Seminário internacional: Os desafios da agricultura tropical

Os microrganismos e
sua importância para a
Agricultura Tropical

João Lúcio de Azevedo

ESALQ/USP
CBA

São Paulo, FAPESP, 15/09/2009

Número de Espécies no Planeta
Espécie Nº Conhecido Nº Estimado NC/NE %

Bactéria 4 700 40 000 11,0

Fungo 69 000 1 500 000 4,6
Alga 40 000 60 000 66,7
Planta 276 750 295 000 90,8
Protozoário 30 800 100 000 30,8
Inseto 970 000 6 a 10 mi 9,7 a 16
Porífera, cnídios 29 000 515 000 5,6
e nematóides

Outros 98 000 100 000 98,0

Fixação biológica de nitrogênio atmosférico por bactérias
Promoção de crescimento vegetal por fungos micorrízicos
 Interações

 Planta hospedeira
 Estoque de microrganismos
 Microrganismos epifíticos

 Microrganismos endofíticos
 Microrganismos endofíticos

Microrganismos depositados na Coleção de culturas do CBA

 Microrganismos isolados

Actinomicetos depositados na Coleção de culturas do CBA

 Endófitos e suas aplicações

 Controle de insetos–pragas

 Controle de patógenos

 Produção de fármacos

 Produção de hormônios de crescimento vegetal

 Resistência a condições de estresse

 Como vetores em tecnologia do DNA recombinante

Bactérias promotoras de crescimento e inibidoras de fitopatógenos de
guaraná - Colletotrichum guaranicola e cupuaçu - Crinipellis perniciosa
(53 isolados testados)

Bactérias produtoras de
fitohomônios (16 isolados)

Bactérias fixadoras de
nitrogênio (18 isolados)

Bactérias solubilizadoras Bactérias capazes de inibir

de fosfato (6 isolados ). fitopatógenos (isolados G1 e G2)
 Produção de metabólitos
secundários

Microrganismos capazes de produzir metabólitos com atividade antimicrobiana; A)

metabólito de actinomiceto (isolado 1) inibindo E. coli, e B) metábólito de fungo
(isolado 81) inibindo S. marcescens)
Controle de bactérias humano-patogênicas por bactérias
endofíticas
Fungo atacando fungo
Controle de Rhizoctonia solani por Thrichoderma sp. em tomateiro
Pinta preta em citrus
(Guinardia citricarpa)
1992 2000
PATOGÊNICO ENDOFÍTICO
ANÁLISE DE RAPD
 PCP1
PCRJ1
PCP2
PCP3
PCP7
Isolados patogênicos
•São Paulo (17)
PCC2
PCP5
PCP8
PCP9
PC7L

•Rio de Janeiro (5)

PCRJ3
PCRJ2
PC23
PC97005
PC97008

•Rio Grande do Sul (4)

PC97012
PC97013
PCFM
PCP10
PC18
100% PC97007
CBS111.20
PC97014
PC7LS
PCC9
•Strain CBS 111.20
PCP6
40% PC13
ECPR1
ECPR7
ECPR9
100% ECPR3
ECPR6
ECPR11
ECPR12
ECPR5
Isolados endofíticos
•Paraná (10)
ECPR8
ECPR10
PC19
EC0L23
PC97010
ECPR14
ECPR16
EC15
EC80
EC86
EC45
ECTO1
PC48
EC1
Isolados endofíticos
•São Paulo (25)
PC2
PC4
PC45
EC4
P G1513

•Rio Grande do Sul (8)

P G1506
ECA175
ECA245
EC171
ECA63

•Paraná (1)
ECA196
ECN22
63% ECPOA7
ECPOA4
ECPOA5
% 79%
•Tucumãn-Argentina (6)
ECN1
ECN14
ECN18
P G1509
P G1512

•Amazonas-guaraná (4)
ECRP1
ECN2
ECRP5
ECPOA2
EG2Z

•São Paulo-eucalyptus (1)

ECN19
ECRP2
ECRP4
P G1515
EENI2

•Distrito Federal-guava (9)

