Preguntas Fermenta:
las propiedades intrínsecas de la enzima.
1. ¿Por qué la actividad enzimática se mide a tiempos cortos?
Como sabemos la actividad enzimática está en función con su velocidad
y para poder medir la velocidad el tiempo tienen que ser muy cortos de
modo que la velocidad de la reacción de reserva es insignificante
2. ¿Cuáles son los parámetros de RDI y RDC en un proceso reactivo
con enzimas inmovilizadas?
RD externas:
𝜶: (𝒏𝒖𝒎𝒆𝒓𝒐 𝒅𝒆 𝑫𝒂𝒎𝒌𝒉𝒆𝒍𝒆𝒓 )
𝜼 = (𝒇𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝒆𝒇𝒆𝒄𝒕𝒊𝒗𝒊𝒅𝒂𝒅 ): 𝒇(𝜶, 𝜷𝟎)
Resultan como consecuencia de la existencia (en la vecindad de la
RD internas:
partícula catalítica) de una zona de líquido estanco donde hay sólo
difusión molecular y no transporte convectivo.
Si la limitación es muy fuerte, la velocidad de la reacción es la velocidad
de difusión.
Estas restricciones disminuyen aumentando la agitación para mejorar el
mezclado.
En una situación ideal de mezcla sin limitación de la difusión, la reacción
tendrá los parámetros cinéticos idénticos a los de la enzima libre.
 Módulo de Damkholer ()
 Número adimensional que expresa la relación entre la velocidad
máxima de una reacción enzimática y la velocidad máxima de
transferencia de sustrato en las proximidades de una enzima
inmovilizada
 Indica los factores que limitan la actividad de la enzima inmovilizada
y cuanto se aleja del máximo posible.
 Módulo de Thiele ()
Incidencia del fenómeno de transporte de
sustrato en la expresión del potencial catalítico
de la enzima.
Si  es pequeño -> baja incidencia de RDE
Si  es grande -> alta incidencia de RDE
 Factor de Efectividad ()
 Expresa los efectos combinados de los factores que afectan a
=1 -> La actividad de la enzima no se ha reducido por la inmovilización.
<1 -> Se ha perdido parte de la actividad durante la inmovilización y por
los efectos de partición y difusionales.
>1 -> Al romper células inmovilizada, cuando hay división celular,
cuando los inhibidores se excluyen selectivamente, aumento de
temperatura, cuando la enzima inmovilizada es más estable.
∅ = (𝒎𝒐𝒅𝒖𝒍𝒐 𝒅𝒆 𝑻𝒉𝒊𝒆𝒍𝒆), 𝜷 = 𝒇(𝒛, ∅)
𝜼: 𝒇(∅, 𝜷𝟎)
Se deben al tamaño y tortuosidad de los poros del soporte.
Efecto más complejo porque la difusión se produce simultáneamente con
la reacción, creando gradientes de concentración alrededor de las
partículas.
El efecto sobre la Km es el mismo que para la limitación difusional externa
(K´m> Km)
La disponibilidad de sustrato es más difícil y siempre se tendrán valores
de V´max < Vmax porque la enzima ubicada en el centro de la partícula
permanecerá inactiva.
Es importante controlar la cantidad de enzima inmovilizada.
 Método para cuantificar las restricciones difusionales internas y
externas.
 Relación entre velocidad de reacción química y proceso difusivo en
los poros.
 Los valores pequeños: no influye el proceso difusivo (mayor factor de
efectividad); y los valores altos: tienen mayor influencia de difusión en
los poros (menor factor de efectividad)
  La definición sólo es válida para una ecuación cinética concreta
(primer orden).
L = Espesor medio de la partícula.
[E] = Contenido en enzima de la
partícula.
De = Difusividad efectiva del
sustrato.
3. Porque es fundamental el K y Vmax de enzimas como biocatalizadores
en un reactor.
 K es la constante de velocidad o también constantes microscópicas
de velocidad
 En estas condiciones (las condiciones óptimas de pH,temperatura,
presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes
de sustrato), la velocidad de reacción observada es la velocidad
máxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la
aparición de los productos o la desaparición de los reactivos.
 Al seguir la velocidad de aparición de producto (o de
desaparición del sustrato) en función del tiempo se
obtiene la llamada curva de progreso de la reacción,
o simplemente, la cinética de la reacción.
4. Mencione un objetivo de las estrategias de operación en un
biorreactor enzimático.
La operación de reactores enzimáticos requiere producto de calidad
uniforme (X= cte)
En bioreactores por lotes :
E soluble: X:f(E,t)
E inmovilizado: Pérdida de capacidad catalítica
La pérdida de la capacidad catalítica durante la operación del birreactor;
básicamente se debe a la temperatura y al tiempo que está expuesto.
El estudio del fenómeno de inactivación térmica del biocatalizador y la
determinación de la T de operación de un birreactor enzimático son
aspectos de la mayor relevancia.
5. Defina UI.
UNIDAD INTERNACIONAL DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: Es la
cantidad de enzima que cataliza la transformación de 1 micromol de
substrato por minuto, bajo condiciones bien definidas (condiciones
estándar). Esta es la expresión básica de la velocidad de la reacción.
Se ha sugerido que la temperatura debe ser, en lo posible, de 30°C
y que las otras condiciones, tales como pH y concentraciones de
substratos, debieran ser las óptimas para la actividad enzimática.
La cantidad de enzimas presentes en un fluido biológico es muy difícil
de determinar en valores absolutos, mg. o moles, una forma de
resolver este problema es midiendo la velocidad de reacción
 catalizada por la misma empleando un sustrato específico. La
velocidad de reacción puede expresarse como la cantidad de reactivo
que se transforman en producto por unidad de tiempo. De allí que la
unidad internacional (UI) de cualquier enzima se define como la
cantidad de la misma que cataliza la transformación de un mol de
sustrato por minuto, bajo condiciones definidas: pH, temperatura,
concentración de sustrato/s y cofactores, etc.

