Cuantificacin de la clorofila

La vida en la tierra depende fundamentalmente de la energa solar, la cual es atrapada mediante el

proceso fotosinttico, que es responsable de la produccin de toda la materia orgnica que
conocemos. La materia orgnica comprende los alimentos que consumimos diariamente tanto
nosotros como los animales, los combustibles fsiles (petrleo, gas, gasolina, carbn); as como la
lea, madera, pulpa para papel, inclusive la materia prima para la fabricacin de fibras sintticas,
plsticos, polister, etc.Utilizando tcnicas cromatogrficas se han identificado un grupo de
sustancias en las plantas verdes llamadas clorofilas, siendo las representantes la a y b. La
clorofila a esta integrada por un ncleo de Mg, 4N, C y H. Para que se pueda formar la clorofila es
indispensable la presencia del Fe. Las formulas de la clorofila son:

a.C55H72O5N4Mg b.C55H70O6N4Mg

La clorofila tiene la capacidad de transformar la energa luminosa absorbida en energa qumica,

canalizndola hacia reacciones celulares de biosntesis.El pigmento no entra en si en las reacciones
qumicas que se llevan a cabo, si no que ejerce solamente una accin cataltica que activa las
reacciones sin intervenir en ellas. Esta accin cataltica es extraordinariamente rpida y trabaja en
fracciones de segundo.

La clorofila, el pigmento verde comn a todas las clulas fotosintticas, absorbe todas las longitudes
de onda del espectro visible, excepto las de la percepcin global del verde, detectado por nuestros
ojos.la clorofila es una molcula compleja que posee un tomo de magnesio en el centro, mantenido
por un anillo de porfirinas. Numerosas modificaciones de la clorofila se encuentran entre las plantas
y otros organismos fotosintticos (plantas, algunos protistas, proclorobacteria y cianobacterias).

Clorofila a Clorofila b Clorofila c1 Clorofila c2 Clorofila d clorofila f

Frmula C55H72O5N4 C55H70O6N4 C35H30O5N4M C35H28O5N4M C54H70O6N4 C55H70O6N4
emprica Mg Mg g g Mg Mg
Grupo C2 -CH3 -CH3 -CH3 -CH3 -CH3 -CHO
Grupo C3 -CH=CH2 -CH=CH2 -CH=CH2 -CH=CH2 -CHO -CH=CH2
Grupo C7 -CH3 -CHO -CH3 -CH3 -CH3 -CH3
Grupo C8 -CH2CH3 -CH2CH3 -CH2CH3 -CH=CH2 -CH2CH3 -CH2CH3
- - - - - -
Grupo C17 CH2CH2COO CH2CH2COO CH=CHCOO CH=CHCOO CH2CH2COO CH2CH2COO
-Phytyl -Phytyl H H -Phytyl -Phytyl
Enlace
Simple Simple Doble Doble Simple Simple
C17-C18
Universal algn alga algunas
Distribuci plantas y algas algas
(plantas y roja y cianobacteria
n algas verdes cromofitas cromofitas
algas) cianobacteria s

Los pigmentos accesorios que incluyen a la clorofila b (tambin c, d, y e en algas y protistas) y los
carotenoides, como el beta caroteno y las xantofilas (carotenoide de color amarillo), absorben la
energa no absorbida por la clorofila.
La clorofila a (R = --CHO) absorbe sus energas de longitudes de onda correspondientes a los
colores que van del violeta azulado al anaranjado-rojizo y rojo.

El organismo vegetal ha desarrollado un sistema para capturar un fotn de luz y utilizar la energa
para elevar el nivel energtico de un electrn determinado que posteriormente regresa su nivel
basal; cuando esto sucede, el exceso de energa es liberad en diferentes formas. La evolucin de la
vida vegetal ha logrado, a travs de mecanismos bioqumicos, desviar el retorno del electrn a su
nivel primitivo y utilizar el exceso de energa para sintetizar carbohidratos.

Adems de las clorofilas a y b, en el cloroplasto de plantas superiores, hay otro grupo de pigmentos
que son los carotenoides y las xantofilas. Existen otros pigmentos, como son las antocianinas, que
se encuentran en clulas de vegetales superiores y que determinan, en especial, el color de las flores
y algunos matices en hojas y otras estructuras de la planta.

DETERMINACIN CUANTITATIVA DE CLOROFILA

Se calculara la cantidad de clorofila presente en el extracto, expresndola como mg de clorofila

por gramo de tejido extrado, de acuerdo con las siguientes ecuaciones:

Densidad ptica (nm) Absorbancia

645 0.336
652 0.516
663 0.850

OBJETIVO

Calcular la cantidad de clorofila que se encuentra en una determinada porcin de extracto por una
determinacin cuantitativa.

