Universidad Austral de Chile

Facultad de Ciencias
Escuela de Licenciatura en Ciencias

Profesor Patrocinante Dr. Marcelo A. Muñoz Flores

Instituto de Ciencias Químicas
Facultad de Ciencias

EXPLORACIÓN DE UNA RUTA DE HEMISÍNTESIS PARA LA PREPARACIÓN Y

DETERMINACIÓN DE LA CONFIGURACIÓN ABSOLUTA DE (±)-3α-
FENILACETOXI-6ß-(E)-(3,4,5-TRIMETOXICINAMOILOXI)TROPANO

Seminario de Graduación presentado

como parte de los requisitos para optar
al grado de Licenciado en Ciencias
con Mención en Química.

EZEQUIEL ABRAHAM SALDIVIA VERGARA

VALDIVIA – CHILE
 2

Índice

Introducción ....................................................................................................................................4

Hipótesis ..........................................................................................................................................8

Objetivos ..........................................................................................................................................9

Objetivos Principales ....................................................................................................................9

Objetivos Secundarios .................................................................................................................9

Materiales y Métodos .....................................................................................................................9

Reactivos .......................................................................................................................................9

Equipos .......................................................................................................................................10

Preparación del cloruro de 3,4,5-trimetoxicinamoil ...................................................................10

Preparación de la (±)-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropanona ........................................10

Preparación del (±)3α-hidroxi-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropano ..............................11

Preparación modificada del (±)3α-hidroxi-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropano ..........11

Preparación del (±)-3α-fenilacetoxi-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropano .....................12

Preparación de (±)-3α,6β-fenilacetoxytropano ...........................................................................12

Purificación de (±)-3α,6β-fenilacetoxytropano ..........................................................................13

Preparación de (±)-3α-fenilacetoxy-6β-hidroxi-tropano ............................................................13

Preparación de muestra para espectroscopia de masas ...............................................................14

Preparación de muestra para 1H-RMN .......................................................................................14

 3

Resultados y Discusiones .............................................................................................................14

Conclusiones .................................................................................................................................25

Bibliografía ...................................................................................................................................26
 4

INTRODUCIÓN

Los productos naturales o también llamados metabolitos secundarios han fascinado a la

humanidad por miles de años debido a sus propiedades y fácil aislación (Brocksom, de Oliveira,

& Desiderá, 2017). Dentro de esta familia destacan los alcaloides los cuales se pueden definir

como metabolitos secundarios de origen animal, vegetal o microbiano, constituidos por uno o

más átomos de nitrógeno, usualmente en un anillo heterocíclico. Generalmente estos tienden a

tener reacciones de tipo básicas junto con fuertes efectos farmacológicos al ser suministrados en

animales y humanos (Christen, 2000).

Durante siglos las plantas han sido una fuente única de alcaloides terapéuticamente

significativos y continúan siéndolo en la actualidad. Por otro lado los alcaloides de origen natural

han servido como modelo de estudio para la semi síntesis o la síntesis de derivados que tienen

propiedades farmacocinéticas mejoradas, mayor eficacia, además de una mayor o menor

toxicidad (Christen, 2000).

La familia de las plantas Solanáceas produce una gran variedad de alcaloides, donde

algunos de estos tienen un considerable valor medicinal debido a sus propiedades analgésicas,

anestésicas, anticolinérgicas, antieméticas, antihipertensivas y efectos parasimpaticolítico (Chin

et al., 2006).

Uno de estos grupos de alcaloides son los derivados del núcleo de tropano N-metil-8-

azabiciclo[3.2.1]octano (1). Estos se encuentran en su mayoría esterificados con ácidos alifáticos,

 5

aromáticos y heterocíclicos de varias estructuras químicas como benzoico, cinámico, tíglico,

trópico, entre otros (Christen, 2000).

A su vez dentro de este grupo hay varios compuestos derivados del 3α,6β-tropanodiol (2),

los cuales pueden existir en sus dos formas estereoisomericas; (1R,3R,5R,6R) o (1S,3S,5S,6S).

Cabe señalar que estos estereoisómeros no están bien documentados y muchas de están

moléculas no tienen configuración absoluta definida. Además existe mucha confusión en la

literatura en relación a la numeración en el esqueleto del tropano, debido a que este no se rige por

un sistema único de numeración, diferenciándose el C-6 del C-7 en función de la configuración

absoluta de cada molécula (Humam, Shoul, Jeannerat, Munoz, & Christen, 2011) .

