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UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS


CARRERA DE INGENIERA AGRICOLA MENCIN AGROINDUSTRIAL

Practica #5

TEMA:

DETERMINACION DE ENZIMA AMILASA Y PROTEASA EN UN


MICROORGANISMO DE INTERES

ASIGNATURA:

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
CURSO:

4to SEMESTRE

PARALELO A

DOCENTE:

ING. PAULA PINTO

ESTUDIANTE:

VIRGINIA JIMENEZ BORJA

2017-2018

GUAYAQUIL- ECUADOR
INTRODUCCIN

Las enzimas son protenas que actan como aceleradores de las reacciones
qumicas, de sntesis y degradacin de compuestos, stas se encuentran en
todos los seres vivos y son piezas esenciales en su funcionamiento. stas tienen
muchas aplicaciones en diversos tipos de industrias, entre las que se destaca la
alimenticia, por ejemplo en la obtencin de yogurt, o la produccin de cerveza o
de vino, ya que el proceso de fermentacin se debe a las enzimas presentes en
los microorganismos que intervienen en su produccin. Sin embargo, para
mejorar los procesos de produccin, pueden utilizarse enzimas aisladas, sin
incluir a los microorganismos que las producen. Desde hace unas dcadas se
dispone de enzimas relativamente puras extradas industrialmente de bacterias,
hongos, plantas y animales, con una gran variedad de actividades, pero hoy en
da se han desarrollado ms fuentes para la produccin de enzimas que permiten
su aplicacin en diversos procesos, lo cual ha originado un rea interdisciplinaria
llamada ingeniera enzimtica, como nuevo enfoque de la biotecnologa.

En la actualidad se ha logrado obtener enzimas ms puras, con varias ventajas:


accin ms especfica en su funcin cataltica; actividad predecible y controlable,
uso de concentraciones ms elevadas del sustrato.

Objetivos:

a) Preparar medios de cultivos para pruebas enzimticas, placa de agar con


medio amilasa y con medio proteasa.
b) Realizar las pruebas de amilasa y proteasa en un microorganismo de
inters.
c) Interpretar resultados de las pruebas de amilasa y proteasa.
MARCO TEORICO

- Produccin De Enzimas A Partir De Microorganismos

La biotecnologa busca reducir el impacto negativo de dichos procesos en el


medio ambiente, ya que adems de requerir gran inversin de capital,
demandan condiciones especiales para la obtencin de productos de gran
inters como las enzimas; La necesidad de acelerar los procesos con baja
velocidad gener la bsqueda de alternativas para agilizarlos, dando como
resultado la utilizacin de enzimas, principalmente obtenidas a partir de
microorganismos, las cuales permiten la realizacin de un proceso ms
sencillo, la optimizacin del producto al generar, mayor calidad, mayor utilidad
en su aplicacin, mayor rentabilidad, y la obtencin de un producto diferente o
en mayor cantidad que sirva para compensar su reducida disponibilidad.
El uso de enzimas microbianas proporciona grandes ventajas en actividades
necesarias como en la biorremediacin del agua, en la industria alimentaria y
en la produccin de antibiticos.
La actividad biocataltica de los microorganismos hace que stos, como seres
unicelulares, sean usados de forma eficaz como enzimas extracelulares, las
cuales facilitan su aislamiento y purificacin, generan mayor volumen, son ms
puras y estables, porque poseen puentes disulfuro. Tambin se pueden obtener
enzimas intracelulares, pero es un proceso ms complejo, ya que se debe
provocar una lisis celular, separar sus restos y purificar el extracto de la enzima.
- Enzima Amilasa
Son enzimas las cuales hidrolizan molculas de almidn dando como productos
dextrinas y polmeros compuestos progresivamente por unidades de glucosa. Esta
familia de enzimas hidrolticas est compuesta por protenas catalticas: alfa-amilasa,
beta-amilasa, glucoamilasa, isoamilasa se encuentran ampliamente distribuidas en
tejidos vegetales, donde juegan un rol muy importante en la degradacin del almidn en
la germinacin de las semillas en tejidos animales, cumpliendo una misin digestiva y
en diversas especies de microorganismos como hongos y bacterias.
- Enzima proteasa
Las proteasas son enzimas proteolticas, es decir, actan rompiendo los enlaces que
unen los aminocidos de las protenas facilitando su digestin, son consideradas un
aditivo alimentario, considerado tambin como un potenciador del sabor, estabilizador y
se utiliza en el tratamiento de harinas. Las proteasas pueden obtenerse de diferentes
fuentes como animales (quimosina, tripsina y peptina), vegetales (bromelana, papana)
bacterias u hongos. En general son enzimas estables incluso a temperaturas elevadas
(85C).
Las proteasas tienen muchas aplicaciones en la industria como por ejemplo en la
fabricacin de medicamentos, fermentaciones, aditivos alimentarios o suplementos
digestivos. La adicin de proteasas a productos proteicos mejora su digestibilidad, su
solubilidad y su sabor.

