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Determinação da atividade
da Enzima Invertase livre
1. RESUMO
2. INTRODUÇÃO
Enzimas são biomoléculas que possuem alto poder catalítico, muito superiores aos
dos catalisadores que são produzidos sinteticamente, além disso, são altamente
específicas. O objetivo de um catalisador é acelerar as reações químicas, portanto essa é a
função da enzima, que desempenham este papel nas reações que ocorrem nos
organismos, sendo que muitas destas reações não ocorreriam sem a presença das
enzimas
As enzimas possuem diversas aplicações, podem auxiliar na quebra de grandes
moléculas de nutrientes, como proteínas, gorduras e carboidratos em moléculas menores,
permitindo a passagem por sua membrana, e também são responsáveis pela estocagem e
liberação de energia.
A enzima invertase é utilizada na hidrólise da sacarose a xarope de glicose e frutose,
que é muito utilizado na indústria alimentícia. Essa reação enzimática apresenta
vantagens em relação aos métodos tradicionais de hidrólise ácida com ácido sulfúrico,
pois o consumo energético é menor, além de o produto obtido ser de melhor qualidade.
3. FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA
3.1. ENZIMAS
O centro ativo de uma enzima é uma estrutura formada por aminoácidos residuais
com alta afinidade pelo substrato, e a funcionalidade biológica das enzimas depende da
manutenção de sua estrutura protéica nativa.
Existem alguns fatores que influenciam a atividade enzimática, a qual é avaliada
através do aumento ou redução da velocidade da reação catalisada. A análise da atividade
da enzima é chamada cinética enzimática, e é determinada por diferentes fatores, como
concentração da enzima, concentração do substrato e sua disponibilidade, concentração
de cofatores, concentração e tipo de inibidores (quando presentes), e ainda pH e
temperatura.
O avanço de grande parte das reações enzimáticas, a velocidade de reação diminui
com o tempo. Os fatores que podem contribuir para esta diminuição da velocidade de
reação podem ser:
Produto da reação inibe a enzima;
O grau de saturação da enzima com o substrato pode diminuir devido ao
decréscimo da concentração de substrato, a medida que avança a reação;
As reações reversas podem se tornar a medida que a concentração do produto
aumenta;
A enzima pode sofrer inativação térmica ou pelo PH.
Se estes fatores acima mencionados não tiverem tempo de se manifestar, a
atividade enzimática é determinada a partir da medida da velocidade inicial da reação
pois neste ponto as condições em que a reação se processa são exatamente conhecidos.
Onde:
y = a b.t é dada nos gráficos de µmols de glicose + frutose versus tempo.
a = coeficiente linear da reta ajustada.
b = coeficiente angular da reta ajustada.
t = tempo de reação (min).
y = µmoles de glicose + frutose.
𝐸𝑎
− =𝑏
𝑅
𝐸𝑎 = −𝑏. 𝑅 (𝐽) (3)
Onde:
y = a b.t é dada nos gráficos de ln da atividade versus o inverso da temperatura.
a = coeficiente linear da reta ajustada.
b = coeficiente angular da reta ajustada.
1/T = inverso da temperatura (1/K).
y = ln da atividade.
R= constante universal dos gases perfeitos.
4. MATERIAIS E MÉTODOS
4.1. MATERIAIS
4.2. MÉTODOS
5. RESULTADOS
Sendo:
Gr = glicose+frutose formada
Vr = Volume de reação
PM = peso molecular da glicose+frutose (0,360 mg/mol)
Volume de Quantidade de
Tempo reação glicose+frutose mi moles de
Amostra (min) (mL) Absorbância formada (mg/mL) glicose
1 0 51 -0,016 0 0
2 3 50,5 0,02 0,8283233133 116,1953537
3 6 50 0,072 1,986194611 275,8603627
4 12 49,5 0,096 2,520596749 346,582053
T=45C
5 15 49 0,14 3,500334001 476,4343502
6 18 48,5 0,15 3,723001559 501,5710433
7 21 48 0,212 5,103540414 680,4720552
8 24 47,5 0,224 5,370741483 708,6395012
600
500
400
300
y = 28,688x + 33,205
200 R² = 0,9739
100
0
0 5 10 15 20 25 30
Tempo (min)
Volume de Quantidade de
Tempo reação glicose+frutose mi moles de
Amostra (min) (mL) Absorbância formada (mg/mL) glicose
1 0 51 -0,03 0 0
2 3 50,5 0,021 0,850590069 119,3188847
3 6 50 0,06 1,718993543 238,7491031
4 12 49,5 0,094 2,476063238 340,4586952
T=50oC
5 15 49 0,113 2,899131597 394,6040229
6 18 48,5 0,132 3,322199955 447,5741607
7 21 48 0,245 5,838343353 778,4457804
8 24 47,5 0,283 6,684480071 881,9800094
Temperatura=50C
1000
900
mi moles de glicose+frutose
800
700
600
500
400
300 y = 33,503x - 14,455
200 R² = 0,9205
100
0
-100 0 5 10 15 20 25 30
Tempo (min)
Volume de Quantidade de
Tempo reação glicose+frutose mi moles de
Amostra (min) (mL) Absorbância formada (mg/mL) glicose
1 0 51 -0,005 0 0
2 3 50,5 0,056 1,62992652 228,6424701
3 6 50 0,104 2,698730795 374,8237215
4 12 49,5 0,134 3,366733467 462,9258517
T=55oC
5 15 49 0,197 4,769539078 649,1872634
6 18 48,5 0,21 5,059006903 681,5606522
7 21 48 0,298 7,018481407 935,797521
8 24 47,5 0,322 7,552883545 996,5610233
Temperatura=55C
1200
mi moles de glicose+frutose
1000
800
600
400
y = 38.665x + 62.71
200 R² = 0.9674
0
0 5 10 15 20 25 30
Tempo (min)
Volume de Quantidade de
Tempo reação glicose+frutose mi moles de
Amostra (min) (mL) Absorbância formada (mg/mL) glicose
1 0 51 0,001 0 0
2 3 50,5 -0,003 0 0
3 6 50 0,002 0,02226675573 3,092604963
4 12 49,5 0,017 0,3562680917 48,98686261
T=60oC
5 15 49 0,001 0 0
6 18 48,5 0,015 0,3117345803 41,9975754
7 21 48 0,023 0,4898686261 65,31581682
8 24 47,5 0,016 0,334001336 44,06962072
Chart Title
70
mi mols de glicose + frutose
60
50
40
30
20
y = 2,4442x + 0,9131
10 R² = 0,7335
0
0 5 10 15 20 25 30
Tempo (min)
Atividade
Temperatura enzimática Atividade
(oC) (U/mL) específica (U/mg) ln Ae 1/T
40 28,688 0,1550702703 -1,863876908 0,003193357816
50 33,503 0,1810972973 -1,708720838 0,00309453814
55 38,665 0,209 -1,565421027 0,003047386866
60 2,404 0,01299459459 -4,343221808 0,003001650908
Ea 1
ln A ln A0 (6)
R T
É possível construir o gráfico lnAe versus 1/T, obtemos o coeficiente angular -Ea/R.
Energia de ativação
Ln atividade específica
y = -1971.9x + 4.4233
R² = 0.9684
1/T
Logo,
-Ea/R = -1971,9
Sendo:
R = 8,314 J.K-1. mol-1
Ea = -16394,4 J/mol
8. BIBLIOGRAFIA.
Bergamasco, R. “Cinética da hidrólise da sacarose pela invertase”. Dissertação de
mestrado. Universidade estadual de Londrina, 1989.