Jurnal Kimia Mulawarman Volume 10 Nomor 2, Mei 2013 ISSN 1693-5616

Kimia FMIPA Unmul

ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA STEROID PADA

FRAKSI N-HEKSANA DARI DAUN KUKANG
(Lepisanthes amoena (HASSK.) LEENH.)
ISOLATION AND CHARACTERIZATION STEROID COMPUND
FROM N-HEXANA FRACTION KUKANG
(Lepisanthes amoena (HASSK.) LEENH.) LEAVES
M. Riza Agus Pramana dan Chairul Saleh

Program Studi Kimia FMIPA Universitas Mulawarman

Jalan Barong Tongkok No. 4 Kampus Gunung Kelua Samarinda, 75123

ABSTRACT
Kukang (Lepisanthes amoena (Hassk) Leenh.) Leaves is one of the species that belonging to the
Sapindaceae family. Traditionally used as drug ulcerate and skin care and also known it has potency of
tironase inhibitor and antioxidant agent, but compound that contained in that plant was unknown. The
purpose of this research was for isolating steroid compound of n-hexane fraction from Kukang (Lepisanthes
amoena (Hassk) Leenh.) leaves and characterizing steroid compound with phytochemical screening, R f,
melting point and IR spectrum. Extraction of 650 grams powder Kukang (Lepisanthes amoena (Hassk)
Leenh.) leaves with methanol yielded 121,82 grams of crude methanol extract. The crude methanol extract
was fractionated with n-hexane and obtained 2,32 grams of n-hexane fraction. Results of phytochemical
screening showed that the n-hexane gave positive result for steroid compound. Separation of steroid
compound in n-hexane fraction by column chromatography with silica gel 60 (70-230 mesh) which eluted
using n-hexane : ethyl acetate (8 : 2) eluent based on Isocratic method and gave nine fractions.
Phytochemical screening by Liebermann Burchard reagent showed F fraction contained steroid compound
and have been crystalized needle. Purification by recrystallization of the F fraction gave the needle white
crystal 10,2 mg with reterdation factor (Rf) n-hexane : CHCl3 (1 : 1) = 0,40 ; n-heksana : CHCl3 (3 : 7) =
0,50 CHCl3 (100%) = 0,71 ; n-hexane : EtOAc (3 : 7) = 0,82 ; EtOAc (100%) = 0,86. Isolated compound
has melting point 143-144C, IR max (cm-1): 960,48; 1056,92; 1380,94; 1461,94; 1639,38; 2866,02;
2935,46; 3433,06. Based on its physical and spectroscopic characterization, the isolated compound is
supposed as sterol of steroid compound.
Keywords: Lepisanthes amoena (Hassk) Leenh., Isolation, Steroid

