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Temas propuestos:
Pigmentos fotosintticos. Fotosistemas I y II: flujo cclico y no cclico de electrones. Etapas
luminosa y oscura: reactivos y productos. Fosforilacin fotosinttica. Fijacin del carbono: ciclo de
Calvin.
OBJETIVOS:
Interpretar la frmula general de la fotosntesis y todas las reacciones involucradas dentro
del proceso fotosinttico.
Extraer y separar los pigmentos que intervienen en la fotosntesis, teniendo en cuenta sus
diferencias de solubilidad y color.
Demostrar la capacidad reductora de los cloroplastos y que la luz y el CO2 son
necesarios para la fotosntesis.
Determinar el efecto de un herbicida sobre el poder reductor de los cloroplastos.
Bibliografa
Solomon, E., Berg, L. y Martin, D. W. 2013. Biologa. Editorial CENGAGE Learning,
9 Ed.- Captulo 9: Fotosntesis: captura de energa luminosa.
Bibliografa ampliatoria
Curtis, H. y Barnes, N.S. 2000. Biologa. Editorial Mdica Panamericana S.A. 6 Ed.
(en espaol). Captulo 7: El flujo de energa. Captulo 9: Fotosntesis luz y vida.
Este proceso es el origen de todos los seres vivos que habitan la Tierra ya que la energa
solar es utilizada para sintetizar los compuestos orgnicos que despus sern ingeridos y
degradados por los individuos no fotosintticos. As, gracias a la fotosntesis, la energa solar es el
origen de la energa qumica de todas las clulas.
La importancia de la fotosntesis tambin radica en su economa ya que utiliza como fuente
de energa el sol, como fuente de carbono el CO2 y para reducir este ltimo, utiliza agua.
NOTA: Debido a que todo el O2 liberado proviene del H2O, deben asimilarse 12 molculas de H2O
por cada molcula de C6H12O6 formada en la fotosntesis, para balancear la ecuacin.
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El resultado neto es la oxidacin de dos molculas de agua para formar oxgeno mediante
la liberacin de cuatro electrones, y la reduccin de una molcula de dixido de carbono por esos
cuatro electrones para producir carbohidratos (proceso de xido-reduccin).
Cules son los reactivos y los productos de la reaccin del proceso fotosinttico?
En las clulas vegetales (Fig. 1), la fotosntesis se lleva a cabo en los cloroplastos, los
cuales son grandes estructuras subcelulares rodeados por una membrana doble. En su interior,
hay membranas que forman una especie de sacos llamados tilacoides. En las plantas superiores,
esos sacos estn apilados unos sobre otros en grupos formando los denominados grana. La
matriz llena de lquido que rodea los grana es el estroma. La clorofila y los dems pigmentos
fotosintticos se localizan en las membranas tilacoidales. Los tilacoides participan en las
reacciones fotodependientes, y las reacciones fotoindependientes ocurren en el estroma.
Cuando una molcula de clorofila recibe luz a una determinada longitud de onda, uno de
sus electrones alcanza un estado energtico excitado, pero vuelve inmediatamente al estado
fundamental. As emite la energa recibida a una clorofila cercana por fluorescencia, es decir, con
una longitud de onda un poco mayor debido a una ligera prdida de energa en forma de calor. El
paso de la energa luminosa de clorofila en clorofila se denomina resonancia y hace que sta
vaya teniendo cada vez mayor longitud de onda (y por lo tanto menor energa) hasta que es
absorbida por la clorofila del centro de reaccin, momento en el que se produce el acto
fotoqumico.
En las clulas eucariotas fotosintticas y en las cianobacterias hay dos tipos de fotosistemas
que se diferencian en el mximo de absorcin de la clorofila que forma el centro de reaccin. El
fotosistema I tiene un mximo de absorcin a 700 nm y su clorofila se llama P700 (pigmento
700 nm), mientras que el fotosistema II tiene el mximo a 680 nm (P680). El resto de bacterias
fotosintticas slo poseen el fotosistema I.
Cuando inciden dos fotones sobre el fotosistema I (PSI), el P700 se excita y emite dos
electrones a una rbita de elevada energa que son inmediatamente captados por la ferredoxina
(Fd). El NADP+ acepta los electrones y se reduce a NADPH (Fig. 4).
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Cmo se rellena el hueco dejado por los electrones en el P700? Para ello acta el
fotosistema II (PSII). Al ser iluminado por dos fotones el P680 se excita y emite dos electrones que
son captados por una cadena transportadora de electrones formada por la plastoquinona (PQ), el
complejo de los citocromos b6-f y la plastocianina (PC). El complejo citocromo b6-f acta
adems como una bomba de protones, utilizando parte de la energa en impulsar protones al
espacio tilacoidal. De la plastocianina los electrones pasan ya al P700 que recupera los que justo
antes haba perdido.
