UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA

CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS

DEPARTAMENTO DE FITOTECNIA

FIT 5806 - BIOTECNOLOGIAS

APOSTILA (v.2016)

Rubens Onofre Nodari

Doutor em Gentica (UCDavis-CA), Prof. Titular do Dep. de Fitotecnia, Centro de
Cincias Agrrias, Universidade Federal de Santa Catarina, C. Postal 476,
Florianpolis, SC, 88040-900, e-mail: nodari@cca.ufsc.br

Miguel Pedro Guerra

Doutor em Cincias (USP), Prof. Titular do Dep. de Fitotecnia, Centro de Cincias
Agrrias, Universidade Federal de Santa Catarina, C. Postal 476, Florianpolis, SC,
88040-900, e-mail: mpguerra@cca.ufsc.br

Adriana Cibele de Mesuita Dantas

Doutora em Cincias (UFPel, Profa. Adjunto em Biotecnologia
UERGS RS, e-mail acmdantas@yahoo.com.br

Valdir Marcos Stefenon

Doutor em Cincias Florestais/Gentica (Uni-Gttingen-Alemanha), Prof. Adjunto
Universidade Federal do Pampa, So Gabriel - RS e-mail:
valdirstefenon@unipampa.edu.br

Sarah Zanon Agapito Tenfen

Doutora, Genok, Center of Biosafety,Tromso, Noruega e-mail: saragagro@gmail.com

Gustavo Henrique Ferrerro Klabunde

Doutor, Programa de Ps-graduao em Recursos Genticos Vegetais, UFSC,
Florianpolis, e-mail: klabunde.gustavo@gmail.com

Maio de 2016

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 CONTEDO
PARTE 1 Princpios de Gentica Molecular
1-Introduo s macromolculas: protenas e cidos nucleicos 4
1.1-Protenas 4
1.2-cidos nucleicos 6
2-Replicao 16
3-Transcrio 17
4-Traduo 18
5-Mutao e reparo 19
6-Metilao 22
7-Regulao gnica 22
8-Epigentica 23
PARTE 2 Marcadores genticos
1- Introduo 25
2-Marcadores morfolgicos 25
3-Marcadores protenas de sementes 25
4-Isoenzimas 27
5-RFLPs 29
6-Minissatlites 30
7-RAPDs 31
8-Microssatlites 33
9-AFLPs 35
10-SCARs 37
11-SNPs 38
12-Anlise comparativa 39
13-Aplicaes dos marcadores moleculares 39
PARTE 3 Organismos Geneticamente Modificados
1-Introduo 44
2-Tecnologia do DNA recombinante 45
3-Genes marcadores e genes reporteres 46
4- Mtodos de Transformao de plantas 46
5-Diferenas entre os mtodos de melhoramento convencionais e biotecnolgicos 49
6-Aplicaes 49
7-Evoluo do desenvolvimento e cultivo de plantas transgnicas 56
8-Limitaes 61
9-Biossegurana Regulamentao 62
10-Fiscalizao 67
11-Anlise de Risco 68
12-Princpio da Precauo 84
13-Rotulagem 86
14- Nova Tecnologia CRISPR 87
PARTE 4 Direitos De Propriedade Intelectual
1-Direitos de proteo e patentes 89
2-Lei de proteo das cultivares 90
3- Implicaes Das Normas De Propriedade Intelectual Sobre Transgnicos 92
4-Biodiversidade, Biotecnologia e Agricultura 93
PARTE 5 Biotica
1-Introduo 95
2-Percepo Pblica 97
3- Os interesses econmicos da transgnia 98
4- A Relao Da Comunidade Cientfica Com O Governo 100
5- A Necessidade De Um Debate Pblico Com A Sociedade 101
6- Implicaes da clonagem de animais e humanos 102
7- Terapia Gentica Com Vetores Recombinantes Na Espcie Humana 103
8- O Que Se Espera Dos Profissionais Da Biologia E Da Agronomia? 104
9- Concluses 105
BIBLIOGRAFIA 106

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 APRESENTAO

Esta apostila rene contedos bsicos de biologia celular e molecular e suas

decorrentes aplicaes biotecnolgicas e outras tcnicas de uso freqente, visando
conhecer, conservar e melhorar a diversidade gentica existente. O objetivo desta apostila
proporcionar ao estudante um conjunto de informaes bsicas e as principais aplicaes
das biotecnologias. Este conjunto de informaes se constitui no ponto de partida para
estudos mais aprofundados.
As biotecnologias em seu sentido mais amplo compreendem a manipulao de
microorganismos, plantas e animais, objetivando a obteno de processos e produtos de
interesse. Desta maneira, toda atividade que envolva a aplicao dos conhecimentos de
fisiologia, bioqumica e gentica, considerada como tcnica biotecnolgica. Em seu senso
mais restrito as biotecnologias compreendem a associao de tcnicas mais sofisticadas de
biologia molecular e celular, engenharia gentica e manipulaes celulares in vitro. Para o
CNPq, biotecnologia pode ser conceituada como a utilizao de sistemas celulares para a
obteno de produtos e desenvolvimento de processos. A FAO (1989) conceitua
biotecnologia como a aplicao dos princpios cientficos e de engenharia para o
processamento de materiais por agentes biolgicos proporcionando produtos ou servios.
Mais especificamente, a Tecnologia do DNA recombinante possibilitou a obteno de
organismos geneticamente modificados ou transgnicos.
As primeiras atitudes do governo brasileiro em relao s biotecnologias tiveram
inicio em meados da dcada de 1980, quando tanto o CNPq quanto o MCT iniciaram o
apoio formao de recursos humanos. Atualmente, o volume de recursos, o nmero de
bolsas e o nmero de pesquisadores que trabalham com as biotecnologias na rea agrcola
e florestal atingem valores inferiores a 10% em relao s demais reas de C&T no pas.
Contudo, cada vez maior o nmero de pessoas envolvidas com as biotecnologias, as
quais passam a ser utilizadas nas diversas disciplinas da rea biolgica. No estado de So
Paulo, a FAPESP, a agncia de fomento a pesquisa do estado de So Paulo, financiou um
projeto para o sequenciamento da bactria Xyllela fastidiosa, o agente causador da doena
denominada de amarelinho em citrus. Outros programas de pesquisa em biotecnologia de
plantas esto em progresso em caf, cacau, soja, milho, trigo e outras espcies de
importncia econmica. Mais recentemente o governo vem destinando mais improtncia e
recursos para as modernos biotecbologias, que incluem a transgenia.
A clonagem de mamferos, obtidas em 1997, desencadeou uma discusso no s no
seio da comunidade cientfica, mas tambm em toda a sociedade sobre as implicaes do
poder das biotecnologias. Toma corpo ento a Biotica, que discute o modo de ser (tica)
da vida. A biotica pergunta-se sobre a legitimidade dos projetos de efeitos biotecnolgicos.
Vrios agrnomos esto desenvolvendo atividades na gerao de processos e
produtos, utilizando estas tcnicas biotecnologias. O mercado tende a uma expanso nos
prximos anos. Alm dos conhecimentos tcnicos necessrios ao desempenho profissional,
o Engenheiro Agrnomo tem um importante papel na discusso das questes relacionadas
com as biotecnologias com a sociedade. A liberao da soja transgnica em setembro de
1998, resistente ao herbicida glifosate, constitui-se num marco da agricultura e exige que os
profissionais formados tenham o conhecimento tcnico e cientfico no s para o correto
manuseio destes organismos como tambm para participar das decises a respeito das
mesmas.
Agradecemos aos estudantes de ps-graduaao pelas contribuies a esta apostila.

Os Autores

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 PARTE 1 PRINCPIOS DE GENTICA MOLECULAR

1-INTRODUO S MACROMOLCULAS: PROTENAS E CIDOS NUCLEICOS

1.1-Protenas
Protenas so cadeias de aminocidos (aa). A estrutura bsica composta de um
esqueleto e de grupos laterais variveis (Figura 1.1). Uma srie repetida de ligaes
peptdicas entre o carbono de um aa e o nitrognio de outro aa formam molculas grandes,
as protenas (Figura 1.2). Devido a natureza da ligao peptdica, uma das extremidades da
protena H2N (H3N+), denominada de N-terminal, e na outra extremidade encontra-se
COOH (COO-), que chamada de carboxi-terminal. Existem cerca de 20 aa, cada um com
sua forma e constituio qumica caracterstica. Dependendo da composio, as protenas
podem ter carga positiva, neutra ou negativa. Os aa lisina, arginina e histidina contribuem
com carga positiva (denominados de bsicos) enquanto que o cido asprtico e o cido
glutmico so carregados negativamente (denominados de cidos). Os demais 15 aa so
neutros com relao a carga eltrica. Destes, os polares so: serina, treonina, tirosina,
triptofano, asparigina, glutamina e cistena. Os demais apresentam propriedades
hidrofbicas (no polar): alanina, fenilalanina, glicina, isoleucina, leucina, metionina, prolina
e valina. Tais propriedades (polaridade e a hidrofobia) tambm so incorporadas s
protenas.

Figura 1.1: Estrutura geral de um aminocido

mostrando suas estruturas fixas e o radical varivel,
poro que diferencia os diferentes aminocidos

Os tipos de aa includos e principalmente a sua sequncia determinam a

conformao tridimensional e portanto, as propriedades de todas as protenas. O tamanho
de uma protena pode variar de alguns poucos at 30.000 aa. Trinta ou 40 aa so
suficientes para proporcionar uma conformao terciria.

Figura 1.2: oligopeptdeo formado por quatro aminocidos unidos por ligaes peptdicas
(em vermelho). O primeiro aminocido (glicina, com o radical H) apresenta a extremida N-
terminal, enquanto o ltimo aminocido (alanina, com o radical CH3) apresenta a extremidade
carboxi-termina.

