REA DE CIENCIAS QUMICO

BIOLGICAS

LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR

PRCTICA 4

OBSERVACIN DE CLULAS
SANGUINEAS

DOCENTE: ME MARISELA MORENO GALDEANO

 TAMPICO, TAMAULIPAS, MEXICO A 6 DE MARZO DE 2011

OBJETIVOS

Realizar la tcnica de extensin o frotis sanguneo.

Reconocer las caractersticas de las clulas sanguneas y sus funciones.

Practicar la tcnica de tincin mediante el set de tincin rpida para frotis

sanguneo Diff-Quik.

INTRODUCCIN

Como todo tejido la sangre se compone de clulas y componentes extracelulares

(su matriz celular). Estas dos fracciones tisulares vienen representadas por:

Los elementos formes tambin llamados elementos figurados : son

elementos semislidos (es decir, mitad lquidos y mitad slidos) y
particulados (corpsculos) representados por clulas y componentes
derivados de clulas.

El plasma sanguneo: un fluido traslcido y amarillento que representa la

matriz extracelular lquida en la que estn suspendidos los elementos
formes.

Los elementos formes constituyen alrededor del 45% de la sangre. Tal magnitud
porcentual se conoce con el nombre de hematocrito (fraccin "celular"), adscribible
casi en totalidad a la masa eritrocitaria. El otro 55% est representado por el
plasma sanguneo (fraccin acelular).

Los elementos formes de la sangre son variados en tamao, estructura y funcin,

y se agrupan en:

las clulas sanguneas, que son los glbulos blancos o leucocitos, clulas
que "estn de paso" por la sangre para cumplir su funcin en otros tejidos;

los derivados celulares, que no son clulas estrictamente sino fragmentos

celulares; estn representados por los eritrocitos y las plaquetas; son los
nicos componentes sanguneos que cumplen sus funciones estrictamente
dentro del espacio vascular.
Las tinciones hematolgicas son un conjunto de procesos que conducen a la
coloracin de las estructuras que componen las clulas sanguneas. Esto tiene por
objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y
permite por tanto que las clulas sean visual izadas microscpicamente con mayor
facilidad.

La prctica del frotis sanguneo, tambin llamado extendido, es de gran

importancia en hematologa ya que el diagnstico de muchas enfermedades
hematolgicas puede realizarse con slo observar las caractersticas morfolgicas
de las clulas sanguneas.

ANTECEDENTES

Paul Ehrlich, es el autor de la tincin que posibilit el mtodo diagnstico de la

baciloscopa el cual fundamento en el carcter alcohol-cido resistente a la
decoloracin propio del bacilo, para evidenciar utiliz cido ntrico y tio con
violeta de genciana o fuesina, en presencia de anilina disuelta en agua. Este genio
alemn, naci el 14 de marzo de 1854 en Strehlen. Silesia, fue siempre un gran
aficionado a los colorantes y a las tinciones. De hecho su tesis para recibir su ttulo
de mdico, vers sobre la teora y la prctica de las tinciones de los tejidos
animales. El fue el primero que clasific los colorantes en cidos, bases y neutros,
y el mismo que revolucion las tinciones hematolgicas. En 1882 fue la fecha en
que comienza la inslita historia de la tincin.

Hoy en la actualidad la realizacin de extensiones y tinciones es prctica habitual

en el laboratorio. Pese a no realizarse a todas las muestras, al no ser considerado
procedimiento de rutina, es necesario en aquellos casos en los que se detecte
mediante anlisis previos alguna alteracin.

La correcta realizacin, as como una buena interpretacin de lo observado,

permite en muchos casos el diagnstico de hematopatas.
 OBTENCION Y TINCION DE UN FROTIS DE SANGRE
IDENTIFICACIN DE LAS CLULAS SANGUNEAS

TIPO CELULAR ASPECTO TAMAO ABUNDANCIA FUNCIONES

RELATIVA
ERITROCITOS Forma de
disco 7 m
bicncavo, 700 por cada Transporte de oxgeno
anucleados, de leucocito 98% y, secundariamente
dan color referencia CO2 25%
rojo a la
sangre
LEUCOCITOS 1 por cada 700
eritrocitos
GRANULOCITOS

Ncleo con
3-5 lbulos Fagocitosis. Pueden
unidos por un ~1 de cada 2 abandonar el torrente
filamento. 12 m Leucocitos circulatorio y penetrar en
NEUTRFILOS
Granulacin los tejidos para realizar
muy fina, all la fagocitosis.
difcilmente
perceptible.

Ncleo con
dos lbulos
unidos por un Fagocitan los complejos
delgado antgeno-
filamento. ~3 de cada 100 anticuerpo. Su nmero
EOSINFILOS Las 9 m Leucocitos aumenta
granulacione en las reacciones
s acidfilas alrgicas
dan una y en las infecciones
coloracin parasitarias.
rojiza al
citoplasma.

BASFILOS Ncleo
voluminoso Contienen heparina
bilobulado. (anticoagulante)
 Los grnulos e histamina
basfilos (vasodilatador).
son gruesos, 12 m ~1 de cada 200 Responsables de los
tien el Leucocitos cambios
citoplasma producidos en los vasos
de color sanguneos durante los
oscuro y procesos
frecuenteme inflamatorios.
nte dificultan
la
observacin
del ncleo.

