Universidad De Los Andes

Facultad De Ingeniería
Escuela De Ingeniería Química
Departamento De Química Industrial Y Aplicada
Laboratorio De Análisis Instrumental
Mérida Edo. Mérida

DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOSBÉSTICO Y LA CONSTANTE DE

DISOCIACIÓN DE UN INDICADOR ÁCIDO-BASE.

Carrero Greyson; CI: 20.142.142

López Jesús; CI. 19.286.792

Noviembre de 2014.

____________________________________________________________________________________

RESUMEN

El punto isosbéstico es una longitud de onda a la cual la absorción de una solución

es independiente de las condiciones del medio en el que se encuentra, por ejemplo, en su
punto isosbéstico la absorción de un indicador acido-base es independiente del pH al que se
encuentra. Utilizando datos de absorción en un rango de longitud de onda diferente al punto
isosbéstico de un indicador es posible determinar su constante de disociación ácida, Ka, con
los datos de absorbancia en zonas a ambos lados de su pH de viraje. En la práctica
realizada se determinó el punto isosbéstico y la constante de disociación del indicador
azul de bromotimol, para ello se determinaron los espectros de tres soluciones que
contienen la misma concentración total del indicador pero a diferente pH. Conocidos los
espectros del indicador en el medio ácido, básico y neutro se seleccionaron los intervalos
de longitudes de onda más adecuados para calcular el pKa del indicador, encontrándose un
valor de pKa de 7,296 con una discrepancia de 2,76 % con respecto al valor teórico. El
punto isosbéstico hallado para el azul de bromotimol corresponde a una longitud de onda
500 nm. Mediante un análisis estadístico t con un nivel de significancia de 95% se
determinó si el valor de Ka experimental difiere del verdadero encontrándose diferencias
significativas entre dichos valores.
 INTRODUCCION.

La Ley de Lambert-Beer es la ley fundamental que rige la absorción de todos los

tipos de radiación electromagnética, aplicable a disoluciones y también a gases y sólidos.
Esta ley dice que la absorbancia de radiación electromagnética producida por una especie
absorbente es directamente proporcional a la trayectoria de la radiación a través de la
disolución y a la concentración en ésta de la sustancia que produce la absorción.

A=ε.b.c Ec. 1

La absorbancia de la energía radiante de las moléculas que están en solución,

dependen de la forma que estás se encuentren en equilibrio. En particular para las especies
que presentan propiedades acido- base la absorción de la luz será diferente si dicha especie
se encuentra protonada o no, consecuentemente las disoluciones de especie acido-base
presentarán valores de absorbancia que dependerán del valor de pH en equilibrio. En el
caso de un indicador ácido - base se genera un sistema de dos especies absorbentes, así que
la absorbancia de la solución del indicador será el resultado de la contribución de cada una
de las especies de acuerdo a su concentración en el equilibrio. [1]

Entre las muchas aplicaciones de los métodos y medidas espectrofotométricas se

encuentra la medida de concentraciones de especies en equilibrio con el fin de establecer el
valor de las constantes de disociación, o bien de las constantes de formación, ya que si cada
especie absorbe luz en diferentes longitudes de onda, es posible medir sus concentraciones
sin alterar el equilibrio.

El indicador de color es un ácido débil, HA, cuyas especies conjugadas (HA y A -)

están en equilibrio en una proporción de concentraciones que dependen del pH. [2]

El equilibrio de ionización de un indicador se puede representar mediante la

reacción:

HIn  H 2 O  In   H  Ec. 2

En la que HIn representa la molécula de indicador en su forma ácida In- la molécula

de indicador en su forma básica .El cambio de color se basa en el desplazamiento del
equilibrio químico mostrado en la ecuación 2 y en la diferencia de comportamiento del
grupo cromóforo presente en la molécula HIn o el ión In¯.

La constante de ionización correspondiente al equilibrio vendrá expresada de forma

aproximada por:

K = [H3O+] [In-] / [HIn] Ec. 3

 Suponiendo soluciones suficientemente diluidas para que todos los coeficientes de
actividad implicados sean próximos a la unidad. Con esta condición se aplica la ecuación
de Henderson-Hasselbalch para la disolución de este indicador en agua:

pH = pKa + log [In-] / [HIn] Ec. 4

Por lo que si se dispone del valor de la relación [In -] / [HIn] para un pH

determinado, se podrá conocer el valor del pKa del indicador.