4
 A estabilidade das protenas representa um equilbrio entre a sua sntese e a sua
degradao. Existe um processo contnuo de reposio (turnover) que pode ser
caracterizado quando se conhece a meia-vida das protenas, ou seja o tempo necessrio
para a renovao da metade da sua concentrao. A meia-vida das protenas pode variar de
minutos a mais de 20 horas e sua degradao catalisada por enzimas proteolticas.
Exemplos: protenas com N-terminal arginina - 2 min; lisina, leucina e fenilalanina - 3 min;
prolina - 7 min; tirosina e glutamina - 10 min.
Na maioria das vezes as protenas para exercerem suas funes devem sofrer
modificaes, como fosforilao, glicosilao ou metilao. No processo de fosforilao
adicionado protena um grupo fosfato pelas kinases, tonando-se fosfoprotenas. A
metilao ou acetilao consiste na incorporao de um metil ou acetil protena pelas
metilases ou acetilases, respectivamente. A incorporao de carboidratos numa cadeia
protica denomina-se glicosilao, origina as molculas denominadas de glicoprotenas.
Enzima a denominao de uma protena quanto esta apresenta a habilidade de
acelerar uma reao fazendo ou quebrando uma ligao (covalente) especfica. Para o
exerccio desta funo, as protenas devem apresentar a conformao terciria ou
quaternria. A conformao quaternria na realidade a agregao de duas ou mais sub-
unidades, que nesta condio proporcionam a funo catalisadora uma protena enzima.
Exemplo: Rubisco ou ribulose-1,5-bifosfato carboxilase/oxigenase se torna uma enzima
quando oito sub-unidades se agrupam, quatro delas codificadas por genes nucleares e as
outras quatro por genes do cloroplasto. A Rubisco responsvel pela incluso de CO2 numa
cadeia de carbono (1 etapa no ciclo de Calvin). Tratando-se de enzimas, nem todos os aa
participam da reao cataltica. Existe um stio ativo responsvel pela catlise. Este stio
ativo ento um conjunto de aa denominado de motivo ou domain. A domain pode ser
entendida como a unidade funcional de uma protena, uma regio relativamente
independente da protena. Nas interaes com outras protenas ou cidos nucleicos apenas
uma parte da protena, o motivo (ou domain), responsvel pela funo.
Quando diferentes protenas desempenham funes semelhantes, constituem uma
famlia de protenas. A mesma seqncia formadora de uma determinada domain pode se
encontrada em vrias protenas de espcies diferentes. Aparentemente, durante a evoluo
a domain se moveu dentro da sequncia linear de aminocidos sem perder sua funo e
especificidade de ligao. Estas domains variam quanto ao nmero de aa: 18 no Colgeno,
mais de 250 aa Fibrinognio. Freqentemente, as domains podem se repetir (at mais de
30) numa mesma protena, neste caso denominadas de motivo (motif) sendo que nem todas
as repeties so exatamente idnticas. Estas duplicaes provavelmente so devido a
existncia de elementos mveis ou transformao. As duplicaes tm provocado a
elongao de muitas protenas. Estimativas admitem a existncia de mais de 50 mil tipos de
protenas numa espcie eucariota.
As primeiras tcnicas de separao de macromolculas, foram desenvolvidas na
dcada de 40. Nesta poca foi desenvolvido os sistemas de cromatografia que permitem a
separao das fraes polares das no polares com base na solubilidade das diferentes
molculas. De acordo com este princpio, um solvente no polar move-se carregando
solutos com ele. As substncias migram a diferentes distncias de acordo com a sua
solubilidade no solvente. Atualmente existem uma dezena de diferentes tcnicas de
cromatografia, que possibilitam inclusive a identificao de molculas presentes numa
mistura.
Nos anos 80 foi descoberto que algumas doenas (desordens degenerativas)
poderiam ser causadas por agentes infecciosos formados apenas por protenas. Estas
protenas foram denominadas de prons ('proteinaceous infections particles'). O pron uma
forma alterada da protena PrP que normalmente est presente no crebro de vertebrados.
Estas desordens degenerativas ocorrem com freqncia em animais e muito raro na espcie
humana.

5
 O sequenciamento de protenas uma tcnica, desenvolvida por (Sanger, 1950),
com a finalidade de conhecer a seqncia dos aa numa protena. As implicaes desta
descoberta so inmeras. A mais importante se relaciona com a sade humana, pois a
tcnica permitiu a identificao de inmeras doenas. Mutaes ao nvel de DNA podem
provocar a substituio de um aa por outro numa determinada posio da seqncia de uma
protena e dependendo da posio a protena perde sua funo, causando ento uma
doena. Outra conseqncia foi a possibilidade de inferncia da seqncia de bases ao
nvel de DNA que codifica para as protenas sequenciadas. Isto permitiu o isolamento e a
clonagem dos primeiros genes. Mais tarde, o prprio Sanger desenvolveu um mtodo de
sequenciamento de DNA. Por esta contribuio cincia, Sanger foi agraciado com um
segundo prmio Nobel.

1.2-CIDOS NUCLEICOS (Griffiths et al., 2015)

1.2.1-cido desoxirribonucleico - DNA
As molculas de DNA tm estrutura em forma de dupla hlice, semelhante a de uma
escada retorcida. Cada fita formada por uma seqncia de nucleotdeos (dNTP). Cada
dNTP composto de uma base nitrogenada ligadas a uma molcula de acar
(desoxirribose) e um grupo fosfato. As bases nitrogenadas ligadas a desoxirribose so
quatro: adenina (A), citosina (C), guanina (G) e timina (T). Uma ligao fosfodister
unindo o grupo fosfato de um dNTP e o acar desoxirribose de outro dNTP forma o
esqueleto da fita (strand), como se fosse uma das laterais da escada. A outra fita (ou a outra
lateral da escada) formada da mesma maneira, mas com orientao da ligao
fosfodister contrria, o que impe a caracterstica de antiparalelismo as duas fitas. Cada
fita tem uma orientao (5'-3') em funo da natureza da ligao fosfodister entre o
carbono 3' e o 5' da desoxirribose, sendo que um nucleotdeo s pode ser includo na cadeia
atravs da ligao do fosfato com o carbono 3'OH da desorribose. Por isto, a orientao da
cadeia 5'-3', pois haver sempre o carbono 3' numa das extremidade da fita.
Mais do que isto, estas duas fitas so complementares j que quando existir adenina
de um lado, somente timina encontrada na mesma posio na outra fita. O mesmo
acontece com citosina e guanina. So estes os dois nicos tipos complementao de bases
nitrogenadas possveis no DNA. Como conseqncia o nmero de adeninas ser igual ao
nmero de timinas num organismo. O mesmo vale para C e G. Entretanto a quantidade de
purinas (A e G) caracterstica de cada espcie. Assim a proporo entre A e G de 0,7
em Bacillus, 1,56 no homem e 1,7 em Saccharomyces cereviseae. Isto conhecido como
regra de Chargaff.
Entre as bases nitrogenadas existem pontes de hidrognio, duas entre A e T e trs
entre C e G. Tais pontes juntamente com outras foras, mantm as duas fitas unidas. Cada
par de bases anlogo a um degrau desta escada. O DNA funciona como um modelo para
a sntese de novas fitas de DNA. O DNA a molcula responsvel pelo armazenamento e
perpetuao do cdigo gentico. Apesar da ocorrncia de 3 tipos de DNAs ('A', 'Z', 'B'),
aparentemente desempenham a mesma funo.
A prova definitiva de que o DNA a molcula repositrio do cdigo gentico foi
obtida em 1952 por Hershey e Chase. Experimentalmente adicionou-se 32P numa colnia de
bactrias infectadas por vrus, neste caso o fsforo radioativo foi incorporado no DNA, j que
pouco ou quase nenhum fsforo encontrado nas protenas. Num experimento paralelo, foi
feita a adio do istopo 35S, que pode marcar radioativamente as protenas, j que estas
tm enxofre, mas no marca o DNA, pois este no contm enxofre. Como s o 32P foi
detectado nas prognies dos vrus, conclui-se que o DNA passava de gerao a gerao.
Na realidade, oito anos antes, outros trs cientistas (Avery, MacLead e McCarty) haviam
postulado que o agente transformador (possivelmente o DNA) era destrudo pela
desorribonuclease pancretica que por sua vez no afetava as protenas.

6
 A quantidade de DNA pode variar de 103 a 1013 nucleotdeos. Esta quantidade de
DNA por clula haplide denominada de valor C. So aproximadamente 3 bilhes de
pares de bases no ncleo de cada clula humana. Entretanto podem ser apenas 5387 no
vrus x174. A maioria das plantas tem uma quantidade de DNA que varia entre 109 a 1011.
Nos mamferos existem de 109 a 1010 pares de bases; j alguns peixes ou anfbios podem
ter at 1013 pares de bases. muito DNA para pouca funo (paradoxo do valor C).
Enquanto nos procariotos praticamente quase todo o DNA carrega informaes necessrias
para a sntese de protenas e RNAs, a maior parte da seqncia de bases dos eucariotos
no codifica para produto algum. Assim apenas 3% (aproximadamente) do genoma humano
formado por genes (estimados em mais de 50 mil) sendo que a funo do restante ainda
no est suficientemente compreendida. A maior parte deste DNA sem funo conhecida
composto por seqncias repetidas, de onde se originou o nome de DNA repetitivo (selfish,
nos anos 80).
Quando esticada, uma molcula de DNA de qualquer clula humana mediria 1,80 m
e teria a espessura de um trilionsimo de um centmetro (1 micrmetro = 1 milsimo de
milmetro). Uma clula humana no comportaria tal estrutura. Dentro de uma clula as
molculas de DNA esto ligadas a protenas e so retorcidas ou enroladas (supercoil).
Quando completamente compactadas so possveis de serem visualizadas no microscpio
tico e recebem a denominao de cromossomos. A compactao pode alcanar um fator
de 7000 vezes. Vrus e bactrias contm apenas um cromossomo. J os eucariotos (fungos,
plantas, animais) tm dois ou mais cromossomos que em geral, variam de tamanhos.

