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Resumen
Se investigó in vitro la especificidad de cuatro preparados detectores de caries,(fucsina básica en solución hidroalcohólica y en
propilenglicol, rojo ácido en propilenglicol y pigmento verde FD&C en solución acuosa de glicol). Se realizó la eliminación de
caries siguiendo los criterios táctiles y visuales y se aplicó el colorante en la cavidad. Se tomaron muestras de dentina de las zonas
teñidas y no teñidas por el colorante. Estas fueron recubiertas con un film de oro de 50 nm y luego se examinaron con el auxilio
de un microscopio electrónico de barrido, (MEB). La observación reveló la presencia de cantidades variables de barrillo dentinario
y determinó diversos grados de infección bacteriana, especialmente por cocos y bacilos, en las muestras excavadas por criterios
ópticos y táctiles, así como en las teñidas por fucsina en propilenglicol y rojo ácido en propilenglicol. Las muestras excavadas
con la guía de fucsina en solución hidroalcohólica o pigmento verde FD&C resultaron aparentemente libres de bacterias.
Abstract
The specificity of four caries detector dyes, (O.5% basic fuchsin in hydroalcoholic solution and in propylene glycol,1.0% acid
red in propylene glycol and FD&C dark green dye in an aqueous glycol base), was investigated in vitro using extracted human
permanent teeth. Cavity preparation using the visual and tactile criteria was done and the dye was applied into the cavity. Dentin
samples were collected from the dye unstained and stained areas, gold-coated with a 50 nm film, and then examined with the aid
of a scanning electron microscope, (SEM). Results showed a layer of cutting debris, (smear layer), and different grades of
bacterial infection, specially by cocci and bacillus, on the conventional tactile and optical criteria excavated samples and on
fuchsin (in propylene glycol) and acid red stained dentin. Samples excavated with the aid of fuchsin in hydroalcoholic solution
and FD&C dark green were apparently free of bacteria.
trolados por profesores, han mostrado altos por- las fibras colágenas en el límite amelo-dentinario
centajes de error de diagnóstico, que oscilan entre son más toscas y están orientadas en forma dife-
54%, (Kidd et al, 1989), 72%, (Anderson & rente, además de que es una zona menos
Charbeneau, 1985) y hasta 78.4% (Cadalfach et mineralizada. A su vez, la zona circumpulpar o de
al, 2001). Es de hacer notar que el estudio de 1985 predentina es variable en espesor, con zonas an-
encontró 82% de error de diagnóstico en el límite chas de dentinogénesis activa. Estas diferencias
amelo-dentinario, lo que llevó a que los autores harían ambas zonas dentinarias más susceptibles
concluyeran que: “... aparentemente los dentistas a los colorantes.
serían incapaces de detectar dentina cariada por Ansari et al. en 1999, probaron otros tres colo-
discriminación táctil o pruebas visuales basadas rantes, además de la fucsina y el rojo ácido, en-
en la coloración natural...” (Anderson & y
contrando en ellos la misma falta de especifici-
Charbeneau, 1985). dad. Concluyeron que además de la menor
Es lógico entonces que los tests colorimétricos mineralización, la intensidad del color cerca de la
fueran preconizados durante muchos años como pulpa podría deberse a que los colorantes pene-
alternativas seguras y confiables a los métodos trarían más fácilmente en los túbulos, que son más
visuales y táctiles de eliminación de caries, no anchos en ese sector.
solamente en dentina sino también como excelen- Otros trabajos encontraron que la ausencia de
te ayuda en el diagnóstico de lesiones cariosas tinción no era sinónimo de una dentina absoluta-
oclusales de puntos y fisuras (Al Sehaibany et al, mente sana.
