INFORME DE PRÁÁ CTICÁS VIROLOGIÁ

AISLAMIENTO DE BACTERIÓFAGOS

I. INTRODUCCION:

Un bacteriófago o fago es, ante todo, un parásito bacteriano. Un fago

puede persistir por si mismo pero no es capaz de crecer ni de reproducirse
excepto dentro de una célula bacteriana.

La mayoría de los fagos poseen genes que codifican para una variedad
de proteínas, sin embargo todos los fagos conocidos usan de la célula huésped
los ribosomas, factores para síntesis de proteínas aminoácidos y sistemas
generadores de energía. El hecho de que utilice el sistema generador de
energía del huésped indica que un fago sólo puede crecer en una bacteria
metabólicamente activa.

Estos problemas se resuelven de una variedad de formas, de acuerdo a

las diferentes especies de fagos. Todos estas especies tienen ciertas
características en común pero también diferencias en detalle muestran los
varios caminos en los cuales las funciones biológicas específicas pueden
llevarse a cabo.

Una observación importante es el grado en el cual una partícula fágica

individual usa una parte de la maquinaria de la célula. Algunas especies fágicas
tienen menos de 10 genes y usan casi todas las funciones celulares, mientras
que otras tienen de 30 a 50 genes y son menos dependientes de la célula
huésped.

El ciclo de vida de un fago puede ser lítico o lisogénico: Un fago en el

ciclo lítico convierte una célula infectada en una fábrica de fagos y se producen
muchos fagos. Un fago capaz de producir solamente el ciclo lítico se denomina
virulento. En el ciclo lisogénico no se producen partículas fágicas, el DNA
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fágico normalmente llega a formar parte del cromosoma bacteriano (profágo). A

este tipo de fago se le llama temperado.

La primera purificación de un virus fue lograda por Max Schlesinger en

1933 utilizando una técnica conocida como centrifugación diferencial, la cual se
basa en el hecho de que en un tubo de ensayo sometido a la acción de una
fuerza centrífuga las partículas más pesadas sedimentan a menor velocidad
que las partículas ligeras. De esta manera es posible separar los fagos de los
restos de las células bacterianas.

II. OBJETIVO

 Aislar bacteriófagos de una cepa de P. auriginosa

 Aprender la técnica de aislamiento de bacteriófagos

III. MATERIAL:

a. Material biológico

 Cepa bacteriana (E. coli, Pseudomona auriginosa) para la

cual nuestro grupo utilizo Pseudomanas auriginosa.

 Agua residual o servida (en nuestro caso se usó agua servida

del Dren 4000 de Santa Rosa).

b. Material de laboratorio

 Medio de cultivo : CDC ( caldo doble concentrado)

 Caldo Triptosa

 Agar Triptosa

 papel filtro

 Filtro bacteriológico (membrana)

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 Viales, placas, pipetas, tubos, tubos para centrifuga, Asas

bacteriológicas.

 Mechero

 Hisopo

 Centrífuga

 Bomba al vacio
IV. PROCEDIMIENTO:

1. En un frasco o matraz estéril colocamos 50 ml de caldo doble

concentrado (CDC).

2. Luego sombramos la cepa de P. auriginosa, y se dejamos 4 horas

en la estufa a 35-37ºC.

3. Agregar 50 ml de agua servidas (previamente pasadas por un

papel filtro).

4. Incubar durante 18 horas a 37ºC.

5. Centrifugamos a 4.500 durante 20 minutos.

6. El sobrenadante lo filtramos a través de un filtro bacteriológico (el

resultado se recibe en un frasco estéril).

7. Para evitar la contaminación se repartió en varios viales estériles

conteniendo cada uno 1ml del filtrado.

 Para la comprobación de fagos

1. En una placa con Agar Triptosa sembramos con la ayuda de un

hisopo estéril, la cepa de Pseudomonas auriginosa previamente
Se siembra la cepa
sembrado unas 4 horas antes.

2. Después se coloco en la placa, 2 gotas del filtrado sin hacer

estriado alguno.Incubar por 8 horas a 35-370C.

3. Dejar incubar 18 a 24 horas a 35-37ºC.

Medio CDC

50 ml de agua servidas (previamente pasadas por un papel filtro)

Incubar por 18 horas a 35-370C.

V. RESULTADOS:

 Se puede observar la calva de gran amplitud (la cual abarca casi toda la
placa) con lo que se demuestra la presencia del bacteriófago, lisando a
las bacterias En crecimiento.
 VI. CONCLUSIÓN:

 Se logro cumplir el objetivo de la práctica, ya que según el resultado

obtenido, se muestra claramente que se logro aislar bacteriófago de P.
auriginosa, ya que en la placa se pueden observar claramente las calvas
(zonas claras por la lisis de la célula bacteriana), prueba de la presencia
de los bacteriofagos.

VII. RECOMENDACIONES

 Para tener éxito en este tipo de prácticas se recomienda trabajar con

mucha asepsia, orden y exactitud. Evitar al máximo los contaminantes
durante todo el trabajo, especialmente en el filtrado.

VIII. REFERENCIAS

 ACTON, J. (1967). Virología. Editorial Interamericana. México D.F.

 MADIGAN M. y J. PARKER (1997) Brock biología de los
microorganismos. 10ma Edición. Editorial Mc Graw Hill. Mexico D.F.
 http://www.scribd.com/doc/6850630/Virologia-Practica-02-Aislamiento-
de-bacteriofagos