Figura 1.3: Nucleotdeos

formados com as pentoses ribose
(formam RNAs) ou desoxiribose
(forma DNA). A diferena entre as
pentoses est realada em
vermelho.

Figura 1.4: ligao entre dois

desoxirribonucleotdeos (dNTPs),
atravs de uma ligao fosfodister
(em vermelho) entre o grupo fosfato de
um dNTP e a pentose de outro dNTP.
Os carbonos 5 e 3 esto realados em
azul.

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Genoma e gene
A seqncia de pares de bases que formam o DNA pode ser chamada de genoma. A
forma do genoma pode ser circular como nos vrus, bactrias, mitocndria, cloroplasto e
plasmdeos ou linear como nos cromossomos dos organismos eucariotos e alguns
procariotos. O genoma da maioria absoluta dos organismos de DNA. Poucos vrus so de
RNA, como Influenza, HIV, TMV, poliomielite. A grande maioria tambm apresenta fita
dupla. Exceo a alguns vrus como (x174, M13 e f1, cujos genomas so constitudos de
apenas uma fita de DNA. As caractersticas de um indivduo como a cor dos olhos ou da
pele so determinadas por um conjunto limitado de pares de bases contidas no DNA (ou no
RNA, como j mencionado, trecho este, denominado de gene.
O conceito de gene evoluiu tanto quanto a biologia. Uma das primeiras observaes
sobre o tema foi feita por Leonardo da Vinci. Observando a cor dos filhos de mulheres
brancas com homens pretos, ele sugeriu que a semente da me tinha o mesmo vigor que a
do pai (Wallace, 1992). Mas foi Mendel em 1865 quem utilizou pela primeira vez a
expresso fator para os componentes hereditrios parentais responsveis pelas
caractersticas nas prognies. S mais tarde (1908), Johannsen sugeriu o termo gene para
designar os fatores hereditrios.
Por gene entende-se a unidade de herana. Contudo, os diferentes textos de
gentica apresentam diferentes conceitos para gene. Segundo a maioria dos autores, o
principal atributo do gene sua relao com a protena que codifica. Neste caso, define-se
gene como sendo um segmento de DNA, que atravs da intermediao de uma molcula
mensageira de RNA, responsvel pela especificao de uma cadeia peptdica (Wallace,
1992). Entretanto, outros geneticistas incluem, alm das protenas, os RNAs como produtos
gnicos transcritos, mas no traduzidos. Neste caso, a definio de gene um segmento de
DNA responsvel pela produo de um produto difusvel (Lewin, 1994). Como um
significativo grupo de RNAs exerce funes outras que a de mensageiro, como por exemplo,
a regulao gnica, o segundo conceito de gene mais realista.
Dentre os vrios RNAs descobertos neste sltimos 20 anos, o RNAi, denominado de
RNA interferncia, da clase dos micros RNAs (miRNA) tem um papel fundamental da
regulao gnica.
Por se tratar de uma seqncia de DNA, um gene pode ocorrer sob mais que uma
alternativa ou alelo. Desta forma, basta uma alterao na seqncia de bases que cause
uma mudana no produto, para que se configure uma alternativa (alelo) diferente. Para
simplicidade, normalmente utiliza-se um modelo bsico de um gene com dois possveis
alelos, j que a maioria dos seres vivos diplide, portanto, carregam dois alelos (um em
cada cromossomo homlogo) para o mesmo gene. Mas na realidade, um gene pode ter
muitas alternativas. Evidentemente que num indivduo diplide s ocorrem uma ou duas
formas no mximo. Mas diferentes indivduos podem apresentar formas allicas diferentes
uns dos outros. Um dos exemplos mais conhecido trata-se do tipo sanguneo, sendo que
numa populao de indivduos podem ser encontrados quatro diferentes alelos.

Sequenciamento de cidos nucleicos

O sequenciamento consiste na identificao ordenada dos nucleotdeos que
compem um fragmento de DNA ou RNA. Existem duas tcnicas que so utilizadas
normalmente em laboratrios. Por outro lado, nos ltimos anos foram desenvolvidos
equipamentos sequenciadores de alta velocidade e que esto sendo utilizados no
sequenciamento de espcies procariotas (bactcias) e eucariotas (fungos, vegetais e
animais, incluindo Homo sapiens).
Conhecer a sequncia de bases dos genomas das espcies tem sido um dos
objetivos dos bilogos. A sequncia completa de vrios vrus j conhecida h bastante
tempo, devido ao fato do pequeno nmero de nucleotdeos participantes de seus genomas.
Em 1995 foi finalizado o sequenciamento do genoma das duas primeiras bactrias pelo 'The

8
Institute for Genomic Research' (TIGR http://www.tigr.org/tdb/): Haemophilus influenzae e
Mycoplasma genitalium. A primeira delas, que causa a inflamao no ouvido, tem
aproximadamente 1,8 milho de pares de bases e aproximadamente 1700 genes. A
segunda que tem apenas 570 genes est associada s infees reprodutivas. O
sequenciamento do organismo deve contribuir para o desenvolvimento de vacinas ou outras
estratgias de combate a doena causada por aquela bactria. Alm disso, o
seqenciamento do Saccharomyces cerevisae, iniciado em 1989, foi concludo em junho de
1996, resultante de um projeto feito em parceria por um grupo de pesquisadores de vrios
pases europeus. Esta levedura, alm de ser utilizada como modelo gentico para estudos
em espcies eucariotas, utilizada na produo de bebidas fermentadas. O
seqenciamento desta levedura um marco histrico, pois foi o primeiro organismo
eucarioto a ter seus genes totalmente inventariados. Brevemente, sero conhecidas a
maioria das sequncias de nucleotdeos de vrias espcies vegetais e animais de
importncia econmica e cientfica (exemplos na Tabela 1.1).

Tabela 1.1: Nmero de genes e tamanho do genoma de espcies parcial ou totalmente

sequenciadas
Espcie Em milhes de pares de Nmero de genes
bases
Mycoplasma genitalium 0,58 482
Helicobacter pylori 1,67 1.590
Haemophilus influenzae e 1,83 1.740
Bacillus subtilis 4,20 4.000
Xylella fastidiosa 2,679 2.904
Escherichia coli 4,639 4.307

Saccharomyces cerevisae 12,5 6.034

Caenorhabditis elegans 100 13.100
Arabidopsis thaliana 125 25.500
Oryza sativa 389 37.550
Vitis vinifera 487 33.500
Sorghum bicolor 697 37.000
Malus x domestica 742 57.000
Glicine max 1115 47.000
Zea mays 2.300 32.500
Triticum aestivum 16.000 50.000

Gallus gallus 1.000 23.000

Sus domesticus 2.389 46.000
Box taurus 2.870 22.000
Mus musculus 3.000 23.000
Homo sapiens 3.000 25.000
(Adaptado de Science 276:1960, 1997; Science 277:1432, 1997; outras)

O primeiro projeto no Brasil nesta rea foi o sequenciamento da bactria Xyllela

fastidiosa que causa uma doena no citrus chamada de amarelinho. O referido projeto foi
iniciado em 1997 e tem um oramento de 14 milhes de dlares, financiado pela FAPESP,
que a Fundao de Amparo a Pesquisa do Estado de So Paulo. O nmero de espcies j
totalmente sequenciadas cresce ano a ano e J passa de mil. Outras esto sendo
sequenciadas, entre elas.
Enquanto nos procariotos, a densidade mdia de genes de 1 gene a cada 1000 pb
aproximadamente, nos eucariotos de 1 gene a cada 2000 pb nas leveduras, 1 gene em
5000 pb nos nematides e 1 gene a cada 4800 pb em Arabidopsis. A maior quantidade de

