3M Petrifilm

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Placa para Contagem de E.coli e Coliformes

Placa para Contagem de Coliformes

Guia de
Interpretação
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Placa para Contagem de E.coli e Coliformes
Este guia apresenta resultados das Placas 3MTM PetrifilmTM para Contagem de
E.coli e Coliformes. Para maiores informações, contate o representante de
produtos microbiológicos da 3M do Brasil Ltda.
As Placas 3M™ Petrifilm™ para Contagem de E.coli e Coliformes (EC) contêm nutrientes do meio Vermelho Violeta Bile (VRB),
um agente geleificante solúvel em água fria, um indicador de atividade glicuronidásica e um indicador que facilita a enumeração
da colônia. A maioria das E.coli (cerca de 97%) produz beta-glicuronidase na qual forma um precipitado azul associado a
colônia. O filme superior retém o gás formado pelos coliformes e E.coli que são fermentadores de lactose. Cerca de 95% das
E.coli produzem gás indicadas pelas colônias azuis a vermelho-azuladas, associadas ao gás retido na Placa Petrifilm EC (dentro
de, aproximadamente, o diâmetro de uma colônia).

AOAC INTERNATIONAL e U.S FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) definem coliformes como bacilos gram-negativos
produtores de ácido e gás a partir da lactose durante a fermentação metabólica. Colônias de coliformes que crescem na Placa
Petrifilm EC produzem ácido, fazendo com que o indicador de pH torne a cor do gel vermelho mais escuro.
O gás retido ao redor das colônias vermelhas de coliformes indica coliformes confirmados.

A identificação de E.coli pode variar para

cada país (veja a seção Instruções de Uso
para tempos e temperaturas de incubação):

Método validado pela AOAC INTERNATIONAL

E.coli = 49 (colônias azuis com gás)
Coliformes Totais = 87 (colônias vermelhas
e azuis com gás).

Não use esta placa para a detecção de E.coli 0 157. Como a maioria dos outros meios para E.coli e Coliformes, esta placa
não indicará, especificamente, a presença de qualquer cepa 0 157.

2 3
Sem crescimento = 0
Observe as mudanças na cor do gel nas figuras de
2 a 8. Quando a contagem de E.coli ou coliformes
aumenta, a cor do gel se torna vermelha escura ou
roxo-azulada.
Iluminação Iluminação
de Fundo Frontal
1 2
4
Contagem de E.coli = 3
Qualquer azul na colônia (azul a vermelho-azulado)
indica a presença de E.coli. Iluminação frontal
realçará a detecção do precipitado azul formado
pela colônia.
O círculo 1 mostra uma colônia vermelho-azulada
contada usando iluminação de fundo. O círculo 2
mostra a mesma colônia com iluminação frontal.
O precipitado azul é mais evidente no círculo 2.
1
Contagem de E.coli = 13
Contagem de Coliformes Totais = 28
A faixa de contagem para a população total na
Placa Petrifilm EC é de 15 a 150.
Não conte as colônias que aparecem na barreira de
espuma, pois elas não estão sob a influência seletiva
do meio. Veja o círculo 1.
5
Contagem de E.coli = 17
Contagem estimada de Coliformes Totais = 150
A área circular de crescimento é aproximadamente
20 cm2. Estimativas podem ser feitas nas placas
contendo mais de 150 colônias, através da contagem
do número de colônias em um ou mais quadrados
representativos e determinando o número médio por
quadrado. Multiplique o número médio por 20 para
determinar a contagem estimada por placa.
INC (Incontáveis) Para obter uma contagem mais precisa, dilua a amostra

6 7
Contagem atual ~ 10 6 Contagem atual ~ 10 8
Placas Petrifilm EC que são incontáveis têm uma ou Altas concentrações de E.coli podem tornar a área
mais das seguintes características: muitas colônias de crescimento roxa-azulada.
pequenas, muitas bolhas de gás, e uma alteração da
cor do gel de vermelho para roxo-azulada.

