I.

INTRODUCCIÓN
El ácido ascórbico, comúnmente llamado vitamina c, presenta un aspecto de
cristales blancos, con sabor acido, sensible a la luz y a ciertos metales
pesados, es un tipo de vitamina hidrosoluble y esencial, es sintetizado
naturalmente por las plantas superiores y algunos animales, con acepción del
seres humanos, y también puede ser sintetizado químicamente a partir de
glucosa, mediante una serie de reacciones catalizadas por enzimas, es
considerado uno de los más potentes agentes antioxidantes del organismo; en
humanos se encuentra concentrado en cierto órganos como: ojos, hígado,
vaso, cerebro, glándulas suprarrenales y tiroideas. El ácido ascórbico o
vitamina C no es sintetizable por el organismo, por lo que se debe ingerir desde
los alimentos que lo proporcionan como las frutas cítricas, los vegetales verdes,
las papas y los chiles. Es un nutriente esencial, en particular para los
mamíferos. La presencia de esta vitamina es requerida para un cierto número
de reacciones metabólicas en todos los animales y plantas y es creada
internamente por casi todos los organismos, siendo los humanos una notable
excepción. Su deficiencia causa escorbuto en humanos, de ahí el nombre de
ascórbico que se le da al ácido, y es ampliamente usada como aditivo
alimentario para prevenir este último. El ácido ascórbico tiene características
reductoras por sus dos grupos donadores de protones, es termohábil y se en el
aire con gran facilidad, interviene en muchas reacciones metabólicas
importantes, como por ejemplo, actúa como cofactor en las reacciones de
hidroxilación en la síntesis del colágeno. Este es esencial para la formación
normal de huesos y dientes y para reforzar paredes capilares. Inhibe
inflamación de las encías, anemia, deficiencia en la cicatrización de heridas y
susceptibilidad a las infecciones, también es importante en el metabolismo de
carbohidratos y en controlar procesos infecciosos, la mayoría de las reacciones
metabólicas el ácido ascórbico se deben u fuerte potencial reductor, su
actividad antioxidante deriva del desplazamiento de ácido l-ascórbico a su
forma oxidada L-dehidroascorbico, esto también habilita la molécula para
combatir radicales oxidativos y los radicales acuosos. Para la determinación de
esta vitamina se utiliza un método conocido como el método de Mohr, el cual
consiste en un proceso de doble precipitación en donde se presenta la
formación de un primer sólido, que es la especie a cuantificar, y alcanzado el
punto estequiométrico se forma otro precipitado que corresponde a la especie
que señala el punto final de la valoración, este en un método
espectrofotométrico, es decir que se basa en la absorción de radiación
ultravioleta y visible por el analito, como consecuencia de lo cual se origina un
estado activado que posteriormente elimina su exceso de energía en forma de
calor.
 II. OBJETIVOS

 Determinar el efecto de la longitud de onda dominante en el análisis

cuantitativo por espectrofotometría.

III. FUNDAMENTO TEORICO

Ácido ascórbico
Son muchas las características y propiedades de la Vitamina C debida,
principalmente, a que es muy termo sensible y lábil a la acción del oxígeno
y a las radiaciones ultravioletas. La vitamina C corresponde al grupo de las
vitaminas hidrosolubles, y como la gran mayoría de ellas no se almacena en
el cuerpo por un largo período de tiempo. El ácido ascórbico tiene la
estructura de una lactona con una configuración enodiol; su acidez se
deriva del carácter enólico de los grupos hidroxilos. La característica más
importante del ácido ascórbico es su oxidación reversible para formar ácido
deshidroascórbico .En presencia de oxígeno, el ácido ascórbico se degrada
fundamentalmente, a ácido deshidroascórbico. Este último compuesto
posee actividad completa de vitamina C.

Figura 1. Ácido ascórbico y deshidroascórbico.