9
DNA pode ser parcialmente explicada pelo fato de que, nos eucariotos a parte regulatria
dos genes muito maior que nos procariotos. Alm disso, nos eucariotos existem
sequncias repetidas, que so ausentes nos procariotos. Embora se saiba o nmero de
genes dos organismos sequenciados, ainda no se conhece as funes de 40 a 60% dos
genes, dependendo da espcie. O conhecimento da sequncia de bases de um genoma
permite aos bilogos o entendimento do funcionamento dos organismos, as funes dos
genes, que tipo, tamanho, quantidade e caractersticas das protenas formadas. A maior
parte das espcies de bactrias j sequenciadas causam doenas espcie humana. A
razo principal para se conhecer sua sequncia relaciona-se com a possibilidade do seu
controle, via desenvolvimento de vacinas ou outros medicamentos. As plantas so a base
da vida na terra. Contudo, pouco se conhece de seu genoma. O genoma das angiospermas
altamente varivel, mas ainda praticamente desconhecido. Desconhecemos tambm o
nmero de espcies e o nmero de genes para a maioria das espcie. Na verdade, ainda
no conhecido o nmero de cromossomos de mais de 70% das espcies vegetais. O valor
C de DNA s conhecido em 1% das espcies. Desta forma, o projeto genoma de
fundamental importncia para o aprofundamento do conhecimento das plantas,
domesticadas ou no.
Muitos cientistas tm afirmado que o seqenciamento completo do genoma humano
(estimado em trs bilhes de pares de bases) dever revolucionar a medicina e poder
auxiliar na cura para as mais de 3000 doenas hereditrias que atingem a raa humana.
Iniciado em 1985, o seqenciamento do genoma humano que rene cientistas e laboratrios
dos Estados Unidos, Canad, Japo, Inglaterra, Frana, Rssia, Itlia, Austrlia e Brasil
entre outros, foi completado antes da data prevista (2005). Quando pronto, o arquivo
necessrio ao armazenamento das informaes se torna equivalente a 200 listas telefnicas
com mil pginas cada uma. O GenBank (USA) e o DNA Database (Japo) j dispem de
informaes de mapeamento e sequenciamento de mais de 2500 diferentes organismos.
Mapas fsico e de ligao foram divulgados (com resoluo elevada) nos anos de 1993 e
1994 por cientistas franceses e americanos. Tais mapas facilitaro a clonagem de genes
humanos, como aqueles envolvidos com as doenas, a obesidade, entre outras.
Especificamente Arabidopsis thaliana, que hoje se constitui no organismo
experimental para isolamento e clonagem de genes de plantas, est totalmente sequenciado
(Theologis et al., 2000). Esta planta contm aproximadamente 125 milhes de pares de
bases, portanto, o seu genoma relativamente pequeno, se comparado com o das outras
espcies vegetais, o que facilita o seu estudo. O nmero de genes estimado em 26.000.
O sequenciamento do genoma de Arabidopsis foi feito por muitos cientistas e
estudantes em laboratrios ao redor do mundo, vinculado ao Arabidopsis Genome Initiative
O desenvolvimento de densos mapas de ligao gentica e o sequenciamento de
parte do genoma de outras plantas cultivadas facilitar a identificao e isolamento de
importantes genes. O genoma do milho, soja, arroz e outras plantas tambm j esto
praticamente sequenciados.
Professores e estudantes do Laboratrio de Fisiologia do Desenvolvimento e
Gentica Vegetal fizeram parte do Consrcio Genopar que sequenciou o microrganismo
Herbaspirillum seropedicae Cepa Z78 (Pedrosa et al., 2011). Esta bactria que tem
aproximadamente 5.513.887 de pares de bases, est envolvida no processo de fixao do
nitrognio atmosfrico em algumas espcies de gramneas, como a cana-de-acar.

10
 Figura 1.5. Fotografias de plantas de arabidopsis na natura eou em alboratrio.
IlustraoFonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/Ficheiro:Arabidopsis_thaliana_habito.jpg

Introns e exons
Foi descoberto nos anos 70 a presena de seqncias presentes no DNA mas no
no RNA mensageiro, produto da transcrio do DNA. Tais seqncias foram denominadas
de introns (intervening sequences) e esto intercaladas com os exons (expressed
sequences), que so as regies codificadoras dos genes. A remoo dos introns feita por
enzimas e faz parte do processamento que sofre o pr-mRNA antes de sair do ncleo
(Figura 1.6). A presena de introns ou sequncias intervenientes sugere uma maior
oportunidade para recombinaes e maior acmulo de mutaes. Introns so comuns nos
eucariotos e raramente encontrados nos procariotos. Quando o intron que faz o
processamento, ele se regenera no final do processo. Neste caso, o intron seria uma
enzima, proporcionando ao RNA a funo de catlise. Nas bactrias ainda no foram
detectados introns. Uma das hipteses de que as bactrias perderam os introns durante a
evoluo. Neste caso os introns teriam se originado no incio da vida. Outra hiptese admite
que os introns surgiram com os eucariotos. Na realidade, ainda no se sabe exatamente
como os introns surgiram, nem tampouco se apareceram logo no incio da vida ou surgiram
mais recentemente.
Embora tenham caractersticas similares, os introns so muito diversos quanto ao
tamanho, processamento e funes. Certos introns, em especial os do chamado grupo I,
comuns em genomas de organelas celulares (como a mitocndria) e em alguns genes do
ncleo (como o rRNA), apresentam caractersticas especiais. Eles prprios realizam sua
remoo do pr-mRNA (autocatlise) e ligam os exons, fenmeno denominado self-
splicing.
Alguns introns desse grupo so elementos mveis (transposons), capazes de se
transferir em cruzamentos genticos para alelos que no os continham pelo processo
denominado homing, iniciado com o corte do DNA por uma endonuclease, enzima
codificada pelo prprio intron. Outros introns do grupo I codificam cofatores proticos, como

11
as maturases. So poucos os casos conhecidos em que um mesmo produto desse tipo de
intron realiza ambas as funes -- de endonuclease e de maturase.

Figura 1.6: Representao esquemtica da estrutura de um gene eucarioto,

contendo exons e introns. No rocesso de splicing do RNA, os introns so retirados,
ao mesmo tempo que um cap e uma cauda de adeninas so adicionados ao mRNA.

Alm do processamento, distintas combinaes de introns podem ocorrer, resultando

na fromao de diferentes peptideos a partir de um mesmo gene.
J so conhecidos casos de transferncia de introns do grupo I entre indivduos da
mesma espcie (transferncia vertical). Nesse caso, um intron passa de um alelo para outro
que no o continha. Tambm j foi constatado que introns desse grupo presentes no
genoma das mitocndrias podem passar de uma espcie para outra (transferncia
horizontal, ou lateral), mas dentro do mesmo filo.
A transferncia lateral, entre organismos que no se acasalam sexualmente, foi objeto
de profundo estudo de Yangrae Cho e colaboradores, publicado em novembro de 1998. O
estudo envolveu um intron do grupo I do genoma mitocondrial de plantas vasculares,
bastante conhecido e localizado no gene cox1 da erva Peperomia polybotrya, que teria sido
adquirido de um fungo, por transferncia lateral. Analisando o DNA de 335 plantas de
diferentes gneros, os autores verificaram que esse intron est amplamente disseminado
nos genes cox1 das angiospermas.
O intron estudado est presente em 48 gneros diferentes, a partir de 32 eventos
independentes de transferncia lateral. A concluso sobre as transferncias baseia-se em
trs pontos principais: a presena constante do gene cox1 e espordica do intron, a
incongruncia entre as filogenias (histrias evolucionrias) das espcies e dos introns e a
co-converso (Co-converso quando parte das extremidades de um segmento de DNA
3 a 18 pb -, aps o processo de recombinao/reparo, convertida sequncia do DNA
doador ou invasor. Assim, o DNA da espcie recipiente parcialmente degradado e uma
nova sequncia sintetizada com base no molde do DNA da espcie doadora. Desta forma,
a converso deixa um rastro, pois a sequncia original alterada.) das seqncias prximas
do local de insero do intron. O primeiro ponto indica que o gene cox1 se disseminou com
alta freqncia e manteve-se nas espcies que o receberam, enquanto o intron foi perdido

12
na maioria dos casos. O segundo demonstra que a transferncia independe do grau de
parentesco entre as diferentes plantas. E o ltimo -- a divergncia gentica das regies que
flanqueiam a insero do intron -- revela que a transferncia se d via recombinao/reparo
e catalisada por uma endonuclease. Esse processo, conhecido como homing,
exatamente o que esse tipo de intron promove.
Os resultados geram vrias preocupaes. Entre as dvidas principais esto a causa
da extraordinria invaso desse intron, os passos do processo de transferncia em nvel
celular e o caminho evolutivo da disperso do intron do grupo I do gene cox1 entre as
angiospermas. Entre as implicaes, a mais importante est ligada freqncia com que o
DNA transferido de uma espcie a outra. A transmisso planta a planta requer
acasalamento sexual ou a ajuda de vetores (vrus, bactrias, insetos e outros). A questo
bastante atual, j que muitas plantas transgnicas esto sendo liberadas para cultivo.
O trabalho de Cho e colegas (1998) demonstra claramente que a transferncia
horizontal ocorre e mais freqente do que se imagina. Isso torna imperativo estudar o fluxo
gnico entre plantas transgnicas e espcies afins, antes de sua liberao para cultivo, para
testar a possibilidade de uma irradiao de genes, que podem ser desejveis em uma
espcie, mas completamente indesejveis em outras. A probabilidade desta irradiao
aumenta com o aumento do cultivo destas plantas, principalmente no sistema de
monocultura. Num dado momento, um mesmo gene poder estar presente em milhes de
plantas, aumentando o risco da transferncia horizontal.