8 9
Contagem de E.coli presuntiva ~8 Contagem atual ~ 10 8
Contagem de Coliformes Totais estimada ~ 10 8
Quando altos números de organismos não-coliformes,
Quando altos níveis de coliformes estão presentes tais como Pseudomonas, estão presentes nas Placas
(>10 8 ), algumas cepas de E.coli podem produzir Petrifilm EC, o gel pode se tornar amarelo.
menos gás e colônias azuis podem ser menos
definitivas. Conte todas as colônias azuis sem gás e/ou
zonas azuis como E.coli presuntiva. Pegue colônias
azuis sem gás e confirme, se necessário.
Bolhas

3 2
1

10
Contagem de Coliformes Totais = 3
Partículas de alimentos têm formatos irregulares e
não estão associadas as bolhas de gás.
11
Contagem Total de Coliformes = 78
As bolhas podem variar. O gás pode romper a
colônia de forma que a colônia contorne a bolha.
Veja os círculos 1 e 2.
Bolhas artificiais podem resultar de uma inoculação
inadequada ou do ar retido na amostra. Elas são
irregulares e não estão associadas a colônia.
Veja o círculo 3.

1 4
2

5 7
6

8 9 10
12
Os exemplos de 1 a 10 mostram várias bolhas
associadas as colônias produtoras de gás.
Todas devem ser enumeradas.
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Placa para Contagem de Coliformes

Este guia apresenta resultados das Placas 3M™ Petrifilm™ para Contagem de
Coliformes. Para maiores informações, contate o representante de produtos
microbiológicos da 3M do Brasil Ltda.

As Placas 3M™ Petrifilm™ para Contagem de Coliformes (CC) contêm nutrientes do meio Vermelho Violeta Bile (VRB), um agente
geleificante solúvel em água fria e um indicador tetrazólico que facilita a enumeração das colônias. O filme superior retém o gás
formado pelos coliformes fermentadores de lactose.

AOAC INTERNATIONAL e U.S FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) definem coliformes como bacilos gram-negativos
produtores de ácido e gás a partir da lactose durante a fermentação metabólica. Colônias de coliformes que crescem na Placa
Petrifilm CC produzem ácido, fazendo com que o indicador de pH torne a cor do gel vermelho mais escuro. O gás retido ao redor
das colônias vermelhas de coliformes indica coliformes confirmados.

A identificação de coliformes pode variar

para cada país (veja a seção Instruções
de Uso para tempos e temperaturas de
incubação):

Método validado pela AOAC INTERNATIONAL

Coliformes Totais = 69 (colônias com gás).

1
 1

2 3
Sem crescimento = 0 Contagem de Coliformes Totais = 79
Observe as mudanças na cor do gel nas figuras de A faixa de contagem para a população total na
2 a 8. Quando a contagem de coliformes aumenta, Placa Petrifilm CC é de 15 - 150.
a cor do gel escurece.
Bolhas de fundo são características do gel e não Não conte as colônias que aparecem na barreira
indicam crescimento de coliformes. de espuma, pois elas não estão sob a influência
o seletiva do meio. Veja o círculo 1.

4 5
Contagem Estimada de Coliformes Totais = 220 INC
A área circular de crescimento é aproximadamente Placas Petrifilm CC que são incontáveis têm uma
20 cm2. Estimativas podem ser feitas nas placas ou mais das seguintes características: muitas
contendo mais de 150 colônias, através da contagem colônias pequenas, muitas bolhas de gás e um
do número de colônias em um ou mais quadrados escurecimento da cor do gel.
representativos e determinando o número médio por
quadrado. Multiplique o número médio por 20 para
determinar a contagem estimada por placa. Diluição
posterior da amostra é recomendada para uma
contagem mais precisa.
 6 7
Contagem atual = 4 Contagem de Coliformes Totais = 2
Quando altos números de organismos não-coliformes, Partículas de alimentos têm formatos irregulares e
tais como Pseudomonas estão presentes nas Placas não estão associadas as bolhas de gás.
Petrifilm CC, o gel pode se tornar amarelo.

1
3
3 1
4
2
2

5 7
6

8 9 10

8 9
Contagem de Coliformes Totais = 8 Os exemplos de 1 a 10 mostram várias bolhas
As bolhas podem variar. O gás pode romper a associadas as colônias produtoras de gás.
colônia de forma que a colônia contorne a bolha. Todas devem ser enumeradas.
Veja os círculos 1 e 2.

Bolhas artificiais podem resultar de uma inoculação

inadequada ou do ar retido na amostra. Elas são
irregulares e não estão associadas a colônia.
Veja o círculo 3.
 Instruções de Uso
3M Petrifilm
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Placa para Contagem de E.coli e de Coliformes

Para informações detalhadas sobre PRECAUÇÕES, REJEIÇÃO DE GARANTIAS/RECURSO LIMITADO, RESTRIÇÕES DE

RESPONSABILIDADE DA 3M, ARMAZENAMENTO E DESCARTE E INSTRUÇÕES DE USO veja a bula do produto.