En condiciones de extrema acidez o basicidad la absorbancia medida es el producto

de la contribución de una de las especies coloreadas, por lo que es posible determinar la
constante de disociación del indicador a partir de la Absorbancia de una solución neutra por
medio de la relación:
(𝐴𝑛𝑒𝑢𝑡𝑟𝑎−𝐴𝑎𝑐𝑖𝑑𝑎)
𝑝𝐾𝑎 = 𝑝𝐻 − 𝐿𝑜𝑔 (𝐴𝑏𝑎𝑠𝑖𝑐𝑎−𝐴𝑛𝑒𝑢𝑡𝑟𝑎) Ec. 5

Donde A neutra, A ácida, A básica representan la absorbancia medidas para las

soluciones acidas, básica y neutra del indicador. [3]

Si se prepara una serie de soluciones en la que la sustancia se encuentra distribuida

en sus tres forma de disociación acida básica y neutra, permaneciendo constante su
concentración total, el grafico de absorbancia en función de la longitud de onda va a exhibir
un punto en común, para el cual las especies tienen la misma absortividad molar que se
llama punto isosbéstico (del griego iso- igual, sbennyai, extinguir). Así ambas especies
tienen la misma capacidad para absorber radiación de luz electromagnética de luz visual.

La medición de la absorbancia a diferentes valores de pH impuestos en disolución

permite deducir el valor de pKa del indicador y consecuencia el intervalo de pH útil para
que este sea usado para indicar el punto final de las valoraciones.

La práctica realizada tiene como objetivos estudiar el espectro de luz visible de un

indicador acido-base como ejemplo de un sistema con múltiples especies absorbentes,
determinar el punto isosbéstico de dicho indicador y conocer la aplicabilidad de la
espectrometría para la determinación de constantes de disociación de electrolitos débiles.

MATERIALES Y METODOS.

En esta práctica se utilizó un espectrofotómetro digital Genesys 5 fabricado por la

Milton Roy Company. Dicho equipo está compuesto por una fuente de energía radiante que
se encarga de proveer luz radiante con suficiente intensidad para realizar la medición, un
filtro que permite el paso de una determinada longitud de onda, una celda que contiene la
muestra, un detector para la energía radiante no absorbida y un medidor de lectura.
 Inicialmente se calibra el equipo realizando el ajuste cuando en el compartimiento
no se tiene muestra, y el ajuste cuando se tiene agua como blanco del análisis.

Para la determinación del punto isosbéstico de un indicador acido base,

concretamente el azul de bromotimol se prepararon tres soluciones con pH conocido, cada
una en un rango de pH donde el indicador presente un color diferente, una solución de HCl
0.1 M, con un pH inferior a 6, una solución de NaOH 0.1 M con un pH superior a 7,6 y
una solución con pH neutro, justo en el pH de variación del indicador. A cada una de las
soluciones se les agregó 6 gotas de azul de bromotimol, observándose el cambio de color
obtenido. Luego, se realizaron medidas de absorbancia a diferentes longitudes de onda para
cada solución, estas medidas permiten encontrar el punto isosbéstico del indicador.

RESULTADOS Y DISCUSION

El indicador estudiado en la práctica fue el azul de bromotimol, cuyo nombre

IUPAC es 3,3-Dibromo Timolsulfonftaleina, con formula C27H28Br2O5S , peso molecular
de 624,39 gr/grmol y pKa a 25ºC de 7,1, su estructura molecular y su disociación en su
punto de viraje se presentan en la figura 1.

Figura 1.- Disociación del Azul de Bromotimol. [4]

Este tipo de compuestos presentan grupos cromóforos unidos a los anillos

bencénicos, originalmente incoloros, que le otorgan el color característico del indicador en
el medio que se encuentre. Esto se debe a que estos compuestos presentan gran cantidad de
electrones capaces de absorber radiación visible a ciertas longitudes de onda, reflejando
otras longitudes correspondientes a los colores que presentan.

