Especificaciones Para Su Medición Por Laboratorio Y

Estudio De Las Dislipidemias

 Predicen enfermedad cardiovascular (colesterol)

 Clasificación de Fredrickson (electroforesis en gel)

 National Cholesterol Education Program: Detección, evaluación

y tratamiento de la hiperlipidemia
Transportan esencialmente todo el colesterol y lípidos
esterificados de la sangre.

Su parte proteica esta compuesta por proteínas especificas

denominadas apolipoproteínas, que desempeñan papeles
importantes en el transporte de los lípidos, activando o
inhibiendo enzimas y/o fijando lipoproteínas a los receptores
de la superficie celular.
Existen 4 clases de lipoproteínas principales:

• Quilomicrones (QM).
• Lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL).
• Lipoproteínas de baja densidad (LDL).
• Lipoproteínas de alta densidad (HDL).
Quilomicrones:

• Partículas grandes, producidas por el

intestino, ricas en triglicéridos exógenos,
pobres en colesterol libre y fosfolípidos.
• Elevada proporción lípido/proteína son
menos densos en agua.
• Su acumulación genera una capa cremosa
flotante cuando se deja en reposo.

Apoliproteínas:

• apoB-48, apoA-I y apoA-IV.

• apoC-I, apoC-II, apoC-III, apoE.
Lipoproteínas de muy Baja Densidad (VLDL):
• Pequeñas, ricas en triglicéridos de origen endógeno
(hepático).
• Proporción lípido/proteína más baja.
• Colesterol y fosfolípidos 40%.
• Proteínas 10%.
• apoB-100, apoC, apoE.
• Amplio margen de tamaño con variación concomitante de la
composición química.
• Su acumulación genera un plasma turbio.
 Lipoproteínas de Baja Densidad: (LDL)
• 50% de la masa total de lipoproteínas plasmáticas en
humanos.
• Partículas más pequeñas.
• No dispersan la luz o enturbian el plasma.
• Colesterol estratificado representa casi la mitad de su
masa.
• 25% son proteínas:
• apoB-100, poca apoC.

Se han identificado sub-clasificaciones de LDL que difieren

en tamaño y composición química.
Lipoproteínas de Alta Densidad: (HDL)

• Partícula pequeña que consta de un 50% de proteína.

• apoA-I, apoA-II, aldo de apoC y apoE.
• 20% colesterol estratificado.
• 30% fosfolípidos.
• Indicios de triglicéridos.

2 subclases principales:

• HDL2, HDL3. varían en cuanto a densidad, tamaño,

composición.
Lipoproteína Lp(a):
• Intervalo de densidad: 1,055 – 1,085 kg/L.
• 27% proteína [apoB, apo(a)], 65% lípido,
8% carbohidratos.
• Movilidad electroforética: pre-β.
• Proteína pleomórfica (350-700 KDa).
• Alto grado de homología con el
plasminógeno.
• Concentración de <20mg/l a 1,500 mg/l.
Niveles aumentados con herencia
autosómica dominante de tipo
familiar.
Lipoproteína LpX:
• Lipoproteína anormal que se
encuentra en pacientes con
enfermedad biliar obstructiva.
• Lípidos  >90% de su peso.
• Proteínas  <10% de su peso.
apoC, albúmina.
• Β-VLDL:
• Lipoproteína anormal que se
acumula en la
hiperlipoproteinemia III.
• Resultado del catabolismo
defectuoso de la VLDL.
 Apolipoproteína A (ApoA):

Componente proteico principal de la HDL.

 ApoA-I
 75% de la apoA de la HDL.
 243-245aa, peso mol 29,000
 Se sintetiza en hígado e intestino.
 Activador de la enzima lecitin:colesterol-aciltransferasa (LCAT), la cual
esterifica el colesterol en el plasma.

 ApoA-II
 20% de la ApoA de la HDL.
 154aa,peso 17,400.
 Consta de dos péptidos idénticos unidos por puentes disulfuro.
 Apolipoproteína B (ApoB):

 Principal constituyente de la LDL (95%), la VLDL y QM (40%).

 Grupo heterogéneo de proteínas, de las cuales la principal es la
ApoB-100.
 Sintetizada por el hígado.
 Cadena única de 4536aa, peso 513,000.
 Señal de reconocimiento que dirige al receptor de LDL.

