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FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACION
UV”
Tacna – Perú
2016
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Práctica Nº1:
1.- INTRODUCCIÓN:
La radiación de absorción ultravioleta o visibles proviene de la excitación de los electrones
enlazantes y como consecuencia , las longitudes de onda de los picos de absorción pueden
correlacionarse con los tipos de enlace que existen en las especies en estudio .la
grupos funcionales de una molécula .Sin embargo , son más importantes las aplicaciones de
así los cambios en el espectro con cambios de entorno pueden interpretarse en términos de
procesos tales como fusión de ácidos nucleicos , interacciones proteínas –ligando (ensayo
biopolímero es una huella dactilar y como tal puede usarse en ocasiones para
sistemas biológicos intactos , es decir in vivo , tales como tejidos debido a que esta radiación
es fuertemente dispersada .
2.- OBJETIVOS:
Determinar la cantidad de proteínas en una muestra de gelatina comercial, aplicando el
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3.- FUNDAMENTO TEORICO:
ESPECTROSCOPIA UV
electrónicas.
Esta técnica es complementaria de la espectrometría de fluorescencia, que trata con
APLICACIONES
La espectrometría UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinación cuantitativa de
luz visible) debido a que los electrones los átomos de metal se pueden excitar desde un
estado electrónico a otro. El color de las soluciones de iones metálicos se ve muy afectado
por la presencia de otras especies, como algunos aniones o ligandos. Por ejemplo, el color
de una solución diluida de sulfato de cobre es muy azul; agregando amoníaco se intensifica
Compuestos orgánicos
Los compuestos orgánicos, especialmente aquellos con un alto grado de conjugación,
también absorben luz en las regiones del espectro electromagnético visible o ultravioleta. Los
disolventes para estas determinaciones son a menudo el agua para los compuestos solubles
en agua, o el etanol para compuestos orgánicos solubles. Los disolventes orgánicos pueden
tener una significativa absorción de UV, por lo que no todos los disolventes son adecuados
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para su uso en espectrometría UV. El etanol absorbe muy débilmente en la mayoría de
usarse para determinar la concentración de una solución. Es necesario saber con qué
rapidez cambia la absorbancia con la concentración. Esto puede ser obtenido a partir de
Alta Resolución (CLAR). La presencia de un analito da una respuesta que puede ser
analito debe compararse con la respuesta a un estándar, lo que es muy similar al uso de
LEY DE BEERLAMBERT
La espectrometría UV-Vis se utiliza con mayor frecuencia en forma cuantitativa para determinar
Donde:
A es la absorbancia medida
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I0: es la intensidad de la luz incidente a una determinada longitud de onda
I: es la intensidad de transmisión
ESPECTROFOTÓMETRO ULTRAVIOLETAVISIBLE
El instrumento utilizado en la espectrometría ultravioleta-visible se llama espectrofotómetro UV-
Vis. Mide la intensidad de luz que pasa a través de una muestra (I), y la compara con la
basa en la transmisión:
A = - log (%T)
Las partes básicas de un espectrofotómetro son una fuente de luz (a menudo una bombilla
incandescente para las longitudes de onda visibles, o una lámpara de arco de deuterio en el
ultravioleta), un soporte para la muestra, una rejilla de difracción o monocromador para separar
las diferentes longitudes de onda de la luz, y un detector. El detector suele ser un fotodiodo o
un CCD. Los fotodiodos se usan con monochomadores, que filtran la luz de modo que una sola
longitud de onda alcanza el detector. Las rejillas de difracción se utilizan con CCDs, que
Un espectrofotómetro puede ser único o de doble haz. En un instrumento de un solo haz (como
el Spectronic 20), toda la luz pasa a través de la célula muestra. La Io debe medirse retirando la
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muestra. Este fue el primer diseño, y todavía está en uso en la enseñanza y laboratorios
industriales.