Ncleo
esfrico que Producen anticuerpos.
ocupa Son responsables
LINFOCITOS la mayor ~1 de cada 3 del rechazo de los
parte de la Leucocitos injertos y los trasplantes
clula. 6-8 m
Citoplasma
muy escaso.
Ncleo
ovoide, en Fagocitosis. Se vuelven
forma de muy
rin o de activos despus de
herradura. El ~1 de cada 15 atravesar la
MONOCITOS ncleo 9-12 m Leucocitos pared de los capilares y
es ms claro penetrar
que el de en el tejido conjuntivo.
los linfocitos Fagocitan
(cromatina sobre todo virus, hongos
menos y protozoos.
densa)
Anucleados. Forman un tapn cuando
Esfricos, los
ovales vasos sanguneos son
o alargados. 3 m Difcil de lesionados.
TROMBOCITOS Aparecen estimar Liberan tromboplastina,
en grupos por aparecer que
(aglutinados) aglutinados interviene en la
en formacin del
las cogulo, y serotonina ,
extensiones. un vasoconstrictor.
Material
- Algodn
- Alcohol
- Lancetas estriles
- Portaobjetos
- Frascos de tincin
- Microscopio
Reactivos
- Set de coloracin rpida para frotis sanguneos Diff-Quik:

Solucin fijadora Evita el deterioro de la estructura celular

(Fast Green en metanol)
Solucin colorante I
(Eosina G en tampn fosfato)
Solucin colorante II
(Tiazina en tampn fosfato)
Tie de rosa plido el citoplasma y las
granulaciones acidfilas
(eosinfilas)
Tie de color azul-violeta oscuro los
ncleos de las clulas y
las granulaciones basfilas.

Procedimiento
Con un algodn empapado en alcohol limpia el dedo que te vayas a pinchar.
Coge una lanceta estril por el extremo en el que no est el pincho, para que se
mantenga estril y pnchate en la yema del dedo. El pinchazo debe ser profundo, de tal
manera que la sangre salga por simple flexin de la falange, sin necesidad de apretar.
Una vez recogida la sangre necesaria vuelve a limpiar el dedo con el algodn mojado en
alcohol.
Deposita una gota de sangre en un extremo del porta.
Para realizar el frotis (extensin) se procede como indica el dibujo.

A. Deposita una pequea gota de sangre en un extremo del portaobjetos. Si la cantidad

de sangre es excesiva las clulas quedarn apelotonadas en la extensin y ser difcil
observarlas.
Coloca el segundo portaobjetos formando un ngulo de unos 45 con el primero y
asegurndote de que apoya todo el borde.
Desliza lentamente el portaobjetos hacia la gota de sangre hasta que entren en contacto.
Vers como la sangre se extiende por el borde.
B. Desliza ahora el porta en el sentido contrario en un movimiento rpido y procurando
que no pierda el contacto con el otro.
C. Todo el procedimiento se debe realizar apoyado en la mesa y sujetando el porta como
indica el dibujo.
D. Deja secar el frotis al aire antes de comenzar el proceso de tincin.

Sumerge el portaobjetos con la extensin de sangre durante un segundo en la solucin

fijadora, djalo escurrir y vuelve a sumergirlo durante otro segundo y repite el
procedimiento hasta haber completado diez inmersiones de un segundo.
Repite el procedimiento con las soluciones colorantes I y II. Es importante que no se
altere el orden de los colorantes, ya que, de otra manera, no se obtendra el resultado
esperado. Debes evitar tambin la contaminacin de unos lquidos con otros.
Por ltimo debe lavarse el exceso de colorante con abundante agua. El chorro de agua
no debe ser fuerte, para evitar que arrastre las clulas sanguneas. La mejor manera es
colocar el porta inclinado y dejar caer un pequeo chorro de agua sobre el extremo
superior.

Observacin
Las clulas ms abundantes son, con gran diferencia, los eritrocitos. Son clulas
anucleadas y quedan teidos de color anaranjado plido. Se puede observar distinta
intensidad de coloracin entre el centro y la periferia, debido a su forma caracterstica
de disco bicncavo.
Si recorremos la extensin lentamente, de vez en cuando nos llamarn la atencin los
leucocitos, generalmente ms grandes que los eritrocitos y con sus ncleos
intensamente teidos de color azul violeta.
Utiliza el cuadro de los elementos formas de la sangre para intentar identificar los
distintos tipos de leucocitos; los rasgos que te van a ser ms tiles en la identificacin
son: el tamao de las clulas, que podrs determinar por comparacin con los
glbulos rojos, la forma del ncleo y la coloracin del citoplasma.
Las plaquetas son difciles de identificar porque se confunden con partculas de polvo
u otras impurezas que aparecen dispersas por la extensin, pero son bastante
abundantes.

Dibujos
Dibuja los tipos celulares que observes, calcula su tamao aproximado utilizando
como referencia el de los glbulos rojos e indica el nmero de clulas de cada tipo
que has podido ver. Seala qu rasgos te han permitido identificar cada tipo de clula.
No olvides poner junto a cada dibujo los aumentos con los que has realizado la
observacin.

DIBUJO ERITROCITOS Tamao Aproximado: 7

m
OBSERVACIONES:

DIBUJO NEUTRFILOS Tamao Aproximado:

OBSERVACIONES:

DIBUJO LINFOCITOS Tamao Aproximado:

 OBSERVACIONES:

DIBUJO MONOCITOS Tamao Aproximado:

OBSERVACIONES:

DIBUJO EOSINFILOS Tamao Aproximado:

OBSERVACIONES:

DIBUJO BASFILOS Tamao Aproximado:

OBSERVACIONES:

Cuestiones
Adems de los formes que aparecen en la tabla anterior, qu otros componentes
constituyen la sangre?
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Dnde se forman las clulas sanguneas?

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