UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO

FACULTAD DE INGENIERIA DE PROCESOS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA QUIMICA

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

ESPORAS BACTERIANAS

ALUMNAS:
Amanca Vilca, Helen Melina / (151774)
Caceres Oviedo, Xiomara Roxana / (142036)
Sanchez Andia, Nuria / (142040)

SEMESTRE: 2017- II

CUSCO-PER

2017
I. INTRODUCCIN
Las esporas son clulas diferenciadas altamente resistentes al estrs fsico y qumico,
tal como calor, presin, sequedad, cidos y bases fuertes y radiacin UV. Se desarrollan
dentro de clulas bacterianas vegetativas (por eso la denominacin de endospora) de los
gneros Bacillus y Clostridum entre otros.
Debido a su resistencia y al hecho de que varias especies de bacterias formadoras de esporas
son agentes patgenos peligrosos, las esporas tienen gran importancia en microbiologa
alimentaria, industrial y mdica.
Las esporas no presentan actividad metablica, tienen gran resistencia al efecto del calor, a
las radiaciones, a los productos qumicos, poseen deshidratacin y dormancia.
Se pueden observar con el microscopio ptico y electrnico. Como las esporas son
impermeables a la mayora de los colorantes, se observan como reas incoloras dentro de las
clulas coloreadas. Existen adems coloraciones especiales para teir los esporos.
La formacin de esporas, esporognesis o esporulacin, comienza cuando cesa el crecimiento
debido a una falta de nutrientes.
La estructura de la espora es compleja y se distinguen de afuera hacia adentro: el exosporio,
capa cortical, corteza, membrana citoplasmtica, citoplasma y el DNA.
Los datos publicados sobre la longevidad de las endosporas indican que pueden permanecer
viables durante varias dcadas y probablemente mucho tiempo ms segn las condiciones a
las que est sometida.

II. MARCO TEORICO

1. ESPORA
Ciertas bacterias Gram positivas pueden formar una estructura especfica inactiva de
resistencia, conocida como endospora o espora. Se desarrollan en el interior de las clulas
bacterianas vegetativas (razn para la denominacin endospora o espora) como los del
gnero Bacillus y Clostridum y otros.
Las esporas son clulas especficas altamente resistentes al estrs fsico y qumico, como:
calor, presin, sequedad, cidos y bases fuertes y radiacin UV.
Cuando una clula bacteriana es capaz de esporular detiene su crecimiento exponencial
debido a la carencia de nutrientes esenciales en su medio debe decidir esporular o
arriesgarse a seguir creciendo como tal y correr el riesgo de morir. Si la clula decide
esporular se someter a un proceso irreversible de diferenciacin celular, como resultado
dar una forma de vida inactiva y permanecer como tal indefinidamente hasta que
mejoren las condiciones de su medio externo, las cuales le permitirn germinar y volver a
crecer.
2. PROPIEDADES
2.1. Hipometabolia:

Poseen la ms baja tasa respiratoria de todos los seres vivos. Por ello son
capaces de sobrevivir en ausencia de nutrientes durante largos perodos de tiempo.

2.2. Dormancia:

Esta propiedad se refiere al hecho de que la espora tiene una gran inercia a
los sustratos exgenos. Como veremos, la espora slo perder la dormancia cuando
se haya activado para la germinacin.

2.3. Resistencia Al Calor:

Las esporas de ciertas especies resisten el calor hmedo de 120C durante

10 min, lo cual condiciona los parmetros para esterilizar materiales. Esta elevada
resistencia a las altas temperaturas es un subproducto de los cambios evolutivos que
condujeron a la deshidratacin como medio para lograr la hipometabolia y la
dormancia. Por lo tanto, la deshidratacin es la clave de las anteriores propiedades.
(En cambio, como dijimos antes, al menos parte de la resistencia al calor seco, es
decir, en ausencia de vapor de agua, se debe a las protenas SASP, que protegen al
ADN de los daos oxidativos de este tipo de calor).

2.4. Deshidratacin:

El muy bajo contenido en agua de la espora (0.3 g de agua/g de peso seco

frente a los 3-4 g de agua/g de peso seco de la clula vegetativa) hace que la espora
sea muy refrctil al microscopio ptico en fresco. Ello condiciona a las primeras
propiedades.

2.5. Resistencia A Los Rayos Uv:

Se atribuye a la presencia de puentes disulfuro, resultante de la presencia

decistena en las protenas de la cubierta externa.

2.6. Resistencia A Agentes Qumicos:

La resistencia de la endospora a agentes como octanol, cloroformo, etc. se

debe a la impermeabilidad de las cubiertas, gracias a su gran grosor y su peculiar
composicin a base de protenas ricas en aminocidos hidrfobos y con abundantes
puentes disulfuro (cistinas). La resistencia a la lisozima se debe por un lado a la propia
impermeabilidad de las cubiertas, y a la resistencia de la corteza.
3. FASES DE LA ESPORULACIN
3.1. Fase 0 (clula vegetativa):
Al final del periodo de crecimiento exponencial, la clula vegetativa contiene
dos cromosomas.
3.2. Fase I:

El material gentico (los dos cromosomas) se condensa constituyendo

un filamento axialancho, que ocupa el centro de la clula, segn su eje
longitudinal. Cada nucleoide est unido a uno de los extremos de la clula.
Se sintetizan y se liberan los medios antibiticos y varias exoenzimas. Una serie
de proteasas se encargan de las protenas intracelulares, cuyos aminocidos
constituyentes sern empleados para sintetizar nuevas protenas especficas de
la esporulacin.

