solamente la concentración de 50 µg/ml
produjo inhibición, mostrando una signi-
ficativa disminución de la absorbancia (p<
0.05) con un valor promedio de 0,71(figu-
ra 1V).
La comparación de los valores de absorban-
cia de cada concentración a los tres tiempos
de observación mostró diferencias signifi-
cativas (p<0.05), confirmando la recupera-
ción del crecimiento de los FGH a las 48
y 72 horas comparadas con los valores de
proliferación de 24 horas, lo que puede ser
observado comparándose las columnas de
24, 48 y 72 horas de la figura 1.
Con la intención de corroborar la viabili-
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dad de los FGH con el extracto etanólico
a estas nuevas concentraciones, abajo de 50
µg/ml, se utilizó nuevamente la técnica de
exclusión con azul de tripan. Los resultados
mostraron similitud, en las concentracio-
nes investigadas, independiente del tiem-
po, con un valor promedio de viabilidad
celular superior al 88%, lo que difiere de
las concentraciones mayores de 100 µg/
ml que comprometen la viabilidad celular
(gráfico 2).
Fueron realizadas pruebas con concen-
traciones del extracto etéreo de Petiveria
alliacea debajo de 50 µg/ml, que permitie-
ron manejar concentraciones del vehículo
iguales o menores a 0,02%. Los valores
obtenidos a las 24 y 48 horas, revelaron
una relación inversa, en la cual las menores
concentraciones del extracto etéreo, que co-
rresponden a 10, 20 y 30 µg/ml, produje-
ron la mayor inhibición de la proliferación
(p<0.05) (figura 2A a 2V). Sin embargo a
las 72 horas de incubación con el extracto
etéreo, ninguna de las concentraciones de
éste causó inhibición de la proliferación de
manera significativa (gráfico 3). Cuando el
efecto de cada concentración del extracto
etéreo y el tiempo de acción de éstos sobre
las células fueron comparados mutuamen-
te, solamente la concentración de 30 µg/ml
mostró diferencia significativa con mayor
inhibición a las 24 horas (p<0.05) (figura
2N y 2 0). Los valores de absorbancia de 10
y 20 µg/ml a las 24 y 48 horas son simila-
res, sin diferencias significativas entre estos
tiempos, reportando índices promedio de
0,72 y 0,82 respectivamente a las 24 horas
y de 0,76 y 0,72 a las 48 horas (figura 2G,
2H, 2J y 2L).
Contrariamente a lo ocurrido con las con-
centraciones de extracto etéreo superiores
a 100 µg/ml, que mostraron total destruc-
ción de la monocapa y muerte celular, en
las concentraciones inferiores a 50 µg/ml
no solo la monocapa fue preservada sino
que los valores de viabilidad fueron eleva-
dos, con índices superiores a 84% (gráfico
4; figura 2T a 2V).
La correlación de las concentraciones de
los extractos estudiados según el tiempo
reveló que el mayor efecto antiproliferati-
vo lo mostró el extracto etéreo a una con-
centración de 10 µg/ml en las primeras 24
horas, seguido por las concentraciones de
30 y 50 µg/ml del extracto etanólico en el
mismo tiempo de observación (gráfico 5).
A las 48 horas, las concentraciones de 10 y
20 µg/ml del extracto etéreo fueron las más
efectivas (gráfico 6). No obstante, a las 72
horas la única concentración que mostró
ser efectiva fue el extracto etanólico a 50
µg/ml (p<0.05).
DISCUSIÓN
En este estudio se obtuvieron dos extractos
de las hojas y tallos de la planta Petiveria
alliacea.
El extracto etéreo con sustancias básica-
mente lipofílicas y el extracto etanólico,
rico en compuestos polares. Ambos ex-
tractos fueron evaluados en dosis desde 10
hasta 50 µg/ml en cultivos de fibroblastos
gingivales humanos, para analizar el efecto
en la inhibición de proliferación de los mis-
mos hasta 72 horas.
Los dos extractos inhibieron la prolife-
ración celular en forma estadísticamente
significativa en todas las concentraciones
analizadas en las primeras 24 horas. Se
observó que el extracto etéreo sostuvo el
efecto hasta las 48 horas y ninguno de los
dos inhibió la proliferación a las 72 horas.
El etéreo produjo un efecto mayor que el
etanólico (p < 0.05). Se presume, que po-
siblemente ambos extractos tienen compo-
nentes activos asociados a este fenómeno,
y que probablemente estén involucrados
en alteraciones premitóticas como la po-
limerización y despolimerización de los
microtúbulos, fenómeno ya descrito antes
por Rösner y colaboradores en células de
neuroblastoma, fibroablastos de pulmón y
neurites de médula espinal de pollo. 8
El extracto etéreo tuvo mayor efecto anti-
proliferativo que el extracto etanólico, lo
cual podría estar asociado a las caracterís-
ticas lipofílicas del mismo y le conferiría
capacidad de atravesar la membrana celular
como lo hacen los esteroides y producir al-
gún efecto directo en el DNA nuclear, que
puede ser levemente genotóxico, como lo
demuestra Hoyos. 17
La inhibición de la proliferación varió con
respecto a la dosis. El extracto etéreo fue
