Estructura del citocromo P450

En las estructuras cristalinas del enzima libre, disponibles hasta el momento se observa un grupo
hemo (figura 1), en el cual el hierro se encuentra unido a un grupo tiol (-SH) de una cisteina y a
una molécula de agua. La estructura secundaria del P450 consiste en aproximadamente 12 alfa
hélices, de las cuales las hélices I y L, altamente conservadas, están en contacto directo con el
grupo hemo. La hélice I contiene también residuos críticos implicados en el suministro de protones
a los intermediarios hidroperoxo y peroxo del ciclo catalítico. La zona del núcleo está constituida
por cuatro hélices (aD, aE, aI y aL), hélices J y K, dos láminas b, y una espiral denominada meander
loop (serpentina) (figura 2). Abarca entre 7-10 residuos de aminoácidos y se supone que juega un
papel en la unión del grupo hemo, y en la estabilización de la estructura terciaria de la proteína.

Figura 1. Grupo Hemo del citocromo P450

Existen seis regiones denominadas SRSs (substrate recognition sites), involucradas en el

reconocimiento y unión de sustratos, que por lo tanto determinan la especificidad de los mismos.

De un modo resumido, vemos que la molécula del enzima está constituida por una combinación
de regiones a-hélice y de hojas (laminas b), fundamentalmente en la región de la proteína que
rodea al grupo hemo (figura 3), mientras que las regiones más variables son las que constituyen
los lugares de anclaje a la membrana o de unión y reconocimiento de sustratos. La alta
conservación de la región del hemo, que se corresponde con el centro catalítico del enzima, refleja
un mecanismo común de transferencia de electrones y de protones y de activación de oxígeno. El
enzima permanece anclado a la membrana a través de una hélice hidrofóbica cercana al extremo
N-terminal, por lo que la mayor parte de la proteína se sitúa en la cara citosólica de la membrana.
Esta hélice transmembrana está seguida, por regla general, por una serie de aminoácidos básicos
cuyos residuos interaccionan con las cargas negativas de los lípidos de la membrana.

Figura 2. Estructura
secundaria y terciaria de las
proteínas P450.
Representación de la cara
distal del CYP2C5. El grupo
hemo se representa en
naranja y el sustrato en
amarillo.

Figura 3. Estructura
cristalina (Rayos X) del
P450cam. En rojo se
muestra la región C
terminal, en azul la N
terminal y en fucsia el
grupo hemo.
La hemoproteína se encuentra relacionada con una segunda proteína de membrana, la NADPH-
citocromo P450 reductasa en una relación aproximada de 10:1 (10 moléculas de citocromo P450
por cada una de reductasa); esta reductasa posee el complejo FAD/FMN capaz de trasferir los
electrones necesarios para la reacción oxidativa producida en el citocromo P450, aunque estos
electrones también pueden provenir desde el citocromo b5, que facilita su trasferencia desde el
NAD (P) H.

REACCIONES

Las reacciones de hidroxilación desempeñan un papel muy importante en la síntesis del colesterol
a partir del escualeno; así como en la conversión del colesterol en sales biliares y hormonas
esteroides. Todas estas reacciones de hidroxilación requieren NADPH Y O2. El átomo de oxígeno
del grupo hidroxilo procede del O2, y no de la molécula de H2O. De los dos átomos del oxígeno
(O2), uno se incorpora en el grupo hidroxilo, y el otro se reduce hasta H2O. Las enzimas que
catalizan estas reacciones se denominan por esto mismo “oxigenasas de función mixta” o, de
modo más abreviado, “mono-oxigenasas”.

Las “mono-oxigenasas” también se hallan involucradas en la hidroxilación de los aminoácidos

aromáticos.

RH + O2 + NAPDH + H+ → ROH + H2O + NAPD+

La hidroxilación requiere la activación del oxígeno. En la síntesis de sales biliares y hormonas

esteroides, dicha activación se consigue mediante el Citocromo P450, un conjunto de enzimas
citocrómicos con un máximo de absorción a 450nm de longitud de onda cuando forman complejos
con monóxido de carbono exógeno. Las proteínas del Citocromo P450 se anclan en la membrana,
tienen un peso molecular de 50kd (quilodaltons) y contienen un grupo prostético hemo.
El proceso de oxidación (hidroxilación) es complejo. Podemos esquematizarlo en varias etapas:

a) NADPH transfiere sus electrones de elevado potencial a una flavo proteína.

b) La flavoproteína dirige los electrones a la adrenodoxina, una proteína con un átomo de hierro
(la adrenodoxina no contiene grupo prostético hemo).

c) Uno de los electrones de la adrenodoxina reduce el hierro férrico (Fe3+) del grupo hemo del
Citocromo P450 (Fe3+ → Fe2+). Sin la adición del e-, el Citocromo P450 no se enlazaría al O2
(recordar que la mioglobina y hemoglobina solo se unen al oxígeno cuando el átomo de hierro de
su grupo hemo se halla en el estado de oxidación ferroso).

d) Cuando el P450 se ha unido al O2, acepta un segundo e- de la adrenodoxina.

e) La unión de este segundo e- da lugar al clivaje del enlace covalente (O―O):

a. Uno de los átomos de oxígeno se protona y se libera como H2O.

b. El otro átomo de oxígeno forma un intermediario ferrilo (Fe=O), muy inestable y,
consecuentemente, muy reactivo. Este intermediario extrae un átomo de hidrógeno del
sustrato (representado como RH) para dar lugar a un radical muy reactivo (representado
como R*). Este radical libre captura el grupo hidroxilo (―OH) del átomo de hierro,
formándose el metabolito hidroxilado (ROH). El átomo de hierro del Citocromo P450
recupera su estado de oxidación férrico (Fe3+).

El complejo enzimático encuadrado bajo la denominación Citocromo P450 (abreviadamente

CYP450, de su acrónimo en inglés) ejerce un papel principal en la degradación de múltiples
moléculas endógenas, tales como hormonas esteroides, lípidos complejos y vitaminas. Así mismo,
metaboliza sustancias presentes en la dieta; y sustancias exógenas tales como medicamentos y
otros productos ambientales.