3.3. Fase II:

Se termina por formar un septo transversal acntrico, cerca de un polo de la
clula, por invaginacin de la membrana citoplsmica, y deposicin de nuevo
PG entre las dos membranas adyacentes.
Cada nucleoide queda segregado en uno de los dos compartimentos que se han
formado: un cromosoma va al compartimento pequeo (compartimento de
la preespora); la otra copia del cromosoma va al compartimento grande (clula
madre).

3.4. Fase III:

Independizacin del protoplasto de la preespora respecto de la clula madre.

Para ello, lo primero que ocurre es la degradacin selectiva del PG del septo que
se haba depositado en la fase II (esta degradacin comienza por el centro, es
decir, por donde se haba cerrrado, y sigue hacia la periferia, y en ella intervienen
los productos de varios genes). Entonces, la membrana citoplsmica de la clula
madre va creciendo unidireccionalmente alrededor de la preespora, hasta que
sta queda libre en el citoplasma del esporangio.

3.5. Fase IV:

Se forma casi por completo la corteza de la espora, por deposicin de

peptidoglucano entre las dos membranas. Sin embargo este PG an no est
"maduro" (no tiene todava las caractersticas necesarias).
Tambin se deposita el peptidoglucano de la pared celular (que constituye el
germen de la pared celular de la futura clula vegetativa).
 3.6. Fase V:

Las cubiertas comienzan a depositarse por fuera de la membrana esporal externa.

Al final de esta fase se adquiere la resistencia al octanol.

3.7. Fase VI:

La preespora madura hasta espora.

Madura la corteza (para generar el caracterstico PG cortical).
Maduran las cubiertas.
El citoplasma de la espora se hace ms homogneo y ms denso a los electrones.
La espora se hace resistente al calor y al cloroformo.
Se adquiere resistencia a las radiaciones ultravioleta (UV).

3.8. Fase VII:

Liberacin de la espora madura por autolisis de la clula madre.

En las bacterias que han producido exosporio, cuando la espora sale al exterior,
este exosporio pierde su contenido de citoplasma (procedente de la clula
madre), quedando como un saco vaco y plegado, unido a las cubiertas.

4. TINCIN

Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los
factores ambientales adversos. Adems, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan
en el microscopio ptico como estructuras refringentes y de difcil tincin. La tincin
especfica de esporas requiere dos colorantes:

Verde malaquita: capaz de teir las esporas en caliente.

Safranina: colorante de contraste que tie las formas vegetativas.

Las endosporas, tras la primera tincin, no perdern el colorante en el lavado con agua, y
s lo harn las formas vegetativas, que quedarn teidas con el segundo colorante.

4.1. Realizacin

Se emplearn cultivos en fase estacionaria para dar lugar a que las bacterias
produzcan las esporas. Esta tincin es delicada en su realizacin y para poder obtener
unos resultados satisfactorios hay que seguir cuidadosamente las instrucciones.
 Ilustracin 1 Metodologa de tincin de endosporas

Preparar los frotis bacterianos indicados.

Teir con verde malaquita. Con unas pinzas de madera colocar la muestra
encima de la llama del mechero de forma que el colorante humee durante 5 min.
Nota: evitar que la muestra hierva. Aadir ms colorante si ste se evapora; es
importante que la muestra no se seque.

Lavar con abundante agua el exceso de colorante.

Teir con safranina 1 min.
Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
Secar la preparacin.
Observar la preparacin al microscopio. Anotar la disposicin y la morfologa.

4.2. Interpretacin de los resultados

La posicin y la morfologa de la endospora en el interior de la bacteria

constituyen un carcter taxonmico til para diferenciar especies dentro de un mismo
gnero.
5. ESTRUCTURA

Ilustracin 2 Estructura de una endospora

5.1. Protoplasto, citoplasma o ncleo

Sus componentes estn inmovilizados en una matriz de quelatos de cido

dipicolnico (DPA) con iones Ca 2+ (dipicolinato de calcio, DPC), que llega a
representar el 15% del peso. Citoplasma muy deshidratado (10-30%). Contiene el
cromosoma, pocos ribosomas, ARNt, ARN polimerasa, mono y di nucletidos pero
no tri nucletidos (no ATP).

Carece de componentes inestables: No ARNm, no enzimas biosintticas, no

aminocidos ni bases nitrogenadas, no cofactores reducidos (NADH, CoA, etc.).

Gran cantidad de pequeas protenas especiales, las pequeas, cidas, solubles

(SASP) que mantienen le pH ms bajo que en la clula vegetativa. Durante la
germinacin se usarn como fuente de amino cidos. Acomplejan el ADN: protegen
de las radiaciones UV.