1996) Sin embargo, permanecen vigentes algunas Anderson et al. en 1985, usando fucsina en
interrogantes, por ejemplo acer- propilenglicol, encontraron 20%
ca de la especificidad de estas de dientes alojando bacterias lue-
técnicas y por ende la posibili- go de la eliminación de caries y
dad de exceso de tallado Sin embargo otros trabajos demostraron que la dentina no se
(Banerjee et al, 2003; Pinheiro et teñía con el colorante si conte-
al, 2004), ya sea porque no toda encontraron que la ausencia nía menos de 10000 UFC/mg.
la dentina teñida está infectada de tinción no era sinónimo de Boston y Graver en 1989, uti-
o porque los niveles de infección lizando rojo ácido en
remanentes son bajos y conside- dentina absolutamente sana. propilenglicol hallaron 25% de
rados clínicamente insignifican- dientes con bacterias en la zona
tes, (Kidd et al, 1993). Un estu- no teñida. Estas bacterias, que se
dio demostró que no había co- encontraban ocasionalmente y
rrelación entre la dentina coloreada y la presencia eran relativamente escasas, colonizaban los túbulos
de bacterias o sea que serían fenómenos indepen- dentinarios desde 0.1 a 2.4 mm hacia pulpar de la
dientes (Boston & Graver, 1994) zona “limpia”. Los cortes obtenidos de los
Otros investigaciones demostraron in vitro e in especimenes habían sido teñidos con hematoxilina-
vivo la posibilidad de teñir dentina sana. Por ejem- eosina o coloración de Brown y Brenn.
plo tanto la fucsina como el rojo ácido teñirían el List et al. en 1987, encontraron que 15% de
colágeno de las regiones menos mineralizadas de especimenes, aparentemente saneados con la ayu-
la matriz orgánica, zona circumpulpar y límite da de un colorante, contenían bacterias.
amelo-dentinario (Kidd et al, 1993; Yip et al, Boston y Graver en 1994, hallaron 21% de dien-
1994). tes con bacterias en la dentina no teñida, debajo
En la misma dirección otro estudio (Boston & de amalgamas clínicamente sanas y que habían
Liao, 2004), probó cinco diferentes colorantes, to- servido un promedio de 11 años.
dos los cuales tiñeron zonas sanas y absolutamen- Otro trabajo (Zacharia & Munshi, 1995), esta-
te libres de bacterias, aunque generalmente con bleció que el uso de un detector de caries (rojo
menor intensidad que en las zonas realmente ca- ácido al 1%), reducía mucho la presencia de
riadas. Las zonas teñidas correspondieron a zonas microorganismos en la cavidad, pero no asegura-
finas (0.5 mm de espesor), en la zona circumpulpar ba la eliminación completa, ya que algunas mues-
y en el límite amelo dentinario. tras de dentina no coloreada alojaban recuentos
Estos autores especularon con diferencias estruc- (mínimos) de colonias.
turales en la dentina de esas zonas. Por ejemplo Utilizando otra metodología, un estudio compa-
ró los niveles de bacterias (en UFC), entre dentina b.- los tests colorimétricos tiñen dentina sana,
teñida y no teñida en el límite amelo-dentinario, por lo tanto tienden a sobre-extender la cavidad.
no encontrando diferencias significativas (Kidd et c.- por lo tanto, coloración y presencia de bacte-
al, 1993). Por otro lado, Zacharia y Munshi en rias serían fenómenos independientes.
1995, compararon dentina coloreada y no colo- Como por otra parte los tests colorimétricos han
reada por el mismo colorante y concluyeron que demostrado ser útiles en la tarea de sanear la den-
hay una diferencia altamente significativa entre las tina infectada, resulta interesante observar y com-
UFC entre ambas dentinas y que por lo tanto el parar el desempeño de cuatro colorantes comer-
rojo ácido en propilenglicol sería una ayuda va- ciales en cuanto a la eficacia de ese saneado.
liosa en el diagnóstico de la dentina cariada.