En base a lo que se acaba de explicar es posible expresar la cantidad

de una enzima en un fluido biológico en UI/cm 3 o en UI/ mg. de
proteína total. Esta última expresión denominada actividad
específica es la cantidad de moles de sustrato transformados por
minuto y por mg. de proteína, debiéndose indicar la temperatura, el Figura 1. Esquema de un reactor de membrana con lipasas inmovilizadas en
pH, etc.Es importante recordar que la actividad específica de una la membrana
enzima es una medida indirecta de la fracción de la proteína total en
una preparación que contienen a la enzima. La inmovilización de enzimas presenta una serie de ventajas clave que
justifican su utilización en la industria, pero esta técnica no esta exenta
también de algún que otro inconveniente. Entre las ventajas podemos
destacar que la inmovilización de enzimas permite la reutilización de las
6. Mencione las ventajas de usar biorreactores con enzimas mismas, a la vez que aumenta su estabilidad frente a un abanico más amplio
inmovilizadas. de valores de temperatura y pH. También posibilita su operación en continuo
así como el diseño de reactores enzimáticos de más fácil manejo y control.
Biorreactores con Enzimas Inmovilizadas Por otro lado, entre las desventajas podemos mencionar que el proceso de
inmovilización puede bloquear centros activos de la enzima, haciendo que la
CREADO EL MARZO 30, 2011 POR AMARIN actividad global disminuya. Y también la proteína puede ver modificada su
ARCHIVADO COMO BIOTECNOLOGÍA Y ECONOMÍA, PRODUCTOS conformación con respecto al estado nativo. Otra desventaja es el coste de la
BIOTECNOLÓGICOS | DEJA UN COMENTARIO inmovilización, pero este se ve compensado por la reutilización de la enzima
[1].
Las enzimas son macromoléculas de carácter proteico que poseen capacidad
catalítica. Esto quiere decir que hacen que las reacciones químicas se Existen distintos tipos de reactores que operan con enzimas inmovilizadas.
produzcan más rápidamente. Esta extraordinaria propiedad junto con otras, Entre otros, destacan los reactores que utilizan enzimas inmovilizadas en
como por ejemplo la especificidad de sustrato o la esteroselectividad, justifican partículas porosas con forma esférica. En el interior de dichos poros, las
el gran interés que han suscitado en el mundo de la química. Cada día se enzimas pueden quedar fijadas por métodos físicos y químicos, que aquí no
intentan encontrar más y más procesos que se puedan llevar a la práctica por se detallan. Los reactores que operan con este tipo de partículas lo pueden
vía enzimática. Pero el empleo de esta tecnología genera problemas hacer bien en lecho fijo [2], lecho fluidizado [3] o suspendidas en el seno del
derivados principalmente de su alto coste y de la imposibilidad de reutilizarlos líquido (tanque agitado o CSTR). También existen otro tipo de reactores que
cuando se trata de reacciones con enzimas solubles. Es por ello por lo que se utilizan enzimas incluidas en una membrana semipermeable [5]. Un esquema
han desarrollado diversos tipos de inmovilización para estas enzimas. de este tipo de reactor se muestra en la Figura 1

