In vivo voltage-sensitive dye imaging of the insular cortex

in nerve-injured rats

Jeongsoo Hana, Myeounghoon Cha, Minjee Kwon, Seong-Karp Hong, Sun Joon Bai, Bae
Hwan Lee,

Introduccin

La corteza insular (CI) relacionada con la informacin sensorial principalmente el dolor y procesa
los aspectos emocionales del dolor.
El dolor crnico se refiere al dolor prolongado que permanece despus de la recuperacin de un
nervio perifrico. Las investigaciones consideran que los cambios de la plasticidad cerebral
inducidos por la lesin del nervio pueden causar este dolor crnico. El dolor es una sensacin
subjetiva y una experiencia emocional que est integrada por las redes cerebrales relacionadas
con el dolor de estructuras cerebrales como: la corteza singular, la corteza insular anterior, la
corteza somatosensorial primaria y secundaria, la corteza prefrontal y el tlamo.
La corteza Insular est relacionada con el procesamiento y la modulacin del dolor. Estudios
muestran que la lesin de esta rea puede provocar una disminucin del comportamiento
neuroptico e inflamatorio del dolor.

Objetivo:

El presente estudio se realiz para investigar los patrones espaciotemporales

relacionados con los cambios neuroplsticos en la Corteza Insular con el uso de
imgenes de colorante sensible al voltaje despus de lesionar los nervios de una pierna
de ratas (nervio tibial y sural).

Mtodo
Animales: Para realizar el estudio se tuvieron 12 ratas las cuales fueron divididas: 5
de ellas en el grupo control y 7 en el grupo experimental. Para el grupo experimental
se les realiz una operacin para lesionar los nervios de la pata izquierda mientras que
a las ratas del grupo control fueron tambin sometidas a la misma operacin pero sin
lesionar los nervios.

Tcnicas - Se decidi utilizar la tcnica de colorantes sensibles al voltaje y la obtencin

de imgenes ptica debido a que esta nos permite visualizar la activacin neuronal

Ciruga neuroptica: Para llevar a cabo esta ciruga utiliz sodio pentobarbital para
anestesiar a las ratas. En sta, los nervios tibial y sural, del msculo femoral la pata
trasera izquierda de las ratas, fueron cortados y posteriormente ligados estrechamente.
 Al finalizar, se cosi la herida y se coloc lidocana. Este mismo procedimiento se
llev a cabo en las ratas del grupo control pero sin daar ningn nervio.

Test conductual para alodinia mecnica: La alodinia mecnica se refiere a una

sensacin de dolor causada por un estmulo que en realidad no es doloroso. El
objetivo de este test fue observar el umbral mecnico en los das 1, 3 y 7 posteriores a
la operacin. Para realizarlo se utiliz un instrumento llamado electronic von Frey
filament aplicado 8 veces en la pata trasera izquierda, en el rea donde se realiz la
ciruga. La fuerza mecnica fue grabada cuando ocurra una respuesta deretirada
definida como lamer o mover la pata.

7 das despus de la lesin se realiz una craniectoma para realizar la captura de las
imgenes pticas de la Corteza Insular. Una vez realizada la craniectoma se
estimulaba a la CI con estimulacin elctrica a la pata izquierda con intensidades que
iban aumentando progresivamente (Intensidad: 0 mA, 0.6 mA, 1.25 mA, 2.5 mA y 5.0
mA ) y que se daban cada una en intervalos entre los estmulos de 5 segundos. Se
realizaba la captura ptica por cada descarga que se realizaba durante 940 ms.

Resultados

Figura 2 A - reas de la Corteza insular activada de las ratas sin lesin en los nervios de la
pierna. En el eje de las Y se observan las diferentes intensidades de la estimulacin elctrica a
la pata, mientras que en el eje de las X se observa el tiempo transcurrido despus de la
estimulacin elctrica. Las reas con color rojo son las reas con mayor activacin mientras
que las aras de color negro son las menos activas.
Figura 2 B reas de la Corteza insular activada de las ratas con lesin en los nervios de la
pata izquierda. En el eje de las Y se observan las diferentes intensidades de la estimulacin
elctrica a la pata, mientras que en el eje de las X se observa el tiempo transcurrido despus
de la estimulacin elctrica. Las reas con color rojo son las reas con mayor activacin
mientras que las aras de color negro son las menos activas.

Figura 3 A La cual muestra la amplitud de la corteza insular que se activ al momento de

la estimulacin elctrica en sus diferentes intensidades en ambos grupos. 3 B Se muestra el
porcentaje de la activacin del rea de ambos grupos.

Comparando ambas poblaciones de ratas se observa que las ratas a las que se les
lesionaron los nervios de la pata izquierda mostraban un rea ms grande de
 activacin de la Corteza Insular mediante la estimulacin elctrica de 0.6, 1.25 y 2.5
mA en comparacin a las ratas del grupo control, adems la duracin de la activacin
fue ms prolongada y extensa (Figura 2 A y 2 B).
Para las ratas del grupo control no se observa la activacin de la CI con la
estimulacin de 0.6 y 1.25 mA (Figura 2 A y 2 B).
No obstante las reas que se activaron con la estimulacin de ambos grupos se volvan
ms grandes a medida que aumentaba la intensidad de la estimulacin elctrica
(Figura 2 A y 2 B).
La amplitud del rea activada de las ratas fue mayor en el grupo experimental que en
el grupo control principalmente con la estimulacin de 5 mA. Tambin, en la
Activacin de la Cortez insular fue mayor con estimulaciones de 1.25 mA y 2.5 mA
en las ratas con lesin a comparacin de las ratas sin lesin en la pierna,
posteriormente no hubo una diferencia significativa despus de los 5.0 mA de
estimulacin, pero mostraron una respuesta ms sensible (Figura 3 A, 3B).

Discusin
Daos en el sistema nervioso perifrico pueden ocasionar cambios en la plasticidad
del sistema nervioso central
De acuerdo con el estudio, las intensidades pticas y las reas activadas pueden estar
relacionadas con la activacin neuronal en respuesta a la sensacin de dolor. Pero no
se llegan a conclusiones por el hecho de ser el primer estudio de este tio que utilizo
colorantes sensibles al voltaje
La lesin del nervio perifrico induce plasticidad funcional en el CI relacionada con
los receptores NMDA y AMPA.
Las reas activadas de las seales pticas a la estimulacin perifrica se
incrementaron en el grupo con lesin en comparacin con el grupo de control. Se cree
que esto se debe a la plasticidad inducida por lesin nerviosa en el CI.