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11/Agosto/10
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stas nuevas técnicas moleculares en la actualidad le han permitido a los científicos tener
un gran avance en el área de la medicina y en el de la investigación, ya que gracias al
desarrollo de estas técnicas se ha logrado llevar a cabo la producción de medicamentos y
para combatir una serie de enfermedades, que afectan desde hace tiempo tanto a los
animales como a las plantas.
stas técnicas son de relevante importancia en las plantas ya que con ellas podemos
conocer más de su funcionamiento, de sus posibles usos y sobre todo de cómo tratar a
cada uno de estos organismos.
Hoy en día se están realizando experimentos y estudios con estas técnicas empleando
microorganismos como . coli y ciertas levaduras, con tal de prevenir enfermedades,
mejorar la producción y proporcionar una mejor calidad de vida tanto en plantas como en
otros organismos.
Técnicas moleculares
Clonación Molecular
Para insertar el vector en el ADN de la célulahuésped se corta el ADN del vector y el que
contiene el gen deseado con la misma restrictasauniéndose con la ligasa. Así se obtiene
un ADN recombinante.
Secuenciación de ADN
Secuenciación de Maxam-Gilbert
Secuenciación de Sanger
Para este método es necesario contar con una hebra molde de ADN de cadena
sencilla, un cebador de ADN, una ADN polimerasa con nucleótidos marcados
radiactivamente o mediante fluorescencia y nucleótidos modificados que terminan la
elongación de la cadena de ADN. La muestra de ADN se divide en cuatro reacciones
de secuenciación separadas que contienen los cuatro desoxinucleótidos estándar y
una ADN polimerasa. n cada reacción se añade solo uno de los cuatro
didesoxinucleótidos, estos terminan la elongación de la cadena al carecer un grupo 3'-
OH que se necesita para la formación del enlace fosfodiéster entre dos nucleótidos
durante la elongación de la cadena de ADN. La incorporación de un
didesoxinucleótido en la cadena naciente de ADN termina su extensión, lo que
produce varios fragmentos de ADN de longitud variable. Los didesoxinucleótidos se
añaden a concentraciones lo suficientemente bajas como para que produzcan todas
las posibilidades de fragmentos y al mismo tiempo sean suficientes para realizar la
secuenciación.
staa secuenciación se lleva a cabo en una sola reacción, marcándose cada uno de
los cuatro didesoxinucleótidos que terminan la cadena con un colorante fluorescente
diferente, con fluorescencias a diferentes longitudes de onda.apesar de que este
método es muy rápido y mucho menos costoso que los anteriores produce alturas y
formas de picos desiguales en los registros de secuencia de ADN del cromatograma
tras la electroforesis capilar.
l objetivo de esta técnica es el de amplificar o crear copias múltiples del ADN, sin utilizar
un organismo vivo, tal como la o una levadura. También se emplea en la detección
de enfermedades hereditarias, la identificación de huellas digitales genéticas, diagnóstico
clínico, análisis forense del ADN, detección de patógenos en el hombre, animales,
plantas, y alimentos, e investigación en biología molecular.
l procedimiento requiere una plantilla de ADN que puede estar presente en la muestra
en pequeñas cantidades, dos primers oligonucleótidos que flanquean las secuencias de la
plantilla de ADN que va a ser amplificado; y una ADN-polimerasa estable el
calentamiento3
Los ensayos de PCR constan de 30 ciclos, donde cada ciclo consiste en una fase de
desnaturalización, en donde la doble hebra de ADN es fundida en hebras únicas; una fase
de alineación, en donde los primers se unen a las secuencias blanco en las hebras
separadas; y una fase de extensión, en donde la síntesis de ADN procede de los primers
a partir de cada hebra de la plantilla de ADN, generando dos nuevas copias de la doble
hebra de la plantilla original. Después de cada 30 ciclos, una sola copia inicial de la
plantilla de ADN puede llegar a ser amplificado hasta 1 billón de copias.
- Caracterización de germoplasma
- Identificación de genotipos y determinación de pureza
- Análisis de diversidad genética en animales, plantas superiores, patógenos y
plagas (virus, hongos, insectos, nemátodos)
- Selección asistida (resistencia a enfermedades, calidad proteica de cereales, etc.)
Fuentes de información