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Curso de Farmácia
Disciplina de Fitoquímica
Prof. Joceline Franco
Quercetina*
* (Fonte: http://it.wikipedia.org/wiki/Immagine:Quercetina_struttura.PNG)
Curitiba
2016
ROTEIRO DE PESQUISA DOS METABOLITOS SECUNDARIOS – EXTRATO AQUOSO
Para o preparo do extrato, o material botânico deve ser seco, triturado a fragmentos menores
ou reduzido a pó (idealmente).
Filtrar
Resíduo (marco)
Extrato aquoso
No nosso caso das aulas, o extrato inicial obtido após a filtração será utilizado para as
pesquisas e será armazenado em geladeira em frascos de vidro.
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1) Caracterização dos extratos:
a. cor
b. odor
c. sabor
d. pH
e. aspecto
3) Calcular o peso do resíduo seco por ml de solução extrativa e por g de solução extrativa;
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4) Pesquisa de glicosídeos antociânicos
Separar três porções de 2 mL do extrato aquoso em tubos de ensaio.
Tubo 1: acidificar com acido sulfúrico 1N (pH3)
Tubo 2: alcalinizar com hidróxido de sódio 1N (pH 10)
Tubo 3: neutralizar (pH7)
Observar se houver ou não desenvolvimento de coloração.
Em meio acido tons avermelhados
Em meio alcalino tons azulados
Em meio neutro --. Tons violáceos
Coloração verde flavonóides.
As antocianinas são pigmentos hidrossolúveis, encontram-se na forma de sais, são
encontradas principalmente em flores, frutos e tecidos em coloração que vão do roxo ao violeta e
azul. Comportam-se como indicadores de acido base. Possuem caráter anfóero, com ácidos
formam sais de oxônio corados de vermelho, com base reagem com as hidroxilas fenólicas livres e
adquirem a coloração azul devido à estrutura quinóide. A união de acido glicosídeo ocorre através
da hidroxila C3. As colorações dos compostos antociânicos variam com o pH.
Reação de Rossol
- No tubo de ensaio onde foi realizado a evaporação de 5 ml da fase orgânica, adicione 1 gota de
acido sulfúrico concentrado
- o desenvolvimento de uma coloração vermelha ou violeta, indica a presença de sapogenina
Reação de Mitchell
- no tubo de ensaio onde foi realizado a evaporação de 5 ml da fase orgânica, adicione 1 gota de
acido sulfúrico concentrado e vestígios de nitrato de prata
- o desenvolvimento de uma coloração avermelhada indica a presença de sapogenina
Reação de Rosenthalen
- no tubo de ensaio onde foi realizado a evaporação de 5 ml da fase orgânica, adicione 1 ou 2
gotas de vanilina a 1% em acido clorídrico diluido
- aqueça esse essa solução até aparecimento de coloração azul
Reação de Libermann
- no tubo de ensaio onde foi realizado a evaporação de 5 ml da fase orgânica, dissolva o resíduo
em 2 ml de acido acético glacial
- adicione 1 ou 2 gotas de cloreto férrico a 3%
- adicione pela parede do tubo 1 ou 2 ml de acido sulfúrico sem agitar
- a presença de um anel avermelhado ou verde entre os dois líquidos indica a presença de
derivados esteroidais
- a presença de uma anel azul entre os dois líquidos indica a presença de derivados triterpenóides.
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6) Pesquisa de cianogênicos
TESTE DE GUIGNARD (PAPEL PICRO-SÓDICO)
Impregnar tiras de papel de filtro da seguinte maneira: gotejar 2-3 gts no papel de filtro
solução a 10% de ácido pícrico.
Logo a seguir, gotejar 3-4 gts de solução de carbonato de sódio a 10%.
Colocar este papel para secar antes do uso. Reservar.
- Transferir para um tubo de ensaio 5 mL de extrato aquoso de modo a não umedecer as paredes
do tubo e 1 mL de solução aquosa de acido sulfúrico 1N.
- Suspender uma tira de papel picri-sódico com auxilio de uma rolha de cortiça, de modo que o
papel não toque o extrato.
- Levar o tubo de ensaio ao banho maria a 60°, durante 30 minutos.
- Se houver HCN, após alguns minutos, o papel passará do amarelo para o alaranjado e, depois
para o vermelho.
Reação + = papel adquire coloração vermelha, devido ao desprendimento de HCN.
Reação + falsa = quando o papel tocar nas paredes do tubo ou na solução.
7) Pesquisa de aminogrupos
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8) Pesquisa de taninos
A) TESTES DE IDENTIFICAÇÃO:
TUBO 1 – GELATINA
2 mL da extrato aquoso + 2 gotas de HCl diluído + solução de gelatina a 2,5% gota a gota.
Se ocorrer formação de precipitado: reação positiva para taninos.