más eficiente en las menores concentracio-
nes y el etanólico en las mayores. Por lo
tanto, se puede pensar, que las característi-
cas de los compuestos contenidos en cada
extracto, por sus características químicas
de polaridad y no polar, tienen compor-
EFECTO ANTIPROLIFERATIVO DE LA PETIVERIA ALLIACEA EN FIBROBLASTOS GINGIVALES HUMANOS.
tamientos diferentes al interactuar con las
células. Puede ser que el extracto etanólico
por ser hidrofílico, requiera de receptores
de membrana y vías de señalización enzi-
máticas asociadas al receptor, que estén
asociados con factores de crecimiento o
regulación del ciclo celular, como los de
tirosin cinasa y vía MAP. 18 Así entonces,
es probable que las moléculas del extracto
tengan que competir por receptores, va-
riando la intensidad de la señal por la can-
tidad de receptores ocupados y esta sea di-
rectamente proporcional a la concentración
de sustancias agonistas en el medio, como
muestran algunos de los principios activos
en medicamentos. 19 También es factible
que los compuestos presentes en el extracto
etanólico tengan afinidad por los recepto-
res e induzcan un bloqueo de la señal de
proliferación obteniéndose inhibición.
Una tercera posibilidad es que produzcan
una inhibición por mecanismo indirecto,
induciendo cambios o disminuyendo la ex-
presión de los receptores en la membrana
de los fibroblastos gingivales humanos para
factores de crecimiento como el Factor de
crecimiento epidermal (EGF por sus siglas
en inglés), el Factor de crecimiento deriva-
do de plaquetas (PDGF), la Interlukina-1
(IL-1) , Factor de crecimiento similar a la
insulina I y II (IGF-1 e IGF-2), Factor de
crecimiento transformante _ y Factor de
crecimiento transformante _ (TGF-_ y
TGF-_). 18,20
Por otro lado el comportamiento de mayor
inhibición del extracto etéreo a menores
concentraciones, se podría explicar tam-
bién por las características de estructura
química de sus componentes, muchos de
los cuales ya han sido adecuadamente ais-
lados e identificados. 21 Uno de ellos, el
dibenziltrisulfide o DTS, es de característi-
cas lipofílicas y se comporta como una sus-
tancia sumamente activa en otros ensayos
de proliferación. 8
Se ha demostrado que hay sustancias con
características de isómeros o enantiómeros,
los cuales coexisten como mezclas racé-
micas en las que ambos se encuentran en
proporciones de 50 / 50 y tienen compor-
tamiento biológico diferente en distintos
modelos de experimentación, dependiendo
de su concentración y la capacidad de con-
versión de uno en otro. 22 Recientemente
se han identificado cuatro estereoisómeros,
el petiveriin 1a, el petiveriin 1b, el petive-
127
 ASOCIACIÓN COSTARRICENSE CONGRESOS ODONTOLÓGICOS
ricin 1a y el petivericin 1b en la fracción
etérea de la Petiveria alliacea. El petiveriin
1a y el petiveriin 1b se ha confirmado que
se encuentran en mezclas y se distribuyen
en porcentajes diferentes en raíces, hojas y
tallos. 21 Tal vez, los esteroisómeros de la
Petiveria alliacea se comporten en solución
como mezclas racémicas y la disociación de
ambos isómeros pueda estar influida por
la concentración y así en concentraciones
menores haya más cantidad del isómero en
la forma activa, mientras que a concentra-
ciones mayores se encuentre en forma de
mezcla racémica o se favorezca la presencia
de ambos por igual y disminuya la efectivi-
dad. Este fenómeno podría estar asociado
a la mayor actividad del extracto etéreo a
bajas concentraciones.
Dentro de los resultados obtenidos en este
estudio, se observó que la inhibición de
la proliferación fue tiempo dependiente.
El extracto etéreo mantuvo el efecto has-
ta las 48 horas y el etanólico fue eficiente
hasta las 24 horas. Los resultados en esta
investigación son congruentes con estudios
anteriores, en los cuales se ha evaluado el
efecto de la fracción etérea en relación al
tiempo en un modelo de cigotos de erizo
de mar, en el cual se halló que el efecto in-
hibitorio se mantuvo durante el transcurso
del experimento, el cual tuvo una dura-
ción de 6 horas. 6 Rösner y colaborado-
res, encontraron efecto de desensamblaje
de microtúbulos con dibenziltrisulfide,
en cultivo de fibroblastos de pulmón, los
cuales se vuelven a reensamblar a las 24
horas de separarlos del dibenziltrisulfide.
8 Es probable que por las características
hidrofílicas del extracto etanólico su acción
podría estar mediada por receptores rela-
cionados con vías de señalización relacio-
nadas con proliferación celular y el resul-
tado aunque estadísticamente significativo,
es rápidamente controlado por las células
y requiere de dosis de mantenimiento para
seguir inhibiendo. Sin embargo el extrac-
to etéreo tuvo un efecto más duradero. El
componente activo de este extracto, podría
tener mucha afinidad por alguna molécula
o enzima de una cascada de señalización re-