MATERIAL

1 Mortero

1 Embudo de Buchner

1 Matrz de filtracin
1 Matrz aforado de 50 mil

1. Probeta de 100 ml

1. Vaso de precipitados de 200ml.

1. Tubos de ensayo

1 Pipeta de 5ml.

1 Embudo

1.
2. Pipeta pasteur, mechero, tripie y rejilla

espectrofotmetro y celdas

2 Discos de papel filtro

Gradilla

MATERIAL

1 gr de hojas frescas de espinacas.

3gr de ptalos de flores azules

Arena

REACTIVOS

Acetona al 80% (v/v)

H2S04 0.1N

NAOH 0.1N

Papel pH 0-14

METODOLOGIA

1.- Coloque en el mortero 1 g de hojas de espinacas, sin las venas grandes, cortadas en pequeos
tamaos.

2.-Agregue arena y 4 ml de acetona al mortero, para moler el tejido y obtener una pasta fina.
Adicione 20ml ms de acetona.

3.-Transfiera cuidadosamente el extracto resultante al embudo de Buchner provisto de papel filtro, y

filtre al vaco.
4.- Agregue otros 50ml de acetona a la pulpa de las hojas y reanude la molienda y el filtrado. Este
segundo extracto agrguelo al primero. El tejido debe de quedar sin clorofila, de lo contrario repita
el proceso con otros 20ml de acetona y rena todos los filtrados.

5.- Lave el mortero y el embudo con 50ml de acetona que se incorporara al filtrado. En todo el
proceso no debe de usar mas de 100ml de acetona se aconseja aforar a 50ml en un matraz.

6.- Lea la densidad ptica (D) a 645. 652.663 nm del extracto. usando como blanco el acetona.
Anota las densidades medidas.

1. Otros pigmentos no fotosintticos: las antocianinas

1 Macere 3g de ptalos de flores azules y colquelos en un vaso de 200ml, con 100ml. de agua y
ponga a hervir durante unos minutos.

2 Enfre un poco el extracto y filtre

3 En 3 tubos de ensayo. coloque 5 ml del extracto

4 En tubo uno mida el pH de la solucin, utilizando un papel indicador.

5 Al tubo 2, agregue. gota a gota la solucin de H2S04 0.1 N y observe cualquier cambio de color
con respecto al original. Determine el pH y contine la adicin del cido para ver si ocurren otros
cambios.

6 Al tubo 3 aada NAOH 0.1 N gota a gota y mide el pH de la solucin al transcurrir un cambio de
color.

RESULTADOS

Densidad de 645 nm con absorbancia de 0.400

Densidad de 652 nm con absorbancia de 0.550

Densidad de 663 nm con absorbancia de 0.832

CLOROFILA A 0.47452

CLOROFILA B 0.263312

CLOROFILA TOTAL 1 0.737632

CLOROFILA TOTAL 2 0.7971

TRATAMIENTO COLOR pH

Extracto original amarillo 7

Extracto mas H2S04 rosa 3

Extracto ms NAOH verde 9

CUESTIONARIO

1.- QUE SON LAS CLOROFILAS?

Pigmentos verdes con estructuras policiclicas planas que funcionan como receptores de energa
luminosa en la fotosntesis; al igual absorben energa de los organismos fotosintticos.

Tambin la clorofila es una profirina al igual que el grupo hemo de los citocromos pero contiene un
tomo de magnesio en lugar de una de hierro en el centro del anillo perifrico. La clorofila se asocia
con lpidos y protenas hidrofobicas de las membranas fotosintticas. Hay dos tipos de clorofila
como son: la clorofila A y la clorofila b.

2.- DESCRIBA LA FUNCION BIOLOGICA DE LOS PIGMENTOS VEGETALES Y DIGA

,CUAL ES SU IMPORTANCIA?

Son sustancias que su funcin es absorber la luz visible. Los diferentes pigmentos absorben luz de
longitudes de onda diferentes, adems de llevar a cabo principalmente la fotosntesis.

La variacin en las proporciones de estos pigmentos es la responsable de la gama de colores de los

organismos fotosintticos que van desde el azul obscuro de las hojas de abeto hasta el verde ms
intenso de las hojas de arce, el rojo marrn o incluso prpura de algunas plantas.

Las clulas vegetales tambin tienen otros pigmentos fotosintticos accesorios, como los
carotenoides de color amarillo o anaranjado. Vistos absorben longitudes de onda de la luz diferente
a las que corresponden a la clorofila y de tal suerte amplan el espectro luminoso que aporta
energa para la fotosntesis.

3.- DESCRIBA LAS CARACTERISTICAS ESTRUCTURALES DL LA CLOROFILA Y EL

CAROTENO.

A)CLOROFILA:

La estructura bsica de todas las clorofila es la de una unidad tetralirrolica plana que contienen
metal similar al grupo proteico heme de la mioglobina y los citocromos. No obstante, la molcula
de la clorofila es diferente al del grupo heme en tres aspectos:

1 .- En la clorofila, el ion, metlico que esta coordinado al grupo tetrapirrolico es magnesio como
vez del hierro.

2.- Las clorofilas no son dependientes de uniones a grupos proteicos para su actividad.

