Ao de la consolidacin del Mar Grau

E.A.P: Biotecnologa

CURSO: Cintica y reacciones qumicas

DETERMINACIN DE VITAMINA C POR

ESPECTROFOTOMETRA
I. Flujo de Operaciones
 II.
Intr
od
uc
cin
El cido ascrbico presenta un aspecto de cristales blancos, con sabor cido,
sensible a la luz, y a ciertos metales pesados, es un tipo de vitamina hidrosoluble y
esencial, es sintetizado por algunas plantas superiores y algunos animales, y
tambin puede ser sintetizado qumicamente a partir de glucosa. El cido
ascrbico no es sintetizado por el organismo, por lo que se debe ingerir desde los
alimentos que lo proporcionan como: los ctricos, los vegetales verdes, la papa.
Su deficiencia causa escorbuto en humanos, de ah el nombre ascrbico que se le
da al cido.
Para la determinacin de esta vitamina se utiliza el mtodo Mohr, el cual consiste
en un proceso de doble precipitacin en donde se presenta la formacin de un
primer slido, que es la especie a cuantificar, y alcanzado el punto estequiomtrico
se forma otro precipitado que corresponde a la especie que seala el punto final
de la valoracin, est en un mtodo espectrofotomtrico, es decir que se basa en
la absorcin de la radiacin ultravioleta y visible por el analito, como consecuencia
de lo cual se origina un estado activado que posteriormente elimina su exceso de
energa en forma de calor.

Una determinacin de la vitamina C cido ascrbico por el mtodo de

espectrofotometra, se basa en la reduccin del colorante 2-6
diclorofenolindofenol, Por el efecto del cido ascrbico en solucin. El contenido
del cido ascrbico es directamente proporcional a la capacidad de un extracto de
muestra para reducir una solucin estndar de colorante Determinada
espectrofotomtricamente.
La espectrofotometra es el conjunto de procedimientos que utiliza La luz para
medir concentraciones qumicas. (Harris 2001), menciona que la luz puede
describirse en trminos de partculas y ondas, la longitud de onda , es la
distancia entre las crespas de dos ondas y la frecuencia , es el nmero de
oscilaciones completas de una onda en un segundo. La siguiente ecuacin
describe la relacin entre frecuencia y longitud de onda.

La mayora de las sustancias en el visible tienen n>I, lo que significa que la luz
visible atraviesa la materia ms lento que en el vaco; por lo que es conveniente
concebir la luz como fotones (Harris 2001), cada uno de estos transporta energa,
con lo que se obtiene, una relacin como la siguiente:

Cuando una molcula absorbe un fotn su energa aumenta y pasa a un estado

excitado; sin embargo cuando emite un fotn, disminuye su energa
mantenindose en su estado fundamental.
Las mediciones espectrofotomtricas son realizadas por medio de
espectrofotmetro, que tiene una serie de componentes para identificar la
absorbancia de la muestra a analizar.
 II. Objetivos

Determinar el efecto de la temperatura en la degradacin de vitamina C mediante

el anlisis de espectrofotometra.

III. Marco Terico

En 1937, Walter Haworth recibi el Premio Nobel de Qumica

por su trabajo en la determinacin de la estructura del cido
ascrbico (compartido con Paul Karrer, que recibi su premio
por el trabajo con las vitaminas). Ese mismo ao el premio de
Fisiologa y Medicina fue para Albert Szent-Gyrgyi por sus
estudios de las funciones biolgicas del cido L-ascrbico. En el momento de su
descubrimiento, en los aos 20, fue llamado cido hexurnico por algunos
investigadores.

La sntesis qumica del cido L-ascrbico es un procedimiento

caro y complicado que conlleva muchos pasos qumicos que
parten de la D-glucosa, y un nico paso enzimtico que implica
a la sorbitol-deshidrogenasa. La ltima etapa del proceso es la
transformacin catalizada del cido 2-ceto-L-gulnico (2-KGL)
en cido L-ascrbico.

Se ha observado que, en la naturaleza, algunas bacterias como

Acetobacter,Gluconbacter y Erwinia, son capaces de transformar la glucosa en
cido 2,5-diceto-D-gulnico (2,5-DKG), mientras que otras, Corynebacterium,
Brevibacterium y Arthrobacter, son capaces de transformar el cido 2,5-DKG en
cido 2-KLG gracias a la enzima 2,5-DKG-reductasa.

Gracias a la tecnologa de ADN recombinante, ha sido posible aislar el gen de la

2,5-DKG-reductasa en la especie Corynebacterium y expresarlo en Erwinia
berbicola, capaz de transformar la glucosa en 2,5-DKG gracias a tres enzimas.
 Las clulas de Erwinia transformadas son capaces de convertir directamente la
glucosa en cido 2-KLG.
El cido ascrbico es un cido de azcar con propiedades antioxidantes. Su
aspecto es de polvo o cristales de color blanco-amarillento. Es soluble en agua. El
enantimero L- del cido ascrbico se conoce popularmente como vitamina C. El
nombre "ascrbico" procede del prefijo a- (que significa "no") y de la palabra latina
scorbuticus (escorbuto), una enfermedad causada por la deficiencia de vitamina C.

