UNIVERSIDAD PRIVADA SAN CARLOS

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FACULTAD DE INGENIERAS
CARRERA-PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL

CURSO
PRACTICA DE LABORATORIO N 01
BIOSEGURIDAD

PRESENTADO POR:
DANITZA SALAMANCA MIRANDA

DOCENTE:

Lic. Isabel Eveling Castillo Coaquira

PUNO-PERU

2017
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PRACTICA N1 BIOSEGURIDAD

I. INTRODUCCIN:
En el laboratorio de microbiologa es imprescindible trabajar con material y soluciones
estriles con objeto de que los resultados que se obtengan correspondan al
microorganismo o microorganismos que estn presentes en la muestra en estudio y no a
contaminantes que procedentes del medio o los materiales, puedan desarrollarse y
falsear las pruebas. Para ello antes de comenzar el trabajo prctico se esterilizar, junto
con los medios de cultivo, el material que posteriormente va a ser utilizado. Asimismo. se
aprendern las tcnicas de laboratorio que nos permiten manejar esos medios e
instrumental deforma que se minimice el riesgo de contaminacin.

II. OBJETIVO:
- Conocer las principales diferencias entre limpieza, desinfeccin y esterilizacin para
poder aplicar los conocimientos en el uso correcto del laboratorio de microbiologa.

III MARCO TEORICO

LIMPIEZA:
Limpieza es la accin y efecto de limpiar (quitar la suciedad, las imperfecciones o
los defectos de algo; sacar las hojas secas o vainas de las hortalizas

DESINFECCIN:
Se denomina desinfeccin a un proceso fsico o qumico que mata o inactiva
agentes patgenos tales como bacterias, Virus y protozoosimpidiendo el
crecimiento de microorganismos patgenos en fase vegetativa que se
encuentren en objetos inertes.

Los desinfectantes reducen los organismos nocivos a un nivel que no daan la

salud ni la calidad de los bienes perecederos. Algunos, como los compuestos
fenllcos, pueden actuar tambin como antispticos.

Los desinfectantes se aplican sobre objetos inanimados, como instrumentos y

superficies, para tratar y prevenir las infecciones. Entre los desinfectantes
qumicos del agua ms habituales se encuentran el cloro, las cloraminas, en
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ebullicin, la filtracin y la irradiacin ultravioleta. Se deben distinguir los

desinfectantes de los sanitizantes que son sustancias que reducen el nmero de
El autoclave es un instrumento habitual en los laboratorios de Microbiologa. Es.
un sistema cerrado donde se forma vapor de agua que se somete a una presin
elevada, una atmosfera, lo que nace que el agua alcance una temperatura de
121C causando la desnaturalizacin de enzimas lo que conlleva a la muerte de
los microorganismos y la destruccin de las esporas. Habitualmente, se esteriliza a
121C durante 20 minutos.

FUNCIONAMIENTO DEL AUTOCLAVE

El proceso completo de esterilizacin en un autoclave se compone de diferentes fases:
1. Fase de purgado: A medida que la resistencia calienta el agua del fondo del
calderin, se va reduciendo vapor se desplaza e! aire, hacindolo salir Por !a
vlvula de purgado que est abierta. Esta fase termina cuando se alcanza la
temperatura de esterilizacin.
2. Fase de esterilizacin: Una vez cerrada la vlvula de purgado y alcanzada la
temperatura de esterilizacin previamente seleccionada se inicia el proceso- de
esterilizacin
3. Fase de descarga: Terminado el proceso de esterilizacin, deja de funcionar la
resistencia calefactora, con lo que deja de producirse vapor y la presin y
temperatura del caldern empieza a bajar poco a poco.

MECHERO BUNSEN:
El material "y los medios de cultivo donde vamos a crecer a los microorganismos
deben de ser utilizados en condiciones aspticas para evitar su contaminacin
con los microorganismos presentes en el medio ambiente. El mechero Bunsen

esterilizar diverso instrumental como el asa de siembra o el asa de vidrio,

mediante la aplicacin directa de calor. Esterilizacin del asa de siembra.
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El asa de siembra o asa bacteriolgica es probablemente la herramienta ms

usada por el microbilogo. Consiste en un filamento con un lazo en uno de sus
aleacin metlica que se calienta muy rpidamente Esta herramienta tan simple
nos permite tomar un inoculo de un cultivo bacteriano y transferirlo a otro
recipiente con medio de cultivo, o a un portaobjetos para su observacin
microscpica.

El asa de siembra debe de esterilizarse a la llama antes de usarla y despus de

haber sido usada. Debe de esterilizarse antes para evitar la contaminacin de
los microorganismos en estudio con otros microorganismos que estuvieran
presentes en el filamento metlico. Debe de esterilizarse despus de su uso para
evitar que los microorganismos que hemos tomado contaminen el laboratorio o
sean incluso un riesgo biosanitario.