5.2. Membrana citoplasmtica

Rodea al protoplasto, membrana citoplsmica que carece de fluidez

(estructura policristalina). A base de un Peptidoglucano similar al de la clula
vegetativa. Estructura muy delgada. Constituye lo que ser la pared de la futura clula
vegetativa. Se sintetiza a partir de la preespora

5.3. Corteza o crtex

Al microscopio electrnico: transparente a electrones, lminas concntricas,

formado de un Peptidoglucano especial: 30% del NAM con tetrapptidos, pero con
bajo grado de entrecruzamiento, 15% del NAM tiene solo L-ala , 55% lactama del
cido murmico.
 Se origina a partir de la clula madre. Estructura ms laxa, floja y flexible que el PG
normal escapaz de expandirse o contraerse. Rpida autolsis durante la
germinacin.La lactama del murmico presenta gran resistencia a la lisozima.

5.4. Capa cortical

Aspecto muy voluminoso, distinto segn especies. Partes densas a los

electrones. Formada de una o ms protenas de tipo queratina, ricas en cistena y
amino cidos hidrfobos. Estructura insoluble e impermeable queimpide la entrada
de numerosos agentes qumicos agresivos, incluyendo txicos.

5.5. Exosporio

Estructura membranosa transparente, a modo de saco delgado y flojo a base

de protenas, polisacridos complejos y lpidos. Muy resistente a enzimas
proteolticas.

6. REACTIVACIN
La reactivacin de la endspora ocurre cuando las condiciones son ms favorables e
implica la activacin y germinacin. Aunque una endspora est en condiciones
favorables, no germinar hasta que ocurra la activacin. La activacin se acciona con
calor. La germinacin implica una reactivacin del metabolismo que rompe la
hibernacin.

7. LONGEVIDAD
Los datos publicados sobre la longevidad de las endosporas indican que pueden
permanecer viables durante varias dcadas y probablemente mucho tiempo ms segn las
condiciones a las que est sometida.

En 1981 se coloc en un medio nutritivo una suspensin de esporas de la bacteria

Clostridium aceticum que haba sido preparada y extraviada en 1947, luego de 34 aos y
en 12 horas de crecimiento se recuper un cultivo de este microorganismo.

Existen muchos otros ejemplos de esporas de mucha ms antigedad. El anlisis

microbiolgico de los restos arqueolgicos romanos hallados en el Reino Unido, y datados
en 2000 aos permitieron recuperar un gran nmero de esporas viables del gnero
Thermoactinomyces en distintas muestras de residuos. Tambin se recuperaron muestras
de esporas viables de esta bacteria en fracciones de estratos de sedimento en un lago de
Minessota que datan de 7000 aos.

En 1995 un grupo de cientficos public la resurreccin de endosporas bacterianas cuya

edad se estima en 25-40 millones de aos.
 Supuestamente, estas esporas del gnero Bacillus fueron preservadas en los intestinos de
una abeja extinta atrapada en un cristal de mbar. Algo an ms increble fue el
aislamiento de bacterias halfilas formadoras de endosporas en cristales de sal
procedentes del perodo Prmico, es decir, de hace ms de 250 millones de aos.

Estas publicaciones han permitido especular con la idea de que si las esporas se conservan
de manera adecuada podran llegar a perdurar viables de manera indefinida.

III. CONCLUSIN
En conclusin las esporas o endosporas son clulas en reposo, es decir criptobitica
(sin metabolismo).
La esporulacin se puede considerar como un proceso de supervivencia de algunas bacterias
Gram positivas cuando enfrentan condiciones de escases de nutrientes.
Las endosporas son formas de reposo, mas no reproductivas, que representan una etapa del
ciclo de vida de ciertas bacterias y se caracterizan por tener una estructura muy caracterstico,
diferenciada respecto de las clulas vegetativas, por tener un metabolismo usualmente
estancado y adems muy resistentes a las condiciones ambientales no favorables, por tal razn
permanecen en el ambiente con vida por cientos de aos.
La espora a menudo se desarrolla completamente despus de un estado de latencia o
hibernacin, originando un nuevo organismo al dividirse por mitosis sin fusin con otra
clula.
Ciertas bacterias producen esporas como mecanismo de defensa. Debido a su resistencia y al
hecho de que varias especies de bacterias formadoras de esporas son agentes patgenos
peligrosos, las esporas tienen gran importancia en microbiologa alimentaria, industrial y
mdica.

IV. BIBLIOGRAFIA
Prescott, Harley, Klein. Microbiologa. Mc Graw-Hill Interamericana de Espaa. 4 ed. 1999.

Schaechter M, Medoff G, Eisenstein BI, Guerra H. Microbiologa. Mecanismos de las

enfermedades infecciosas.Ed Panamericana. 2 ed. Buenos Aires 1993.

Karly. Bacilos grampositivos esporulados. Ed. El Cid Editor. 2009.

Joklik WK, Willett HP, Amos DB, Wilgert CM. editores, Zinsser Microbiologa. 20 ed.
BsAs. Panamericana.1994.

Francisco Javier Cruz Herndez. Bacteriologa - Corynebacterium, Bacillus y Clostridium.

Ed. El Cid Editor. 2009.