IV. Materiales y Mtodos

-Piceta
-Tubos de ensayo
-Pipetas
- Matraz Erlenmeyer
-Frascos de frugos

REACTIVOS:
- cido oxlico 0.4%
- 2-6 diclorfenol indofenol(colorante)
- cido ascrbico (sol. madre) 0.1%
- stand. w

V. Procedimiento

1 2 3 4 5

SM 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5

Ac. 9.9 9.8 9.7 9.6 9.5

oxlico

Preparacin de curva de calibracin

Paso 1
En 4 tubos de prueba
En tubo I, se agreg 10ml de agua destilada
En tubo II, se agreg 1ml de cido oxlico
En tubo III, se agreg 1ml de estndar + 9ml de agua destilada
En tubo IV, se agreg 1ml de estndar

Paso 2
Ajustar la absorbancia, longitud de onda 520nm

Paso 3
En tubo II, se aadi 9ml de colorante (L1), se dej reaccionar 15
segundos y se ley la absorbancia

Paso 4
Se ajust la absorbancia con el tubo III

Paso 5
En tubo IV, se aadi 9ml de colorante (L2) se dej reaccionar 15
segundos y se ley la absorbancia

VI. Resultados
VII. Discusin

La linealidad es una propiedad importante de los mtodos utilizados para

efectuar mediciones en un intervalo de concentraciones. La linealidad de la
respuesta a patrones puros (MRC) y a muestras realistas puede
determinarse. La linealidad generalmente no es cuantificada pero es
comprobada mediante inspeccin o utilizando pruebas de significancia de la
no-linealidad. La no-linealidad significativa es usualmente corregida
mediante el uso de funciones de calibracin no-lineal o eliminada
seleccionando un intervalo de operacin ms restringido. Cualquier
desviacin residual de la linealidad normalmente es contabilizada por el
estimado de la precisin global cubriendo varias concentraciones, o dentro
de cualquier incertidumbre asociada a la calibracin. (QUAM: 2000.P1.
(2000). EURACHEM/CITAC Guide. Quantifying Uncertainty in Analytical
Measurement. Second edition.)
 La vitamina C se encuentra de dos formas, como cido ascrbico y cido
dehidroascorbico, se utiliza el mtodo de la transformacin del cido
ascrbico, este mtodo se utiliza colorante 2,6 dicloroindofenol, y es este la
que muestra un mximo de absorcin a 540nm. La tcnica de anlisis,
espectrofotometra, es un mtodo muy aceptable, y nos permite determinar
con un buen grado de exactitud las absorbancias en las muestras
preparadas, as trabajar con curva de calibracin para calcular
concentraciones de la naranja y otros.

La curva obtenida por el grupo 2, se debi a distintos factores, tales como,

una mala manipulacin al momento de realizar las diluciones ya que no se
tuvo el cuidado de no mezclar las concentraciones al usar una misma
pipeta para todas sin un previo lavado al pasar de una concentracin a otra
provocando de alguna u otra manera una alteracin. Otro de los factores
fue al momento de la adicin del colorante ya que debe ser inmediato (max.
despus de 15 seg.) ya que el 2,6 dicloroindofenol es rpidamente
oxidado en la presencia del cido ascrbico. Otro error cometido sera al no
mantener al blanco (tubo de ensayo con agua destilada) constante, se
cambi para cada concentracin lo que pudo causar alteracin..P1. (2000).
EURACHEM/CITAC Guide. Quantifying Uncertainty in Analytical
Measurement. Second edition.

Segn nuestros resultados observados en la curva nos damos cuenta que

un factor para este grafo es el control del tiempo en la adicin del indicador
color azul ya que debe ser inmediato y preciso en los 15 segundos
establecidos debido a la rpida oxidacin del cido ascrbico al entrar en
contacto con el 2,6-,dicloroindofenol .

Esta reaccin segn Rogelio Ocampo C. en su libro de Curso prctico de

qumica orgnica explica que la oxidacin de la vitamina C con el agente
oxidante 2,6-,dicloroindofenol es uno de los procedimientos empleados para
cuantificar a nivel de laboratorio es azul en su forma oxidada e incoloro
cuando se reduce pudiendo as determinar el punto final de la reaccin .

VIII. Conclusin
De acuerdo a los resultados de absorbancia obtenidos se puede ver como
inicialmente la curva crece, pero los ltimos dos datos varan; normalmente la
curva de calibracin debe ser recta y creciente, pero en este caso hubo
variabilidad respecto a la lectura de los dos ltimos tubos ya sea por factores de
medicin y concentracin.
Se logr medir con precisin la concentracin de cada tubo con el colorante segn
su absorbancia y realizar la curva de calibracin.

IX. Referencia Bibliogrfica

http://inta.gob.ar/documentos/guia-para-la-verificacion-de-
espectofotometros-uv- visible-utilizados-en-el-analisis-de-suelo-y
agua/at_multi_download/file/Guia_espectrofot%C3%B3metros_UV.pdf

http://www.lacomet.go.cr/documentosweb/quimica/2011/Publicaciones/sand
ra.pdf.

http://www.acidoascorbico.com/

http://determinaciondevitaminas.blogspot.pe/

(QUAM: 2000.P1. (2000). EURACHEM/CITAC Guide. Quantifying

Uncertainty in Analytical Measurement. Second edition.)

Curso prctico de qumica orgnica. Enfocado a biologa y alimentos-

Rogelio Ocampo C.