1 2

Los alcaloides del tropano se encuentran principalmente en la familia de las plantas

Solanáceas, pero también se puede encontrar en familias como las Convolvulaceae, Proteaceae,

Rhizophorbiaceae y Erythroxylaceae (Christen, 2000). En particular esta última familia, está

constituida por alrededor de 200 especies distribuidas en regiones tropicales de américa del sur,

África y en Madagascar (Chin et al., 2006), donde destacan algunos alcaloides tales como la
 6

cocaína y la cutabina D-G, aislados desde Erythroxylaceae coca y Erythroxylaceae vaccinifolium

respectivamente (Muñoz., Arriagada., & Joseph-Nathan., 2010).

Otros alcaloides derivados del tropano de gran interés clínico en la terapia del cáncer; son

las Parveleínas, debido a la capacidad de estas para reducir la resistencia a múltiples fármacos

(MDR) inhibiendo la exclusión de agentes antitumorales hidrófobos mediados por bombas de

eflujo de glicoproteína P a modo de restaurar la sensibilidad de células KB-VI con MDR a

agentes quimioterapéuticos como la vinblastina (Silva et al., 2001).

El mecanismo por el cual la parveleína A restablece la sensibilidad al fármaco está

relacionado por la similitud estructural de esta con el verapamilo, el cual es un agente que

revierte la MDR a través de la inhibición de los mecanismos de flujo de salida de la glicoproteína

P (Mi et al., 2001). Así mismo, tanto la parveleína B, C, D, E, y F comparten similitud estructural

con la parveleína A, teniendo en común como sustituyente al trans-3,4,5-trimetoxicinamato en la

posición C-6, que sería la condición estructural fundamental para inhibir a la glicoproteína P (Mi

et al., 2002) (Silva et al., 2001).

Estructuralmente, las pervileinas están constituidas por un núcleo de tropano donde el C-6

posee como sustituyente, al trans-3,4,5-trimetoxicinamato (Tmc) y el C-7 puede tener como

sustituyentes un protón o un hidroxilo, y el C-3 siempre esta esterificado con una variedad de

ácidos carboxílicos, como se muestra en la figura 3. Aunque la estereoquímica del sistema

biciclico central se ha representado siempre como la señalada en la figura 3, se han llevado a

cabo solo dos estudios para establecer la estereoquímica absoluta de las pervileinas. En el
 7

primero se determinó la configuración de la (+)-parveleína C como (1S,3S,5R,6S) (Mao, Huang,

Gao, Wang, & Huang, 2014) y en el segundo a la (-)-parveleína B como (1R,3S,5R,6R)

(Perlmutter, Kulkarni, Zhao, & Purcell, 2008)

De estos estudios resulta sorpresiva la obtención de dos configuraciones absolutas

contrarias, dado que ambos alcaloides de tropano fueron aislados desde la misma especie vegetal,

hecho poco habitual en la naturaleza.

Figura 3: Estructuras químicas de las parveleínas A, A N-Oxido, B, C, D, E, F, G y H

El (+)-3α-fenilacetoxi-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropano o (+) parveleína F fue

aislada en 1992 desde extractos de raíces desde Erythroxylum parvillei Baillon, colectada en el

sur de Madagascar (Chin et al., 2006). Algunos trabajos recientes registraron la rotación óptica

específica para este alcaloide en +12.0° (c 0.12, CHCl3) y +4.0° (c 0.23, CHCl3) (Mi et al., 2001)

(Chin et al., 2006), pero su configuración absoluta aún se desconoce, y por tanto se ignora cuál de

los dos isómero es el que está presente en esta planta.

 8

El estudio de la estereoselectividad en farmacocinética y farmacodinamia a partir del

bioanálisis estereoselectivo han demostrado que cuando un enantiómero es responsable de la

actividad farmacológica de interés, el otro enantiómero pude se inactivo, ser un antagonista del

enantiómero activo o tener actividad propia lo que podría ser deseable o indeseable (Caner,

Groner, Levy, & Agranat, 2004). De esta manera cabe señalar que es relevante el poder

determinar la configuración absoluta de este alcaloide, entendiendo que este podría ser usado

como potencial inhibidor de la glicoproteína P a modo disminuir la MDR en células

cancerígenas.