Para esterilizar el asa de siembra ponerla lo ms vertical posible y acercar el

filamento a la llama del mechero Bunsen. Cuando todo el filamento se haya y
dejar enfriar antes de tomar la muestra, para evitar que el calor destruya a los
microorganismos.
El asa de vidrio es utilizada para la extensin de un inoculo por toda la superficie
de una placa de agar El vidrio no puede ser esterilizado mediante la aplicacin
de calor directo el mechero Bunsen pues podra fundirse o quebrarse. Para
su estenlizacin, el asa debe de ser introducida en un bote conteniendo alcohol
96. Despus, escurrirla sacarla y flamearla a la llama del mechero Bunsen
Cuando el alcohol sea consumido el fuego se apagar por si solo. Esperar un
poco para enfriar y proceder a usarla.

La esterilizacin por flameado del alcohol es usada tambin con otros materiales e
instrumentos como pinzas, portaobjetos y cubre objetos, etc. Precaucin Se
recomienda tener mucho cuidado con el bote de alcohol Conviene trabajar con
el bote alejado de la llama del mechero. En caso de que el alcohol se prenda,
mantener la calma. El fuego del alcohol se apaga fcilmente si tapamos el bote y
dejamos que no haya oxigeno.
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FILTRACIN:
La filtracin es un procedimiento fsico de esterilizacin de fluidos en el cual los
microorganismos no son destruidos, sino simplemente retenidos por un material
filtrante. La filtracin slo puede ser utilizada con fluidos, sean lquidos o
gaseosos. Se suele utilizar con soluciones cuyos componentes sean
termolbiles y por lo tanto no pueden ser esterilizadas en el autoclave, por
ejemplo, soluciones concentradas de azcares, de urea, vitaminas, factores de
crecimiento, etc.

Material
Cultivo mixto
Placa con agar nutritivo
Filtro desechable de 0,45 micras
Jeringuilla desechable
Tubos estriles

Abrimos el recipiente del filtro pero no lo sacamos. Ajustamos la jeringuilla

desechable sin el mbolo. Tomaremos 5 ml del cultivo mixto con una pipeta y los
tubo estril y mediante el mbolo hacemos pasar el cultivo a travs del filtro.
Sembramos una alcuota del filtrado sobre una placa de agar nutritivo y lo llevamos a
incubar a 37C. Observamos la ausencia de crecimiento tras 24 horas de
incubacin.
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IV. DESARROLLE:
1. ESTABLEZCA LAS PRINCIPALES DIFERENCIAS DESINFECCIN Y
ESTERILIZACIN:
Limpieza accin de limpiar la suciedad, lo superfluo o lo perjudicial de algo. La
limpieza tambin es muy importante en la vida cotidiana ya que sin ella muchos
podramos contraer enfermedades causadas por bacterias de la suciedad.

Desinfeccin Se denomina desinfeccin a un proceso fsico o qumico que mata o

inactiva agentes patgenos tales como bacterias, virus y protozoos

Esterilizacin Se denomina esterilizacin al proceso por el cual se obtiene un

producto libre de microorganismos viables

2. DESCRIBA LOS PASOS DE MANERA ADECUADA PARA REALIZAR UNA

CORRECTA ESTERILIZACIN EN AUTOCLAVE
1. MARCHA. Se cierran las puerta hermticamente
2. PURGA DE AIRE: En esta fase se eliminara el aire contenido en la cmara y se
favorecer a la eliminacin posterior del aire dentro de los paquetes y de los
contenedores. Para ello se inyecta vapor en la cmara y se activa el sistema de
vaco.
3. PREPARACIN: Para la extraccin del aire de los productos y de la cmara, se
realiza una serie de fases (hasta cuatro) de inyeccin de vapor (de recmara a
cmara) seguidas de fases de vaco (prevacio), mediante el sistema de vacio, para
eliminar completamente el aire restante.
4. CALENTAMIENTO: Se introduce vapor en la cmara y en el interior de los
contenedores hasta alcanzar la temperatura y presin de esterilizacin
5. ESTERILIZACIN: Se mantiene constante la temperatura y presin en la c-
mara durante el correspondiente tiempo de esterilizacin.
6. DESVAPORIZACIN: El vapor de la cmara es eliminado por el sistema de vaco
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7. SECADO: Se inicia un vaco final, profundo y duradero. Se mantiene el vapor en la

recmara, para mantener caliente la cmara y ayudar a secar el producto a fin de evitar todo
tipo de recontaminacin bacteriana durante el transporte y c! almacenamiento.
8. IGUALACIN: Entrada de aire atmosfrico a la cmara, a travs de un filtro de aire
estril, para compensar la presin de la cmara (que estaba en depresin) con la
atmosfenca. El vapor utilizado se condensa y se convierte en agua transportndose a un
depsito.
9. FINALIZACIN DEL PROCESO: Se liberan las puertas para que puedan ser abiertas

