UNIVERSIDAD DE COSTA

RICA ESCUELA DE QUMICA

SECCIN DE QUMICA ORGNICA

LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA GENERAL I

Valeria Arias Calvo

Prctica # 10. Cromatografa

Resumen

Se realiz una cromatografa de capa fina y analgsicos mediante patrones de acetaminofn,

ibuprofeno, cafena, aspirina y cafiaspirina disueltos en etanol los cuales se colocaron en un
frasco de desarrollo con 95% acetato de etilo-5% cido actico. Se procedi a revelar la muestra
con luz ultravioleta donde se obtuvieron los siguientes resultados de Rf 0,875, 0,575, 0,550,
1,00, 0,5 (cafiaspirina/cafena) y 0,95 (cafiaspirina/aspirina) respectivamente. Se realiz
cromatografa de pigmentos naturales mediante la extraccin con 15 ml de etanol al 95% del
pigmento de 10,01g espinaca en donde se logr observar las distintas tonalidades que
proporciona la espinaca. Se realiz la separacin de pigmentos por cromatografa de columna
de donde se obtuvieron distintas tonalidades mediante la extraccin. Se realiz cromatografa de
papel para los distintos colores de M&M para los cuales se calcul el Rf obteniendo como
resultados azul 0,86, verde 0,47 y azul 0,8, amarillo 0,44, rojo 0,15 y caf para el cual el rojo
obtuvo 0,17 y el anaranjado 0,3.

Introduccin

La cromatografa corresponde a un mtodo de separacin de varios elementos que forman parte

de una mezcla; esta cuenta con gran capacidad de selectividad fundamentada en las
caractersticas qumicas y fsicas presentes en la matriz presentndose una mayor importancia a
la capacidad de interaccin entre los componentes con una sustancia. Esta se lleva a cabo
mediante el uso de dos fases una mvil compuesta por variedad de elementos y una fase
estacionaria, comnmente un slido, el cual no presentara cambios relevantes con respecto a la
aplicacin de la tcnica. Ahora bien, la mezcla por analizar se conservar con el componente
del sistema con el cual presente una mayor afinidad ya sea tanto para la fase slida como para la
mvil por lo que para una correcta aplicacin de la tcnica se debe de estudiar las caractersticas
bsicas de los elementos del anlisis. Es decir, esta depender de las variaciones para cada
componente con respecto a la retencin con la fase slida y a su vez la afinidad de estos con la
fase mvil. (Romero, 2002)
Durante el anlisis se introduce una muestra de inters en una fase mvil con el fin de que esta
sea transportada por medio de una columna en la cual se encuentra expandida la fase
estacionaria, una vez que esta es introducida al sistema experimenta interacciones entre la fase
mvil y la estacionaria hasta que ambas fases han procedido a la escogencia apropiada de los
componentes de la muestra procedan a separarse gradualmente en forma de bandas en la fase
mvil en donde una vez finalizado el anlisis los componentes emergen en relacin con la
interaccin de la fase estacionaria; en donde el menos retardado emerger primero mientras que
el mas retenido eluye por ultimo. (Durst & Gokel , 1985)
Ahora bien, la distribucin de un soluto entre dos fases se muestra como resultado del equilibrio
de las fuerzas entre las molculas del soluto y de cada fase reflejando de esta manera la
repulsin o atraccin entre las molculas o iones de las fases presentes. Dichas fuerzas podran
corresponder a fuerzas de carcter polar mediante momentos dipolares o inducidos y de
dispersin de London. (Romero, 2002)
En los distintos tipos de cromatografa la separacin de las mezclas se logra atraves de la
exposicin del sistema en anlisis a un medio bifsico que logra llegar a un equilibrio en donde
las fases que intervienen en la separacin podrn corresponder a dos lquidos inmiscibles lo cual
correspondera a una extraccin mediante una cromatografa liquido-liquido, una fase slida y
una gaseosa correspondiente a una cromatografa gas-solido, una fase liquida y una gaseosa
siendo esta una cromatografa gas-liquido o bien una entre una fase slida y una liquida siendo
as una cromatografa liquido-solido. (Romero, 2002)
Una manera de generar una clasificacin de tipos de cromatografa es mediante la metodologa
y materiales aplicados de los cuales se logra la identificacin de dos grandes grupos entre los
que se encuentra la cromatografa de particin para la cual la fase estacionaria corresponde a un
lquido fijo a una superficie solida ya sea por mtodos fsicos o qumicos y una fase mvil la
cual puede ser desde un lquido hasta un gas. La cromatografa de particin ha sido de gran uso
en anlisis cuantitativos de aminocidos y componentes vegetales. Por otro lado, en la
cromatografa por absorcin su fase estacionaria corresponde a un slido mientras que su fase
mvil a un medio liquido o gaseoso. (Romero, 2002)
Ahora bien, un aspecto fundamental para la aplicacin de la tcnica de cromatografa es la
correcta escogencia del adsorbente y de la fase mvil ya que estos aseguran una mejor
separacin de los componentes de la matriz. Por otro lado, una vez seleccionado el sistema se
debe de buscar que la distancia recorrida por cada componente sea mayor con el fin de obtener
mejor calidad en cuanto al anlisis de la muestra; para lo cual es necesario realizar una correcta
seleccin de placa con el fin de que una vez seleccionada esta se logre marcar el punto de
aplicacin para proceder a esta misma. Ahora bien, una vez aplicada la muestra se debe de
trasladar a una cmara de desarrollo saturada la cual contiene el eluyente y una atmosfera
saturada de disolvente con el fin de obtener un sistema en equilibrio adecuando para realizar el
anlisis. Ahora bien, una vez concluido el anlisis se procede a la revelacin la cual es necesaria
para gran mayora de compuestos orgnicos puesto que estos carecen de color por lo que se
puede utilizar luz ultravioleta o bien una cmara de yodo con el fin de poder analizar los
resultados obtenidos. Por otro lado, si se emplean pigmentos cuyo origen es vegetal estos al
poseer color no presentan la necesidad de revelacin para la muestra. (Ocampo, Rios , Betancur
, & Ocampo , 2008)

