PRÁCTICA NO. 10.

TINCIÓN ÁCIDO-ALCOHOL RESISTENTE

OBJETIVO
El alumno aplicará las técnicas de coloración de microorganismos ácido-
resistentes para diferenciarlos e identificarlos, en base a sus propiedades
morfológicas

MATERIAL
*Un cultivo de 72 horas de mycobacterium. Si es posible se les facilitará un esputo
de tuberculoso procesado en autoclave.
* Un cultivo de 24 horas de streptococcus

REACTIVOS
* Fucsina de Ziehl- Neelsen
* Azul de metileno
* Alcohol acidulado

INTRODUCCIÓN
Los microorganismos pertenecientes al género Mycobacterium se caracterizan por tener
una pared celular completamente diferente a las restantes bacterias. La pared de las
Mycobacterias posee un alto contenido de lípidos que la hace impermeable a los agentes
hidrofílicos, por lo tanto estos microorganismos no se tiñen adecuadamente con los
reactivos utilizados en la coloración de Gram y no pueden ser clasificados como Gram
positivos o negativos. Las Mycobacterias son teñidas adecuadamente por el método de
Ziehl-Neelsen (Tinción Ácido-Rápida o Acid-Fast Stain) que utiliza como solución
decolorante una mezcla de etanol y ácido clorhídrico. Son bacilos ácido-alcohol resistentes
por lo que la tinción de Zieh1Neelsen es útil para la coloración de estos microorganismos
obtenidos de muestras clínicas o de cultivo. Con esta tinción, los bacilos aparecen de color
rojo brillante sobre un fondo azul. Los bacilos tuberculosos son difíciles de teñir con la
tinción de Gram, y se observan como bacilos gram positivos con tinción irregular. Estos
microorganismos una vez coloreados son resistentes a la decoloración ácido-alcohólica y
por eso se denominan Bacilos Ácido Alcohol Resistentes (BAAR). El género
Mycobacterium incluye más de 100 especies que pueden clasificarse en seis grupos desde
el punto de vista bacteriológico, pero con fines didácticos se dividen en tres apartados:
Complejo tuberculosis. Incluye las especies M. tuberculosis, Mycobacterium bovis
(incluida la cepa BCG) y Mycobacterium africanum, productoras todas ellas de tuberculosis.
Se incluye también Mycobacterium microti, productor de tuberculosis en rata Complejo
lepra. En el que se incluyen las especies M. leprae, productor de la lepra humana, y
Mycobacterium lepraemurium, que produce lepra en roedoresel. El Mycobacterium
leprae que es un parásito intracelular obligado que se multiplica lentamente en
células fagocitarias mononucleares como los histiocitos de la piel y en las células
de Shwan de los nervios Otras Micobacterias. Micobacterias no comprendidas en
los dos grupos anteriores. Sólo algunas de ellas suelen ser patógenas, otras pueden
ser patógenas oportunistas y finalmente otras suelen ser saprofitas. Producen las
denominadas micobacteriosis las infecciones producidas por M. avium, M. kansakii,
M. fortuitum y M. chelonei son consideradas oportunistas y no tuberculosasPrepara
un frotis bacteriano. Haciendo un delgado extendido del material para su estudio y
permitir que se seque al aire.

PROCEDIMIENTO

1. Fijar el frotis con calor, evitar que hierva

2. Cubrir la preparación con carbofucsina. o fucsina fenicada
3. Calentar la preparación en un mechero Bunsen durante 5 min. No debe
hervir. Si se evapora, se añade más carbofucsina para que no se seque en
ningún momento.
4. Lavar con agua el resto de colorante.
5. Decolorar con la mezcla ácido-alcohol. Hasta que solo permanezca un
tenue color rosa.
6. Lavar con agua para que no prosiga la decoloración.
7. Teñir con azul de metileno 1 min.
8. Lavar con agua el resto de colorante.
9. Secar la preparación.
10. Examinar al microscopio. Con objetivo de inmersión por 100 X ( aceite)

La tinción es positiva para bacilos rojos contra un fondo azul claro

CUESTIONARIO
1.- ¿Que Clasificación de bacterias pueden ser encontradas en este tipo de
tinción?
R.- Mycobacterium y nocardia.

2.- ¿Que otro nombre recibe la tinción ácido- alcohol- resistente?

R.- También recibe el nombre de Ziehl-Neelsen.

3.- ¿Que coloración se tiñen las bacterias bacilares en la tinción ácido-

alcohol- resistente que da como resultado la reacción positiva?
R.- Si la tinción es positiva las bacterias bacilares se tiñen de rojo contra un fondo
azul claro.

4.- ¿Que función tiene el alcohol en la técnica de tinción?

R.- La decoloración de la pared de las células para que puedan ser clasificadas y
conservarlas por más tiempo.

5.- ¿Que especies de Mycobacterium son los causantes de la tuberculosis?

R- Mycobacterium tuberculosis.

6.- ¿Que especie de Mycobacterium es el responsable de la lepra?

R.- Mycobacterium leprae.
 DIAGRAMA DE FLUJO

Cuando se torne rosa,

Recolectar una Teñir con azul de
lavar con agua para
muestra de esputo. metileno durante 1
evitar que continue la
minuto.
decoloración.

Tomar un poco de
Lavar con agua Lavar la preparación
muestra y hacer un
destilada y decolorar con agua destilada y
extendido sobre un
con alcohol- ácido. secarla.
portaobjetos.

Pasar por debajo del Observar al

Fijar la muesta con la
frotis, la lámpara de microscopio a 40x o
lámpara de alcohol y
alchol por 5 minutos, 100x (con aceite de
teñir con fucsina.
evitando que hierva. inmersión).
RESULTADOS:
Los resultados fueron negativos, ya que no se encontró mycobacterium o
nocardia, pero aprendimos a realizar la tinción para su identificación.

CONCLUSIONES:
La tinción ácido-alcohol resistente se utiliza para encontrar principalmente
mycobacterium tuberculosis.
Ésta tinción es la propiedad física de algunas bacterias a la resistencia a la
decoloración de fucsina (rojo), la cual penetra por acción de fenol y calor.
La coloración requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras, de no ser así, el enfriamiento provoca una nueva
solidificación de los ácidos grasos de modo que el colorante no puede salir de la
bacteria.

FUENTES BIBLIOGRÁFICAS:
 https://prezi.com/s3eiwriq5ldk/bacterias-acido-alcohol-resistentes/
 http://microbiologiaulat2013.blogspot.mx/2013/12/tincion-acido-alcohol-
resistente.html
 http://www.abc.com.py/articulos/bacilos-acidos-alcohol-resistentes-
698013.html
 CBTis No. 103
“Francisco Javier Mina”.
PRÁCTICA 10
Tinción ácido-alcohol resistente.

Nombre del alumno:

Gómez Barajas Frida Michelle

SUBMÓDULO I:
IDENTIFICA MICROORGANISMOS CON
BASE EN TÉCNICAS BACTERIOLÓGICAS.

Nombre del profesor:

Q.F.B Marina Sánchez Méndez.

Fecha de entrega:
11-Noviembre-2017