A. PENDAHULUAN
Steroid merupakan salah satu golongan senyawa
metabolit sekunder yang cukup penting dalam bidang
medis. Beberapa jenis senyawa steroid yang digunakan
dalam dunia obat-obatan antara lain estrogen merupakan
jenis steroid hormon seks yang digunakan untuk
kontrasepsi sebagai penghambat ovulasi, progestin
merupakan steroid sintetik digunakan untuk mencegah
keguguran dan uji kehamilan, glukokortikoid sebagai
anti inflamasi, alergi, demam, leukemia dan hipertensi
serta kardenolida merupakan steroid glikosida jantung
digunakan sebagai obat diuretik dan penguat jantung
(Doerge, 1982). Karena semakin meningkatnya
kebutuhan akan obat-obatan steroid, maka perlu
diupayakan pencarian bahan baku yang lebih banyak
untuk mensintesis obat-obatan steroid dimasa yang akan
datang.
Suku Dayak di Kalimantan Timur sampai saat ini
masih tetap mempertahankan tradisi dengan
memanfaatkan tumbuhan di sekitarnya untuk pengobatan
ataupun perawatan kesehatan. Salah satu tumbuhan yang
bermanfaat dan berpotensi sebagai obat adalah Daun
Kukang yang bernama Latin Lepisanthes amoena
(Hassk) Leenh. Daun Kukang adalah famili dari
Sapindaceae dan secara etnobotani, daun dari tumbuhan
Kukang ini digunakan oleh suku Dayak Tunjung untuk
mengobati bisul dan digunakan untuk perawatan kulit
(skin care) (Setyowati, 2010).
Penelitian ini didasarkan pada hasil penelitian
Setyowati (2010), yang dilakukan terhadap tumbuhan
obat tradisional yang sering digunakan oleh suku Dayak
Tunjung Kalimantan Timur, dimana tercatat 47 jenis
tumbuhan yang terdiri dari 27 suku dan 46 marga yang
dapat dimanfaatkan sebagai tumbuhan obat, salah satu
diantaranya adalah tumbuhan yang berasal dari suku
Sapindaceae, yaitu Lepisanthes amoena (Hassk.) Leenh
yang dikenal sebagai tumbuhan Kukang. Masyarakat
Dayak setempat memanfaatkan daunnya sebagai obat
bisul dan perawatan kulit dengan cara mengambil pucuk
daunnya, lalu dipilin hingga berbusa kemudian dijadikan
sebagai pencuci muka dan buahnya dapat pula
dikonsumsi.
Selain itu penelitian ini didasarkan juga oleh
penelitian yang dilakukan oleh Batubara et al (2011)
terhadap 45 jenis tumbuhan tradisional Indonesia yang
dapat menghambat tirosinase dan berpotensi sebagai
antioksidan, dimana salah satunya adalah tumbuhan