3. EN SU OPININ, CUAL ES LA IMPORTANCIA DE LA ESERILIZACION EN

EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA.
En la actualidad es OBLIGATORIO realizar procesos de Esterilizacin en
AUTOCLAVE (Vapor a una temperatura, presin y tiempo determinado). La mayora de
fabricantes de intrumental odontolgico deben someterse a las normas internacionales
de desinfeccin y esterilizacin. Por esta razn Usted debe exigir !a apertura en su
presencia de! instrumente! esterilizado en bolsas especialmente diseadas para ello.
De lo contrario Usted estara corriendo riesgos como paciente, asistente o profesional.

4. COMO VA UD. A UTILIZAR EL CONOCIMIENTO DE ESTERILIZACIN EN

SU DESARROLLO PROFESIONAL? ESTABLEZCA EJEMPLOS REALES
Una vez terminado el tratamiento, se clasifica todo material en artculos
corto punzantes, artculos reutilizables, desechos biolgicos y artculos
desechables en sus respectivos contenedores para su procesamiento
almacenaje o desecho.
En el laboratorio
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5. DESCRIBA LOS PRINCIPALES NIVELES DE PROTECCION

QUE SE EMPLEAN EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA: Nivel de
Bioseguridad 1
En este nivel se trabaja con agentes que presentan un peligro mnimo para el
personal del laboratorio y para el ambiente. El acceso al laboratorio no es restringido y
el trabajo se realiza por lo regular en mesas estndar de laboratorio. En este nivel no
se requiere equipo especial ni tampoco un diseo especfico de las instalaciones. El
personal de estos laboratorios es generalmente supervisado por un cientfico con
entrenamiento en microbiologa. Incluye varios tipos de bacterias y virus como la
hepatitis canina, Escherichia colino patgena, as como algunos cultivos de clulas y
las bacterias no-infecciosas. En este nivel las precauciones tomadas con los
materiales de riesgo biolgico en cuestin, son los guantes de plstico y algn tipo
de proteccin facial. El laboratorio no est necesariamente aislado de las dems
instalaciones del edificio. El trabajo se realiza generalmente en mesas de trabajo
abiertas. Por lo general, los materiales contaminados se desechan en recipientes de
residuos abiertos. Los procedimientos de descontaminacin para este nivel son
similares en muchos aspectos a las precauciones modernas contra los
microorganismos de la vida cotidiana (por ejemplo, lavarse las manos con jabn
antibacteriano, lavar todas las superficies expuestas del laboratorio con los
desinfectantes, etc.)

Nivel de Bioseguridad 2
Es similar al nivel 1 y en l se manejan agentes de peligro moderado hacia el
personal y el ambiente, pero difiere del nivel 1 en las siguientes caractersticas:
1. El personal de laboratorio tiene entrenamiento especfico en el
manejo de agentes patgenos
2. El acceso al laboratorio es restringido cuando se est
realizando algn trabajo.
3. Se toman precauciones extremas con instrumentos
punzocortantes contaminados
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4. Ciertos procedimientos en los cuales pueden salpicar los