TUBO 4 - BRANCO
Contém apenas 5 mL do extrato aquoso para comparação.
Para pesquisa de taninos, outras reações podem ser úteis, por exemplo: Cloridrato de emetina (ou
outros alcalóides), Água de bromo, Cianeto de potássio, Acido nitroso, Dicromato de potássio e
outros sais férricos.
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ROTEIRO DE PESQUISA DOS METAB. SECUNDARIOS – EXTRATO HIDROALCOÓLICO
Para o preparo do extrato, o material botânico deve ser seco, triturado a fragmentos menores
ou reduzido a pó (idealmente).
Filtrar
Resíduo (marco)
Extrato hidroalcoolico
Extrato concentrado
3) Calcular o peso do resíduo seco por ml de solução extrativa e por g de solução extrativa;
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4) Pesquisa de flavonóides
NÚCLEO FUNDAMENTAL
3'
2' 4'
8
B
O 2 5'
7
6'
A C
6 4 3
5
O
2-fenil-crom ona
(2-fenil-benzopinona)
Deve aparecer coloração vermelha, quanto mais intensa a cor, maior a concentração dos
flavonóides.
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- em um dos tubos, coloque 1 gota de cloreto férrico a 2% pela parede do tubo
- a cor pode variar entre verde, amarelo-castanho e violeta de acordo com o tipo de composto
flavonoídicos.
C) Reação oxalo-bórica
- evaporar 2 mL do extrato hidroalcoolico a secura num tubo de ensaio,
- ao resíduo adicionar 5 gotas de acetona e 30 mg da mistura de acido bórico e acido oxálico,
agitar.
- Evaporar a secura,
- ao resíduo adicionar 5 mL de éter etílico, agitar.
- Examinar a solução etérea sob luz UV. O aparecimento de fluorescência indica reação positiva.
5) Pesquisa de cumarinas:
- Aquecer em chapa-quente, durante cerca de 10 minutos, o pó da droga vegetal em uma câmara
de microssublimação (o sublimado apresenta-se sob a forma de gotas incolores ou cristais
aciculares).
- Dissolver o sublimado obtido com 0,5 ml de metanol.
- Em uma folha de papel filtro (10cm x 4cm), pingar 5 gotas em cada ponto, de modo a obter 2
manchas de 1cm de diâmetro. A uma delas adicionar 1 gota de sol alcoólica de KOH ou NaOH
10% e secá-la.
- Depois de seco, pingar na mesma mancha, 1 gota de solução alcoólica de hidróxido de potássio;
cobrir uma mancha com papel preto e coloca-las em exposição às radiações ultravioletas (lâmpada
UV com de 254 a 366nm). A mancha exposta adquire, pouco a pouco, fluorescência verde, já
aparente ao final do primeiro minuto.
- Descubra depois a outra mancha e verifique que, de início, esta não possui fluorescência, mas
também a adquire por idêntica exposição às radiações ultravioleta.
- Reação + para cumarinas : Fluorescência azul-verde
O O OH OH
COOH
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6) Pesquisa de antraquinonas
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8) Pesquisa de Alcalóides.
Método geral:
- Evaporar 25 mL do extrato hidroalcoólico até secura.
- Dissolver o resíduo com 1 mL do etanol e adicionar 10 mL de HCL a 1%,
- Transferir para 5 tubos de ensaio, 0,5 mL de extrato hidrocloridrico (em cada tubo), o quinto tubo
é usado como referencia.
- Acrescente a cada tubo de ensaio 3 gotas dos reagentes de MAYER, DRAGENDORFF,
BOUCHARDAT, BERTRAND, respectivamente;
- Observe a formação de turvação e/ou turvação
Reativo de MAYER precipitado branco ou leve turvação
Reativo de DRAGENDORFF precipitado de coloração tijolo
Reativo de BOUCHARDAT precipitado de coloração alaranjada
Reativo de BERTRAND precipitado branco ou leve turvação
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PESQUISA DE ÓLEOS ESSENCIAIS
A1) Cálculo
% de óleo volátil = volume de óleo volátil coletado (ml) x 100
(V/P) Peso da amostra (g)
P AE AF
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REFERÊNCIAS
MOUCO, G.; BERNARDINO., N.J.; CORNÉLIO, M.L.. Controle de qualidade de Phyllanthus niruri
L. (Quebra-pedra). Revista Biotecnologia Ciência e Desenvolvimento. n. 31, p. 68-73, 2003.
SIMÕES, C. M. O.; SCHENKEL, E. P.; GOSMANN, G.; MELLO, J. C. P.; MENTZ, L. A.;
PETROVICK, P. R. Farmacognosia: da planta ao medicamento, 5. Ed., Porto Alegre - RS:
Editora UFRGS e UFSC, 2005.
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