 ApoB-48, con peso de 241,000, es de origen intestinal y se haya en

los QM.

 La síntesis de ambas proteínas está dirigida por el mismo gen: ApoB.

 Enzimas Lipasa hepática Lecitín:colesterol-
Lipoproteínlipasa
Lipolíticas: de triglicéridos: aciltransferasa:

• Lipoproteinasa, • Derivada del tejido • (HTGL) secretada • Cataliza la

lipasa hepática de adiposo, hidroliza por los hepatocitos. esterificación del
triglicéridos. TGC de los QM y • Capacidad limitada colesterol,
VLDL. para hidrolizar TGC promoviendo la
• Localizada en las en QM intactos y transferencia de ác.
superficies de VLDL. grasos desde la
células • Conversión de lecitina al col,
endoteliales de los VLDL e IDL a LDL. dando lugar a la
capilares de tejido formación de
• Hidrólisis de
adiposo, lisolecitina y éster
fosfolípidos y TGC
esquelético y de colesterol.
en las HDL.
cardiaco. • Sintetizada en el
hígado, viaja
asociada a HDL.
 Digestión de las grasas:
 Lipasa lingual.
 Intestino delgado  emulsión de grasa por
ácidos biliares.
 Lipasa pancreática  digestión de
triglicéridos.

 Absorción:
 Penetran la superficie de los enterocitos,
pasando a la linfa y de ahí a la circulación
general.
 El análisis de las lipoproteínas
del plasma requiere primero la
separación de las distintas
clases de lipoproteínas y
segundo, la medición de la
lipoproteína o del componente
lipoproteico de interés.
 Las concentraciones de
lipoproteínas plasmáticas
pueden cambiar como
resultado de una
variación fisiológica
normal.

 Coeficiente de variación fisiológica intraindividual para colesterol es de 6.5%.

 La variación fisiológica es, por lo tanto, mayor que el error analítico.
 Ayuno de 12hrs a 14 hrs antes de la punción.

 Posición sentada.

 Torniquete por no más de 1 min.

 Suero o Plasma (EDTA).

 Refrigerar 4°C, Congelación -20°C.

• Ayuno de 12- 14 Hs. (Es por los quilomicrones, es anormal su
presencia después de este tiempo)
• El ayuno menor no afecta los valores de colesterol.
• Suero o Plasma (EDTA, NO Heparina)
• Refrigerar 4 °c , Congelación -20°c
• No ingesta de drogas, medicamentos, Enf. Febriles.
• Post-Infarto, etc.
 No esterificados (30%), esterificados (70%).

 Métodos Químicos:
 Abell-Kendall;
▪ KOH + Alcohol + éter de petróleo + Ac. Sulfúrico Anhidro.
 Reactivo de Lieberman-Buechard
▪ (Acetico anhidro + ac. Sulfurico cloruro ferrico + ac. Sulfurico Ac. p-Tuoleno
Sulfonico ) en OH puro.
 Métodos Enzimáticos:
 Reacciones donde se hidrolizan los ésteres de colesterol.
▪ El grupo 3-OH del col es oxidado.
 Absorbancia  500 nm (560 nm en el Synchron)
 Menor interferencia.
 Bilirrubina, turbidez de la muestra, genera interferencias.
 CV  1-2%. Calibradores séricos.
 Hidrólisis de TG con la medición del glicerol liberado.

 Método químico:
 Extracción de cloroformo, seguido por cromatografía con ácido silícico para aislar TG.
 Glicerol separado mediante saponificación y oxidado con peryodato de sodio.
 El peryodato producido se mide mediante reacción con una solución de ác cromotrópico
con ác sulfúrico  cromóforo rosa.
 Método enzimático:
 Directo en plasma o suero.
 Hidrólisis de TG. Glicerol formado se convierte
en glicerofosfato, que se mide con una
reacción.
 El NADH formado se mide con
espectrofotometría.
 Esfingomielina

Fosfatidilcolina

 Ictericia obstructiva, abeta o hipolipoproteinemia, enfermedad

de Tangier.

 Determinación mediante la medición de fosforo de los

fosfolípidos.