HIPÓTESIS DE TRABAJO

Las reacciones de esterificación y reducción a partir del (±)-6β-hidroxi-3-tropinona

permiten obtener el (±)-3α-fenilacetoxi-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropano. Además, las

técnicas de cromatografía liquida de alta resolución (HPLC) y rotación óptica (RO), permiten

desarrollar metodologías para la separación y determinación de su configuración absoluta.

OBJETIVO PRINCIPAL.

Determinar la configuración absoluta del (±)-3α-fenilacetoxi-6β-(E)-(3,4,5-

trimetoxicinamoiloxi)tropano preparado a partir del (±)-6β-hidroxi-3-tropinona para su posterior

análisis por cromatografía liquida de alta resolución con columna quiral acoplado a un detector

de rotación óptica HPLC-OR.

 9

OBEJTIVOS SECUNDARIOS

• Preparar el cloruro de 3,4,5-trimetoxicinamoilo

• Preparar el racemato (±)-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropanona

• Preparar el racemato (±)-3α-hidroxi-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropano.

• Preparar el racemato (±)-3α-fenilacetoxi-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropano.

• Preparar de manera enantioselectiva el (±)-3α-fenilacetoxi-6β-(E)-(3,4,5-

trimetoxicinamoiloxi)tropano.

• Determinar la configuración absoluta de los dos isómeros del (±)-3α-fenilacetoxi-6β-(E)-

(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropano.

MATERIALES Y MÉTODOS

Reactivos

Exo-6-hidroxitropinona (99% de pureza), ácido 3,4,5-trimetoxicinámico, cloruro de 2-

fenilacetilo, cloruro de tionilo, óxido de plata (I), piridina, (-)-escopolamina obtenidos de Sigma

Aldrich. Carbonato de potasio y sulfato de sodio anhídrido, ambos de grado pro análisis, y etanol

absoluto de grado analítico cuyo proveedor fue Merck. Los disolventes utilizados fueron,

diclorometano, metanol, acetona, etanol y acetonitrilo obtenidos de Merck. Además, se utilizaron

gases como argón extra puro 99,9 % e hidrógeno cuyo proveedor fue AGA.
 10

Equipos

La masa de los reactivos y productos fue medida en balanza analítica Precisa, modelo XB

220A, mientras que las reacciones se llevaron a cabo sobre una placa de agitación magnética con

manto calefactor Heidolph Mr Hei-Standard. Las muestras obtenidas fueron concentradas y

rotavaporadas en un rotavapor Buchi R-210 sobre un calefactor Buchi modelo B-491, conectado

a una bomba de vacío Vacumbrand 2C. La reacción de reducción con H2/PtO2 se realizó en un

hidrogenador PARR 5500 Series Compact Reactors. Los análisis de espectrometría de masas se

llevaron a cabo en un Espectrómetro de Masas, Waters, ZQ.

Preparación del cloruro de 3,4,5-trimetoxicinamoilo (1)

La preparación de (1) fue llevada a cabo a partir de la reacción de 1g de ácido 3,4,5-

trimetoxicinámico con 3 mL de cloruro de tionilo a 60 °C por 1 hora. El producto obtenido fue

rotavaporado a 30°C para eliminar el cloruro de tionilo sin reaccionar.

Preparación de la (±)-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropinona (2)

La preparación de (2) se realizó mediante la esterificación del (±)-6β-hidroxitropinona

con (1). Para esto se hizo reaccionar 50 mg de (±)-6β-hidroxitropanona con 0,5 g de (1) en 1 mL

de piridina anhidra y 9 mL CH2Cl2 por 12 horas a temperatura ambiente. El residuo obtenido de

la reacción fue concentrado al vacío en un rotavapor a 40 °C. Posteriormente se adiciono 50 mL

de H2O basificada con K2CO3 hasta pH 10, para luego realizar 3 extracciones líquido-líquido con

10 ml de Cl2CH2 por extracción. A continuación, la fase orgánica fue secada con Na2SO4

anhidro, y luego se filtró a través de algodón. Finalmente, el disolvente fue eliminado por rota

vaporación a 30°C.
 11

Preparación del (±)-3α-hidroxi-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropano (3)

La preparación de (3) se llevó a cabo por reducción de (2), para ello se tomó el producto

crudo de este y fue disuelto en 50 mL de etanol absoluto el cual contenía 35 mg de óxido de

platino reducido con hidrogeno a 50 psi por 5 minutos, y se dejó reaccionar por una semana. La

reacción fue monitoreada por espectroscopia de masa.