3.- Las clorotilas contienen un grupo caracterstico de cadenas laterales unidos a los pirroliticos, los
ms notables de los cuales son un grupo alcohlico, grande y no polar en enlace esfrico o un
residuo Iateral del cido propionoico. y un anillo funcionado del ciclo pentano. El grupo fitol no
polar es particularmente notable ya que proporciona la base estructural para una integracin de las
molculas de clorofila en la matriz lipoproteica de la membrana de tilacoide.
B) CAROTENO.- carotenos y las xantotilas son pigmentos insolubles en agua y ampliamente
distribuidas en la naturaleza, siendo ms abundantes en plantas y algas.

4.-QU SON LAS ANTICIANINAS?

Son pigmentos vegetales hidrosolubles que se encuentran en flores y frutos, son hermosos colores
azules, prpura, violeta, malva y la mayora de los rojos, contienen los grupos henzaopirilium y
benzopirono. Estos pigmentos suelen presentarse en forma de gluxodisos lo que explica su
solubilidad en agua y la fcil extractailidad por solventes acuosos. Se encuentran en la savia de las
plantas y a menudo en forma de slidos amorfos o cristalinos en las hojas en el tejido leoso y
frutos. Su color esta algunas veces enmascarado por otros pigmentos, como la clorofila en algunas
clulas vegetales la vacuola contiene elevadas concentraciones de pigmentos que dan su intenso
color o prpura en las llores de los geranios. Las rosas las ciruelas y las uvas.

5.- DE ACUERDO A SU EXTRCCION. QUE DIFERENCIA HAY ENTRE LAS CLOROFILAS

Y LAS ANTOCIANINAS.

La clorofila se encuentra en los cloroplastos formando compuestos insolubles se hace necesaria para
llevar acabo el estudio de su poder. absorbente, extraerlas y aquellos por medio de ter, acetona u
otros disolventes adecuados.

Adems que la parte fundamental de la molcula de la clorofila es cl anillo llamado porfirina

estructura formada por 4 ncleos pirrolicos unidos por eslabones metlicos.

Los antocianinas son del grupo de los glucosidos son compuestos de glucosa, alcohol, o cido. Que
en solucin en las vacuola dan color a la flor, rojo si en el pH es cido, azul o violeta si el ph es
bsico.

DISCUSIN

La fotosntesis es un proceso que transforma en carbono orgnico el gas carbnico tomado del aire
o disuelto en el agua. En el proceso interviene un pigmento, la clorofila, que es una sustancia capaz
de absorber las radiaciones luminosas. Esta captacin de energa luminosa se realiza en una primera
etapa en la fotosntesis, en la cual se produce energa qumica en forma de molculas de
adenosintrifosfato (ATP) y se desprende oxigeno, que produce de la escisin de una molcula de
agua. En una segunda etapa, que se denomina fase obscura porque puede tener lugar en ausencia de
luz, el dixido de carbono se combina con una pentosa para formar glucosa a travs de una serie de
reacciones qumicas. La clorofila absorbe sobre todo la luz roja, violeta y azul, y refleja la verde.

La luz roja es la de mayor eficacia para la fotosntesis, ya que el espectro de absorcin de la

clorofila es ms amplio en la zona del rojo. En cambio la luz verde carece de accin sobre este
proceso.

Lo anterior nos explica por que cuando llevbamos la solucin de clorofila a la luz del sol esta
cambiaba a un color rojo.

Cabe mencionar que no todas las soluciones obtenidas en la prctica por los dems equipos tenan la
misma tonalidad de verde, esto es por que no todas las hojas de espinacas tenan la misma frescura,
esto es que entre ms frescas se encuentren las hojas mayor contenido de clorofila.
En cuanto a las antocianinas estas son glucosidos es decir que se pueden hidrolizar por la accin de
enzimas o de los cidos en una o ms de azucares y en otra porcin de diferente naturaleza llamada
aglicon o antocianidina.

Este se divide en tres antocianidinas: roja en solucin cida, violeta en medio neutro y azul en
solucin alcalina.

Por lo que cabe resaltar que las antocianinas pueden alterar qumicamente de acuerdo a su medio, el
color se cambia de acuerdo a su medio cido cuando va de 1 a 7 y la basticidad cuando va de 7 - 11
por lo que se tiene que proceder a ver un cambio de color de la substancia por el indicador que
contiene la antocianina.

La antocianina pertenece al grupo de los glusidos los cuales contiene glucosa, cido y alcohol en su
estructura.

CONCLUSIN

Sabemos que la clorofila es un factor importante en la fotosntesis y que es capaz de absorber la

energa luminosa y gracias a ello puede promover la serie de reacciones que conducen al
almacenamiento de dicha energa en un compuesto de alto poder calrico.

La luz roja es la de mayor eficacia para la fotosntesis, ya que el espectro de absorcin de la

clorofila es ms amplio en la zona del rojo. En cambio la luz verde carece de activacin sobre este
proceso.

Viviana Medina Rodrguez