 Permite la utilización continua del biocatalizador, dado que éste queda

fácilmente retenido en el interior del reactor utilizado, mientras se
mantiene en flujo continuo de entrada y salida de líquido.
 Favorece la re-utilización del biocatalizador en el caso de reacciones en
discontinuo.
 Con la inmovilización se puede aumentar sensiblemente 10. ¿Para qué es útil obtener el perfil X vs
𝑲𝒆𝒕
?
𝑲
la concentración de biocatalizador, con respecto a un proceso en el que
el mismo se encuentre en suspensión.
 En cuanto a sistemas operando en continuo, éstos permiten un aumento
en las productividades de los correspondientes biorreactores, dado que
permiten operara a mayor concentración decatalizador, (mayor
conversión de substrato) y con caudales más altos.
 En el caso de enzimas inmovilizadas es frecuente observar un aumento
de su estabilidad y su resistencia a la desnaturalización y proteolisis.
 Permite reducir los efectos de contaminación accidentales del proceso en
las células; dado que la población de células contaminantes se
encuentran en suspensión y en concentración mucho menor que la
población de células inmovilizadas, ésta puede ser eliminada mucho más
fácilmente del reactor.
11. Porque es indispensable en el experimento determinar los valores
7. ¿Cómo se mide la actividad de una enzima? de los parámetros de una enzima soluble e inmovilizada en tu
experiencia de catálisis de la invertasa inmovilizada podrías intuir
Se mide mediante la siguiente ecuación: que sus valores fueran equivalentes o semejantes a las obtenidas
con invertasa soluble ¿por qué?
𝑉 × 𝑆0
𝑣=
𝐾 + 𝑆0 Cuando estudiamos la acción de una enzima en un organismo es importante
saber su Vmax porque es el parámetro cinético por excelencia. Tenemos que
saber su velocidad máxima para poder conocer su 1/2 Vmax, del cual
8. En el rango de linealidad de la invertasa ¿Cuál fue el objetivo de hallamos Km, que es la concentración de sustrato a la que una enzima trabaja
emplear un blanco? a la mitad de la Vmax. De esta manera, añadiendo los distintos sustratos de
la enzima sabremos, según su Km, con cual trabaja mejor, por cual tiene más
El blanco es una muestra cultivada de la célula sin las sustancias que se o menos afinidad etc. Asimismo, podremos estudiar inhibidores y activadores
quiere emplear, y el objetivo es que permita saber si el comportamiento de la enzima, que según sean Competitivos, no competitivos o Mixtos
del cultivo se debe a la sustancia que le añadiste o si simplemente se modificarán su Vmax pero no su Km, o modificarán su Km pero no su Vmax,
debe a otro factor distinto de la sustancia. o modificarán ambos parámetros.

No hay semejanza porque los parámetros cinéticos de la enzima soluble son

9. ¿Por qué la determinación de experimental de rango de linealidad de mayores que de la enzima inmovilizada, la inmovilización puede limitar el
la invertasa soluble se tuvo que ensayar a diferentes diluciones del acceso del sustrato al centro activo de la enzima, lo que afecta en la actividad.
extracto enzimático de levadura?

12. ¿Cómo se halla el Vmax y Kmax?

 Para determinar la velocidad máxima de una reacción enzimática, la
concentración de sustrato ([S]) se aumenta hasta alcanzar una
velocidad constante de formación de producto. Esa es lavelocidad
máxima (Vmax) de la enzima. En ese caso, los sitios activos de la
enzima están saturados con sustrato.
 Pues K es una cnstante que ayuda a definir la actividad enzimática,es decir
la eficiencia de una enzima.

K=K0.e ED/RT

Es K m como la concentración de sustrato necesaria para alcanzar la mitad

de la velocidad máxima de la reacción.


 Aunque es imposible medir exactamente la concentración de sustrato 14. ¿Cuál es el procedimiento para obtener el rango de linealidad y
que da Vmax, las enzimas pueden caracterizarse mediante la enzima inmovilizada?
concentración de sustrato a la cual la velocidad de reacción es la
mitad de la velocidad máxima. Esta concentración de sustrato se
conoce como constante de Michaelis-Menten (KM). Se obtendrá
una KM diferente según el sustrato específico sobre el que actúe la
enzima (como sucede en el caso de enzimas que actúan sobre
sustratos análogos) y según las condiciones de reacción en que se
realicen las mediciones.
 Se puede hallar ambas constantes (Vmax y Kmax) con el diagrama de
Lineweaver-Burk que se emplea como herramienta gráfica para
calcular los parámetros cinéticos de una enzima.

o
 Cuyo recíproco es:

 Donde V es la velocidad de reacción, Km es la constante de

Michaelis-Menten, Vmax es la velocidad máxima, y [S] es
la concentración de sustrato.
 La representación gráfica de Lineweaver-Burk permite identificar el
Km y Vmax; el punto de corte con el eje de ordenadas es el equivalente
a la inversa de Vmax, y el de abscisas es el valor de -1/Km.

13. ¿Cuál es el verdadero parámetro cinético que determina la eficiencia

de la enzima?