lacionada con proliferación celular, con la
cual establece enlaces más fuertes y permite
que el efecto perdure, como por ejemplo la
configuración de puentes de disulfide del
dibenziltrisulfide, que le permite establecer
enlaces estables con la albúmina de suero
128 EFECTO ANTIPROLIFERATIVO DE LA PETIVERIA ALLIACEA EN FIBROBLASTOS GINGIVALES HUMANOS.
bovino. 8 O también es factible que si po-
see la habilidad de penetrar directamente a
través de la membrana y llegar al núcleo,
tal vez dentro de sus acciones pueda estar la
de producir un daño leve al DNA, el cual
requiere más tiempo para ser reparado. 17
Se propone con base en los resultados obte-
nidos, que ambos extractos inhiben la pro-
liferación celular, de formas dosis y tiempo
dependientes, las cuales obedecen proba-
blemente a las características estructurales
de los compuestos que contienen. Confir-
ma la concepción de que los efectos pro-
ducidos por un extracto o una planta, pue-
den darse por un solo componente o una
mezcla de sustancias contenidas en ella que
actúan de diversas maneras. 15 El extracto
etanólico por tener características hidrofí-
licas, probablemente origine interacciones
con la célula por medio de receptores de
membrana, unidos con vías de señalización
intracitoplasmáticas relacionados con pro-
liferación celular, lo cual es dependiente
de la dosis. Por otro lado posiblemente el
extracto etéreo contenga isómeros que se
disocian dependiendo de la concentración,
siendo el más activo el que se encuentra
en bajas concentraciones, el cual podría
atravesar la membrana celular por ser lipo-
fílico, llegar más rápido al núcleo o esta-
blecer uniones intracelulares estables, que
lo hacen ser más potente en la inhibición
de la proliferación de fibroblastos gingiva-
les humanos a bajas dosis. Medicamentos
antineoplásicos de origen vegetal como los
taxoles y los nocodazoles han demostrado
comportamiento similar en modelos de es-
tudio para inhibición celular, como se ha
observado con el dibenziltrisulfide, uno de
los componentes activos del extracto etéreo
de la Petiveria alliacea. 8 Es importante
agregar, que aunque el extracto etéreo tuvo
un mayor efecto en la inhibición de la pro-
liferación comparado con el extracto eta-
nólico, realmente no fue tan grande como
para decir que los resultados con el extracto
etanólico deban ser desechados. Es más,
otros antineoplásicos de origen vegetal en
uso en la actualidad, es reconocida la di-
ficultad en su elaboración por sus carac-
terísticas de dilución y biodisponibilidad,
precisamente por ser muy poco polares. 23
Por lo tanto, si el extracto etanólico tam-
bién inhibió la proliferación, es posible que
contenga sustancias que sean hidrosolubles
y que en caso de que se pueda obtener un
compuesto con actividad antineoplásica,
éste tenga una buena tolerancia por la vía
oral, como son las recomendaciones de la
Division of Cancer Treatment del Natio-
nal Cancer Institute de Estados Unidos,
encargada de la investigación sobre drogas
nuevas de origen natural. 24 La variedad
de efectos y sustancias contenidas en esta
planta, hacen de ella un promisorio objeto
de investigación.
CONCLUSIONES
El extracto etéreo y el etanólico de Petiveria
alliacea demostraron acción eficaz antipro-
liferativa en fibroblastos gingivales huma-
nos, a las dosis más bajas de 10 y 20 mg/ml
establecidas en esta investigación, sin com-
prometer la viabilidad, hasta 48 horas.
La actividad antiproliferativa del extracto
etéreo y del extracto etanólico en fibroblas-
tos gingivales humanos es dependiente de
la dosis y del tiempo de exposición.
El extracto etéreo tiene mayor actividad
antiproliferativa que el extracto etanólico
en fibroblastos gingivales humanos en las
dosis y tiempos de exposición empleados
en este estudio.
Aunque el extracto etéreo tuvo mayor efec-
to inhibitorio que el etanólico, no signifi-
ca que se deba descartar, más bien se debe
seguir investigando, por la posibilidad de
encontrar sustancias con actividad antipro-
liferativa que sean hidrosolubles y puedan
ser mejor toleradas por vía oral.
RECOMENDACIONES:
Aunque se haya identificado la inhibición
de la proliferación celular a bajas dosis con
el extracto etéreo y el etanólico de Petiveria
alliacea, estudios posteriores son necesarios
para averiguar en dónde y cómo se produce
este efecto.
Los resultados obtenidos con el extracto
etéreo en altas concentraciones en fibro-
blastos gingivales humanos son desconoci-
dos, se sugiere la utilización de otro vehícu-
lo que no sea citotóxico en concentraciones
superiores a 0,03%.
El estudio del efecto de las fracciones de
estos extractos de Petiveria alliacea debe ser
evaluada inicialmente en fibroblastos gin-
givales humanos, con el objetivo de aislar e
 ASOCIACIÓN COSTARRICENSE CONGRESOS ODONTOLÓGICOS