Seccin experimental

El procedimiento se tom d e l M a n u a l d e l a b o r a t o r i o d e q u m i c a o r g n i c a

g e n e r a l I , p a g i n a 96, experimento cromatografa. Las modificaciones realizadas

fueron las siguientes: .

Resultados
Cuadro I. Resultados obtenidos mediante la cromatografa con TLC y analgsicos

Sustancia Distancia Rf
(cm)
Aspirina 4 1
Ibuprofeno 2,3 0,575
Cafena 2,2 0,55
Acetaminofn 3,5 0,875
Cafiaspirina/cafena 2,0 0,5
Cafiaspirina/aspirina 3,8 0,95
*Nota aclaratoria: el dd para esta seccin correspondi a 4 cm.

Muestra de clculo para el Rf:

1 4
= = =1
4

4,5
4
4 3,8
3,5
3,5

2,5 2,3
2,2
2
2

1,5

0,5
0
0
Aspirina Ibuprofeno Cafeina Acetaminofen Caaspirina/ Caaspirina/
cafeina aspirina

Distancia Rf

Figura 1. Resultados de distancia en centmetros y Rf obtenidos mediante la cromatografa con

TLC y analgsicos.

Cuadro II. Resultados obtenidos mediante la cromatografa de papel con los distintos colores
de M&M.

color distancia recorrida (cm) rf

azul 7.8 0.86
amarillo 4 0.44
rojo 1.4 0.15
verde/azul 7.2 0.47
verde/amarillo 4.3 0.8
caf/rojo 1.6 0.17
caf/anaranjado 2.7 0.3
*Nota aclaratoria: el dd para esta seccin correspondi a 9 cm.

