¿Introducción?

1. Objetivos
1.1. Objetivos Principales
Preparar diluciones de 10-2, 10-4 y 10-6 mililitros de una suspensión de levadura
mediante la técnica de diluciones sucesivas, para realizar un recuento de
cuantas unidades de levadura se presentan en cada prueba al final de la dilución.
Observar en el microscopio óptico la distribución de las células de levadura en
cada una de las diluciones.
Realizar el recuento de células de levadura observadas en cada una de las
diluciones.
1.2. Objetivos Secundarios
Realizar la planificación para la elaboración de las diluciones, definiendo una
cantidad inicial de levadura (soluto) y de agua (solvente) que se va a mezclar.

2. Marco Teórico
2.1. Solución
Si se va a abordar el tema de diluciones sucesivas, es imprescindible conocer
adecuadamente el significado de algunos términos muy importantes. Una
solución es una mezcla homogénea en la cual el soluto es aquel componente
que se encuentra en menor proporción frente al solvente, que es aquel elemento
que se encuentra en mayores cantidades. Las soluciones se pueden clasificar
según su capacidad de disolver un soluto en:
- Solución Saturada: A una temperatura específica, es toda solución en la
que existe la máxima cantidad de un soluto y que se disuelve en un
solvente en particular.

- Solución Insaturada: Solución en la que existe una menor cantidad de

soluto que la que es capaz de disolver.

- Solución Sobresaturada: Es aquella Solución que contiene más solutos

que los que pueden existir para que una solución sea clasificada como
saturada. Son soluciones que no poseen demasiada estabilidad. En el
transcurso de la vida de la solución una parte del soluto se separará de la
solución sobresaturada en forma de cristales
Si hablamos de soluciones, entonces abordar el término solubilidad es
importante. Es la cantidad máxima de soluto que puede disolverse en una
disolución, y que depende de condiciones como la temperatura, presión, y otras
substancias disueltas o en suspensión. Se define mediante:
 𝑇°𝐶
𝑊𝑚á𝑥 𝑠𝑡𝑜 (𝑔)
𝑆𝑠𝑡𝑜 =
100𝑔 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎
Donde “S” representa a la solubilidad y “Wmax” es la cantidad máxima de soluto
que se diluyen en cien gamos de agua, a una temperatura determinada.
Para expresar cuantitativamente la proporción entre un soluto y el disolvente en
una disolución se emplean distintas unidades: molaridad, normalidad, molalidad,
porcentaje en peso, porcentaje en volumen, fracción molar, partes por millón,
etc. También se puede expresar cualitativamente con la dilución, este consiste
en preparar una solución menos concentrada. Las diluciones se expresan
usualmente como una razón matemática, como 1:10, lo cual significa una unidad
de solución original diluida a un volumen final de 10, lo que es igual a un volumen
de solución original con nueve volúmenes de solvente (siendo el volumen final =
10.)

2.2. Dilución
Podemos tener una idea de dilución si se presenta la siguiente situación: Si nos
sirven una taza de té y este está muy "cargado", es decir, con una concentración
alta de té, lo que naturalmente hacemos es agregarle más agua hasta reducir la
intensidad del sabor o, lo que sería en otras palabras, bajarle (relativamente) la
concentración al té. Este procedimiento que realizamos de manera mecánica, es
un proceso de dilución. En este sentido, la dilución es el procedimiento que se
sigue para preparar una disolución menos concentrada a partir de una más
concentrada, y simplemente consiste en añadir más solvente. En una dilución la
cantidad del soluto no varía, lo que varía es el volumen del solvente: al añadirse
más solvente, la concentración del soluto disminuye, pues el volumen (y el peso)
de la solución aumenta.

2.3. Dilución sucesiva o en serie

En muchas situaciones, se necesita preparar disoluciones con concentraciones
extremadamente bajas de un soluto, hasta el punto que es difícil o imposible de
manera práctica medir la cantidad necesaria de producto sólido o el volumen de
solución madre. En estos casos es necesario preparar una solución de mayor
concentración, llamada solución de stock o solución madre, y hacer diluciones
sucesivas a partir de ésta hasta alcanzar la concentración deseada.
Es la reducción progresiva de la concentración de una sustancia en disolución.
El factor de dilución (el cual será definido más adelante) es constante en cada
paso, lo que resulta en una progresión geométrica de la concentración, en forma
logarítmica. Las diluciones en serie se utilizan para tener precisión al crear
disoluciones muy diluidas. Las diluciones sucesivas son ampliamente utilizadas
en bioquímica, química, farmacología, microbiología, física y agroindustria.
Se le denomina razón de dilución a la razón entre volumen de la solución original
y el volumen de solvente utilizado. De esta manera, una dilución 1:1 se interpreta
que por cada volumen de solución se añade un volumen de solvente.
El factor de dilución corresponde a la razón entre el volumen de la solución
preparada, es decir, aquella que está diluida, y el volumen de la solución original
o concentrada. Debido a que la cantidad de soluto permanece constante durante
la dilución, el factor de dilución también equivale a la razón entre la concentración
de la solución original y la concentración de la solución diluida.

3. Materiales, Equipos y Metodología

Para la práctica sobre diluciones sucesivas se utilizaron los siguientes
elementos:
3.1. Materiales
- Levadura.
- Agua corriente.
- Tubos de ensayo.
- Vaso de precipitación.
- Pipetas de 1 y 10 mililitros.
- Varilla de vidrio.
- Lámina Portaobjetos.
- Lámina Cubreobjetos.

3.2. Equipos
- Microscopio Óptico.

3.3. Metodología
Se prepararán tres diluciones de suspensión de levadura en agua corriente,
mediante la técnica de diluciones sucesivas, para observar cómo varía la
cantidad de unidades de levadura tras el recuento en una muestra de cada
dilución. El primer paso es definir la cantidad necesaria de soluto (levadura) y de
solvente para realizar la mezcla y definir la cantidad de diluciones sucesivas que
se prepararán hasta alcanzar la disolución deseada. Se deben tomar las
precauciones necesarias al momento de lavar los implementos de laboratorio.
3.3.1. Preparación y Dilución de la muestra
Se lava un vaso de precipitación y se llena con agua corriente. De este recipiente
se extraerá el solvente necesario. Pesar la cantidad calculada de soluto y
colocarla en un tubo de ensayo. Con una pipeta de 10 ml. se toma la cantidad
necesaria de solvente y se vierte en el tubo de ensayo. Homogenizar la mezcla
con una varilla de vidrio. Extraer la cantidad necesaria de dilución con ayuda de
una pipeta y verterla en un tubo de ensayo adicional.

3.3.2. Diluciones Sucesivas

Del vaso de precipitación extraer agua corriente y añadirla en el segundo tubo
que contiene la dilución. Homogenizar adecuadamente. En este punto, la
solución de levadura ya estará siendo diluida según se haya calculado
previamente. Realizar este procedimiento las veces que sea necesario hasta
alcanzar el grado de dilución deseado para cada prueba.
[HACER IMAGEN DE DILUCIONES SUCESIVAS]

3.3.3. Observación de la dilución en el microscopio

4. Referencias Bibliográficas
[COLOCAR BIBLOGRAFÍA DE MARCO TEÓRICO Y METODOLOGÍA]