En un instrumento de doble haz, la luz se divide en dos haces antes de llegar a la muestra. Un
haz se utiliza como referencia, y el otro haz de luz pasa a través de la muestra. Algunos
muestra se miden al mismo tiempo. En otros instrumentos, los dos haces pasan a través de un
bloqueador que impide el paso de un haz. El detector alterna entre la medida del haz de
Las muestras para espectrofotometría UV-Vis suelen ser líquidas, aunque la absorbancia de los
gases e incluso de los sólidos también puede medirse. Las muestras suelen ser colocadas en
una célula transparente, conocida como cubeta. Las cubetas suelen ser rectangulares, con una
anchura interior de 1 cm. Esta anchura se convierte en la longitud de ruta, L, en la Ley de Beer-
Lambert. También se pueden usar tubos de ensayo como cubetas en algunos instrumentos.
Las mejores cubetas están hechas con cuarzo de alta calidad, aunque son comunes las de
vidrio o plástico. El cristal y la mayoría de los plásticos absorben en el UV, lo que limita su
ESPECTRO ULTRAVIOLETAVISIBLE
Un espectro ultravioleta-visible es esencialmente un gráfico de absorbancia de luz frente a una
longitud de onda en el rango del ultravioleta o la luz visible. Este espectro puede ser producido
directamente con los espectrofotómetros más sofisticados, o bien pueden registrarse los datos
de una sola longitud de onda con los instrumentos más simples. La longitud de onda se
representa con el símbolo λ. Del mismo modo, para una determinada sustancia, puede hacerse
un gráfico estándar del coeficiente de extinción (ε) frente a la longitud de onda (λ). Este gráfico
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estándar sería efectivamente "la concentración corregida" y, por tanto, independiente de la
utilizarse para predecir λ max, la longitud de onda de la absorción UV-Vis, para compuestos
Las longitudes de onda de los picos de absorción pueden correlacionarse con los tipos de
enlace en una determinada molécula, y son valiosos para determinar los grupos funcionales
dentro de la molécula. La absorción UV-Vis no es, sin embargo, una prueba específica para
influir en los espectros de absorción de los ompuestos, así como las variaciones en la anchura
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Pipetas
Matraces aforados de 10ml
Vaso de precipitación
5.- PROCEDIMIENTO:
a) Preparación de la muestra:
CURVA PADRÓN:
Prepara una solución padrón de SAB 1300ppm (1300mg/L)
Realizar la curva padrón conforme los datos.
6.- RESULTADOS:
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PREPARACIÓN DE LA MUESTRA: gelatina comercial (royal)
Se pesó 0.5012g, se disuelve en 100ml con H 2O.
Tomamos la muestra y medimos la absorbancia a 280 nm: 0.7668
Determinamos la concentración en cada tubo tomando como referencia la concentración del
SAB (1300mg/1000ml)
Entonces: 1000ml 1300mg
0.2ml X
De la misma
manera se
0.2 x 1300
X= continuara para
1000
los demás tubos.
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0.6
absorbancia
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 2 4 6 8 10 12 14
concentracion
Co
10
11
Curva de calibracion
Linear ()
concentracion
Curva de calibracion
Linear ()
concentracion
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Curva de calibracion
Linear ()
concentracion
Curva de calibracion
Linear ()
concentracion
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R2 = 0.97
Absorbancia de la muestra: 0.7668
Y = A +Bx
0.7668= 0.1148 + 0.0499x
x = 13.066mg
Entonces:
13.066mg 0.5021gr
X mg 100 gr
x = 2602.229 mg
X= 2.60g
X= aprox 2% de azucar
ENTONCES: existe un 2% de proteína en cada 100 g de
gelatina comercial
DISCUSIÓN de RESULTADOS:
Se obtuvo un porcentaje de proteína muy bajo cerca la 2% a diferencia de las fuentes
Dependiendo del origen de la proteína sea animal o vegetal el porcentaje varia por ejemplo:
La gelatina de origen vegetal se obtiene directamente de las plantas, por lo que su contenido
en proteínas es menor que la que proviene de los animales. Es un tipo de gelatina más
7.- CONCLUSION:
8.- BIBLIOGRAFIA:
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