Kimia FMIPA Unmul 85

Riza Agus Pramana dan Chairul Saleh
Kimia FMIPA Unmul
Kukang. Pada penelitian tersebut diketahui daun Kukang
mempunyai nilai IC50 yang relatif kecil sehingga dapat
berpotensi sebagai agen antioksidan.
Penelitian ini dilakukan karena pada penelitan-
penelitian tersebut di atas belum diketahui kandungan
senyawa kimia yang terkandung dalam daun Kukang,
khususnya dalam fraksi n-heksana karena daun Kukang
mengandung beberapa senyawa metabolit sekunder yang
dapat memberikan manfaat terhadap kesehatan
masyarakat. Uji pendahuluan (skrining fitokimia)
kandungan steroid dengan pereaksi Liebermann-
B. METODOLOGI PENELITIAN
2.1. Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini
adalah neraca analitik, botol kaca gelap 2500 mL, batang
pengaduk, tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet tetes,
pompa vakum, rotary evaporator, corong pisah, lampu
UV 254 nm dan 366 nm , statif, klem, Kromatografi
Kolom, botol vial, plat Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
GF254, chamber KLT, melting point apparatus dan
Spektrofotometer Inframerah Shimadzu 8400S.
2.2. Bahan
Bahan-bahan yang digunakan adalah daun
Kukang (Lepisanthes amoena (Hassk.) Leenh.), metanol,
kloroform, n-heksana, etil asetat, H2SO4, CH3COOH
anhidrat, akuades, aluminium foil, kertas saring
Whatman no.42, silika gel 60 (70-230 mesh) dan plat
KLT silika gel GF254.
2.3. Prosedur Penelitian
Sampel daun Kukang (Lepisanthes amoena
(Hassk.) Leenh.) yang telah dikeringkan dan dihaluskan
C. HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1. Ekstraksi dan Fraksinasi Senyawa Steroid
Serbuk daun kukang kering sebanyak 650 gram
diekstraksi dengan metode ekstraksi maserasi. Maserasi
adalah salah satu metode pemisahan senyawa dengan
cara perendaman dengan menggunakan pelarut organik
pada temperatur ruangan. Proses maserasi sangat
menguntungkan dalam isolasi senyawa bahan alam
karena selain murah dan mudah dilakukan, metode ini
sangat tepat digunakan untuk senyawa yang tidak tahan
panas. Sampel dimaserasi dengan pelarut organik
metanol, tujuannya untuk menarik senyawa-senyawa
metabolit sekunder yang terkandung dalam sampel.
Proses maserasi menyebabkan pelarut akan menembus
dinding sel dan masuk kedalam rongga sel yang
mengandung zat aktif. Zat aktif tersebut akan larut karena
adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di
dalam sel dengan di luar sel, maka larutan yang terpekat
akan didesak keluar. Peristiwa tersebut akan berlangsung
terus-menerus sampai terjadi keseimbangan konsentrasi
antara larutan di luar sel dan di dalam sel. Sampel
dimaserasi dengan pelarut metanol pada suhu ruang
selama 3 x 24 jam sambil sesekali dikocok. Pelarut
metanol digunakan sebagai pelarut awal karena metanol
merupakan salah satu pelarut yang dapat melisiskan
membran sel pada tanaman dan memeliki partikel yang
kecil sehingga mampu menembus semua jaringan
86
Isolasi dan Karakterisasi
Burchard terhadap fraksi n-heksana daun Kukang
diketahui bahwa fraksi n-heksana daun kukang positif
mengandung steroid, namun isolasi steroid dari daun
kukang belum dilaporkan.
Oleh karena itu, melihat kegunaan tumbuhan
kukang dalam pengobatan tradisional dan banyaknya
kegunaan dari senyawa steroid, maka perlu dilakukan
penelitian tentang Isolasi dan Karakterisasi Senyawa
Steroid pada Fraksi n-Heksana dari Daun Kukang
(Lepisanthes amoena (Hassk.) Leenh.)
sebanyak 650 gram dimaserasi dengan metanol. Ekstrak
metanol dipekatkan kemudian difraksinasi dengan
menggunakan n-heksana dan masing-masing diuji
streroid. Ekstrak fraksi n-heksana merupakan fraksi yang
positif steroid kemudian dipisahkan dengan cara
kromatografi kolom menggunakan fase diam siliaka gel
dan dielusi secara isokratik menggunakan eluen n-
heksana : etil asetat (8 : 2). Semua fraksi yang diperoleh
dari hasil kromatografi kolom dianalisis menggunakan