identificar la sustancia o sustancias activas
y su efecto en células normales.
Se recomienda la investigación de los efec-
tos de estos mismos extractos de Petiveria
alliacea en otras líneas celulares humanas
normales y tumorales.
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EFECTO ANTIPROLIFERATIVO DE LA PETIVERIA ALLIACEA EN FIBROBLASTOS GINGIVALES HUMANOS. 129

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Gráfico 1

Gráfico 1. Ensayo del efecto del extracto etanólico de Petiveria alliacea en la proliferación celular de FGH en con-
centraciones de 10 a 50 µg/ml. En las primeras 24 horas hay inhibición de la proliferación en todas las dosis,
con disminución del efecto en los siguientes tiempos de exposición al extracto hasta 72 horas. * p> 0.05.

Gráfico 2

Gráfico 2. Prueba de viabilidad celular realizada con el extracto etanólico de Petiveria allia-
cea en concentraciones de 300 a 10 µg/ml en FGH. Es evidente en este gráfico el efecto citotóxici-
co del extracto, comprometiendo la viabilidad en todas las dosis superiores a 50µg/ml.

130 EFECTO ANTIPROLIFERATIVO DE LA PETIVERIA ALLIACEA EN FIBROBLASTOS GINGIVALES HUMANOS.

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24 horas 48 horas 72 horas

Fig. 1A Fig. 1B Fig. 1C

Fig. 1D Fig. 1E Fig. 1F

Fig. 1G Fig. 1H Fig. 1I

Fig. 1J Fig. 1L Fig. 1M

Figura 1. Ensayo del efecto del extracto etanólico de Petiveria alliacea en FGH en las concentraciones de 50 a 10 µg/ml. A, B y C
corresponden al control de células solas en los tiempos de 24, 48 y 72 horas respectivamente; D, E y F, al control con el vehículo DMSO
a 0.02% en los tiempos de 24, 48 y 72 horas respectivamente; G, H e I, al extracto etanólico administrado en la concentración de 10
µg/ml en los tiempos de 24, 48 y 72 horas respectivamente; J, L y M, al extracto etanólico administrado en la concentración de 20 µg/ml
en los tiempos de 24, 48 y 72 horas respectivamente.

EFECTO ANTIPROLIFERATIVO DE LA PETIVERIA ALLIACEA EN FIBROBLASTOS GINGIVALES HUMANOS. 131

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24 horas 48 horas 72 horas

Fig. 1N Fig. 1O Fig. 1P

Fig. 1Q Fig. 1R Fig. 1S

Fig. 1T Fig. 1U Fig. 1V

Figura 1. Ensayo del efecto del extracto etanólico de Petiveria alliacea en FGH en las concentraciones de 50 a 10 µg/ml. N, O y P co-
rresponden al extracto etanólico administrado en la concentración de 30 µg/ml en los tiempos de 24, 48 y 72 horas respectivamente; Q,
R y S corresponden al extracto etanólico administrado en la concentración de 40 µg/ml en los tiempos de 24, 48 y 72 horas respectiva-
mente; T, U y V corresponden al extracto etanólico administrado en la concentración de 50 µg/ml en los tiempos de 24, 48 y 72 horas
respectivamente. Todos las concentraciones mostraron disminución de la monocapa en las primeras 24 horas de exposición, resultado de
la inhibición de la proliferación. Sin embargo, la densidad de la monocapa aumenta en todos las concentraciones al tiempo de 72 horas,
con excepción de 50 µg/ml.