Preparación alternativa del (±)-3α-hidroxi-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropano (3)

La preparación de (3) se llevó a cabo por reducción de (2), para ello se tomó el producto

crudo de este y fue disuelto en 50 mL de etanol con 30 mg borohidruro de sodio, y se dejó

reaccionar por 12 horas a 0°C. Seguido de esto el metanol fue extraído por rotavaporación a

30°C, para luego acidificar con HCl concentrado. Una vez finalizado esto se adicionaron 50 mL

de agua basificada con K2CO3, para luego realizar 3 extracciones liquido-liquido de 10 mL de

CH2Cl2 por cada extracción. Finalmente, la mezcla de reacción fue concentrada por

rotavaporación a 30°C. La reacción fue monitoreada por espectroscopia de masas.

Preparación del (±)-3α-fenilacetoxi-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropano (4)

La preparación de (4) se realizó mediante la esterificación de (3) con cloruro de 2-

fenilacetilo. Para esto se hizo reaccionar el producto crudo de (3) con 200 μL de cloruro de 2-

fenilacetilo en 1mL de piridina anhidra y 9 mL de CH2Cl2. El residuo obtenido de la reacción fue

concentrado al vacío en un rotavapor a 30 °C. Posteriormente se adicionaron 50 H2O basificada

con K2CO3 hasta pH 10, para luego realizar 3 extracciones líquido-líquido con 10 ml de éter

dimetílico por cada extracción, seguido de esto se realizaron otras 3 extracciones líquido-líquido
 12

sobre la fase orgánica con 10 mL de CH2Cl2. A continuación, la fase orgánica extraída con

CH2Cl2 fue secada con Na2SO4 anhidro, y luego filtrada a través de algodón. Finalmente, el

solvente fue eliminado por rota vaporación a 30°C.

Preparación de (±)-3α,6β-fenilacetoxytropano (5)

La preparación de (5) se realizó mediante la esterificación de (±)-3α,6β-tropanodiol (6) el

cual fue obtenido a partir de la (-)-escopolamina (Muñoz et al., 2006), con cloruro de 2-

fenilacetilo. Para esto se hizo reaccionar 0.2880 g de (6) con 1.21 mL de cloruro de 2-fenilacetilo

en 10 mL de CH3CN por 96 horas a 50°C. La mezcla de reacción obtenido de la fue concentrada

al vacío en un rotavapor a 25 °C. Posteriormente se adicionaron 50 mL H2O basificada con

K2CO3 hasta pH 10, para luego realizar 3 extracciones líquido-líquido con 10 ml con 10 mL de

CH2Cl2. A continuación, la fase orgánica extraída con CH2Cl2 fue secada con Na2SO4 anhidro, y

luego filtrada a través de algodón. Finalmente, el solvente fue eliminado por rota vaporación a

30°C.

Purificación del crudo de reacción de (5) por cromatografía flash en columna

Para ello se empacó hasta 6 in una columna de 30 mm de diámetro con silicagel 60, para

ello se deposito silicagel sobre una porción de fase móvil (CH2CCl2/MeOH/NH4OH, 100:10:1) y

se fue añadiendo a la columna hasta las 6 in, seguido de esto se depositó un algodón sobre la

superficie de la fase estacionaria y se adiciono lentamente el crudo de reacción disuelto en 2,5

mL de CH2Cl2, para luego adicionar una porción de fase móvil para eluir a la solución sobre la

fase estacionara has por debajo de la superficie de esta. Luego se adicionaron los 400 mL de fase

móvil y la columna fue cerrada con un control de flujo para hacer pasar aire comprimido sobre el
 13

sistema. Se tomaron 20 de fracciones de 20 mL cada y se realizaron 3 cromatografía en capa fina

sobre las fracciones 1, 2, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 y 16, para luego ser concentradas las

fracciones de la 1-10 por rotavaporación a 30 °C.