kromatografi lapis tipis. Fraksi yang sama digabung
berdasarkan pola noda yang sama dan masing-masing
diuji stroid. Fraksi yang positif steroid (vial 91-115)
menghasilkan kristal dan direkristalisasi dengan
menggunakan n-heksana p.a dan etil asetat p.a sampai
diperoleh steroid yang murni. Uji kemurnian dilakukan
dengan menggunakan KLT dan penentuan titik leleh.
Karakterisasi struktrur molekul dilakukan dengan
menggunakan spektrofotometer inframerah (IR).
tumbuhan untuk menarik semua senyawa aktif keluar.
Metanol dapat melarutkan hampir semua senyawa
organik, baik polar maupun non-polar, metanol mudah
menguap sehingga mudah dipisahkan dari ekstrak (Waji
RA, 2009).
Ekstrak yang diperoleh dari hasil maserasi
tersebut dilanjutkan ke proses pemekatan pelarut dengan
bantuan rotary evaporator pada suhu 40C sampai semua
pelarut metanol menguap sehingga diperoleh ekstrak
kasar metanol dari daun kukang berwarna cokelat tua
sebanyak 121,82 gram. Evaporasi dilakukan pada suhu
35-40C untuk menghindari kerusakan senyawa
metabolit sekunder karena beberapa senyawa metabolit
sekunder mudah rusak pada suhu tinggi (Robinson,
1995).
Selanjutnya setelah diperoleh ekstrak pekat
metanol dilakukan tahap fraksinasi (partisi cair-cair)
dengan menggunakan pelarut n-heksana dan etil asetat
secara berturut-turut. Sebelum fraksinasi ekstrak kasar
metanol dengan beberapa pelarut, sebanyak 50 gram
ekstrak kasar metanol tersebut dilarutkan kembali dengan
metanol. Kemudian ekstrak metanol difraksinasi dengan
n-heksana terlebih dahulu dengan tujuan agar seluruh
senyawa metabolit sekunder yang bersifat nonpolar akan
terlarut dalam pelarut n-heksana. Fraksinasi ini akan
menghasilkan fraksi n-heksana dan fraksi metanol, fraksi
Kimia FMIPA Unmul
Jurnal Kimia Mulawarman Volume 10 Nomor 2, Mei 2013
Kimia FMIPA Unmul
metanol dilanjutkan dengan fraksinasi menggunakan etil
asetat hingga didapatkan tiga fraksi, yaitu fraksi n-
heksana, etil asetat dan fraksi metanol. Selanjutnya setiap
fraksi dipekatkan dengan rotary evaporator.
Tetapi dalam penelitian ini, hanya fraksi n-
heksana yang akan dilanjutkan ke tahap pemisahan dan
pemurnian senyawa metabolit sekunder. Dipilihnya
fraksi n-heksana dimaksudkan agar senyawa yang
memiliki sifat cenderung non polar dalam sampel seperti
senyawa triterpenoid dan steroid terekstrak di dalam
fraksi tersebut sehingga akan mudah untuk dilakukan
tahap isolasi.
3.2. Pemisahan dan Pemurnian Senyawa Steroid
Pemisahan senyawa steroid pada tanaman
kukang dilakukan dengan metode kolom kromatografi
secara isokratik, yaitu dengan menggunakan metode
kromatofrafi yang sama dari tahap awal hingga tahap
akhir kromatografi kolom, dimana eluen yang
digunakan didasarkan hasil uji KLT yang memberikan
noda terbaik. Eluen n-heksana : etil asetat (8 : 2)
memberikan pola pemisahan terbaik karena mampu
memisahkan 5 buah noda yang terkandung pada fraksi
n-heksana dengan jarak pemisahan cukup baik,
sehingga dapat digunakan sebagai fase gerak dalam
pemisahan menggunakan kromatografi kolom. Hal ini
sesuai dengan sistem yang disarankan untuk pemisahan
steroid yaitu n-heksana : etil asetat dengan
perbandingan 8 : 2 (Harborne, 1987)
Proses pemisahan pada tahap isolasi ini
dilakukan terhadap 2 gram fraksi n-heksana dengan
menggunakan fase diam silika gel 60 (70-230 mesh)
dengan panjang kolom 60cm, diameter 2,5cm
menggunakan fase gerak n-heksana-etil asetat (8 : 2)
lalu silika gel dimasukkan ke dalam kolom yang
didasarnya telah diberi kapas dan didiamkan selama
semalam untuk memadatkan silika di dalam kolom
(Ratnasari, 2008). Setelah itu sampel dilarutkan dengan
sedikit pelarut n-heksana-etil asetat (8 : 2) dan
dimasukkan ke dalam kolom dan dielusi dengan metode
Isokratik.
Setiap fraksi ditampung 5 mL dan diperoleh
sebanyak 250 vial. Vial-vial yang diperoleh diangin-