1.2.2-cido ribonucleico - RNA

Apesar de ser tambm um cido nucleco, os RNAs tm muitas diferenas em
relao ao DNA. Em primeiro lugar, todos os RNAs so formados por apenas uma fita.
Entretanto, pode apresentar uma configurao denominada de secundria, quando ocorre o
pareamento entre bases complementares. Ao invs de desoxirribose como no DNA, o
acar do RNA uma ribose (uma oxidrila a mais em relao a desoxirribose do DNA). A
terceira principal diferena a presena de uracil (U) ao invs de timina (T). Podem ocorrer
pelo menos quatro tipos de RNA: mRNA (1-3%), rRNA (>90%), tRNA (1-2%) e sRNA (?%),
denominados de mensageiro, ribossomal, transportador e small RNAs, respectivamente.
Cada um deles desempenha funes especficas. Dentro do ltimo grupo, so includos um
grande grupo de RNAs, muitos dos quais ainda sem funo conhecida. Outros esto
envolvidos na regulao gnica.
Alm das funes de mensageiro entre o DNA e os ribossomos, formador dos
ribossomos, e transportador de aminocidos, os RNAs podem ainda desempenhar a funo
de catlise e de regulao gnica. A funo de catlise (at ento exclusividade das
protenas) foi descoberta na dcada passada e os RNAs que tm esta habilidade, as
ribozimas, realizam a separao do RNA transcrito em vrias partes, fenmeno que se
chama de splicing. O autoprocessamento do RNA no idntico catlise enzimtica
executada pelas protenas. Numa reao enzimtica, a protena se envolve, mas liberada
intacta ao final do processo. No caso do autoprocessamento, o pr-RNA se processa a si
prprio, sem a presena de enzimas, mas no se regenera no fim do processo. Portanto, o
pr-RNA no uma enzima, mas tem a propriedade de catlise. Alm disso, foi verificado
experimentalmente que o RNA tem a capacidade de retirar bases de um segmento de RNA
e adicion-las em outro, demonstrando a capacidade de sintetizar algo semelhante a si
prprio.

mRNA
Resultam da transcrio de um gene. So os RNA mensageiros (mRNA), aqueles
que sero decodificados pelos ribossomos e contm informaes para a produo de uma
protena. O tamanho dos mRNAs varivel, dependendo do nmero de bases contidas no
gene transcrito. Como contm uma mensagem, diz-se que existe uma colinearidade entre

13
as bases do mRNA e a sequncia de aminocidos da protena resultante de sua
decodificao. O tempo de vida de um mRNA muito pequeno. Na maioria dos procariotos
a meia vida de um mRNA no ultrapassa 2 minutos. J nos eucariotos, alguns mRNAs
duram algumas horas.

rRNA
O RNA ribossomal (rRNA) tambm resultante da transcrio de genes de uma
regio do DNA, neste caso denominada de rDNA. O produto da transcrio no
decodificada, pois os prprios RNAs produzidos juntamente com protenas vo formar os
ribossomos e executar a funo especfica, que a produo de protenas. Participam da
formao do ribossomo de um procarioto trs rRNAs: o 5S rRNA com 120 nucleotdeos, o
16S rRNA com 1542 nucleotdeos e o 23S rRNA com 2904 nucleotdeos. Nos eucariotos,
estes rRNAs so um pouco maiores e designados de o 5S rRNA, o 18S rRNA e o 28S
rRNA. Entretanto, nem todos os eucariotos tm os rRNAs do mesmo tamanho.

tRNA
Denominada de adaptadores por Francis Crick, o tRNA (RNA transportador) um
RNA que tem a funo especfica de transportar os aminocidos at o ribossomo durante a
sntese de uma protena. So molculas relativamente pequenas, contendo de 73 a 93
nucleotdeos. Dos cidos nucleicos conhecidos, o tRNA o nico que apresenta algumas
bases que no A, C, G e T. Numa clula existem pelo menos tantos tRNAs quanto so os
aminocidos, e estes esto ligados ao tRNA na extremidade 3'OH. A estrutura tridimensional
de um tRNA assemelha-se a uma folha de trevo, contendo numa das alas (loop ou hairpin)
o anticodon, que uma seqncia de trs bases.

Outros RNAs
Alm dos RNA acima mencionados, existem outros RNAs, muitos deles transcritos e
que permanecem no ncleo da clula sem funo aparente. Os ncRNAs (non-coding RNA)
so pequenas molculas de RNA que no codificam protenas funcionais. Os small nuclear
RNAs (snRNAs) esto envolvidos no processo de splicing de mRNA (retirda dos introns
ejunao dos exons de um gene). J os small nucleolar RNAs (snoRNAs) que esto
envolvidos no processo de splicing de rRNA. Outras formas de RNA tambm so
conhecidas, como o circRNA (circular RNA), mas as suas funes reguladoras e vias
metablicas ainda no esto totalmente elucidadas.
Os ncRNAs regulatrios esto envolvidos em diversos processos biolgicos. Estes
ncRNAs podem ser divididos, de acordo com o seu comprimento, em pequenos e longos
ncRNAs (lncRNAs). Os ncRNAs pequenos possuem comprimento menor que 200
nucleotdeos e incluem microRNAs (miRNAs), short interfering RNA (siRNA), trans-acting
RNA (tasiRNA) e piwi-interacting RNA (piRNA), enquanto os lncRNAs possuem
comprimento maior que 200 nt, variando at 100 kb. Os miRNAs fazem parte de processos
biolgicos cruciais, como resposta estresse biolgico, desenvolvimento e comportamento
celular miRNAs constituem uma famlia de elementos reguladores de expresso gnica,
com tamanho variando de 18 a 26 nt, e que controlam diversos processos celulares em
organismos eucariticos. (Ramesh et al., 2014) Em animais, a maioria dos miRNAs so
processados de longos transcritos em forma de hairpin atravs de consecutivas aes de
enzimas membros da famlia da RNA III, DROSHA e DICER, enquanto em plantas somente
a enzima DICER responsvel pelo processamento de miRNAs. A maioria das plantas
possuem mais de 100 genes de miRNAs (chamados de MIR), localizados quase que
exclusivamente em regies intergnicas do genoma. J siRNAs e piRNAs so produzidos
por vias diferentes s dos miRNAs, esto envolvidos no silenciamento gnico de
transposons e sequncias repetitivas.

14
 Os siRNAs so gerados de RNAs de dupla fita que por sua vez tem distontas
origens, tais como RNAs transcritos de regies invertidas, pares de transcritos em cis-
antisenso, pela ao de RNA-dependent RNA polymerases (RDRs) que convertem RNA de
fita simples em RNA dupla fita (dsRNA), entre outros. O dsRNA clivado em siRNAs curtos
(21 24 nt) pela ao de protenas DCLs, as quais definem o tamanho do siRNA de acordo
com a sua atividade cataltica. De forma similar aos miRNAs, os siRNAs tambm so
incorporados em complexos RISC, podendo interferir na regulao gnica a nveis ps-
transcricionais ou transcricionais (por meio de vias RNA-directed DNA Methylation- RdDM).
A interferncia mediada por RNAi um mecanismo natural que ocorre nos
organismos eucariotos e exerce o papel na eliminao de RNAs mensageiros anmalos e
na defesa do organismo contra parasitas moleculares como transposons e vrus. A
interferncia de RNA (ou RNAi) leva ao silenciamento estvel de genes especficos e
herdvel. Estes siRNAs podem destruir os RNAs menssageiros. Tambm podem ser
amplificados. A presena pode ser devido ao possvel combate de invasores (ex: vrus) e
outras sequncias (ex: transposons). O RNAi (miRNAS ou siRNAS) podem ser transmitidos
para clulas-filhas ou outras clulas mais distantes.

1.2.3-cido peptdeo nuclico (PNA)

Esta nova molcula, criada em 1991 em laboratrio, tm as quatro bases
nitrogenadas do DNA ou RNA ligadas ao esqueleto de uma protena. Este novo composto
sinttico alm de ser mais estvel nas clulas que o DNA e o RNA, se liga naturalmente a
estes com uma intensidade 50 a 100 vezes mais forte que os prprios cidos nucleicos
naturais o fazem entre si. Quando se liga ao DNA, forma uma estrutura de trs fitas. Isto
permite o uso destas molculas na terapia gnica, pois pode provocar a indisponibilidade
daquela regio genmica ser acessada por enzimas e protenas. Neste caso, poderia ser
utilizado um PNA para se ligar a um gene defeituoso que, ento, deixaria de expressar uma
protena defeituosa. Os PNAs podem procurar e se ligar a outra fita com seqncia
complementar de bases, estratgia similar ao antisenso.
O PNA construdo ligando-se cada base nitrogenada a um peptdeo ao invs de um
acar e um grupo fosfato. Como a cadeia de peptdeos tem carga eltrica neutra, os PNAs
apresentam uma grande capacidade de ligao, eliminando a repulso criada pela carga
eltrica negativa devido a presena dos grupos fosfatos presentes no DNA e RNA. Alm
disso, os PNAs podem atacar genes invadindo a dupla hlice, algo que DNA e RNA no
conseguem. Mais ainda, a qumica de peptdeos simples e mais barata que sintetizar
cidos nucleicos.
Este produto da biotecnologia poder ser aplicado na sade humana. O principal
argumento da utilizao dos PNAs em diagnstico decorre do fato da grande afinidade com
o alvo; quanto maior a afinidade, maior a possibilidade de ligao com seqncias
especficas e consequentemente, a sua marcao. Mas como a molcula artificial, ainda
no se conhece ainda a sua toxicidade.

1.2.4-cidos nucleicos e a origem da vida

Como capaz de armazenar o cdigo gentico em alguns vrus, tem a funo
cataltica e de regulao gnica, o RNA passou a ser admitido (hiptese) como a provvel
molcula que poderia ter originado a vida a partir do 'caldo primitivo'. Esta teoria tem
recebido contribuies cientficas por uma grande quantidade de cientistas do mundo inteiro.
Duplicando RNAs semelhantes como os RNAs ribossomais e participando da produo das
protenas, o RNA um forte candidato a ser a estrutura do primeiro ser vivo na face da
Terra. A funo cataltica, entendida aqui como sendo a capacidade de quebrar e ligar
outros RNAs, j foi comprovada. H tambm resultados de pesquisa que atribuem ao RNA a
capacidade de editorao, um sistema simplificado do sistema de reparo do DNA. Os vrus
que possuem RNA como material gentico necessitam da enzima transcriptase reversa para

15
produzir DNA e ento se replicarem. Quando se provar que o RNA tem ou teve capacidade
de autoduplicao, ser dado um passo importante favorvel a hiptese do 'Mundo do RNA'.
Nenhuma outra molcula teria a capacidade e a versatilidade de desempenhar tantas
funes como o RNA no 'caldo primitivo'. Outra hiptese considera uma molcula mais
simples, precursora do RNA, composta de um cido nuclico ligado a peptdeos
(denominada de PNA).
Alguns cientistas no concordam com estas hipteses por considerarem que as
molculas de RNA so muito complexas para ter tido origem no ambiente primitivo terrestre,
onde s havia gua, gs carbnico, nitrognio e radiao ultravioleta. Alm disso, no 'caldo
primitivo' deveriam existir substncias muitos txicas. Em contrapartida, admitem que sob as
condies primitivas, a estrutura cristalogrfica dos minerais seria capaz de reduzir dixido
de carbono para formar aldedos e a partir destes se formariam acares e molculas
orgnicas essenciais. A transferncia de eltrons de uma molcula outra poderia ter
contribudo para as transformaes metablicas. Recentemente, cientistas obtiveram
molculas de RNA mais complexas quando utilizaram uma mistura de pequenas molculas
de RNA sob condies de altas temperaturas, situao que deve ter ocorrido na poca do
surgimento da vida.
Outra possibilidade da origem da vida seria via metablitos secundrios. Tais
metablitos, considerados secundrios no atual estgio evolutivo, teriam sido relevantes no
perodo pr-bitico como integrantes do metabolismo primrio responsvel pela sntese dos
cidos ncleicos e traduo e replicao.
De qualquer forma, a hiptese de maior consenso a de que o RNA teria sido o
primeiro material gentico sobre o qual a evoluo agiu, resultando numa quantidade
enorme de formas de vida que se conhecem atualmente.