Otro estudio más reciente (Shirol, 2004), demos-
tró que la dentina coloreada con un producto en
base a rojo ácido al 1% en propilenglicol contenía OBJETIVOS
seis veces más UFC por mg que la dentina no te-
ñida. El objetivo de este trabajo es observar, por
Oikawa et al. en 1994, utilizaron un detector microscopía electrónica de barrido, la dentina re-
experimental de rojo ácido en solución en poli- manente a la eliminación de caries con cuatro de-
propilenglicol, con la finalidad de conservar la tectores distintos, (fucsina básica en solución
dentina esclerótica. En ese estudio ese detector hidro-alcohólica, fucsina básica en propilenglicol,
permitió la eliminación total de rojo ácido en propilenglicol y
la dentina infectada, sin bacte- pigmento FD&C verde oscuro
rias remanentes detectables. en solución acuosa de glicol),
Sin embargo, actualmente se Actualmente se entiende que para determinar alteraciones de
postula que los medios conven- los métodos convencionales de la estructura dentinaria y la
cionales de análisis del conteni- permanencia de infección
do bacteriano en realidad son ca- análisis de contenido bacteriano, bacteriana.
paces de detectar menos del
son capaces de detectar menos
50% del total de la población
microbiana (Banerjee et al, del 50% del total de la
2000). El desarrollo de nuevas MATERIALES
tecnologías, como por ejemplo población microbiana. Y MÉTODOS
la detección del ADN bacteriano
en el tejido dentinario, han per- Se utilizaron 8 molares con
mitido ahondar más en este problema (Becker et caries oclusales e indicación de extracción por
al, 2002). motivos periodontales. Luego de la avulsión, las
En esa línea de trabajo, Iwami (2005), utilizó piezas dentarias fueron conservadas en suero fi-
colorimetría para comparar este método objetivo, siológico y mantenidas bajo refrigeración a 3°C
con la presencia de bacterias detectadas en la den- hasta su procesamiento (máximo 3 días).
tina remanente por PCR (Polymerase Chain Se procedió a la eliminación de la dentina infec-
Reaction), técnica que evidencia la presencia de tada con cucharitas afiladas hasta considerar los
ADN bacteriano. Concluyó que el grado de tinción ejemplares libres de caries por los métodos tácti-
de la dentina cariada se correlacionaba con el gra- les y visuales usuales (color y dureza).
do de destrucción de la misma por los ácidos y/o A continuación se dividieron los ejemplares en
las colagenasas bacterianas, y que a medida que cuatro grupos, A,B,C y D, de dos dientes cada uno.
disminuía la intensidad de la tinción dentinaria, A cada ejemplar del grupo A se le tomó una
ésta se acercaba a valores de contaminación de 0, muestra de dentina, (especimenes A1), realizán-
ya que el rojo ácido teñía la matriz orgánica dose los cortes correspondientes por medio de un
desmineralizada y no las bacterias. disco de diamante a velocidad media, (Esquema
Resumiendo toda esta información se podrían 1). Seguidamente se colocó fucsina básica en so-
establecer tres puntos fundamentales: lución hidro-alcohólicaa en el piso de la cavidad,
a.- los tests colorimétricos dejan dentina infec- usando una torunda de algodón estéril por 10 se-
tada sin teñir. gundos. A continuación se eliminó el exceso de
colorante con agua destilada, luego con alcohol A continuación fueron recubiertas con film de
(Turell, 1976) y nuevamente con agua. Se secó la oro de 50 nm. por 100 segundos, (Figura 1) en un
cavidad con el aire procedente de la jeringa triple. equipo de sputtering, (Denton Vaccum-Desk II).
