Prueba de Flujo Lateral CrAg

Para la detección del antígeno criptocócico – REF CR2003

PROCEDIMIENTO BÁSICO CUALITATIVO

1.Agregar 1 gota de diluyente de muestra LF al tubo

2.Agregar 40 µL de muestra de paciente al tubo
3.Insertar la tira como se observa en la figura.
4.Esperar durante 10 minutos.
5.Prueba / Control / Positivo / Negativo

Uso pretendido La Criptococosis es causada por las dos Si el especies

CrAg estádel presente
complejo
en la muestra, e
Cryptococcus Gatti) (4). Los individuos con complejo
deficiencias
antígeno-anticuerpo
en la inmunidad marcado
celular sonco
La Prueba de Flujo Lateral CrAg es un sistema
infecciónde(6).
prueba
La Criptococosis
inmunocromatográfica
es una de hasta
las
para
infecciones
que
la detección
interactúa
máscualitativa
comunes
con la Línea
oen los
de pacien
Prueb
semicuantitativa de los antígenos polisacáridos
La detección del capsulares
antígeno criptocócico
del complejo (CrAg)
El de
complejo
en
especies
sueroantígeno-anticuerpo
y en LCR ha sido marcado
ampliam
(Cryptococcus neoformans y Cryptococcussensibilidad
Gatti y especificidad (1-3). forme una Línea de Prueba visible.
La Prueba de Flujo Lateral CrAg es un ensayo de laboratorio con carácterCon prescriptivo
un adecuado que flujo
favorece
y reactividad
el de lo
diagnóstico de la Criptococosis. Principios biológicos negativa, hará que el anticuerpo control co
Los anticuerpos inmovilizados en la Línea
Explicación La Prueba de Flujo Lateral CrAg es un ensayoformarán inmunocromatográfico
una Línea de Control sandwich.
visible. La
L
muestra se agregan en un reservorio apropiado,
Control). como
Los resultados
un tubo dede ensayo,
pruebasen nega
dond
flujo lateral. La prueba utiliza la acción capilar
control,delalaprueba
muestra,
no es
para
válida.
capturar anticue
conjugados con oro coloidal, y anticuerpos control conjugados con oro depositados

Materiales provistos Toda modificación de los procedimientos Las aquí muestras

descriptos,pueden
queda bajoconservarse
responsabilida
por
Al manejar muestras de pacientes, deben descongeladas
tomarse medidas
y vueltas
adecuadas
a congelar
parareitera
prev
A. Diluyente de muestra LF (2,5 ml, REFinfecciosos
GLF025): potencialmente
Solución salina
presentes
tamponada
en Las
lacon
muestra.
muestras
glicina, contiene
en tránsitoagentes
deben manteners
bloqueantes y un conservante. Al manipular los reactivos en este kit, utilizar guantes siempre, dado que algunos re
B. Tiras de prueba CrAg LF (50 tiras en0,095%
un recipiente
(w/w) desecante,
de azida deREF
sodio.
LFCR50).
La azida Procedimiento
de sodio nunca debe desecharse por el
C. Control positivo CrAg (1 ml, REF CB1020):
químico Solución
puede reaccionar
salina tamponada
con el plomo
con glicina
o el cobre
salpicada
de lasconcañerías
antígeno
y formar azid
criptocócico. explosivas. Los excesos de los reactivos Procedimiento
deben desecharse cualitativo
en un recipiente de resi
D. Inserto del envase.
Estabilidad y conservación 1.Agregar 1 gota de diluyente de muestra
Materiales no provistos de microtitulación, tubo de ensayo, etc.).
Todos los reactivos incluidos en este kit deben
2.Agregar
conservarse
40 µL deamuestra
temperatura
al recipiente.
ambiente
A. Pipetas (40 µL y 80 vencimiento que figura en las etiquetas de 3.Sumergir
los mismos. el extremo blanco de una Tira d
µL). 4.Esperar durante 10 minutos.
B. Timer Recolección de muestras y 5.Leer y registrar los resultados inmediatam
C. Tubos microcentrífugos descartables,
preparación
tubos de ensayo, o una placa de microtitulación.