2-REPLICAO (Replication)
O DNA funciona como um modelo para a sntese de novas fitas de DNA de maneira
semiconservativa, ou seja, cada uma das duas molculas filhas tem uma fita da molcula
me e outra recm sintetizada. A replicao ocorre bidirecionalmente a partir de uma
(procariotos) ou vrias (eucariotos) origens. A replicao precisa (alta fidelidade), ou seja,
a maioria dos erros corrigida. Cabe a replicao o desafio maior de perpetuar, com alta
fidelidade, um genoma e ao mesmo tempo permitir erros que originam a variabilidade
necessria para a evoluo.
A origem de replicao uma regio do DNA que contm uma seqncia de bases
especfica. Nas bactrias s existe uma destas seqncias. A rigor, a replicao completa
do cromossomo de uma bactria depende da iniciao nesta seqncia. Neste caso, dito
que as bactrias tm apenas um replicon. Replicon a unidade de DNA no qual a
replicao ocorre a partir de uma origem. J os eucariotos, por terem genomas bem maiores
que as bactrias e mais de um cromossomo, tm vrias origens de replicao. Nas
leveduras (ex: Saccharomyces cerevisiae) existem pelo menos umas 500 origens de
replicao, denominadas de ARS (Autonomously Replicating Sequences); ou seja, 500
replicons. Na Drosophila melanogaster existem cerca de 3.500 replicons. J na Vicia faba
estima-se a presena de pelo menos 35.000 replicons. As origens de replicao dos
eucariotos so ativadas em diferentes tempos durante o perodo de replicao do ciclo
celular (fase S da mitose). Estas origens de replicao esto espaadas em mdia de 50 a
100 kb. A velocidade de replicao em Escherichia coli, a bactria residente no intestino de
todas as pessoas, chega alcanar 50.000 bases por minuto. Nos eucariotos, o movimento
do garfo de replicao pelo menos 10 vezes mais lento.
Os vrus apresentam um modo de replicao especfico denominado de crculo
rolando (rolling circle). Uma vez iniciada a replicao, o genoma circular vai sendo replicado
indefinidamente. Posteriormente uma enzima produzida pelo prprio genoma viral, corta a

16
longa cadeia produzida em partes iguais, cada uma contendo uma cpia do genoma do
vrus, a ser subseqentemente encapsulada.
Mais de 20 enzimas atuam diretamente no processo de replicao das bactrias. As
principais protenas envolvidas e sua funo na replicao so apresentadas abaixo:
toposisomerases - desenovelam o DNA
helicases - separam as duas fitas
Single strand binding proteins (SSB) - protegem o DNA na forma de fita simples
Primase - adiciona os primers ou iniciadores
DNA polimerase III - polimeriza, i.., adiciona os dNTP no sentido 5'-3'
DNA polimerase I - substitui os iniciadores de RNA por bases do DNA; tambm tem
a funo de reparo
ligase - une os dNTP de dois fragmentos.

Nos procariotos, alm destas duas polimerases, existe uma terceira, a DNA
polimerase II, cuja funo ainda desconhecida. Das trs, somente a DNA Pol I apresenta
a funo de edio, ou seja, de correo dos possveis erros de replicao. A DNA Pol I
formada por vrias subunidades. O agrupamento de algumas delas forma o que se conhece
por fragmento Klenow, utilizado para replicao do DNA in vitro. Este fragmento no tem a
habilidade de edio como a enzima completa, pode ser comprado de vrios fornecedores e
usado em laboratrios. A DNA Pol III formada por sete subunidades ou polipetdeos.
Nos eucariotos tambm existem trs polimerases. Duas delas atuam no ncleo,
sendo que a DNA Pol teria a mesma funo que a DNA pol III dos procariotos. A DNA
Pol teria a funo de reparo. A terceira polimerase (DNA Pol ) especfica para a
replicao do genoma das mitocndrias.
A replicao dos genomas dos retrovrus, que so codificados por RNA, feita pela
transcritpase reversa (RT), o que pode produzir inmeros variantes. O conhecimento da
natureza molecular destes vrus permite a criao de estratgias para combat-los.
Molculas ribozimas de RNA foram engenheiradas e podem ser introduzidas nos
hospedeiros para procurar e destruir o genoma do HIV, cortando-os em dois.
O avano no conhecimento cientfico sobre a replicao foi de fundamental
importncia no desenvolvimento da reao da polimerizao em cadeia (PCR), uma das
tcnicas moleculares mais utilizadas no momento.

3-TRANSCRIO (Transcription)
Transcrio o processo pelo qual uma regio do DNA transcrita resultando num
RNA. Existem dois grandes grupos de RNAs: (i) os RNA mensageiros (mRNA), aqueles que
sero decodificados pelos ribossomos e contm informaes para a produo de uma
protena e (ii) o outro grupo de RNAs, formado pela transcrio de determinadas regies
genmicas e que permanecem como RNA para executar uma funo especfica. Entre eles
esto o transportador (tRNA), o ribossomal (rRNA) que juntamente com protenas forma os
ribossomos e outros RNAs (snRNA, hnRNA, etc.) com funo na regulao gnica ou
desconhecida. A regio (segmento) do DNA transcrita a parte estrutural do gene.
A transcrio nos procariotos feita pela RNA polimerase. Numa E. coli podem
existir at 3.000 cpias dela. Esta enzima usa o DNA como molde e sintetiza uma cadeia de
nucleotdeos de RNA complementar ao molde. Aparentemente no h conferncia do
produto transcrito. Se no DNA esto A, C, G e T, vai aparecer no mRNA U, G, C e A,
respectivamente. A exemplo da replicao, a transcrio ocorre na direo 5'-3'.
Seis peptdeos ou sub-unidades fazem parte da RNA pol ('2). A rigor o fator
tem a habilidade de reconhecer o promotor, que a regio 5', situada imediatamente
anterior ao incio da parte codificadora (ou estrutural) do gene. Posteriormente, juntam-se ao

17
fator s os demais peptdeos quando ento a RNA Pol inicia o processo de transcrio.
Vrios fatores de transcrio (pequenos polipeptdeos), os TFs, atuam no incio, durante a
elongao e no trmino da transcrio.
O fator ( de fundamental importncia. Quando um vrus entra numa clula
hospedeira, um fator (do vrus transcrito e agora os outros cinco peptdeos da RNA Pol
ficam a disposio do fator ( do vrus, que reconhece to somente os genes do vrus. Desta
forma, em pouco tempo os vrus conseguem expressar seus genes no hospedeiro e se
replicando a uma velocidade impressionante, atingem milhes de cpias. Afetam
drasticamente o organismo hospedeiro porque tambm reprimem a produo de protenas
deste.
O promotor das bactrias formado por duas seqncias localizadas nas posies -
10 e -35 (regio 5') da base codificante +1 do gene. Nestas regies, normalmente so
encontradas as seqncias (consenso) TATAAT (denominada de TATA box ou Pribnow
box) e TTGACA (CAAT box), respectivamente. Nos eucariotos, a regio regulatria dos
genes bem mais complexa. Em alguns casos, podem ser encontrados vrios elementos
que controlam ou afetam a transcrio. Entre eles esto o promotor, o enhancer e
elementos como o GLE, o MRE, etc. Os enhancers so seqncias de DNA que esto muito
distantes dos genes e so compostas de seqncias muitas vezes repetidas. Os elementos
so sequncias de DNA, que so alvos de ligao para protenas especificas, que
constituem o que se chama de fatores de transcrio (TF). Os fatores de transcrio podem
aumentar dramaticamente a taxa de transcrio de um gene nos organismos eucariotos.
Alm do promotor, outras regies podem acelerar a taxa de transcrio como os enhancers
e os terminadores. Os terminadores so seqncias que a RNA Pol identifica como o fim
da regio de DNA codificadora ou de um gene.
Existem algumas diferenas entre eucariotos e procariotos com relao a
transcrio. Em primeiro lugar existem trs RNA polimerases ao invs de uma. A RNA Pol I
s transcreve o rDNA (sequncia de DNA que codifica o rRNA). A RNA pol II transcreve os
genes que codificam para protenas, produzindo ento mRNAs. Os demais RNAs (tRNA,
snRNA e a 5 S rRNA) so transcritos pelo RNA pol III. Nos procariotos, os ribossomos
identificam os mRNAs porque estes apresentam uma seqncia denominada de Shine-
Dalgarno que includa antes das bases codificadoras, complementar a uma regio do
componente 16 S rRNA. Por sua vez os mRNAs dos eucariotos apresentam uma estrutura
denominada de quepe (Cap) resultante de uma ligao 5'-5' entre duas guaninas ou entre G
e A. Aps a transcrio, ao mRNA adicionado uma longa cauda de adeninas, o que se
convencionou denominar de poli-A. Esta caracterstica dos eucariotos permite a separao
dos mRNAs dos demais RNAs, o que normalmente pode ser feito em laboratrio. Nos
procariotos, a cauda de adenina bem reduzida. Uma quarta diferena entre procariotos e
eucariotos relaciona-se com o processamento do pr-mRNA nas clulas eucariotas. Nestas,
aps a transcrio, so removidos os introns do pr-mRNA. S ento, este RNA se desloca
para o citoplasma e recebe a denominao de mRNA.