Armazenamento

Petrifilm
Petrifilm
Petrifilm

1 Refrigere os pacotes fechados a < 8°C.

Use antes da data de vencimento impresso
na embalagem. Em áreas de alta umidade
2 Para selar os pacotes abertos, dobre a
extremidade e sele com fita adesiva. 3 Mantenha os pacotes re-selados a
< 25ºC e < 50% UR. Não refrigere os
pacotes abertos. Use as Placas
onde a condensação pode ser um problema, Petrifilm em um mês, após abertos.
deixe os pacotes atingirem a temperatura
ambiente antes de abrí-los.

Preparo da Amostra

4 Prepare uma diluição 1:10 ou superior

da amostra. Pese ou pipete a amostra
num recipiente adequado, como saco
5 Adicione a quantidade adequada de um dos
diluentes estéreis a seguir: tampão fosfato
de Butterfield, água peptonada 0,1%,
6 Misture ou homogeneíze a amostra
utilizando métodos de rotina.

para homogeneização, frasco de diluente salina peptonada (método ISO 6887),

diluição ou outro recipiente estéril.
água peptonada tamponada
(método ISO 6887-1), solução salina
(0,85-090%), caldo letheen sem
bissulfito ou água destilada.
Não use tampões contendo citrato,
bissulfito ou tiossulfato; eles
podem inibir o crescimento.
• para a placa de E.coli, ajuste o pH
da amostra diluída entre 6,5 e 7,5
• para a placa de Coliformes, ajuste
o pH da amostra diluída entre 6,6 e 7,2
• para produtos ácidos use NaOH1 1N
• para produtos alcalinos use HCI 1N
 Inoculação

7 Coloque a Placa Petrifilm em uma

superfície plana. Levante o
filme superior.
8 Com a pipeta posicionada
perpendicularmente à Placa
Petrifilm, coloque 1 ml da amostra
9 Cuidadosamente DESÇA o filme
superior de forma a evitar a
formação de bolhas de ar. NÃO
no centro do filme inferior. deixe o filme superior cair.

Lado côncavo

Lado liso

10 Com o lado LISO para baixo,

coloque o difusor no filme superior
sobre o inóculo.
11 DELICADAMENTE pressione o
difusor para distribuir o inóculo na
área circular antes do gel se formar.
12 Retire o difusor. Espere um minuto,
no mínimo, para o gel solidificar.

Não gire nem arraste o difusor.

Incubação Interpretação
<70°F

13 Incube as placas com a face

transparente para cima, em pilhas de
até 20 placas. Pode ser necessário
14
umidificar a estufa para minimizar a
perda de umidade.
As Placas Petrifilm podem ser
contadas em um contador de
colônias comum ou outro sistema
15 As colônias podem ser isoladas
para identificação futura. Levante o
filme superior e retire a
de amplificação. Consulte o Guia colônia do gel.
de Interpretação para a leitura
dos resultados.
 O tempo e a temperatura de incubação variam de acordo
com o método. Os métodos aprovados mais comuns são:

Placa para Contagem de E.coli e Coliformes (EC)

Método Oficial AOAC 991.14 Método Oficial AOAC 998.08 Método NMKL (147.1993)
Para coliformes: incube 24h ± 2h a 35°C ± 1°C Para E.coli (carnes, aves e pescados): Para coliformes: incube 24h ± 2h a 37°C
Para E.coli: incube 48h ± 2h a 35°C ± 1°C incube 24h ± 2h a 35°C ± 1°C Para E.coli: incube 48h ± 2h a 37°C

Placa para Contagem de Coliformes (CC)

Coliformes Totais Coliformes Termotolerantes

• Métodos Oficiais AOAC 986.33 e 989.10 • Método validado AFNOR
(leite, leite cru, outros produtos lácteos) 3M 01/2 – 09/89C (todos os tipos
incube 24h ± 2h a 32°C ± 1°C de alimentos)
incube 24h ± 2h a 44°C ± 1°C
• Método Oficial AOAC 991.14 (alimentos) • Umidificação da estufa
incube 24h ± 2h a 35°C ± 1°C é necessária nesta temperatura
elevada.
• Método NMKL (147.1993)
incube 24h ± 2h a 37°C ± 1°C

• Métodos validados AFNOR 3M 01/2 –

09/89A e B (todos os tipos de alimentos
exceto ostra)
incube 24h ± 2h a 30°C ± 1°C
 Abril/09 Bretas

Microbiologia
3M do Brasil Ltda.
Via Anhanguera, km 110
13181-900 - Sumaré - SP