132 EFECTO ANTIPROLIFERATIVO DE LA PETIVERIA ALLIACEA EN FIBROBLASTOS GINGIVALES HUMANOS.

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24 horas 48 horas 72 horas

Fig. 2A Fig. 2B Fig. 2C

Fig. 2D Fig. 2E Fig. 2F

Fig. 2G Fig. 2H Fig. 2I

Fig. 2J Fig. 2L Fig. 2M

Figura 2. Ensayo del efecto del extracto etéreo de Petiveria alliacea en FGH en las concentraciones de 50 a 10 µg/ml. A, B y C correspon-
den al control de células solas en los tiempos de 24, 48 y 72 horas respectivamente; D, E y F, al control con el vehículo Tween 80 a 0.02%
en los tiempos de 24, 48 y 72 horas respectivamente; G, H e I, al extracto etéreo administrado en la concentración de 10 µg/ml en los
tiempos de 24, 48 y 72 horas respectivamente; J, L y M, al extracto etéreo administrado en la concentración de 20 µg/ml en los tiempos
de 24, 48 y 72 horas respectivamente.

EFECTO ANTIPROLIFERATIVO DE LA PETIVERIA ALLIACEA EN FIBROBLASTOS GINGIVALES HUMANOS. 133

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24 horas 48 horas 72 horas

Fig. 2N Fig. 2O Fig. 2P

Fig. 2Q Fig. 2R Fig. 2S

Fig. 2T Fig. 2U Fig. 2V

Figura 2. Ensayo del efecto del extracto etéreo de Petiveria alliacea en FGH en concentraciones de 50 a 10 µg/ml. N, O y P corresponden
al extracto etéreo en concentración de 30 µg/ml a las 24, 48 y 72 horas respectivamente; Q, R y S, extracto etéreo en concentración de 40
µg/ml a las 24, 48 y 72 horas respectivamente; T, U y V, extracto etéreo a concentración de 50 µg/ml a las 24, 48 y 72 horas respectiva-
mente. Se puede observar la disminución de la monocapa en los intervalos de 10 a 30 µg/ml hasta las 48 horas, resultado de la inhibición
de la proliferación.

134 EFECTO ANTIPROLIFERATIVO DE LA PETIVERIA ALLIACEA EN FIBROBLASTOS GINGIVALES HUMANOS.

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Gráfico 3

Gráfico 3. Ensayo del efecto del extracto etanólico de Peti-

veria alliacea en la proliferación celular de FGH en concen-
traciones de 50 a 10 µg/ml. Los valores de la absorbancia
están significativamente disminuidos en las concentracio-
nes de 10 a 30 µg/ml hasta las 48 horas de exposición. A las
72 horas ninguna de las dosis utilizadas generó inhibición
de la proliferación cuando comparado al grupo control.
* p>0.05.

Gráfico 4

Gráfico 4. Prueba de viabilidad celular realizada con el

extracto etéreo de la Petiveria alliacea en concentraciones
de 40 a 10 µg/ml en FGH. Se observa los altos niveles de
viabilidad celular obtenidos con todas las concentraciones
administrada en todos los tiempos de exposición.

Gráfico 5

Gráfico 5. Comparación del extracto etanólico y etéreo en

las concentraciones más activas en la inhibición de la proli-
feración de FGH a 24 horas de exposición. A la concentra-
ción de 10 µg/ml el extracto etéreo fue el más efectivo, a la
concentración de 20 µg/ml los extractos mostraron valores
similares de inhibición y, a la concentración de 30 µg/ml, el
más efectivo fue el extracto etanólico. * p> 0 .05.

Gráfico 6

Gráfico 6. Comparación del extracto etanólico y etéreo en

las concentraciones más activas en la inhibición de la pro-
liferación de FGH a 48 horas de exposición. A las concen-
traciones de 10 y 20 µg/ml el extracto etéreo fue el más
efectivo, mientras que a la concentración de 30 µg/ml los
valores de ambos extractos fueron similares.

EFECTO ANTIPROLIFERATIVO DE LA PETIVERIA ALLIACEA EN FIBROBLASTOS GINGIVALES HUMANOS. 135