anginkan selama beberapa hari agar pekat dan mudah
terdeteksi pada saat monitoring KLT. Tiap-tiap fraksi
dianalisis secara kromatografi lapis tipis (KLT) dengan
fase gerak n-heksana:etil asetat (8 : 2). Fraksi-fraksi
dengan pola Rf yang sama digabungkan menjadi satu
kemudian pelarutnya diuapkan. Dari 250 fraksi
diperoleh 9 fraksi gabungan. Kemudian masing-masing
fraksi gabungan diuji kembali dengan KLT dengan
eluen n-heksana : etil asetat (8 : 2). Adapun
kromatogram lapis tipis fraksi-fraksi yang diperoleh
dikelompokkan dapat dilihat pada Gambar 4.2.
Fraksi-fraksi yang menampakkan pola sama
pada kromatogram lapis tipis digabungkan dan
diuapkan pelarutnya sehingga diperoleh 9 fraksi, yaitu
fraksi A (1-13) seberat 193,6 mg, fraksi B (14-23)
seberat 95,6 mg, fraksi C (24-39) seberat 34,7 mg, fraksi
D (40-54) seberat 33,5 mg, fraksi E (55-90) seberat 95,5
mg, fraksi F (91-115) seberat 91,3 mg, fraksi G (116-
Kimia FMIPA Unmul
ISSN 1693-5616
133) seberat 52,2 mg, fraksi H (134-175) seberat 84,9
mg dan fraksi I (176-250) seberat 145,7 mg.
Kesembilan fraksi dilakukan uji steroid.
Dari kesembilan fraksi tersebut terdapat satu
fraksi yang paling murni karena telah terbentuk kristal
jarum yaitu fraksi F, oleh karena itu fraksi F dilanjutkan
ke tahap pemurnian. Kemudian terhadap fraksi F
dilakukan tahap rekristalisasi untuk memurnikan kristal
fraksi F. Rekristalisasi dilakukan dengan cara terlebih
dahulu kristal dicuci dengan pelarut n-heksana (p.a) lalu
kristal yang telah bersih dari pengotor dilarutkan
dengan etil asetat (p.a). Larutan yang diperoleh
dipindahkan ke dalam vial baru dan ditaruh di dalam
desikator sampai seluruh pelarut teruapkan dan
terbentuk kristal kembali. Kristal yang diperoleh berupa
keristal jarum berwarna putih seberat 10,2 mg.
Kemudian terhadap fraksi tersebut dilakukan uji
kemurnian dengan menggunakan kromatografi lapis
tipis.
3.3. Karakterisasi Senyawa Steroid
Isolat murni yang diperoleh dari fraksi n-heksana
sebanyak 10 mg berupa kristal berwarna putih berbentuk
jarum dengan titik leleh 147-148C. Uji fitokimia dengan
menggunakan pereaksi Liebermann-Burchard
memberikan warna hijau, menunjukkan bahwa isolat
tersebut positif steroid.
Hasil spektrum inframerah memperlihatkan
bahwa senyawa yang diperoleh menunjukkan serapan
melebar pada daerah bilangan gelombang 3433,06cm-1
yang diduga merupakan serapan ulur (stretching) dari
gugus O-H (3230 3550cm-1). Dugaan ini diperkuat oleh
munculnya serapan uluran C-OH siklik pada bilangan
gelombang 1056,92cm-1 (1085-1030cm-1) (Socrates,
1994).
Hasil analisa juga menunjukkan keberadaan
serapan rentangan CH alifatik dengan adanya serapan
pada bilangan gelombang 2965,46cm-1 dan 2866,02cm-1,
hal ini memberikan petunjuk kemungkinan adanya gugus
metil (CH3) dan metilena (CH2). Dugaan ini diperkuat
oleh adanya serapan pada daerah bilangan gelombang
1461,94cm-1 yang menunjukkan adanya tekukan pada C-
H dari CH2 dan pita serapan pada daerah bilangan
gelombang 1380,94cm-1 yang menunjukkan adanya
tekukkan pada C-H dari CH3 (Socrates, 1994).
Pita serapan pada bilangan gelombang
1639,38cm-1 yang tajam menunjukkan adanya uluran
C=C non konjugasi (1620-1680cm-1). Dugaan ini
diperkuat dengan adanya serapan pada bilangan
gelombang 3028,03cm-1 yang menunjukkan adanya
uluran =C-H dan pada 960,48cm-1 yang menunjukkan
adanya tekukan =C-H (1000-650) (Saleh, 2007).
Dari hasil interpretasi spektrum infra merah di
atas, maka disimpulkan bahwa senyawa isolat
mengandung gugus hidroksil (OH), alkil (CH2 dan CH3),
C-O alkohol sekunder dan alkena (C=C) tak terkonjugasi
dan diduga senyawa steroid tersebut merupakan steroid
yang termasuk golongan sterol (steroid alkohol)
dikarenakan adanya gugus OH (alkohol sekunder) yang
terdapat pada senyawa tersebut.
87
Riza Agus Pramana dan Chairul Saleh Isolasi dan Karakterisasi
Kimia FMIPA Unmul