Las reacciones de oxidación de la vitamina C se aceleran por el calor, los
álcalis, la presencia de algunos metales como el cobre y el hierro y la acción de
la luz, etc. De todas las vitaminas, la vitamina C es la más lábil e inestable y
puede ser degradada a través de muchas vías: las de oxidación y degradación
térmica son las más importantes. Debido a la alta sensibilidad de la vitamina C
al calor, algunos investigadores propusieron usar el contenido residual de esta
vitamina como índice de retención de nutrientes; se considera, que si el ácido
ascórbico resiste los tratamientos térmicos durante el procesamiento de
alimentos todos los demás nutrimentos serán poco afectados (Badui, 1999). Es
un índice de apreciación de las pérdidas de otras vitaminas y sirve como
criterio valido de la conservación de otros componentes organolépticos
nutritivos, tales como pigmentos naturales y sustancias aromáticas (Badui,
1999). Tanto la vitamina C propiamente dicha (ácido 1-ascórbico), como la
forma parcialmente oxidada ofrecen propiedades vitamínicas; los métodos
rutinarios de titulación con yodo o con 2,6-diclorofenolindofenol sólo determinan
la forma reducida; sin embargo, rinden buenos resultados en el análisis de
frutas e incluso en el extracto de vegetales no sometidos a tratamientos
térmicos, porque toda la vitamina C presente en ellos se encuentran en la
forma reducida (Hart y Fisher, 1991).
Cada determinación de análisis cuantitativo por espectrofotometría debe
realizarse en una longitud de onda específica a fin de que los datos a
obtenerse seas precisos y exactos.
La determinación del contenido de ácido ascórbico en frutas y vegetales puede
realizarse por diversos métodos. Siendo uno de ellos el espectrofotométrico
propuesto por el departamento de agricultura de Canadá. Se basa en la
reducción del colorante 2-6 diclorofenol por efecto de la solución estándar de
colorante, esta capacidad es determinada espectrofotométricamente.
El valor del reactivo 2-6 DFIF se ve limitado por la presencia de sustancias
reductoras como sales ferrosas, sulfitos, compuestos sulfhídricos entre otros.
Estas sustancias podrías estar presentes, en ciertos productos que hayan
sufrido un prolongado tratamiento térmico o almacenamiento.
METODO VOLUMÉTRICO DEL 2,6-DICLOROFENOLINDOFENOL
El ácido ascórbico (vitamina C) puede ser determinado químicamente en el
laboratorio basándose en su fuerte capacidad reductora. La cuantificación de
vitamina C en el alimento es dada por la cantidad de ácido L- dehidroascórbico.
El método volumétrico recomendado por la AOAC es la titulación con el
indicador redox 2,6-diclorofenolindofenol. El análisis implica la oxidación del
ácido ascórbico con un colorante redox, como el 2,6-diclorofenolindofenol (azul
en medio básico y rojo en medio ácido), el cual se reduce en presencia de un
medio ácido, a un compuesto incoloro.
IV. MATERIALES Y METODOS

 Espectrofotómetro
 Fiolas
 Frutas: naranja, piña y limón
 Pipetas
 Acido oxálico
 2-6diclorofenol indofenol
V. PROCEDIMIENTO
1. PREPARACION DE REACTIVOS
2. CONSTRUCCION DE CURVA ESTANDAR

Concentraciones de: 2, 4, 6, 8, 10ml de solución madre.

Con cada concentración se

tomara 4 tubos y se agregara lo
siguiente:

TUBO 1: H2O
TUBO 2: 1ML DE ACIDO OXALICO + 9ML 2-6
DICLOROFENOL
TUBO 3: 1ML DE SOLUCION ESTANDAR +
9ML DE H2O
TUBO 4: 1ML DE SOLUCION ESTANDAR +
9ML 2-6 DICLOROFENOL
 AGREGAR 9ML DE 2-6 DICLOROFENOL AL TUBO
2 Y TUBO 4 Y ESPERAR 15 SEGUNDOS PARA
LEER LA ABSORBANCIA.

AJUSTAR A CERO LA ABSORBANCIA ANTES DE LEER LA

ABSORBANCIA DE CADA CONCENTRACION.

LEER LAS ABSORVANCIAS Y REPETIR EL PASO PARA

CADA COCNETRACCION.
3. PREPARACION DE LA MUESTRA

DILUIR 5ML DE CADA

MUESTRA + 35ML DE
ACIDO OXALICO

CENTRIGUGAR POR 10
MINUTOS Y LUEGO
FILTRAR

TUBO 1: H2O
TUBO 2: 1ML DE ACIDO OXALICO + 9ML 2-6
DICLOROFENOL
TUBO 3: 1ML DE MUESTRA + 9ML DE H2O
TUBO 4: 1ML DE MUESTRA + 9ML 2-6
DICLOROFENOL

LEER ABSORVANCIAS Y
REPETIR CADA PASO
PARA CADA MUESTRA
 VI. RESULTADOS

1. CURVA ESTANDAR
CONCENTRACION DE 2ML

TUBO 1 0
L1
TUBO 2 0.0638

TUBO 3 0

L2 TUBO 4 0.0190

L1 – L2 = 0.0448

CONCENTRACION DE 4ML

TUBO 1 0
L1
TUBO 2 0.0724

TUBO 3 0

L2 TUBO 4 0.0133

L1 – L2 = 0.0591

CONCENTRACION 6ML

TUBO 1 0
L1
TUBO 2 0.0704

TUBO 3 0

L2 TUBO 4 0.0121

L1 – L2 = 0.0583
CONCENTRACION 8ML

TUBO 1 0
L1
TUBO 2 0.0544

TUBO 3 0

L2 TUBO 4 -0.0061

L1 – L 2 = 0.0605

CONCENTRACION 10ML

TUBO 1 0
L1
TUBO 2 0.0645

TUBO 3 0

L2 TUBO 4 -0.0023

L1 – L2 = 0.0668

GRAFICA: ABSORBANCIA VS CONCETRACION

CONCENTRACION ABSORVANCIA

2 0.0448

6 0.0583

8 0.0605

10 0.0668
 0.08
0.07 y = 0.0027x + 0.0402
R² = 0.9767
0.06

ABSORVANCIA
0.05
0.04
Series1
0.03
Linear (Series1)
0.02
0.01
0
0 5 10 15
CONCENTRACION

2. CURVA EXPERIMENTAL

FRUTAS VITAMINA C

NARANAJA 53.2

PIÑA 47.8

LIMON 53

 5ML DE CADA MUESTRA / 35ML DE ACIDO OXALICO

 CENTRIGUGAR POR 10 MINUTOS.