Materiales Equipos Insumos


Agua destilada

Probeta
Balanza analtica TSA (TRIPTICASA
graduada
DE SOYA)
Autoclave
Esptula de
laboratorio Mechero Microorganismo de
inters
Matraz Incubadora de
Erlenmeyer laboratorio a Almidn
35C 1C
Palillos de Leche descremada
dientes

2 cajas Petri

PROCEDIMIENTO

1. Realizar los clculos para preparar:

Medio para amilasa: preparar 100ml de TSA con el 1% de almidn.

100ml De TSA (40g/L) 1% De Almidn.

1000 40 100% 100


100 = 4 1% = 1
Medio para proteasa: preparar 100ml de TSA con el 1% de leche
descremada.
100ml De TSA (40g/L) 1% De Leche Descremada

1000 40 100% 100


100 = 4 1% = 1

2. Esterilizar medios de cultivos.


a) Medio amilasa: una vez esterilizado, enfriar hasta 45C, adicionar el
sustrato de la amilasa y verter en placas Petri estriles, un aproximado
de 15 a 18ml de medio.
b) Medio proteasa: una vez esterilizado, enfriar hasta 45C, adicionar el
sustrato de la proteasa y verter en placas Petri estriles, un
aproximado de 15 a 18ml de medio.
3. Dejar que se solidifique el medio de cultivo y rotular placas indicando el
nombre del medio.
4. Realizar pruebas de amilasa y proteasa.
a) Tomar con un palillo estril el inculo de la bacteria de inters y realizar
un rayado o una estra en la superficie del agar amilasa.
b) Tomar con un palillo estril el inculo de la bacteria de inters y realizar
un rayado o una estra en la superficie del agar proteasa.
c) Sellar y rotular las placas.
5. Incubar las placas a una temperatura de 28 a 30C durante 5 das.
6. Chequear resultados.

CONCLUSIN

Se logro obtener amilasa a partir de un microorganismo de inters, en el cual se


form una transparencia alrededor de la estra indicando que la produccin de
amilasa es positiva. Mientras que en la obtencin de proteasa no acto el
microorganismo de inters, dando as el resultado de produccin negativo de la
proteasa.
ANEXOS

Imagen: 1 Pesar la muestra de agar TSA y Imagen: 2 Diluir el agar TSA en agua
Almidn destilada y llevar Mecheros Bunsen

Imagen: 4: tener 10 microlitro de leche Imagen5: Verter la mezcla de agar a placa Petri
descremada y agregar al agar TSA para
prueba de proteasa

Imagen7: 1Aadimos 5 microlitro de


Imagen 6: con un palillo aadimos en
almidn diluida con bacto peptona al agar
nuestra agar la bacteria para prueba de
TSA y hacemos el mismo procedimiento con
proteasa
el agar proteasa
Imagen 8: rotular la muestra prueba Imagen 9: llevar las muestra a incubacin
amilasa y proteasa las placas a temperatura de 28 c durante 5
das

BIBLIOGRAFIA

MARIA TERESA PEATE. (2008, Octubre 28). Blogstop. Retrieved from


http://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:http://enzimamicro.blogspot.com/

Miriam Felipe. (2008, ENERO 5). AcademiaEdu. Bolivia . Retrieved from


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NA_MEDIANTE_FERMENTACION_EN_SUSTRATO_L%C3%8DQUIDO_FACULTAD_D
E_INGENIERIA_AGROINDUSTRIAL_UNIVERSIDAD_PONTIFICIA_BOLIVARIANA_CE
NTRO_DE_INVESTIGACIONES_MONTERIA_CORDOBA_2008

Dr. Leslie Soto, Dr. Ral Gutirrez, Dr. Carlos Seas. Mdicos del Instituto de Medicina Tropical Alexander
von Humboldt de la Universidad Peruana Cayetano Heredia. INHIBIDORES DE PROTEASA (IPs)