Se procedió a eliminar la zona teñida con fresas La observación, el análisis y la microfotografía
estériles redondas de carburo de tungsteno núme- de los especimenes se realizó por medio de un
ro 6 a baja velocidad, (Esquema 1). Se tomó una microscopio electrónico de barrido (JEOL, mo-
segunda muestra de dentina (especimenes A2). El delo JSM-5900LV, Tokio, Japón), con un voltaje
protocolo se repitió hasta que los tejidos de aceleración de 20 kV.
dentinarios no volvieron a teñirse con el coloran-
te. En ese momento se tomó una tercera muestra
de dentina, (especimenes A3). y
El procedimiento completo se repitió con los
ejemplares del grupo B, usándose fucsina básica
en propilenglicol b. Con los especimenes del gru-
po C se usó rojo ácido en propilenglicolc, y con
ESQUEMA 1
RESULTADOS
los del grupo D, pigmento verde FD&C en solu- Se pudo observar, en la mayoría de los ejempla-
ción acuosa de glicold, pero para estos tres colo- res procesados, una capa de barrillo dentinario que
rantes no se realizó el lavado con alcohol, ya que cubría la dentina y enmascaraba los detalles es-
este paso no integra el protocolo de esos detecto- tructurales. (Figuras 2, 3,13 y 14). Las muestras
res, (Tabla 1). teñidas con fucsina básica en solución
Para la preparación de las muestras para la ob- hidroalcohólica aparecieron más limpias. (Figu-
servación por microscopía electrónica, se pro- ras 4, 5, 6,15 y 16)
cedió a fijarlas inmediatamente en glutaraldehído Se constató la presencia de bacterias en las mues-
al 3%, bajo refrigeración y por 4 horas a 4 grados tras de dentina correspondientes a la eliminación
C. Luego fueron lavadas con solución fisiológica. de caries guiada por criterios ópticos y táctiles.
Se procedió al secado de las muestras en un apa- (Figura 8)
rato de punto crítico, (Denton Vaccum-DCP.1) y En el grupo A, fucsina en solución
su fijación en las bases apropiadas, (diámetro 1 hidroalcohólica, no se constató la presencia de
cm) con cinta de doble faz. microorganismos en las muestras 2 y 3. (Figuras
4, 5, 6, 15, 16)
TABLA 1 En el grupo B, fucsina en propilenglicol, se cons-
tató la presencia de bacterias en las muestras 1, 2
y 3. (Figuras 9 y 10)
En el grupo C, colorante rojo ácido en
propilenglicol, se constató la presencia de bacte-
rias en las muestras 1,2 y 3. (Figuras 11 y 12)
En el grupo D, pigmento FD&C en solución
acuosa de glicol, no se encontraron bacterias en la
muestra 3. (Figuras 13 y 14)
Figura 2. Barrillo dentinario. (400 X) Figura 3. Barrillo dentinario. Partículas inorgánicas de 9 a 11 micras
de diámetro. (1100 X)
Figura 4. Túbulos dentinarios abiertos y vacíos. Eliminación par- Figura 5. Túbulos dentinarios cortados longitudinalmente. Fucsina
cial con fucsina básica en solución hidroalcohólica. Ausencia de con- básica en solución hidroalcohólica. Eliminación total. (2200 X)
taminación. (3000 X)
Figura 6. Túbulos dentinarios cortados longitudinalmente. Fucsina Figura 7. Contaminación bacteriana exógena. Cocos en racimo.
básica en solución hidroalcohólica. Eliminación total. Espécimen b. (7000x)
(5000 X)
Figura 8. Eliminación con criterios ópticos y táctiles. Presencia de Figura 9. Eliminación parcial con fucsina en propilenglicol. Pre-
contaminación bacteriana. (6000 X) sencia de cocos y bacilos. (10000 X)
y
Figura 10. Eliminación total con fucsina en propilenglicol. Pre- Figura 11. Eliminación parcial con rojo ácido en propilenglicol.
sencia de microorganismos. (10000 X) Contaminación por cocos y bacilos. (10000 X)
Figura 12. Eliminación total con rojo ácido en propilenglicol. Se Figura 13. Eliminación total con pigmento verde FD&C. Se apre-
observa contaminación bacteriana. (6000 X) cia el barrillo dentinario y ausencia de contaminación bacteriana.