P G1435
P G1508
53% PC58
P G1514
PC1
PCC4
PC50
PCC4S
EC210
PC16

Isolados patogênicos
EC216
ECN3
EC86S
EC384
ECRP6
EG1Z
EG4Z
EG3Z
P G1499
ECPOA1
•São Paulo (11)
ECPOA8
ECPOA6
EC131
EC145
•Rio Grande do Sul (1)
0.05 0.29 0.53 0.76 1.00
Coeficiente de Similaridade Genética
SEQUÊNCIA DO FRAGMENTO ESPECÍFICO DO PATÓGENO
 DETECÇÃO DE G. citricarpa
PATOGÊNICA EM TECIDO DE CITRUS
 Triângulo da doença

Remoção de Controle do
plantas vetor
sintomáticas
Sobrevivência
com CVC

Certificação de mudas
Isolamento de bactérias endofíticas

Curtobacterium

Methylobacterium

Incidence of the main endophytes isolated from branches of sweet orange and
tangerine plants
Interação entre bactérias endofíticas e X. fastidiosa

X. fastidiosa X. fastidiosa
Methylobacterium sp.
(bactéria endofítica)
Crescimento de isolados de X. fastidiosa estimulado por isolados endofíticos de
Methylobacterium spp.
Relação entre populações bacterianas, sugerindo assim que os sintomas da CVC em
citrus pode ser o resultado do balanço populacional entre Methylobacterium spp., C.
flaccumfaciens e X. fastidiosa.
> 70 citações
Fungos endofíticos utilizados no controle de
C. perniciosa

% sintomas
87,50% Controle A (com C. perniciosa)
00,00% Controle B (sem C. perniciosa)
29,16% Endofítico Iso 2 ( Gliocadium catenulatum)
33-79% Outros endófitos (22 islados)
Soja
Promoção de crescimento por fungos endofíticos isolados de soja
Soja

Promoção de crescimento por fungos endofíticos isolados de soja

Eucalyptus

Promoção de crescimento por fungos endofíticos isolados de Eucalyptus

Fungos endofíticos isolados de folhas e
caule de milho

steam leaf steam leaf

field greenhouse
Mortalidade (20 dias) de fêmeas de Boophilus microplus tratadas com
suspensão de conídios (105 conídios ml-1) of B. amorpha (isolados B95, B157)
ou B. bassiana (linhagens CG166, CG478). As lagartas do controle foram
tratadas com solução de Tween 80 (0.1%). As barras representam o desvio
padrão. Valores acompanhados da mesma letra não diferem estaticamente
(Teste de Tukey, P>0.05).
Mortalidade (20 dias) de lagartas de S. frugipera tratadas com suspensão de
conídios (105 conídio ml-1) de B. amorpha (isolados B95, B157) e B. bassiana
(linhagens CG61, CG14, CG166). As lagartas do controle foram tratadas com
solução de Tween 80 (0,1%). Valores acompanhados da mesma letra não
diferem estaticamente (Teste de Tukey, P>0.05)
 Utilização da tecnologia do DNA
recombinante em endófitos

 Clavibacter xyli/BT em milho

 Bradyrhizobium japonicum/BT em Cajanus cajan

 Pseudomonas/BT em cana-de-açúcar

 Herbaspirillum/quitinase em cana-de-açúcar
 Desenvolvimento de vetor de expressão
PvuII PstI

BamHI HincII
BglIII

pPA 2.5 Digestão com BamHI and ligated pUC18

2,5 Kb 2,7 Kb

PstI
XbaI MCS

EcoRI; SacI; KpnI; SmaHI; XbaI;

SlaI; HincII; PstI

Digestão com XbaI; PstI XbaI

BamHI
pPA2.5/18 e ligação pSMC2
GFP
5.2 Kb XhaI 5.2 Kb
BamHI
PstI
PstI

XbaI

pPA2.5/18
6.0 Kb
PstI
 X

b
b

Mortalidade (10 dias) de lagartas de D. sacchatralis tratadas com bactéria

endofítica Pantoea agglomerans (33.1) geneticamente modificada
expressando o gene cry1Ac (108 UFC/colmo). Valores acompanhados da
mesma letra não diferem estaticamente (Teste de Tukey, P>0.05)
Centro de Biotecnologia da Amazônia - CBA
Centro de Biotecnologia da Amazônia – CBA
ESALQ-USP
 Obrigad
o !
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