Ahora es el P680 el que presenta un hueco electrnico. ste es rellenado por los
electrones procedentes del agua como consecuencia de la ruptura de la molcula de agua
(fotlisis del agua), proceso en el que interviene un enzima con manganeso no muy bien
conocido y mediante el cual una molcula de agua se escinde en dos protones, dos electrones y
un tomo de oxgeno.
Los protones que libera la fotlisis del agua en el espacio tilacoidal se suman a los que
bombea el complejo de citocromos b6-f con lo que se genera un gradiente electroqumico. Ahora,
al igual que ocurre en las mitocondrias segn la hiptesis quimiosmtica, los protones son
impulsados por el gradiente de pH a travs del ATP-sintetasa que se encuentra en la membrana
tilacoidal, con lo que se sintetiza ATP a partir de ADP + Pi.
Esta sntesis de ATP recibe el nombre de fotofosforilacin no cclica debido a que el
flujo de electrones comienza en la molcula de agua y termina en el NADP+. En conjunto, en la
transferencia no cclica, a partir de una molcula de agua y 4 fotones de luz, se forman una
molcula de NADPH, una de ATP y O2.
Al igual que en el proceso no cclico, al incidir los fotones sobre el fotosistema I, los
electrones adquieren la energa necesaria para ser capturados por la ferredoxina, pero ahora, en
vez de continuar hacia el NADP+, son desviados hacia la cadena de transporte de electrones que
conecta los fotosistemas I y II, concretamente al complejo citocromo b6-f que bombea protones al
espacio tilacoidal para que luego se sintetice ATP al pasar por el canal de la ATP-sintetasa. Se
llama ahora fotofosforilacin cclica ya que el flujo de electrones es cclico, son los mismos que
perdi el P700 los que vuelven cclicamente a l. As pues, en este caso no se forma NADPH, no
interviene el agua ni se libera O2.
En la fase oscura (ciclo de Calvin) se utilizan el poder energtico (ATP) y el poder reductor
(NADPH) obtenidos durante la fase luminosa para impulsar la transformacin de sustancias
inorgnicas en materia orgnica. Esta transformacin es muy desfavorable energticamente y por
ello se acopla a las reacciones de la fase luminosa.
El proceso fundamental de la fase oscura es la fijacin reductora del C a partir del CO2
formndose primero glcidos sencillos (gliceraldehdo fosfato PGAL) de los que derivarn el resto
de compuestos orgnicos.
Ciclo de Calvin
La fijacin reductora del CO2 ocurre en la mayora de las plantas a travs de una
secuencia cclica de reacciones conocida como ciclo de Calvin o ciclo C3 debido a que la mayora
de los metabolitos intermediarios tienen 3 carbonos (Fig. 6). El ciclo se inicia a partir de un enzima
de elevado peso molecular, la ribulosa difosfato carboxilasa (RuBisCo), que cataliza la
incorporacin al ciclo del CO2 atmosfrico o disuelto en agua si se trata de plantas acuticas. Este
enzima se encuentra en grandes cantidades en los cloroplastos y se considera que es la protena
ms abundante de la Biosfera.
Se distinguen 3 etapas:
Produccin de ATP y formacin del gradiente de protones en una bacteria, una mitocondria y un
cloroplasto.
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Referencias:
C.K.: Ciclo de Krebs
C.C.: Ciclo de Calvin
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EXPERIENCIA N1
Figura 8. Pigmentos.
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a- Solubilidad diferencial
Procedimiento:
1- Colocar en un mortero 15 mL de alcohol y trocitos de hojas verdes (sin
nervaduras), y aplastar suavemente hasta que el lquido adquiera una coloracin
similar a la de las hojas (verde transparente).
2- Filtrar la solucin de pigmentos con papel de filtro
(embudo) y recogerla en un erlenmeyer.
3- De la solucin de pigmentos contenida en el vaso,
colocar 4 mL en un tubo de ensayo, y 2 mL en una
cpsula de Petri.
4- En el tubo de ensayo, aadir 2 mL de ter de petrleo y
agitar suavemente por inversin con tapn de goma,
durante 30 segundos.
5- Aadir 2 mL de agua destilada volviendo a agitar con
suavidad otros 30 segundos.
6- Dejar el tubo reposando en la gradilla 15 minutos y
observar las distintas fases.
Mecanismo de separacin
En la cromatografa ascendente sobre papel, la fase estacionaria consiste
principalmente de molculas de agua unidas al papel. El papel de cromatografa contiene
entre 6 a 10% de agua adsorbida a las fibras de celulosa. Los solutos en la mezcla se
disuelven en cierto grado en estas molculas de agua e interaccionan con la fase
estacionaria.
La fase mvil comprende el/los solvente/s (alcohol, acetona, ter de petrleo) en
el/los cual/es cada soluto se disuelve en diferente grado.