Preparación de (±)-3α-fenilacetoxi-6β-hidroxitropano (7)

La preparación de (7) se realizó por hidrolisis selectiva de 0,3330 g de (5) con 30 mL de

acetona/ NaOH 0.1% en relación 2:3 en atmosfera de argón a 50°C por 30 minutos. Seguido de

esto se neutralizo con HCl concentrado para luego extraer la acetona por rotavaporación a 30°C.

Se de esto se adicionaron 50 mL H2O basificada con K2CO3 hasta pH 10, para luego realizar 3

extracciones líquido-líquido con 10 ml con 10 mL de CH2Cl2. A continuación, la fase orgánica

extraída con CH2Cl2 fue secada con Na2SO4 anhidro, y luego filtrada a través de algodón.

Finalmente, el solvente fue eliminado por rota vaporación a 30°C.

Preparación de muestra para espectroscopia de masas

Las muestras fueron diluidas en 5 mL de etanol absoluto, a partir de las cual se tomó una

alícuota 2 gotas de solución para ser diluidas en 1 mL de ácido fórmico 0.1% en metanol. Luego

la muestra fue medida en el espectrómetro de masa por infusión.

Preparación de muestra para 1H-RMN

El espectro fue registrado por los procedimientos convencionales en un tubo de vidrio de

5 mm de diámetro en disolución de CDCl3 en un equipo Bruker Avance 400.

 14

RESULTADOS Y DISCUSIONES

Con el objeto de preparar el compuesto objetivo (±)-3α-hidroxifenilacetoxi-6ß-(E)-(3,4,5-

trimetoxicinamoiloxi)tropano, se propuso una secuencia de hemisíntesis a partir del compuesto

comercial (±)-6β-hidroxitropanona (figura 4).

Figura 4: Ruta de hemisíntesis para la preparación de (±)-3α-hidroxifenilacetoxi-6ß-(E)-(3,4,5-

trimetoxicinamoiloxi)tropano a partir de (±)-6β-hidroxitropanona.

A partir del espectro de masas del crudo de reacción del primer paso de esta secuencia

(figura 5), es posible apreciar que la reacción de esterificación de la (±)-6β-hidroxitropanona con

cloruro de 3,4,5-trimetoxicinamoilo tuvo lugar en el medio de reacción, debido a la presencia de

un peak en 376.182 (100%) u.m.a, el cual se correlaciona correctamente con la masa del ion
 15

pseudomolecular [M+H] de la (±)-6ß-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropinona con un valor

nominal de 376 u.m.a. Adicionalmente, es posible observar un peak en 156,137 u.m.a, el cual se

corresponde con la masa del ion pseudomolecular [M+H] (±)-6β-hidroxitropanona, con un 40%

de intensidad relativa.

Figura 5: Espectro MS, Reacción de esterificación (±)-6β-hidroxitropanona con crudo cloruro de 3,4,5-
trimetoxicinamoil (EI, 70 eV): m/z (%) = 376.182 [M + H+] (100)

Consecuentemente, el producto de la reacción anterior se trató con PtO2 pre-hidrogenado,

donde bajo condiciones suaves de reacción, se esperaba que fuera favorecida la reducción del

grupo carbonilo posicionado en C-3 por sobre la reducción del doble enlace, esto debido a la

estabilización de este por resonancia como se muestra en la figura 6.

 16

Figura 6: Estructura de resonancia electrónica para (±)-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropinona

Asimismo, se esperaba también una reducción del grupo carbonilo donde se favoreciera la

adición syn (Simoni et al., 2005), esquematizado en la figura 7.

Figura 7: Absorción del sustrato sobre la superficie del metal que favorece la adición syn

Sin embargo, luego del segundo paso de síntesis, el espectro de masas del crudo de

reacción (figura 9), muestra un peak en 380.232 u.m.a con un porcentaje de intensidad relativa de

un 100%, lo que evidencia la incorporación de dos equivalentes de hidrógeno durante la reacción

de hidrogenación esquematizado en la figura 8.

 17

Figura 8: Reducción crudo (±)-6ß-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropanona con H2/PtO2 en ácido acético a

50 psi.

