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1. Homogeneizado de la muestra:
La muestra utilizada fue agua embotellada, al tratarse de un producto líquido se
homogeniza previo a realizar la disolución, y con la ayuda de una pipeta estéril se tomó
una alícuota de 10 ml de la muestra. Luego se transfiere a los 90 mL de diluyente que se
encuentran en el Erlenmeyer (en este caso soya tripticasa) obteniendo la dilución 10-1 y
se homogeniza durante cinco minutos.
2. Realizar las diluciones:
Para realizar las diluciones se utilizan 4 tubos con 9 mL de diluyente cada uno (soya
tripticasa), se procede a transferir 1 ml de la solución 10-1 a un tubo rotulado como
dilución 10-2, se agita el tubo y se procede a tomar 1 ml de este tubo transfiriendo a un
tubo rotulado obteniendo la disolución 10-3.
Siembra:
Se utiliza la técnica del NMP (Número Más Probable). Se tienen 9 tubos en total con 10
ml de caldo LAURIL SULFATO TRIPTOSA en cada uno de ellos, se dividen en tres
series y con ayuda de las pipetas utilizadas con anterioridad, se coloca 1 ml de la solución
10-1 en cada uno de los tres tubos de la primera serie, luego se coloca 1 ml de la solución
10-2 en cada uno de los tres tubos de la segunda serie y al final 1 ml de la solución 10-3 en
cada uno de los tres tubos de la tercera serie. Se debe considerar que se homogeneizó cada
tubo luego de cada transferencia.
3. Incubación:
Incubar los tubos a 35C por un lapso de 24 horas, si no hay presencia de gas se procede
a incubar los tubos nuevamente 24 horas, terminando la prueba presuntiva a las 48 horas.
Si el resultado es negativo se termina el análisis sin la necesidad de realizar la prueba
confirmatoria y complementaria.
4. Resultados:
- Prueba presuntiva: positiva o negativa
- Prueba confirmatoria: los presuntivamente positivos se siembran en caldo lactosa
bilis al 2% verde brillante, y se incuban los tubos a 35OC por 48 horas. Se tiene
prueba confirmatoria para coliformes y coliformes termotolerantes.
- Prueba complementaria: se puede realizar la siembra en el agar MacConkey.