En la figura 2 se observa los espectros de absorción del azul de bromotimol en

diferentes pH, en medio ácido el indicador presenta su máximo de absorbancia en una
longitud aproximada de 425 nm, a esta longitud de onda la solución presenta un color
amarillo, es decir que absorbe las longitudes azul y roja del espectro, por otro lado, en un
medio básico, el espectro presenta un máximo de absorción a una longitud de onda
aproximada de 625 nm, donde absorbe los colores amarillo y rojo del espectro y la solución
tiene un color azul intenso, en medio neutro, donde se presenta un equilibrio entre las
especies disociadas y sin disociar del indicador, el espectro presenta dos máximos, uno a
425 nm y otro a 620 nm.

El punto isosbéstico de este indicador se encuentra a 500 nm, a esta longitud de

onda los coeficientes de extinción molar del indicador en medio ácido y medio básico, son
iguales, lo que se demuestra debido a que a esta longitud de onda la absorción de ambas
especies es exclusivamente dependiente de la concentración del indicador y no del medio
en el que se encuentra. Para determinar la constante de disociación de este indicador se
puede utilizar los espectros a cualquier longitud de onda, excepto en la longitud
correspondiente al punto isosbéstico, esto se debe a que el cálculo de la constante de
disociación se basa en la diferencia de absorbancia de las especies disociadas, y en este
punto, la absorbancia es igual. Es recomendable utilizar una longitud de onda donde la
diferencia entre las absorbancia sea máxima para aumentar la precisión del método.

0.6

0.5
Absorbancia (A)

0.4

0.3 Med.
Acido

0.2 Med.Ne
utro

0.1 Med.
Basico
0
375 400 425 450 475 500 525 550 575 600 625 650 695
Longitud de Onda (λ)

Figura 2. Espectro de absorción del Azul de Bromotimol a diferentes pH

El valor experimental encontrado para el pKa es de 7,296 y para el Ka de 5,06e-8

±3,8289E-09 con una discrepancia de 2,758 % para el valor del pKa. La menor
discrepancia porcentual entre el valor de pKa experimental y el teórico se tiene para una
longitud de onda comprendida entre 400 a 475 nm.
 Por medio de un análisis estadístico t se pudo conocer si el valor promedio de Ka
(X) determinado experimentalmente difiere del valor verdadero (μ) se encontró que como
t exp  t ( , ) , por lo que se rechaza Ho y se acepta HA, con un nivel de confianza del
95%, la diferencia entre X y μ es significativa y no puede explicarse por errores aleatorios.

CONCLUSIONES

Los espectros de absorción de una solución de un ácido débil, como lo es el azul de

bromotimol, presenta distintos comportamientos dependiendo del pH del medio.
Obteniéndose unas longitudes de onda con grandes diferencias de absorbancia y otras
donde las absorbancias tienden a ser iguales, lo que ocurre en el punto isosbéstico. Este
comportamiento es característico de compuestos que presentan equilibrios entre dos
especies.

El punto isosbéstico del azul de bromotimol se encuentra a una longitud de onda de

500± 5nm y una absorbancia de 0,058 ±0,02.

Los métodos de análisis por espectrometría de luz visible permiten identificar

sustancias presentes en una solución y determinar constantes de equilibrio de ácidos débiles
con bastante precisión. Obteniéndose para el azul de bromotimol un valor de pKa de 7,296
con una discrepancia del valor teórico de 2,758 %

BIBLIOGRAFIA.

[1] Alejandro Beaza. (1998). Espectrometría de luz UV/VIS y Equilibrio químico: Punto
Isosbéstico. Universidad Nacional de México. Facultad de Química.

[2] Douglas A. Skoog, Et Al. Fundamentos de Química Analítica. Editorial Thomson.

Octava Edición. Ciudad de México, 2002.

[3] Documento en línea. http://www.upct.es/~minaeees/espectro_electromagnetico.pdf.

Fecha de consulta 30/10/14.

[4] Documento en línea. http://www1.uprh.edu/inieves/pKa-manual_timol.htm . Fecha de

consulta 27/10/14
 ANEXOS

1. DEDUCCIÓN PARA DETERMINAR LA CONSTANTE DE DISOCIACIÓN DEL

INDICADOR.