Precauciones Para resultados óptimos, debe utilizarse suero no hemolizado estéril o LCR
procesamiento de las muestras, pueden conservarse a 2º-8º C hasta por 72 horas.
Es necesaria una estandarización específica para mantener la alta calidad de materiales y reactivos.
1
 (0/10) Si bien no es frecuente, las concentracio
Rubeola 5 0 % (0/5) pueden dar como resultado líneas de prue
Procedimiento de titulación Micoplasmosis 10 0 % negativo. Si se sospecha, por tanto, que
semicuantitativo (0/10) negativos, debe utilizarse el procedimiento
Toxoplasmosis 7 0 % (0/7) negativos.
1.Colocar 10 tubos microcentrífugos CMV o tubos de ensayo en 10
una gradilla
0 apropiada
% y etiquetarlos del 1 al 10 (1:5 a
1:2560). Quizás se requieran diluciones adicionales si la muestra es positiva en 1:2560.
(0/10) Valores esperados y
2.Agregar 4 gotas de diluyente de muestra LF (REF GLF025)
Blastomicosis 10 al tubo0Nº1. % características de rendimiento
3.Agregar 2 gotas de diluyente de muestra LF a cada uno de los tubos etiquetado específicas
(0/10) 2-10.
4.Agregar 40 µL de muestra al tubo Nº 1 y mezclar bien. 10
Coccidiomicosis 0 %
5.Transferir 80 µL de muestra del tubo Nº 1 al tubo Nº 2 y mezclar bien. Continuar
(0/10) La Prueba
con este
deprocedimiento
Flujo Lateral de
CrAg se eval
dilución hasta llegar al tubo Nº Histoplasmosis
10. 10 0 % fueron enviadas a un laboratorio en Esta
6. Sumergir el extremo blanco de una Tira de Prueba CrAg LF en la(0/10) muestra en cada
muestras
uno defueron
los 10 analizadas
tubos. usando la P
7.Esperar durante 10 minutos. Candidiasis 10 0 % criptocócico en látex Immy (REF CR100
8.Leer y registrar los resultados inmediatamente (ver LECTURA DE(0/10) LA PRUEBA).criptocócico .
Los resultados de estas comparacion
Aspergillus GM 10 10 %
Lectura de la prueba + (1/10)
Factor 10 0 %
Leer las reacciones inmediatamente. La presencia de dos líneas (Prueba y Control), independientemente
Comparación del métodode la
reumatoide (0/10)
intensidad de la línea de prueba, indica un resultado positivo. por aglutinación con
látex
Para el procedimiento de titulación semicuantitativo, el título del paciente debe informarse como la dilución más
alta que arroja un resultado positivo. Suero y LCR Immy LA
Pos Neg
Una sola Línea de Control indica resultado negativo. Si la línea de controlEnsayo no aparece, los resultados
Pos 121son2
inválidos y la prueba debe repetirse. CrAg LFA Neg 0 116

Suero y LCR Calculado 95%

Control de calidad CI
%Concordancia 100% 97% -
Un control positivo (Control Positivo CrAg REF CBO020) puede evaluarse agregando positiva 1 gota de diluyente de
(121/121) 100%
muestra LF (REF GLF025) seguido de 1 gota de Control Positivo CrAg en un%Concordancia tubo. Un control negativo
98% puede94% -
evaluarse agregando 2 gotas de diluyente de muestra LF (REF GLF025) en unnegativa tubo. Insertar una Tira de Prueba
(116/118) 99.5%
CrAg LF en los tubos y leerla luego de 10 Por otra parte,
minutos. Dos se evaluó
líneas la reactividad
(Prueba y Control) cruzada
indican analizando
un resultadolospositivo,
filtradosy de cultivo d
%Concordancia 99.2% 97% -
una línea (Control), un resultado negativo.rango de concentraciones utilizando latotal Prueba de Flujo Lateral CrAg. En
(237/239)
concentra
99.8%
antígenos de Paracoccidioides brasiliensis
Interpretación de los Comparación del método con
resultados Antígenos de los siguientes organismos fueron probados y no mostraron reactividad
el ensayo EIA Meridian
Aspergillus terreus
Para que la prueba sea válida, la Línea de ControlAspergillus
debe estarfumigatus
presente. La presencia de dos bandas (una banda
Suero y LCR EIA Mridian
Aspergillus nige Aspergillus
de control y una banda en la zona de la prueba) indica un resultado positivo. flavus
Pos Neg
Ensayo Pos
Esta prueba no se evaluó para reactividad cruzada contra los siguientes 116 7 organismos
Limitaciones del
CrAg LFA Neg 0 116
procedimiento
Candida dubliniensis
Pneumocystis
El análisis de las muestras de suero hemolizadas puedecarinii Suero
dar resultados negativos & debido
falsos LCR al fuerte
Calculado
color de95%
Candida
fondo de la tira. Esta prueba no fue evaluada potencial interferencia relativa al pretratamiento de la muestraCI
paratropicales
con 2-mercaptoetanol. Trichosporon beigelii %Concordancia 100% 97%
(116/116) -100
Candida parapsidosis positiva %
Zygomycetes %Concordancia 94% 89% -
Análisis de reactividad Candida krusei negativa (116/123) 97%
cruzada Anticuerpo antinuclear positivo %Concordancia 97% 94%
Candida glabrata total (232/239) -
La Prueba de Flujo Lateral CrAg fue Virus Hepatitis
evaluada paraAreactividad cruzada contra un panel de muestras de99%
pacientes con una variedad de patologíasCladosporium
diferentes. Lostrichoides
resultados de esta evaluación pueden observarse en la
tabla a continuación. Virus Hepatitis C Comparación del método
Neisseria meningitidis semicuantitativo
Patología Cantidad % Staphylococcus aureus
de Positivas Salmonella typhi Por otra parte, 79 de estas muestras (17
muestras Streptococcus pneumoniae titulación semicuantitativo tanto en la Prueb
Peniciliosis 5 0 % (0/5) Mycobacterium tuberculosis criptocócico en látex Immy
Esporotricosis 6 0 % (0/6) (REF CR1003). El análisis de regresión line
HAMA 5 0 % (0/5) Efecto gancho en altas dosis
Sífilis 10 0 % Límite de detección