(2300 X)
Por lo tanto para estos autores, no habría evi- y post tinción por medio de un microscopio elec-
dencia clara de que sea relevante dejar dentina in- trónico, teniendo en cuenta que la observación de
fectada, aún en el caso de que esté blanda y húme- los tejidos dentinarios por esta modalidad presen-
da, previamente al sellado de la cavidad, (por re- ta algunas desventajas. Por ejemplo, la desecación
visión ver Kidd, 2004). de los tejidos en su preparación para el alto vacío
La suerte de los microorganismos sería pues in- puede provocar grietas o, en el caso de la obser-
cierta, y se pueden plantear múltiples preguntas vación de microorganismos, una disminución bas-
acerca de si sobreviven o no, de cuánto sobrevi- tante apreciable en su número.
ven, de si cambian sus fenotipos o genotipos, de Por otra parte, la dentina excavada con instru-
si siguen siendo agresivos, de si continúan produ- mentos manuales o rotatorios, presenta al MEB
ciendo ácidos y descalcificando la dentina (y a una capa de barrillo dentinario de partículas orgá-
partir de qué substratos), de si sus toxinas agre- nicas y de hidroxiapatita (el-Housseiny et al, 2000;
den o no la pulpa y muchas otras. Yazici et al, 2002; Pinheiro et al, 2004), que pe-
Dentro de este cúmulo de interrogantes aún no netra en los túbulos y que complica y dificulta la
resueltos se destaca el riesgo de una falla en el observación de estructuras anatómicas y
sellado marginal de las restauraciones: en ese caso, microorganismos (Figuras 2, 13 y 14). En la Figu-
al recomenzar el suministro de nutrientes desde la ra 3 puede observarse esas partículas, de forma
placa, las bacterias que aún se encuentren viables, regular y bastante redondeada, pero cuyo tamaño,
¿podrían reactivarse reiniciándose la progresión de que oscila entre 6 y 11 micras, descarta la posibi-
la enfermedad y llevando eventualmente a la des- lidad de que sean microorganismos.
trucción de la pieza dentaria? Sin embargo, en algunos especimenes que resul-
Como esta pregunta no ha sido aún respondida, taron sorprendentemente “limpios”, se pudo apre-
y como tampoco se ha desarrollado un material ciar la presencia de detalles anatómicos como
de sellado perfecto, especialmente en lo referido túbulos dentinarios abiertos y aparentemente va-
a su permanencia en el tiempo, parece juicioso cíos, (cortes transversales, Figuras 4 y 15) y cor-
inclinarse por la eliminación total de la dentina tados longitudinalmente, con prolongaciones
infectada. Este procedimiento pasaría a ser una citoplásmicas de los odontoblastos, (Figuras 5 y
condición de sanidad indispensable antes de en- 6), y con una estructura aparentemente fibrilar (Fi-
carar la restauración, fuera cual fuera su enverga- gura 16).
dura. Estos ejemplares fueron los teñidos con fucsina
La eliminación guiada por colorantes detectores básica en solución hidroalcohólica. Reportes an-
parece dar mayor seguridad que la sola ayuda de teriores (Leidal et al, 1979) sugieren que sólo las
criterios ópticos y táctiles para la eliminación de soluciones desmineralizantes o los agentes ácidos
esa dentina infectada (Styner et al, 1996). como el ácido fosfórico al 37%, son capaces de
Con la finalidad de observar en forma cualitati- remover el barrillo dentinario. Los colorantes de-
va el resultado de la eliminación de caries guiada tectores, como por ejemplo el pigmento FD&C no
por distintos detectores se observó la dentina pre tienen esa capacidad (El-Housseiny et al, 2000).
Figura 15. Eliminación parcial con fucsina en solución Figura 16. Eliminación total con fucsina en solución
hidroalcohólica. Túbulos dentinarios vacíos. Espécimen b. (7500 X) hidroalcohólica. Túbulo cortado longitudinalmente. Se aprecia fibra
de Tomes y ausencia de contaminación. (10000 X)
a
Fucsina - Pharma Dent.
b
Test- Pharma Dent.
c
Detector de Caries Densell.
d
SableSeek - Ultradent Products.
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