4-TRADUO (Translation)
Traduo o processo de decodificao do mRNA nos ribossomos resultando na
formao de um peptdeo. Na maioria dos casos as protenas so formadas por apenas um
peptdeo. Para a produo de um peptdeo in vitro so necessrios o mRNA, os ribossomos,
os tRNAs, os amino cidos, fatores da traduo e energia.
Os ribossomos dos procariotos so formados por duas subunidades: a grande,
chamada de 50 S, constituda por dois rRNAs, o 23 S rRNA e o 5 S rRNA, e por 34
protenas; a pequena, chamada de 30 S, constituda pela unidade 16 S rRNA e por 21
protenas. Dependendo da fase, uma bactria pode ter aproximadamente 5.000 ribossomos,
o que representa 25% da massa celular.

18
 Os tRNAs so os RNAs transportadores, tambm chamados de adaptadores, que
transportam os amino cidos do meio at os ribossomos para serem incorporados cadeia
peptdica. Uma enzima, encarregada de carregar o amino cido especfico na extremidade
3'OH do tRNA, com base no seu anticodon. Existem mais de 20 tRNAs, pois na maioria dos
casos, mais de um codon codifica para um mesmo amino cido.
O processo de traduo (5'-3') inicia quando a sub-unidade pequena do ribossomo
reconhece a seqncia lder do mRNA. Em seguida o primeiro codon (um conjunto de 3
bases) lido e geralmente codifica para metionina. Um tRNA traz o amino cido
correspondente ao codon lido. Sucessivamente os codons vo sendo lidos e os amino
cidos correspondentes incorporados ao peptdeo nascente pela enzima peptidil
transferase. A velocidade da traduo chega a 40 amino cidos por segundo. Qualquer um
dos codons de terminao UAG, UAA ou UGA, significa o fim do peptdeo, cuja
interpretao feita pelos ribossomos. Nos procariotos, algumas mensagens so
policistrnicas.
Nos procariotos a traduo simultnea transcrio. Mais ainda, um mesmo
mRNA pode ser traduzido por dezenas de ribossomos enfileirados, o que resulta num
nmero elevado de cpias repetidas de uma protena a partir de uma nica molcula
mensageira.
O cdigo gentico (Tabela 1.2) est estruturado em codons (trincas), cada um com
trs bases. A probabilidade de associar trs bases independentemente da ordem e natureza
de 64. Trs codons so de terminao. Os outros 61 codificam os 20 amino cidos.
Consequentemente, um mesmo amino cido pode ser codificado por mais de um codon. As
principais caractersticas do cdigo gentico so:
- estruturado em trinca de bases
- no h sobreposio (uma base pertence a um e somente um codon)
- universal (refora a teoria da origem nica da vida); somente poucas diferenas com o
cdigo gentico das mitocndrias
- degenerativo (mais de um codon codificam para um mesmo amino cido)
- o primeiro codon (das protenas) AUG ou GUG
- h diferena ou preferncia de uso de diferentes codons de um mesmo amino cido
- a hiptese de Wobble permite a no ocorrncia dos 61 tRNAs.

O conhecimento do funcionamento desta fbrica permitiu a compreenso da ao

dos antibiticos e o desenvolvimento de remdios para vrias doenas. Geralmente os
antibiticos se ligam ao rRNA ou s protenas dos ribossomos, impedindo ou a leitura do
mRNA, ou o emparelhamento do tRNA com o ribossomo ou impedindo outra atividade nos
ribossomos. Como os ribossomos dos procariotos so diferentes dos eucariotos, um
antibitico pode afetar o funcionamento da sub-unidade pequena (30 S) de uma bactria,
sem contudo interferir no ribossomo da clula eucariota hospedeira, cujas sub-unidades tem
rRNAs de diferentes tamanhos e seqncia.

5-MUTAO E REPARO
Mutao uma modificao no DNA. Mutante o fentipo resultante da mutao.
As mutaes so causadas por erros de replicao do DNA e alteraes do DNA por
deleo, duplicao ou rearranjamentos causados por vrus, transposons, ao enzimtica
ou processos fsicos e qumicos. A taxa mdia de mutao que ocorre naturalmente atinge
1x10-7. Agentes qumicos e fsicos (radiaes) so utilizados em laboratrio para aumentar
esta taxa.

19
Tabela 1.2. Cdigo gentico do RNA mensageiro.
Primeira Segunda Terceira
base base base
U C A G
UUU - Phe UCU - Ser UAU - Tyr UGU Cys U
U UUC - Phe UCC - Ser UAC - Tyr UGC Cys C
UUA - Leu UCA - Ser UAA Stop UGA Stop A
UUG - Leu UCG - Ser UAG - Stop UGG Trp G
CUU - Leu CCU - Pro CAU - His CGU - Arg U
C CUC - Leu CCC - Pro CAC - His CGC - Arg C
CUA - Leu CCA - Pro CAA Gln CGA - Arg A
CUG - Leu CCG - Pro CAG Gln CGG - Arg G
AUU - Ile ACU - Thr AAU Asn AGU - Ser U
A AUC - Ile ACC - Thr AAC Asn AGC - Ser C
AUA - Ile ACA - Thr AAA Lys AGA - Arg A
AUG - Met ACG - Thr AAG Lys AGG - Arg G
GUU - Val GCU - Ala GAU Asp GGU - Gly U
G GUC - Val GCC - Ala GAC - Asp GGC - Gly C
GUA - Val GCA - Ala GAA Glu GGA - Gly A
GUG - Val GCG - Ala GAG Glu GGG - Gly G

Uma mutao dita silenciosa quando o codon alterado, mas no muda o amino
cido codificado e consequentemente, a cadeia peptdica. Ela neutra quando, mesmo
alterando o amino cido, a protena permanece com a mesma funo. Aqui surge o conceito
de polimorfismo a nvel molecular: diferentes gentipos com o mesmo ou diferentes
fentipos. A mutao com o efeito mais crtico aquela que provoca a insero ou remoo
de uma base (frameship). Como conseqncia, todos os codons localizados aps a
mutao ficam alterados, ou seja, a cadeia se torna diferente do padro anterior. Mutaes
ocorrem naturalmente. As mutaes mais comuns so aquelas de ponto, onde apenas uma
base alterada. Outras mutaes com profundas implicaes no fentipo so aquelas
decorrentes de delees, adies, inverses e transposies.
preciso salientar que o prprio DNA tem mecanismos de produzir mutaes em si
mesmo, independentemente do ambiente. Um deles atravs dos elementos mveis
existentes no genoma: os transposons. Transposons so seqncias de DNA que se
movem (pulam) de um lugar para outro no genoma. A transposio deixa duplicadas as
bases imediatamente prximas desta seqncia (entre 5 e 9), alm de causar interrupes
de outros genes quando neles se inserirem. Outras vezes, o transposon se duplica e a nova
cpia se insere num outro ponto do genoma. Apesar de no serem ainda bem conhecidos,
sabe-se que em alguns casos os transposons carregam genes de resistncia a antibiticos.
Como eles afetam a evoluo, devem ter outras funes celulares ainda no descobertas.
Uma deles poderia ser o controle do estresse celular. No entanto, eles tm sido tratados
como 'genes egostas' porque eles s conseguem se replicar quando dentro do
cromossomo, garantindo a sua prpria permanncia no genoma. Nos procariotos, os vrus
podem se integrar ao genoma do hospedeiro, podendo causar duplicaes ou delees. Ou
seja, existem causas naturais de produo de mutaes, responsveis pela propulso da
evoluo.
O nmero de mutaes que ocorre num organismo relativamente muito grande.
Entretanto, os seres vivos dispem de vrios sistemas de reparo, que corrigem a maioria