El grado de separacin obtenido es funcin de la solubilidad relativa de cada soluto
en la fase estacionaria (agua) y en la fase mvil (solventes) (Fig. 9).
EXPERIENCIA N2
a- Aislamiento de cloroplastos
Las tcnicas de aislamiento de cloroplastos no son demasiado sencillas, sin embargo
pueden utilizarse tcnicas aproximadas, que permiten mantener, por lo menos, algo de la
actividad del cloroplasto.
Procedimiento:
NOTA: El macerado en mortero se usa para destruir la estructura celular del vegetal y as liberar los
cloroplastos intactos, impidiendo que pierdan su actividad. El filtrado es para separar residuos celulares y
fragmentos de hojas. La primera centrifugacin remueve clulas enteras y otros fragmentos de hojas ms
pequeos. En la segunda centrifugacin se sedimentan los cloroplastos. El fro se utiliza para mantener
inactivas las enzimas que pudieran destruir las protenas de los complejos proteicos que intervienen en la
fase luminosa de la fotosntesis.
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Procedimiento:
Aadir a la suspensin de cloroplastos obtenida
anteriormente (y que se habr mantenido en un bao de
hielo) una solucin de DCPIP al 0,0004 M (cinco partes
de solucin de DCPIP por cada parte de suspensin de
cloroplastos).
El DCPIP es un colorante azul, que en su forma reducida pierde el color; se utiliza en este
caso, en lugar del NADP+, para demostrar fcilmente la capacidad reductora de los cloroplastos.
c- Determinacin del efecto del herbicida diurn (DCMU) sobre el poder reductor
de los cloroplastos
Ms de la mitad de los herbicidas de uso agronmico ejercen su accin fitotxica
inhibiendo la actividad fotosintetizadora de la planta. Las posibilidades de actuacin son muy
variadas, entre los que se destacan los que inhiben el transporte de electrones entre los
fotosistemas II y I. El diurn (DCMU) pertenece a esta categora de herbicidas, secuestrando
electrones a nivel de la Plastoquinona; se usa en una concentracin de 0,001 M para inhibir la
fotosntesis.
Desde la perspectiva agronmica, el conocimiento de la estructura y funcin de la
maquinaria fotosinttica, conducen al diseo de variedades vegetales resistentes a los herbicidas.
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Procedimiento:
a- disueltas en el citoplasma.
b- disueltas en el estroma del cloroplasto.
c- incluidas en la membrana externa del cloroplasto.
d- incluidas en la membrana interna del cloroplasto.
e- incluidas en la membrana tilacoidal.
El oxgeno liberado durante la fotlisis del agua es utilizado para la fijacin de CO2 en el ciclo
de Calvin.
La ATP sintetasa requiere de un gradiente de protones para sintetizar ATP a partir de ADP.
ETAPA
ETAPA FOTODEPENDIENTE
FOTOINDEPENDIENTE
H2O H+ + e- + O2
CO2 + H+ + e- (CH2O)n
ATP
ADP + Pi
NADPH
NADP+ + H+
6 O2
6 CO2 + luz
5- Indicar verdadero (V) o falso (F). El diurn (DCMU) es un herbicida que inhibe el proceso de
fotosntesis, especficamente en la cadena de transporte de electrones. Si agregamos DCMU a una
suspensin de cloroplastos y colocamos estos a la luz:
7- Indica V o F:
Los carotenos presentan una gran afinidad por solventes no polares, por lo tanto tienden a
1 2 3 4 5
6 7 8 9 10
protones.
b- b- la ubicacin de la
ATPasa.
Despus del bombeo de protonoes en el interior del tilacoide el pH se hace ms CIDO / BSICO
Sabiendo que segn el fabricante la mezcla contiene 4 pigmentos con la siguiente afinidad por los
solventes apolares B>C>>D>A
Indicar:
a- en qu punto se sembr cada una de las muestras (1, 2 y 3).
b- a qu pigmento corresponde cada banda.
12- Teniendo en
cuenta el siguiente
esquema, responde
las consignas que se
presentan a
continuacin:
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a- Completar el cuadro en blanco que se encuentra al lado de cada molcula con la cantidad de
tomos de carbono que presenta cada una.
b- Cuntas vueltas del ciclo son necesarias para sintetizar una molcula de glucosa?
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e- Cul es el costo energtico en cantidad de molculas de ATP para la fijacin de una molcula
de glucosa?
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13- El electrn eliminado de la clorofila P680 hace que esta molcula requiera su reemplazo el cual
es...
14- Marque con una cruz la respuesta correcta. Cul de los siguientes hechos NO ocurre en la
fotofosforilacin cclica?
a- Se produce ATP.
b- El centro de reaccin del fotosistema I est activo.
c- Hay transporte electrnico en las membranas fotosintticas.
d- Se utiliza la energa luminosa.
e- Se forma NADPH.