Figura 9: Espectro MS, Reacción de reducción crudo de (±)-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropanona con

H2/Pt (EI, 70 eV): m/z (%) = 380.232 [M + H+] (100)

A partir de esto, es posible concluir que la reducción de (±)-6β-(E)-(3,4,5-

trimetoxicinamoiloxi)tropinona con H2/PtO2 no se produjo de forma regioselectiva bajo las

condiciones de reacción dadas experimentalmente, y que por lo tanto no es posible su utilización

en la secuencia de síntesis propuesta.

 18

Por otra parte, se exploró la posibilidad de una forma de reducción alternativa con NaBH4

como agente reductor. Este se realizó a baja temperatura para minimizar la reacción de

rompimiento del ester en la posición C-6. En este caso, el espectro de masas del crudo de

reacción (figura 10), muestra un peak en 378.212 u.m.a., valor que se correspondería con la masa

del ion pseudomolecular [C21H29NO5 + H+], e indicativo de la incorporación de un solo

equivalente de H2 durante la reducción. Además, es posible apreciar el peak del compuesto

precursor en 396.200 de u.m.a con sólo un 9.7% de intensidad relativa, lo que confirma que la

reacción de reducción tuvo lugar en el medio de reacción debido al bajo porcentaje de

abundancia relativa de este.

Figura 10: Espectro MS, Reacción de reducción crudo de (±)-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropanona

con NaBH4 (EI, 70 eV): m/z (%) = 380.232 [M + H+] (100)

Sin embargo, no se puede evidenciar si la reducción de la (±)-6ß-(E)-(3,4,5-

trimetoxicinamoiloxi)tropinona con NaBH4, mostró una preferencia enantioselectiva sobre la

 19

reducción del grupo carbonilo en C-3, debido a que el producto final no pudo ser caracterizado en

profundidad.

A continuación, se llevó a cabo la esterificación del producto de la reacción anterior con

cloruro de 2-fenilacetilo. En este caso, el espectro de masas del crudo de reacción (figura 11) se

puede observar un peak en 496.227 u.m.a de intensidad relativa de un 100%, indicativo de la

formación del producto deseado.

Figura 11: Espectro MS, Reacción de esterificación crudo de (±)-3α-hidroxi-6β-(E)-(3,4,5-

trimetoxicinamoiloxi)tropano con cloruro de 2-fenilacetilo (EI, 70 eV): m/z (%) = 496.227 [M + H+] (100)

Sin embargo, el espectro de resonancia magnética nuclear de protones del crudo de

reacción (figura 12) no permitió establecer una caracterización de tipo estructural clara de los

productos de interés debido a la complejidad de la mezcla obtenida.

 20

Figura 12: Espectro 1H-RMN, Crudo (±)-3α-fenilacetoxi-6ß-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropano.

En relación con la preparación del 3α-fenilacetoxi-6ß-(E)-(3,4,5-

trimetoxicinamoiloxi)tropano, se puede establecer que las dos reacciones de esterificación

llevadas a cabo bajo la metodología propuesta dio buenos rendimientos bajo las condiciones

experimentales dadas, además se puede concluir que la utilización de halogenuros de acilo para

la preparación de los respectivos esteres fue útil debido a la mayor reactividad de estos para

esterificar.

En relación con lo expuesto anteriormente, y debido a que no pudo ser caracterizado el

compuesto de interés, se decidió estudiar una ruta alternativa para la obtención del compuesto

objetivo a partir del (±)-3α,6β-tropanodiol, como se describe en la figura 13.

 21

Figura 13: Ruta alternativa para para preparación de (±)-3α-hidroxifenilacetoxi-6ß-(E)-(3,4,5-

trimetoxicinamoiloxi)tropano a partir de (±)-3α,6β-tropanodiol.