Muestra de clculo para el Rf:

1 7.8
= = = 0.86
9

7,8
8
7,2
7

5
4,3
4
4

3 2,7

2 1,6
1,4
0,86 0,8
1 0,44 0,47
0,15 0,17 0,3

0
azul amarillo rojo verde/azul verde/amarillo caf/rojo caf/anaranjado

distancia recorrida (cm) rf

Figura 2. Resultados de distancia en centmetros y Rf obtenidos mediante la cromatografa de

papel con los distintos colores de M&M.
Figura 3. Fotografa de los resultados de la cromatografa de papel para los distintos colores de
M&M.

Figura 4. Fotografa de los resultados de la cromatografa de columna para el extracto de

espinacas.
Discusin

En la cromatografa de capa fina (TLC) y analgsicos se procedi a la separacin de los componentes de

los distintos patrones de etanol con acetaminofn, ibuprofeno, cafena, aspirina y cafiaspirina a travs de
la migracin diferencial para cada capa fina del absorbente la cual se encuentra retenida en una
superficie plana. Este tipo de cromatografa cuenta con dos tipos de fases una mvil el cual es el
disolvente colocado en la cmara de desarrollo el cual fue una mezcla de 95% acetato de etilo-5% cido
actico y una estacionaria la cual consisti en una placa de cromatografa 6x6 cm, una placa de aluminio
recubierta con gel de slice HF254, en la cual se aplicaron las muestras. Esta separacin se puede llevar a
cabo puesto que algunos componentes de la muestra tienden a una mayor retencin por parte de la fase
estacionaria mientras que otros cuentan con mayor movilidad con respecto a la fase mvil. (Durst &
Gokel , 1985) Ahora bien, una vez montada las muestras en la placa cromatografa se debe de marcar
con grafito, esto con el fin de que no se mezcle los componentes del marcador con la mezcla, una lnea a
1cm del extremo inferior y a 1 cm del extremo superior. Una vez marcada la lnea inferior se colocan las
muestras las cuales se colocaron en el siguiente orden acetaminofn, ibuprofeno, cafena, aspirina y
cafiaspirina. Una vez montadas las muestras en la se coloca la placa en la cmara de desarrollo en donde
se ha creado una atmosfera en donde se espera hasta que el disolvente se desplace hasta el frente de
disolvente. Seguido a esto se debe de pasar la muestra por luz ultravioleta y posterior a esto se pasa por
una cmara de yodo esto porque las lminas de yodo resultan sensibles ante los compuestos orgnicos de
las muestras que se encuentran en la placa dando como resultados productos oscuros en las lminas.
(Durst & Gokel , 1985) Ahora bien, la luz fluorescente es amortiguada por los componentes de cada
muestra exhibiendo en la totalidad de la lmina a excepcin de los lugares donde se encuentran los
componentes de la muestra. Una vez analizada la muestra y revelada se debe de marcar la mxima altura
alcanzada por cada sustancia por el arrastre del disolvente para poder calcular la relacin frontal Rf para
el cual entre mayor sea su valor mejor ser la resolucin de la muestra. Este es calculado como el
coeficiente de la distancia recorrida por el componente el cual se mide desde el centro de la mancha y el
frente del disolvente. El valor de la relacin frontal depende del disolvente empleado, as como del
espesor del absorbente y del tipo de capa, la cual durante la experimentacin correspondi a gel de slice.
(Ocampo, Rios , Betancur , & Ocampo , 2008)
1
=

Ecuacin 1. Ecuacin para el clculo de la relacin frontal.
Imagen 3. Revelado con luz ultravioleta y revelado con cmara de yodo respectivamente.