2
 % % % LCR 1 % Pos % Pos % Pos
Pos Pos Pos %
Para establecer el límite de detección,Negativo
se llevó a0%cabo 0% un experimento
0% 0% C5-C95 diluyendo Pos antígeno criptocócico
purificado en diluyente de muestra LF (REF GLF025), 0/30 y analizando
0/30 0/15 24 réplicas
0/75 Negati por concentración
0% 0% usando
0% la0%
Prueba de Flujo Lateral CrAg. Los resultados
Alto de esta
7% prueba
0% se0%demuestran
3% envo la siguiente
0/30tabla:
0/30 0/15 0/75
Negativo 2/30 0/30 0/15 2/75 Alto 10% 0% 0% 4%
Bajo 100% 100% 100% 100% Negati 3/30 0/30 0/15 3/75
Concentración
Positivo 30/30 #30/30 15/15 % Positivo
75/75 vo
Intervalo 1.0 -1.5ng/ml Moderado 100% Positivo
100% 100% 100% Bajo 100% 100% 100% 100%
0,50 ng/mL30/30 030/30 15/15
Positivo 0% (0/24)
75/75 positivo 30/30 30/30 15/15 75/75
C5 – C95 0,75 ng/mL 0 0% (0/24) Moderad 100% 100% 100% 100%
1,00 ng/mL 4 17% (4/24) o 30/30) (30/30 (15/15 (75/75)
1,25 ng/mL 12 50% positivo ) )
(12/24)
Reproducibilidad y precisión 1,50 ng/mL 21 88%
(21/24)
La Prueba de Flujo Lateral CrAg se evaluó para reproducibilidad100%
1,75 ng/mL 24 y precisión salpicando suero y LCR simulado
(24/24)
con antígeno criptocócico para producir2,00un ng/mL
panel consistente
24 en una muestra negativa alta (C
100%
positiva baja y una muestra positiva moderada. Este panel fue evaluado (24/24) dos veces por día en tres sitios con un
total de 5 operadores durante un período 2,50de 5 días a 24
ng/mL fin de determinar
100% la reproducibilidad y precisión inter- e
intra-ensayo. Los resultados de este estudio figuran en la siguiente (24/24)
tabla:
3,00 ng/mL 24 100%
(24/24)
Panel de Sitio Sitio Sitio General
suero 1 2 3 % Pos
Panel de Sitio Sitio 2 Sitio 3 General

Referencias

1. Doering, T. L. 2009. Annu. Rev. Microbial. 63:223-247.

2. Goodman, J. S., L. Kaufman, and M. G. Koening. 1971.. N. Engl. J. Med. 285:434-436.
3. Kozel, T. R. 1995. Trends Microbial. 3:295-299.
4. Lin, X. and J. Heitman. 2006. T. Annu. Rev. Microbial. 60:69-105.
5. Park, B. J., K. A. Wannemuehler, B. J. Marston, N. Govender, P. G. Pappas, and T. M. Chiller. 2009.. AIDS
23:525-530.
6. Zhou, Q. and W. J. Murphy. 2006. Immunol. Res. 35:191-208.

Immuno-Mycologies, Inc. CE
2700 Technology Place
Norman OK 73071 EC REP
EE.UU.
(405) 360-4669/(800) MDSS
654-3639 Schiffgraben 41
Fax: (405) 364-1058 30175 Hannover,
E-mail: info@immy.com Alemania
Web: www.immy.com

Conservar a Número de lote

20º-25º C

Fabricado por Código

Fecha de Para uso diagnóstico

vencimiento in vitro

De Conformidad con Contenido suficiente

las normativas para < n > ensayos
europeas

3
Proteger de
la humedad