agentes o aerosoles se llevan a cabo en gabinetes de trabajo biolgico

Nivel de Bioseguridad 3
Este nivel es el que se encuentra en los laboratorios clnicos, de diagnstico,
algunos laboratorios universitarios y tambin de investigacin, en el cual se realiza
trabajo con agentes exticos o que pueden causar un dao serio y potencialmente
mortal como resultado de la inhalacin o exposicin a los mismos (por ejemplo, el
Carbunco).
El laboratorio cuenta con un diseo y caractersticas especiales y todos los
materiales son manipulados utilizando vestimenta y equipo de proteccin. El
personal de laboratorio tienen una formacin especfica en el manejo de patgenos y
agentes potencialmente letales, y son supervisados por cientficos competentes con
experiencia en el trabajo con estos agentes. Todos los procedimientos que implican
la manipulacin de materiales infecciosos se llevan a cabo dentro de los gabinetes
de seguridad biolgica, campanas de diseo especial, u otros dispositivos de
contencin fsica, o por personal que use el equipo de proteccin personal y
equipos.
Sin embargo, se reconoce que no todos los laboratorios llegan a cumplir con las
normas recomendadas para este nivel de bioseguridad. En estas circunstancias, es
aceptable el realizar las siguientes prcticas para poder seguir operando de una
manera segura:
1. Ventilar el aire del laboratorio al exterior
2. La ventilacin del laboratorio se tiene que hacer con un
flujo de aire
direccional controlado
3. El acceso al laboratorio est restringido
4. Seguir el estndar de prcticas microbiolgicas y equipamiento de seguridad
impuesto para el nivel de bioseguridad 2.
Nivel de Bioseguridad 4
Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes biolgicos que representan
un alto riesgo individual de contagio y que adems son muy perjudiciales para
la
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vida. Los agentes nuevos que tienen un cierto parecido con los antgenos de los
agentes conocidos que operan en el nivel 4, son confinados a este nivel hasta que
se tiene suficiente informacin para confirmar que pertenecen a este nivel o bien
pasarlos al nivel adecuado.
El personal de estos laboratorios cuenta con entrenamiento especfico y extensivo
en el manejo de agentes infecciosos y cuentan con entrenamiento para trabajar en
el ambiente estril y controlado de los mismos.
Por lo regular los cientficos que trabajan aqu, utilizan trajes especiales que cubren la
totalidad de sus cuerpos y que adems tienen una leve sobrepresin para evitar que
entren partculas infecciosas al mismo si es que ste llega a desgarrarse. Los
laboratorios se mantienen con una presin de aire negativa, lo cual ayuda a impedir
que los agentes nocivos escapen al ambiente. Adems, las instalaciones estn en
un edificio separado o en un rea controlada dentro de un edificio, que est
completamente aislado de las dems reas del edificio.Las enfermedades
infecciosas que s manejan en el nivel 4 son: bola, Viruela, Hantavirus, Fiebre de
Lassa etctera. .

6. INDIQUE LAS PRINCIPALES REGLAS BASICAS DE SEGURIDAD QUE SE

MANTIENEN EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA: Normas generales
No fumes, comas o bebas en el laboratorio.
Utiliza una bata y tenla siempre bien abrochada, as protegers tu ropa.
Guarda tus prendas de abrigo y los objetos personales en un armario o
taquilla y no los dejes nunca sobre la mesa de trabajo. . No lleves
bufandas, pauelos largos ni prendas u objetos que dificulten tu
movilidad.
Procura no andar de un lado para otro sin motivo y, sobre todo, no corras
dentro del laboratorio.
Si tienes el cabello largo, recgetelo.
Dispn sobre la mesa slo los libros y cuadernos que sean necesarios.
Ten siempre tus manos limpias y secas. Si tienes alguna herida, tpala.
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No pruebes ni ingieras los productos.

En caso de producirse un accidente, quemadura o lesin, comuncalo

inmediatamente al profesor.

Recuerda dnde est situado el botiqun.

Mantn el rea de trabajo limpia y ordenada.

Normas para manipular instrumentos y productos

Antes de manipular un aparato o montaje elctrico, desconctalo de la red
elctrica.
No pongas en funcionamiento un circuito elctrico sin que el profesor haya
revisado la instalacin.
No utilices ninguna herramienta o mquina sin conocer
su uso, funcionamiento y normas de seguridad especficas.
Maneja con especial cuidado el material frgil, por ejemplo, el vidrio. .
Informa al profesor del material roto o averiado.
Fjate en los signos de peligrosidad que aparecen en los frascos de los
productos qumicos.
Lvate las manos con jabn despus de tocar cualquier producto qumico.
Al acabar la prctica, limpia y ordena el material utilizado.
Si te salpicas accidentalmente, lava la zona afectada con agua abundante.
Si salpicas la mesa, lmpiala con agua y scala despus con un pao. .
Evita el contacto con fuentes de calor. No manipules cerca de ellas
sustancias inflamables. Para sujetar el instrumental de vidrio y retirarlo del
fuego, utiliza pinzas de madera. Cuando calientes los tubos de ensayo con la
ayuda de dichas pinzas, procura darles cierta inclinacin. Nunca mires
directamente al interior del tubo por su abertura ni dirijas esta hacia algn
compaero.
Todos los productos inflamables deben almacenarse en un lugar adecuado y
separados de los cidos, las bases y los reactivos oxidantes.
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Los cidos y las bases fuertes han de manejarse con mucha precaucin, ya que
la mayora son corrosivos y, si caen sobre la piel o la ropa, pueden producir
heridas y quemaduras importantes.
Si tienes que mezclar algn cido (por ejemplo, cido sulfrico) con agua,
aade el cido sobre el agua, nunca al contrario, pues el cido saltara y
podra provocarte quemaduras en la cara y los ojos.
No dejes destapados los frascos ni aspires su contenido. Muchas sustancias
lquidas (alcohol, ter, cloroformo, amonaco...) emiten vapores txicos.

5. DESCRIBA LA IMPORTANCIA Y CUALES SON LOS COLORES DE SEALIZACION:

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6. DESCRIBA EL USO DE LAS FRANJAS DE SEGURIDAD:

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7. GRAFIQUE LAS PRINCIPALES SEALES DE SEGURIDAD:

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