Una de las ventajas es que cuenta con equipo relativamente sencillo por lo que no requiere de una
alta inversin econmica; asimismo este es un mtodo de gran rapidez sin embargo puede
presentar errores en los resultados lo que se puede dar por una migracin de disolvente no regular,
tiempo de traslado, calidad de placa o lectura de esta misma. (Durst & Gokel , 1985)
Ahora bien, antes de ingresar las placas a las cmaras de yodo se debe de evaporar todo el
disolvente puesto que de esta manera se evitan manchas que generen incertidumbre sobre la marca
final de la muestra por lo que se deben de buscar los disolventes ms voltiles con el fin de que
estos se evaporen antes del ingreso a la cmara. (Durst & Gokel , 1985)
Ahora bien, el disolvente utilizado en la experimentacin
correspondi a 95% acetato de etilo-5% cido actico el cual
gracias al acetato de etilo este cuenta con una polaridad baja
Figura 7. Componentes principales mientras que el absorbente de gel de slice cuenta con una
del disolvente utilizado polaridad intermedia. Tomando en cuenta que un componente
no polar vieja ms rpido que uno polar por lo que se elude
primero por lo que los primeros componentes en separarse de la muestra son los que cuentan con
una polaridad baja. Ahora bien, siendo este una mezcla relativamente voltil ha sido seleccionado
como la mejor mezcla para el anlisis. (Durst & Gokel , 1985)
Por otro lado, con respecto a la cromatografa de pigmentos naturales de las plantas, la cual
correspondi a la espinaca durante la experimentacin, se procedi primeramente a la extraccin
del pigmento de la espinaca mediante la deshidratacin con 15ml de etanol al 95% y se procede a
triturar la espinaca junto con el etanol; seguido a esto se debe de filtrar y una vez recolectado el
filtrado se debe de agregar ter de petrleo y hexano por lo cual se debe de revolver una vez hecho
esto se debe de separar la fase orgnica de la inorgnica por lo que si se observan dos fases se debe
de proceder a extraer la inferior con una pipeta Pasteur. Ahora bien, una vez separa la fase orgnica
se debe de calentar con el fin de obtener una mezcla de mayor pureza y concentracin. (Viera,
2014)
Posteriormente, se tom la mezcla concentrada y se procedi a la separacin de pigmentos por
medio de la cromatografa de columna la cual se fundament en la utilizacin de diversos filtros
para la obtencin de los distintos tipos de pigmentos de la espinaca. Ahora bien, la principal
diferencia entre la cromatografa fina y de columna consiste en que en la columna el absorbente se
debe de introducir en un tubo o en una columna mientras que en la cromatografa de capa fina este
se debe de depositar en forma de una capa delgada sobre una superficie plstica o de vidrio. (Viera,
2014) Asimismo, existe otra variacin entre ambas tcnicas que es importante remarcar la cual es
que para la cromatografa de columna la fase mvil se traslada hacia abajo por la columna es decir
que la fuerza motriz que impulsa el sistema es la gravedad mientras que en la cromatografa de capa
fina la accin capilar del absorbente hace que el disolvente ascienda desde el deposito que se
encuentra en el fondo de la cmara de desarrollo. Para estas el factor ms importante es el
establecimiento del equilibrio del sistema. Cabe mencionar que a mayor tamao de columna o placa
cromatografa mejor ser la separacin de la muestra puesto que las fuerzas que llevan a cabo la
separacin tienen ms posibilidad de interaccin sobre cada componente. (Durst & Gokel , 1985)
Existen dos tipos de absorbentes comunes el gel de slice o almina, ambos cuentan con el mismo
mtodo de actuacin la separacin se da principalmente por retencin de los componentes en la
superficie mediante una mezcla de fuerzas acido-base de Lewis las cuales actan con distinta
intensidad sobre las muestras. Ahora bien, hay que tomar en cuenta que entre ms grueso sea el
absorbente ms rpido pasara el disolvente sin embargo hay que tomar en cuenta que los
absorbentes gruesos tienden a producir una superficie menor que los finos por lo que el punto de
interaccin del sistema se vera reducido. Asimismo, al proporcionar un paso rpido del disolvente a
travs del absorbente se disminuye el punto de alcance del equilibrio del sistema lo que puede
producir que no sea de total eficacia la separacin de ciertas mezclas a medida que se da un
aumento en el tamao de la partcula. (Durst & Gokel , 1985)
Ahora bien, en la cromatografa de columna se logra la separacin de los componentes de la
muestra mediante la absorcin de estos a la superficie del solido con afinidades diferentes, es decir
la fuerza de unin con el medio en donde la fase mvil se desplazar y disolver los componentes en
base a su afinidad con la fase solida del sistema y la solubilidad con la que la sustancia cuente con
respecto a la superficie. Para la cromatografa de columna se utiliz como columna un depsito de
gel de slice ya que este cuenta con la capacidad de crear canales de poros que cuentan con gran
variedad de tamaos permitiendo que las molculas de distintos tamaos puedan atravesarlo.
(Romero, 2002)
Ahora bien, las hojas de espinacas cuentan con cuatro pigmentos principales las xantofilas,
carotenos, clorofila A y B; por lo que como se muestra en la figura 4 para la extraccin de los
pigmentos que se presentan en la espinaca el que mayor recorrido realizo fue la xantofila la cual
corresponde al color amarillo que se logra apreciar; seguido de la gran variedad de verdes ms
ligeros y verdes oscuros los cuales corresponden a las clorofilas A y B respectivamente. (Ocampo,
Rios , Betancur , & Ocampo , 2008)