D. KESIMPULAN
Senyawa steroid hasil isolasi dari fraksi n-heksana
dari daun kukang (Lepisanthes amoena (Hassk.) Leenh.)
dapat diisolasi melalui melalui proses maserasi,
dilanjutkan dengan proses fraksinasi, lalu dilakukan
proses pemisahan dan pemurnian melalui proses
kromatografi kolom dan rekristalisasi sehingga diperoleh
kristal berbentuk jarum berwarna putih sebanyak 10,2
mg. Dan brdasarkan hasik uji fitokimia dan hasil
karakterisasi dengan menggunakan spektrofotometri
inframerah menunjukkan adanya gugus : hidroksil (OH),
alkil (CH2 dan CH3), C-O alkohol sekunder dan alkena
(C=C) tak terkonjugasi sehingga diduga senyawa
metabolit sekunder pada fraksi n-heksana dari daun
Kukang (Lepisanthes amoena (Hassk.) Leenh.)
merupakan senyawa steroid golongan sterol.

DAFTAR PUSTAKA
1. Batubara, I, Darusman,L.K, Mitsunaga, T, Rahminawagti, M, and Djauhari, E. 2010. Potency of Indonesian
Medicinal Plant as Tyrosinase Inhibitor and Antioxidant Agent. Journal Of Biological Sciences.10 (2) : 138-144.
2. Cole, A.R.H. 1963. Application of Infrared Spectroscopy dalam Elucidation of Structures by Physical and Chemical
Methods. Part I. Newyork: Interscience Publishers.
3. Doerge, F. 1982. Buku Teks Wilson Dan Gisvold Kimia Farmasi Dan Medicinal Organic. Semarang: Institut
Keguruan Dan Ilmu Pendidikan Press.
4. Dono, S. 2011. Isolasi Senyawa Steroid dari Daun Sirih Hutan (Piper aduncum Linn). Skripsi Sarjana. Samarinda
: Universitas Mulawarman Harbone,J. B. 1987. Metode Fitokimia. Bandung: ITB.
5. Marjang, Y. 1988. Isolasi Komponen Aktif Pada Tumbuhan Baluin (Brucia javanica L Meer) Yang Aktif Untuk
Pembatasan Kelahiran. Laporan Penelitian. Departemen Pendidikan Dan Kebudayaan, Pusat Penelitian Universitas
Andalas, Padang.
6. Saleh, C. 2007. Isolasi dan Penentuan Struktur Senyawa Steroid dari Akar Tumbuhan Cendana (Santalum album
Linn). Desertasi. Medan: Universitas Sumatera Utara.
7. Setyowati, F. 2010. Etnofarmakologi dan Pemakaian Obat Suku Dayak Tunjung di Kalimantan Timur. Artikel.
Media Litbang Kesehatan Volume XX no. 3
8. Socrates, G. 1994. Infrared Characteristic Group Frequencies Tables and Charts. Newyork: John Wiley and Sons.

88 Kimia FMIPA Unmul

Jurnal Kimia Mulawarman Volume 10 Nomor 2, Mei 2013 ISSN 1693-5616
Kimia FMIPA Unmul

LAMPIRAN

Gambar 1. Spektrum Inframerah Isolat Fraksi F

Bilangan Gelombang (cm-1) Bentuk Penempatan

No. Intensitas
Pada Spektra Pada Pustaka Pita Gugus Terkait
O-H (ikatan
1 3433,06 3550-3230 Melebar Sedang hidrogen
antarmolekul
2 3028,03 3100-3000 Tajam Sedang =C-H
3 2935,46 Tajam Kuat C-H (pada CH3)
2950-2850
4 2866,02 Tajam Sedang C-H (pada CH2)
5 1639,38 1680-1620 Tajam Sedang C=C non konjugasi
6 1461,94 1480-1440 Tajam Sedang C-H pada (CH2)
7 1380,94 1385-1360 Tajam Sedang C-H pada (CH3)
C-OH (alkohol
8 1056,92 1085-1030 Tajam Sedang
siklik sekunder)
9 960,48 1000-650 Tajam Sedang =C-H out of plane

Kimia FMIPA Unmul 89