NARANJA

TUBO 1 0
L1
TUBO 2 0.0735

TUBO 3 0

L2 TUBO 4 0.0647

L1 – L2= 0.0088
PIÑA

TUBO 1 0
L1
TUBO 2 0.0759

TUBO 3 0

L2 TUBO 4 0.0649

L1 – L2= 0.011

LIMON

TUBO 1 0
L1
TUBO 2 0.0726

TUBO 3 0

L2 TUBO 4 0.0586

L1 – L2= 0.014

a= 0.0027; b=0.0402

FRUTAS ABSORVANCIA

NARANAJA 0.0088

PIÑA 0.011

LIMON 0.014
  NARANJA
YN= a [X] – b
0.0088= 0.0027 [x] - 0.0402
[X]= 18.15 x 0.1 [Factor de Disolución]
[X]= 1.815

 PIÑA
YN= a [X] + b
0.011= 0.0027 [x] - 0.0402
[X]= 18.96 x 0.1 [Factor de Disolución]
[X]= 1.896

 LIMON
YN= a [X] + b
0.014= 0.0027 [x] - 0.0402
[X]= 20.07 x 0.1 [Factor de Disolución]
[X]= 2.007

VII. DISCUSIONES

 (2000). EURACHEM/CITAC Guide. Quantifying Uncertainty in

Analytical Measurement. Second edition.)
La linealidad es una propiedad importante de los métodos utilizados para
efectuar mediciones en un intervalo de concentraciones. La linealidad de
la respuesta a patrones puros (MRC) y a muestras realistas puede
determinarse. La linealidad generalmente no es cuantificada pero es
comprobada mediante inspección o utilizando pruebas de significancia
de la no-linealidad. La no-linealidad significativa es usualmente corregida
mediante el uso de funciones de calibración no-lineal o eliminada
seleccionando un intervalo de operación más restringido. Cualquier
desviación residual de la linealidad normalmente es contabilizada por el
estimado de la precisión global cubriendo varias concentraciones, o
dentro de cualquier incertidumbre asociada a la calibración.
 La curva obtenida, se debió a distintos factores, tales como, una
mala manipulación al momento de realizar las diluciones ya que no
se tuvo el cuidado de no mezclar las concentraciones al usar una
misma pipeta para todas sin un previo lavado al pasar de una
concentración a otra provocando de alguna u otra manera una
alteración.

 La vitamina C se encuentra de dos formas, como ácido ascórbico y

ácido dehidroascorbico, se utiliza el método de la transformación del
ácido ascórbico, este método se utiliza colorante 2,6 dicloroindofenol, y
es este la que muestra un máximo de absorción a 540nm. La técnica de
análisis, espectrofotometría, es un método muy aceptable, y nos permite
determinar con un buen grado de exactitud las absorbancias en las
muestras preparadas, así trabajar con curva de calibración para calcular
concentraciones de la naranja y otros.

Otro de los factores fue al momento de la adición del colorante ya

que debe ser inmediato (max. después de 15 seg.) ya que el 2,6 –
dicloroindofenol es rápidamente oxidado en la presencia del ácido
ascórbico. Otro error cometido seria al no mantener al blanco (tubo
de ensayo con agua destilada) constante, se cambió para cada
concentración lo que pudo causar alteración.

VIII. CONCLUSIONES

 Para la Control de la linealidad fotométrica El estudio de la linealidad

fotométrica permite establecer el rango de absorbancia en el que el
instrumento tiene respuesta proporcional a los cambios de
concentración. Para ello se determina la respuesta del
espectrofotómetro a diferentes concentraciones de una sustancia que
cumpla con la ley de Lambert-Beer.
 La curva obtenida, se debió a distintos factores, tales como, una
mala manipulación al momento de realizar las diluciones ya que no
se tuvo el cuidado de no mezclar las concentraciones al usar una
misma pipeta para todas sin un previo lavado al pasar de una
concentración a otra provocando de alguna u otra manera una
alteración.
IX. BIBLIOGRAFIA

 QUAM: 2000.P1. (2000). EURACHEM/CITAC Guide. Quantifying

Uncertainty in Analytical Measurement. Second edition.
 http://www.lacomet.go.cr/documentosweb/quimica/2011/Publicaciones/s
andra.pdf.