Figura 8. Estructura de las xantofilas, clorofilas A y B presentes los pigmentos de la espinaca.

Como se muestra en la figura 8 las xantofilas cuentan con un menor tamao a comparacin con las
clorofilas; adems estas al estar compuestas nicamente de cadenas de carbonos no poseen
polaridad puesto que carecen de algn compuesto en su estructura de mayor electronegatividad
que pueda atraer a los electrones siendo esto el motivo por lo que logran una mayor recorrido en
comparacin con las clorofilas A y B las cuales poseen una polaridad mayor y un mayor tamao por
lo que su trasporte a travs de los poros de la capa de slice es de un grado mayor de dificultad.
(Ocampo, Rios , Betancur , & Ocampo , 2008)
Asimismo, el gel de slice posee un grado de polaridad relativamente importante con respecto a la
xantofila siendo este otro de los motivos por el cual esta se elude de primera puesto que no
presenta interaccin alguna con la columna. Ahora bien, las clorofilas A y B presentan una nica
diferencia en su estructura la cual consiste en que la clorofila A presenta un grupo funcional metilo
aadido a su estructura para el cual en la misma posicin que este la clorofila B cuenta con un
aldehdo aadido; lo cual significa una gran variacin tomando en cuenta la interaccin con la
superficie de slice puesto que el aldehdo cuenta con mayor polaridad que el grupo metilo por el
oxgeno que posee siendo esta la causa de que la clorofila B sea la que se encuentra al final de la
columna siendo este el componente ms polar por lo que tendera a eludir de ultimo. (Durst & Gokel
, 1985)
Por otro lado, la cromatografa de papel la cual se realiz para los distintos colores de M&M est
relacionada tanto con la cromatografa de columna como con la de capa fina sin embargo su principal
diferencia se encuentra en que en la cromatografa de papel para la realizacin de la separacin se
procede a emplear un sistema de extraccin continua en el que la celulosa se impregna con una fase
inmvil, la cual durante la experimentacin consisti en agua. Una vez que la fase mvil orgnica pasa
por la fase acuosa estacionaria los compuestos en anlisis proceden a una reparticin entre ambas fases.
Por lo que un compuesto con mayor afinidad con el agua, componentes polares, permanecern mayor
tiempo en la fase inmvil acuosa por lo que tendern a emigrar en las ltimas posiciones. Es por esto que
los componentes con menos afinidad con el agua emigran primero. (Durst & Gokel , 1985)
Ahora bien, entre los colorantes utilizados en los distintos colores de M&M E100 conocido como
colorante de crcuma proporciona el color amarillo, E120 obtenido del cido carminico extrado
de la cochinilla u otros insectos es el que proporciona el color rojo, E133 consiste en un colorante
de clasificacin sinttica utilizado para proporcionar color azul a los alimentos este consiste en una
sal di sdica altamente soluble en agua elaborada a partir de los sub-derivados del petrleo
principalmente en hidrocarburos aromticos , E160a encontrado principalmente en la zanahoria y
algas proporciona el color anaranjado a los alimentos, E160e puede ser un colorante artificial o
sinttico que proporciona un color del anaranjado al rojo; este al ser ingerido por el organismo es
transformado en vitamina A y E171 corresponde al oxido de titanio el cual corresponde a un
colorante natural que proporciona un color blanco puro. (Aditivos alimentarios , 2017) Los colorantes
empleados en los M&Ms presentan alta solubilidad en agua, es decir son altamente polares por lo que
la tcnica de cromatografa de papel corresponde a un buen mtodo de anlisis. Sin embargo, como se
puede apreciar en la figura 3 el colorante que proporciona el color rojo cuenta con una polaridad menor
con respecto al anaranjado que a su vez cuenta con una polaridad menor en comparacin con el amarillo
el cual es relativamente menos polar que el colorante que proporciona el color azul el cual es el que
presenta una mayor polaridad; es decir mayor afinidad con la fase inmvil acuosa. (Durst & Gokel ,
1985)
Este tipo de tcnica presenta varias ventajas entre ellas que su costo es sumamente bajo y que resulta de
gran eficacia con sustancias polares; asimismo es de gran facilidad separar pequeas cantidades de
materiales solubles en agua como aminocidos, cidos nucleicos y azucares. Ahora bien, uno de los
principales inconvenientes con respecto a esta tcnica consiste en que los cronogramas son relativamente
lentos reduciendo de esta manera la satisfaccin del analista. (Durst & Gokel , 1985)