A partir del espectro de masas del crudo de reacción del primer paso del esta ruta

alternativa (figura 14), se puede observar que la reacción entre el (±)-3α,6β-tropanodiol y el

cloruro de 2-fenilacetilo tuvo lugar en el medio de reacción al observarse un peak en 394.384

u.m.a y abundancia relativa de un 100%, valor correspondiente a la formula del producto

deseado. En relación con el peak en 260.416 u.m.a y 37.50% de intensidad relativa, este

correspondería al producto de esterificación del 3α-tropanol, el que se encuentra presente como

subproducto del compuesto precursor (±)-3α,6β-tropanodiol (Muñoz, Muñoz, & Joseph-Nathan,

2006)
 22

Figura 14: Espectro MS, Reacción de esterificación crudo de (±)-3α,6β-tropanodiol con cloruro de 2-
fenilacetilo (EI, 70 eV): m/z (%) = 394.384 [M + H+] (100)

Luego de la reacción de esterificación, se procedió a la purificación del producto principal

(±)-3α,6β-difenilacetoxytropano por cromatografía en columna, el que resultó ser un método

eficiente para la aislación del producto deseado. En la figura 15 se ha representado la

cromatografía en capa fina realizada a 15 fracciones de un total de 20 recolectadas durante el

proceso cromatográfico.

Figura 15: Cromatografía en capa fina, fracciones 1-16 obtenidas por cromatografía en columna del (±)-
3α,6β-fenilacetoxytropano. Rf : 1 [0.94] – 2 [0.94] – 4 [0.94, 0.43] – 5 [0.94, 0.47] – 7 [0.93, 0.37] – 8 [0.33] – 9
[0.33] – 10 [0.33] – 11 [0.37,0.05] – 12 [0.33, 0.00] – 13 [0.29, 0.00] – 14 [0.33, 0.00] – 15 [0.37, 0.00] – 16 [0.39,
0.00], en CH2Cl2:MeOH:NH4+ (100:10:1).
 23

A continuación, el espectro de masas de las fracciones 1-10 (fígura 16), mostró la

presencia del peak en 394.388 u.m.a correspondiente al compuesto de interés (±)-3α,6β-

difenilacetoxytropano, además de una disminución considerable en la intensidad de los otros

peaks presentes originalmente en el crudo de reacción (figura 14).

Figura 16: Espectro MS, Concentrado fracciones 1-10 obtenidas por cromatografía en columna del (±)-3α,6β-
fenilacetoxytropano (EI, 70 eV): m/z (%) = 394.384 [M + H+] (100)

Finalmente, se procedió a explorar una reacción de hidrolisis selectiva del (±)-3α,6β-

fenilacetoxytropano, la que fue seguida mediante espectrometría de masas (figura 17). De este

análisis se pudo establecer que la reacción efectivamente tuvo lugar mediante la presencia de un

peak en 276.412 u.m.a e intensidad relativa del 100%, indicativo de la pérdida de uno de los

ésteres del compuesto precursor, además de los peaks en 158.276 y 394.384 u.m.a

correspondientes a (±)-3α,6β-tropanodiol y (±)-3α,6β-fenilacetoxytropano sin hidrolizar. Con

 24

respecto a la regioselectividad de esta reacción, la literatura sugiere que el compuesto principal

sería el isómero (±)-3α-fenilacetoxy-6β-hidroxi-tropano (Acta, 1959), aunque no se descarta la

presencia del otro posible mono éster (±)-3α-hidroxi-6β-fenilacetoxy-tropano.

Figura 17: Espectro MS, Reacción de hidrolisis de (±)-3α,6β-fenilacetoxytropano con NaOH (EI, 70 eV): m/z
(%) = 276.412 [M + H+] (100)
 25

CONCLUSIONES

En el presente trabajo se exploró una ruta de hemisíntesis para la preparación del (±)3α-

fenilacetoxi-6β-(E)-(3,4,5-trimetoxicinamoiloxi)tropano, para su posterior análisis

estereoquímico. Para ello se propuso como objetivo principal la obtención de este a partir del

producto comercial (±)-6β-hidroxitropanona cómo se visualiza en la figura 13. Ahora bien,

debido a las limitaciones experimentales discutidas en la sección anterior se puede establecer que

la determinación de la configuración absoluta de la molécula objetivo, a través de la ruta de

hemisíntesis propuesta, para su posterior análisis por cromatografía liquida de alta resolución con

columna quiral acoplado a un detector de rotación óptica HPLC-OR, no pudo ser llevada a cabo.

Es por ello por lo que se planteó una ruta de hemisíntesis alternativa para la obtención de

la molécula en estudio a partir del (±)-3α,6β-tropanodiol como se muestra en la figura 17. A

partir de la incorporación de esta propuesta metodológica, se puede concluir que la esterificación

del reactivo de partida y posterior hidrolisis selectiva del (±)-3α,6β-fenilacetoxytropano tuvo

lugar en el medio de reacción, lo que pudo ser comprobado mediante espectroscopia de masa.