HIn  In   H 

Al equilibrio Co (1-α) Coα Coα

El grado de disociación:  
In  …………………….. (1)


Co

La constante de disociación viene dada por: Ka 

H In   H * 
 


HIn  1

Aplicando logaritmo en ambos lados de la constante de disociación:

LogKa  Log H   Log

 In  

HIn 
Multiplicando ambos lados de la ecuación por (-1):

 LogKa   Log H   Log

 In     pKa  pH  log In 
 

HIn  HIn 
  
pKa  pH  log   …………………. (2)
1  

Escribiendo la ley de Beer cuando existen dos especies de concentraciones c1 y c2 en equilibrio y

cuyos coeficientes de extinción son 1 ,  2 :

A  C1 *  1 * b  C2 *  2 * b

Siendo C1  C 2  Co

Cuando se representa una familia de espectros de absorción de un indicador, en el que cada curva
representa la Absorbancia de la disolución a un pH determinado (Fig.), se tiene que para una
longitud de onda y para una curva de pH intermedio la Absorbancia viene dada por:

A  C HI *  HI * b  C In  *  In  * b ………………….. (3)

Si C HI  C In   C o

C o  C HI  C In  …………………(4)
Sustituyendo en (4) en (3):

A  C HI *  HI * b  (C o  C HI ) *  In  * b

Para un pH muy ácido no se aporta Absorbancia porque la disociación está muy reprimida, por lo
que α  0, solo existe la especie HI y la Absorbancia que se mide es:

A  AHI  Co *  HI * b

AHI
 HI  …………………. (5)
CO * b

A pH muy básico   1 , casi solo existe la especie In-, por lo tanto la Absorbancia que se mide es:

A  AIn   C o *  In  * b

AIn 
 In 
 ………………….. (6)
CO * b

La medida de la Absorbancia para cualquier longitud de onda está dada por:

A  AHI  AIn 

Aplicando la ley de Beer y el grado de disociación:

A  C HI *  HI * b  C In  *  In  * b  C o (1   ) *  HI * b  C o *  In  * b …….. (7)

Sustituyendo (5) y (6) en (7):

AHI A
A  Co (1   ) * * b  Co * In * b
Co * b Co * b

A  (1   ) * AHI   * AIn 

A  AHI
Despejando  
AIn   AHI

Sustituyendo esta última expresión en 2:

 A  AHI   A  AHI 
   
A  AHI  AIn  AHI
pKa  pH  log  In  pH  log  
 A  AHI   AIn  AHI  A  AHI 
1     
 AIn  AHI   AIn  AHI 
Simplificando términos y aplicando doble C se llega a la siguiente expresión:

 A  AHI 
pKa  pH  log  
 A   A
 In 

2. DETERMINACIÓN DEL PKA:

Las mediciones realizadas en el laboratorio son las siguientes:

Tabla 1. Datos para construir el espectro de absorción ácido, básico y neutro.

Absorbancia
Long. De Med. Med. Med.
Onda Acido Neutro Básico
375 0,13 0,13 0,12
400 0,17 0,15 0,11
425 0,19 0,15 0,054
450 0,18 0,13 0,04
475 0,13 0,1 0,052
500 0,06 0,054 0,058
525 0,03 0,054 0,17
550 0,01 0,056 0,26
575 0,005 0,11 0,39
600 0,01 0,15 0,47
625 0,01 0,15 0,52
650 0,03 0,1 0,28
695 0,08 0,058 0,09
 Tabla 2. Datos para calcular el pKa y Ka