Conclusiones

Se realiz una cromatografa de columna para la cual se estableci como absorbente gel de slice
tomando en cuenta que entre mayor sea el largo de la columna mayor ser la capacidad de separacin del
sistema. Asimismo, se logr determinar que los componentes que emigraran primero durante la
cromatografa de columna corresponden a los de menor polaridad las cuales son las xantofilas mientras
que los de mayor polaridad, clorofilas A y B, sern las que emigraran de ultimas obteniendo as un
recorrido menor a travs del sistema.
Se realiz una cromatografa de capa fina (TLC) y analgsicos en donde se observ que sus componentes
de menor afinidad con el adsorbente son los que emigraran primero mientras que los de mayor afinidad
emigraran de ltimos.
Ahora bien, se debe de colocar la muestra ante un aumento de temperatura con el fin de disolver todo el
disolvente de la mezcla para lograr resultados ms concretos con un grado menor de incertidumbre
puesto que se reducen la posibilidad de que se den manchas confusas en los resultados luego de la
revelacin.

Referencias

Aditivos alimentarios . (agosto de 2017). Obtenido de colorantes : http://www.aditivos-alimentarios.com/

Durst, H., & Gokel , G. (1985). Quimica Organica Experimental . Barcelona : Editorial Revert S.A.

Ocampo, R., Rios , L., Betancur , L., & Ocampo , D. (2008). curso practico de quimica organica . Manizales :
Universidad de Caldas .

Romero, S. A. (2002). universidad nacional autonoma de mexico. Obtenido de

http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/Cromatografia.pdf

Viera, J. V. (2014). Extraccin y separacin de pigmentos de los cloroplastos. . nuevo chimbote : universidad
nacional del santa.