 Se extraen lo lípidos de la muestra y se oxidan hasta convertir el

fósforo en fosfato inorgánico, que se determina por colorimetría.
 Etanol-dietiléter, cloroformo-metanol.
 Método enzimático:

 WAKO Pure Chenmical Industries:

la lecitina, esfingomielina y
lisolecitina son hidrolisadas
usando fosfolipasa D, y la colina
liberada se oxida.
 Problema
principal es la
separación de
las diversas
clases de
lipoproteínas.
Métodos actuales:

• Ultracentrifugación analítica (método de referencia).

• Adsorción.
• Filtración en gel.
• Afinidad cromatográfica.
• Electroforesis.
• Precipitación de polianiónes.
• Inmunoquímica.
• Combinación de diversos métodos.
 Métodos de Ultracentrifugación

 Se sirve de las diferentes densidades de las lipoproteínas.

 1,006kg/l  QM, VLDL flotan, LDL, HDL sedimentan. Las

lipoproteínas
pueden ser
 1,063kg/l  VLDL y LDL flotan. separadas de
otras
proteínas
 1,21kg/l  VLDL, LDL Y HDL flotan. plasmáticas y
a la vez entre
sí
1. Se aíslan las lipoproteínas del plasma por UC
preparatoria.

2. Centrifugación analítica a diferentes

densidades.

3. Las Lp migran (dependiendo de su densidad).

4. Su movimiento y concentración se mide

utilizando la óptica de Schlieren
 (concentración según los cambios de refracción).

5. Las concentraciones se expresan en términos de

masa total.
 Métodos Electroforéticos

 Medio usado: gel de agarosa.

 Velocidad, sensibilidad, resolución.

 QM permanecen en el origen. Las demás migran

a velocidades que aumentan en orden de HDL >
VLDL > LDL, y se denominan de acuerdo a su
movilidad:
 HDL: α-lipoproteínas.
 LDL: β-lipoproteína.
 VLDL: lipoproteína pre-β.

 Colorantes para lípidos: rojo-O al aceite, grasa

roja 7B, negro sudán B.
 DETERMINACIÓN DE HDL-COLESTEROL:

 Se basa en la precipitación polianiónica con cationes

divalentes de los Quilimicrones, VLDL y LDL.
 Se agrega al suero Ac. fosfotúnsgtico, Cloruro de Magnesio ó
Manganeso, Heparina.
 Del sobrenadante se determina el colesterol, el cual corresponde al
HDL-colesterol.
 Los procedimientos actuales se basan en:
 Inmunoseparación.
 Enzima modificada con polietilenglicol.
 Polímero sintético.
 Métodos para las mediciones de LDL-colesterol:

 Ultracentrifugación.
 Métodos directos:
 Fórmula de Friedewald.  Precipitación química.
 Inmunoprecipitación.
 Reactivo que inhibe las otras Lp.
LDL-C = Col Total – HDL-c – TGC/5

 Analizadores químicos
LDL-C = Col Total – HDL-c – TGC/2.175 automatizados.
 No requiere ultracentrifugación.
• Las enfermedades cardiovasculares constituyen la primera causa de
muerte en México

• Entre los factores de riesgo se encuentra la hipercolesterolemia, cuya

incidencia ha ido en aumento por el consumo de grasas saturadas, el
sedentarismo y otros factores de riesgo mayores como el tabaquismo, la
diabetes y la hipertensión arterial

• Conjunto de enfermedades asintomáticas causadas por

concentraciones anormales de las lipoproteínas sanguíneas
El riesgo cardiovascular es directamente proporcional a la concentración
de colesterol.

Los individuos situados por encima del intervalo de normalidad, tienen

riesgo mayor.

El Adult Treatment Panel of the National Cholesterol

Education Program publicó las pautas para el
reconocimiento y tratamiento de la hipercolesterolemia
en adultos, que incluyen una redefinición de los niveles
de colesterol, LDL-c y HDL-c, en términos de riesgo
cardiovascular.
Cálculo del Índice Aterogénico:

Col/HDL LDL/HDL
M F M F
Promedio 5.0 4.4 3.5 3.2
 COLESTEROL TOTAL / HDL-C normal
½ riesgo 3.4 3.3 1.0 1.4
 LDL-COLESTEROL / HDL-C Riesgo >2 9.6 7.1 6.2 5.0
Riesgo >3 13.5 11.0 7.9 6.1