Long. Onda pH (An-Aa)/(Ab-An) Log pKa Ka % Discrepancia

375 7 0 #¡NUM! #¡NUM! #¡NUM! #¡NUM!
400 7 0,5 -0,30103 7,30103 5E-08 2,83140839
425 7 0,416666667 -0,38021124 7,38021124 4,1667E-08 3,946637207
450 7 0,555555556 -0,25527251 7,25527251 5,5556E-08 2,186936692
475 7 0,625 -0,20411998 7,20411998 6,25E-08 1,466478629
500 7 -1,5 #¡NUM! #¡NUM! #¡NUM! #¡NUM!
525 7 0,206896552 -0,68424675 7,68424675 2,069E-08 8,22882743
550 7 0,225490196 -0,64687234 7,64687234 2,2549E-08 7,702427264
575 7 0,375 -0,42596873 7,42596873 3,75E-08 4,591108905
600 7 0,4375 -0,35902194 7,35902194 4,375E-08 3,648196375
625 7 0,378378378 -0,42207369 7,42207369 3,7838E-08 4,536249132
650 7 0,388888889 -0,41017447 7,41017447 3,8889E-08 4,368654438
695 7 -0,6875 #¡NUM! #¡NUM! #¡NUM! #¡NUM!

Tabla 3. Ka promedio y pKa promedio

Ka promedio Ka real %Discrepancia Ka pKa promedio %Discrepancia pKa

5,06 E-08 7,943 E-08 32,47 7,296 2,758

Nota: para calcula el pKa promedio se tomaron los valores de la tabla 3 que están en
amarillo, debido a que presentan menor discrepancia con respecto al valor teórico
experimental

MUESTRA DE CÁLCULO.

A continuación se muestran los cálculos realizados para el Ka, tomando como ejemplo la
segunda fila de la tabla 2, el valor real del pKa es de 7,1.

 Aneutra  Aacida 
pKa  pH  Log  
 Abasica  Aneutra 

 0,15  0,17 
pKa  7  Log    7,30
 0,11  0,15 

7,1  7,30
% Discrepanc ia  *100  2,83
7,1
 Ka  10   pKa   10  ( 7 ,30)  5 x10 8

El Ka y pKa promedio se calculó de la siguiente manera.

 Kai
i 1 5,0 E  8  4,166 E  8  5,555E  8  6,25E  8  4,375E  8
Ka    5,06 E  8
n 5
 
pKA   Log Ka   Log 5,06 E  8  7,296

7,493E  8  5,06 E  8
% Discrepanc ia Ka  *100  32,47%
7,493E  8

7,1  7,296
% Discrepanc ia pKA  *100  2,758%
7,1

ANALISIS ESTADISTICO

Tabla 4. Valores seleccionados para calcular el KA promedio

Long. %
Onda pKa Ka Discrepancia
400 7,30103 5E-08 2,83140839
425 7,38021124 4,1667E-08 3,946637207
450 7,25527251 5,5556E-08 2,186936692
475 7,20411998 6,25E-08 1,466478629
600 7,35902194 2,069E-08 8,22882743

Los valores reales de pKa y Ka son 7,1 y 7,493x10-8 respectivamente.

Tabla 5. Estadística descriptiva

Ka
Media 5,06944E-08
Error típico 3,8289E-09
Mediana 5E-08
Moda #N/A
Desviación estándar 8,56169E-09
Varianza de la muestra 7,33025E-17
-
Curtosis 1,265019044
 Coeficiente de
asimetría 0,457581805
. Rango 2,08333E-08
Mínimo 4,16667E-08
Máximo 6,25E-08
Suma 2,53472E-07
Cuenta 5
Nivel de
confianza(95,0%) 1,06307E-08

Tabla 6. Comparación de media experimental con valor conocido

Comparación de Ka experimental con Ka real

Media 7,493E-08 5,0694E-08
Varianza 0 7,3302E-17
Observaciones 5 5
Diferencia hipotética de las 0
medias
Grados de libertad 4
Estadístico t 6,329635187
P(T<=t) una cola 0,001594363
Valor crítico de t (una cola) 2,131846786
P(T<=t) dos colas 0,003188726
Valor crítico de t (dos colas) 2,776445105

1- Definición del problema Ho y HA

Ho = 𝑋̅ = μ

HA= 𝑋̅ ≠ μ

2. Nivel de significación (α):

Nivel de confianza =95 %

3. En tablas y con grados de libertad=4 y 95 % de confianza:

t ( , )  2,1318

4. Comparación:
6,3296 > 2,1318

Como t exp > 2,1318. Se rechaza Ho y se acepta HA.