Por otro lado, la utilización de cromatografía en columna para la purificación de un crudo

de reacción nos muestra resultados satisfactorios para aislar una molécula de interés desde este.

Es por ello por lo que se concluye que la utilización de esta técnica permitiría obtener productos

de reacción de mayor pureza que a su vez permitan una mejor caracterización de estos por

resonancia magnética nuclear de protones.

 26

BIBLIOGRAFÍA

Acta, H. C. (1959). Process for the preparation of: Google Patents.

Brocksom, T., de Oliveira, K., & Desiderá, A. (2017). The Chemistry of the Sesquiterpene Alkaloids.

Journal of the Brazilian Chemical Society.

Caner, H., Groner, E., Levy, L., & Agranat, I. (2004). Trends in the development of chiral drugs. Drug

Discovery Today, 9(3), 105-110.

Chin, Y.-W., Jones, W. P., Waybright, T. J., McCloud, T. G., Rasoanaivo, P., Cragg, G. M., . . . Kinghorn, A.

D. (2006). Tropane Aromatic Ester Alkaloids from a Large-Scale Re-collection of Erythroxylum

pervillei Stem Bark Obtained in Madagascar. Journal of Natural Products, 69(3), 414-417.

Christen. (2000). Tropane Alkaloids: Old Drugs Used In Modern Medicine. Studies in Natural Products

Chemistry, 22, 717 - 749.

Humam, M., Shoul, T., Jeannerat, D., Munoz, O., & Christen, P. (2011). Chirality and numbering of

substituted tropane alkaloids. Molecules, 16(9), 7199-7209.

Mao, Z., Huang, S., Gao, L., Wang, A., & Huang, P. (2014). A novel and versatile method for the

enantioselective syntheses of tropane alkaloids. Science China Chemistry, 57(2), 252-264.

Mi, Q., Cui, B., Silva, G. L., Lantvit, D., Lim, E., Chai, H., . . . Pezzuto, J. M. (2002). Pervilleines B and C, new

tropane alkaloid aromatic esters that reverse the multidrug-resistance in the hollow fiber assay.

Cancer Letters, 184(1), 13-20.

Mi, Q., Cui, B., Silva, G. L., Lantvit, D., Lim, E., Chai, H., . . . Pezzuto, J. M. (2001). Pervilleine A, a Novel

Tropane Alkaloid that Reverses the Multidrug-resistance Phenotype. Cancer Research, 61(10),

4030-4037.
 27

Muñoz, M. A., Muñoz, O., & Joseph-Nathan, P. (2006). Absolute Configuration of Natural

Diastereoisomers of 6β-Hydroxyhyoscyamine by Vibrational Circular Dichroism. Journal of

Natural Products, 69(9), 1335-1340.

Muñoz., M., Arriagada., S., & Joseph-Nathan., P. (2010). Chiral Resolution and Absolute Configuration of

3α,6β-Dicinnamoyloxytropane and 3α,6β-Di(1-ethyl-1-H-pyrrol-2-ylcarbonyloxy)tropane,

Constituens of Erythroxylaceae Species. Natural Product Commnunications, 9(1), 27-30.

Perlmutter, P., Kulkarni, K., Zhao, A., & Purcell, A. (2008). The Enantioselective Total Synthesis and

Unambiguous Proof of the Absolute Stereochemistry of Pervilleine C. Synlett, 2008(14), 2209-

2212.

Silva, G. L., Cui, B., Chávez, D., You, M., Chai, H.-B., Rasoanaivo, P., . . . Kinghorn, A. D. (2001). Modulation

of the Multidrug-Resistance Phenotype by New Tropane Alkaloid Aromatic Esters from

Erythroxylum pervillei. Journal of Natural Products, 64(12), 1514-1520.

Simoni, D., Rossi, M., Bertolasi, V., Roberti, M., Pizzirani, D., Rondanin, R., . . . Siniscalchi, A. (2005).

Synthesis and Pharmacology of 6-Substituted Benztropines:  Discovery of Novel Dopamine

Uptake Inhibitors Possessing Low Binding Affinity to the Dopamine Transporter. Journal of

Medicinal Chemistry, 48(9).