20
dos erros ocorridos. Outros erros, quando no corrigidos, podem causar enormes problemas
tanto na sobrevivncia como na reproduo do organismo. Neste caso atua a seleo
natural, ou eliminado este indivduo ou fazendo com que ele deixe um menor nmero de
descendentes. O acmulo de mutaes em diferentes populaes pode provocar, a longo
prazo (prazo em termos de evoluo), a diminuio da freqncia de cruzamentos com o
conseqente incio da especiao, processo que pode culminar com a origem de uma nova
espcie.
Ao nvel de laboratrio, os agentes qumicos mais utilizados para induzir mutaes
so: etil metil sulfanato (EMS), cido nitroso, etil metano e alguns agrotxicos ou defensivos.
A ao dos agentes qumicos normalmente produz alterao de uma base qualquer.
Exemplo: substituio de A por T. Muitos vegetais contm substncias que causam
mutaes na espcie humana. Ex: nas frutas e legumes so encontradas as psoralenas (o
limo contm quantidades elevadas), que tambm dimerizam duas timinas, se ocorrem lado
a lado. Entre os agentes fsicos, os mais usados so as radiaes (UV, gama, etc.). Os
agentes fsicos geralmente causam quebras e rearranjos de cromossomos. Especificamente
a radiao UV causa a dimerizao de duas timinas se estiverem lado a lado. Durante a
replicao, a DNA Pol no consegue ler este dmero, o que provoca a insero de duas
bases quaisquer no lugar das timinas, se no houver reparo. Muitos problemas de pele so
causados pela radiao UV. por isto que existe tanta preocupao com a diminuio da
camada de oznio, pois este atua como uma barreira aos raios UV.
A mutagnese direcionada permite a alterao de uma ou mais bases de uma
seqncia de DNA qualquer. Inicialmente a seqncia de interesse inserida num vetor,
como o vrus M13 que de fita simples. Posteriormente feito um primer (iniciador) num
sintetizador de oligonucleotdeos. Este primer complementar a um certo segmento da
seqncia de interesse, mas contendo uma base diferente. Posteriormente, o restante da
molcula duplicado. Resultado: a nova seqncia difere da original por uma base apenas.
Esta seqncia pode ser avaliada in vitro ou in vivo. Pela tcnica da recombinao
homloga, esta seqncia mutante pode substituir a seqncia normal de um organismo.
Desta forma, avaliado o efeito de uma mutao in vivo.
Foi desenvolvido por Ames, um teste para avaliar a capacidade mutagnica dos
produtos qumicos utilizados, com base no tipo de mutao que os produtos provocam. Tais
produtos qumicos so classificados quanto ao potencial de causar danos nas pessoas,
dependendo do tipo de mutao e a freqncia que so causadas. Este teste associa a
capacidade de ao mutagnica com a capacidade de causar cncer, pois estas duas esto
estreitamente relacionadas. Outros tipos de testes tambm so utilizados para confirmar a
periculosidade do produto. Com base nestes testes, a fabricao e a comercializao de
muitos produtos qumicos j foram proibidas.
Exemplo de uma mutao que causa a anemia falciforme (Figura 1.7).
Seqncia normal:
atggtgcacctgactcctgtggagaagtctgccgttactgccctgtggggcaaggtgaacgtggatgaagttggtggtgaggccc
tgggcaggttggtatcaaggttacaagacaggtttaaggagaccaatagaaactgggcatgt

Seqncia contendo a mutao:

atggtgcacctgactcctgaggagaagtctgccgttactgccctgtggggcaaggtgaacgtggatgaagttggtggtgaggccc
tgggcaggttggtatcaaggttacaagacaggtttaaggagaccaatagaaactgggcatgt

O cdon gtg na sequncia normal codifica para o cido glutmico, que substitudo pela
valina na cadeia protena, em razo da muato de t para a, formando um novo codon gag.
O individuo portador desta mutao apresenta a anemia falciforme e, simultaneamente,
resistncia a malria, ilustrada na Figura 6 abaixo

21
Figura 1.7. Glbulos em forma de meia lua, caracterizando a anemia falciforme.

6-METILAO
Uma frao das citosinas no DNA de muitos organismos torna-se metilada (5mC)
aps a replicao. Esta metilao no tem distribuio ao acaso. Algumas seqncias
como as denominadas ilhas de CpG em animais, so raramente ou no metiladas.
Enquanto algumas seqncias so metiladas em certas condies, como aquelas herdadas
da me e no do pai, outras so sempre metiladas em todos os tecidos.
Nas plantas e fungos as ilhas CpG so freqentemente metiladas pelas metilases,
embora h evidncia de uma substancial quantidade delas no metiladas. Em fungos, a
metilao atinge 1,5% das Citosinas e no ocorre somente de forma simtrica.
Tanto o controle da metilao quanto sua funo nos eucariotos, ainda no so
suficientemente compreendidos. A metilao tem sido correlacionada com reduo na
atividade gnica, havendo evidncias de inibio da expresso de vrios genes. Em ratos, a
reduo da metilao do DNA em 70%, resultante da mutao no gene metiltransferase do
DNA, leva a morte os indivduos na embriognese. A hiptese levantada admite que as
regies com bases metiladas dificilmente so transcritas. Neste caso, a morte dos ratos
poderia ter sido provocada pela falta de protenas e/ou RNAs. A metilao tambm
requerida para o comportamento normal dos cromossomos em Neurospora crassa. Sua
necessidade foi comprovada, mas sua funo ainda no est totalmente esclarecida.

7-REGULAO GNICA
Na definio de Jacob e Monod (1961), gene uma seqncia de DNA que codifica
para um produto difusvel. A regio regulatria do gene uma seqncia de DNA que no
convertida em outra forma (como a regio codificadora) e que s funciona in situ. Alm
disso, existem genes estruturais e genes reguladores de outros genes.
O princpio bsico da regulao gnica a interao entre protenas regulatrias e
certas regies (seqncias) do DNA. Assim, nos procariotos a regulao gnica chamada
de negativa se um gene no se expressa caso o repressor, que uma protena, liga-se ao
DNA na regio do promotor do gene (Figura 1.8). Para que o gene possa ser transcrito, h a
necessidade de remover a protena repressora. Isto possvel, pela presena do indutor,
para o qual a protena repressora tem muito mais afinidade que pela regio do DNA
responsvel pela regulao do gene. O indutor ento tem um efeito inativador sobre o
repressor. Este tipo de regulao gnica o mais comum nos genes de organismos
procariotos. No controle dito positivo, o mais frequente nos eucariotos, o gene ativado
pela presena de um ativador. Em outras palavras, no controle negativo, a interao
protena-DNA desliga o gene, enquanto no controle positivo, a interao liga o gene.

22
 O controle negativo bastante comum nas bactrias, onde a maioria dos genes
estaria ligada (on) at que os repressores os desligariam (off). J o sistema positivo mais
comum nos eucariotos, onde os genes estariam desligados at que os ativadores os
ligariam.

Figura 1.8: Modelo de funcionamento do operon lac em bactrias. O repressor impede

a transcrio dos genes Z, Y e A, que ativada na presena de -galactosdio.

A rigor, existem cinco pontos de controle na regulao de um gene eucarioto: 1) na

ativao de gene estrutural, 2) no incio da transcrio, 3) no processamento da transcrio,
4) no transporte para o citoplasma e 5) na traduo do mRNA. Na ativao de um gene
estrutural, um gene regulado por uma seqncia no promotor e/ou no enhancer, as quais
so reconhecidas por protenas especficas. Esta protena funciona como um fator de
transcrio necessrio para o incio da transcrio atravs da RNA Pol. Protena ativa s
disponvel sob condies quando o gene para ser expresso. In vitro possvel modular a
regulao nos diversos pontos de controle. In vivo, a adio de determinados genes
permitem o controle de um ou mais pontos de controle.
Nos eucariotos ainda no se conhece profundamente a regulao gnica. Entretanto,
vrios mecanismos j foram amplamente estudados. Em primeiro lugar, um grande nmero
de genes ativado em determinados tecidos e rgos e no em outros. Os genes
denominados de Homeobox so os responsveis por este controle. J nas primeiras
divises celulares do zigoto formado, os genes Homeobox se encarregam de marcar quais
os genes que podero e quais os genes que no podero ser expressos num determinado
tecido ou rgo. Outros genes dependem de um complexo sistema de eventos: sinal
ambiental (temperatura, umidade, etc.) faz com que uma substncia seja produzida e/ou
movida para as clulas. Este sinal qumico seria recebido por um receptor na clula, cujo
complexo tem habilidade para penetrar no ncleo da clula e ativar um conjunto de genes
de forma coordenada.

8-EPIGENTICA
Uma das incgnitas da diferenciao no desenvolvimento de organismos como o
sistema de expresso gnica e de herana produzem diferentes tecidos ou rgos a se as
clulas tm a mesma informao gentica. Os avanos cientficos culminaram com o
desenvolvimento de um segundo cdigo gentico, a epigentica. Epigentica o estudo de
mudanas herdveis na expresso e funo dos genes que no podem ser explicado por
alteraes na sequncia de DNA (exemplo na Figura 1.9). As mudanas epigenticas so
baseadas num conjunto de processos moleculares que podem ativar, reduzir ou eliminar
completamente a atividade de um determinado gene:
(i) metilao da citosina no DNA,

23
 (ii) remodelamento da estrutura da cromatina por modificao qumica, em
particular acetilao ou metilao de histonas e
(iii) processos regulatrios mediados por molculas pequenas de RNA (ex:
siRNA).
Sistemas de herana epigenticos - Com poucas excees, as diferenas entre
clulas especializadas so epigenticas e no genticas. Estas clulas no s mantm o
fentipo por longos perodos, mas tambm o transmitem para as clulas-filhas. Esta
transmisso de informao denominada de sistemas de herana epigenticos. Seria a
segunda dimenso da herana e da evoluo. A evoluo possvel a partir da variao
epigentica herdvel at mesmo quando no existe nenhuma variao gentica.
No livro EVOLUO EM QUATRO DIMENSES - DNA, comportamento e a histria
da vida, de autoria de Eva Jablonka e Marion J. Lamb, lanado no Brasil em 2010, so
discutidas as quatro "dimenses" na evoluo - quatro sistemas de herana que
desempenham um papel na evoluo: a gentica, a epigentica (ou transmisso de
caractersticas celulares, alheia ao DNA), a comportamental e a simblica (transmisso por
meio da linguagem e de outras formas de comunicao simblica). Em todos esses
sistemas ocorre alguma herana de caracteres adquiridos.

Figura 1.9. Relaes hipotticas entre a variao gentica, epigentica e fenotpica

em populaes naturais. So mostrados dois genes para cada um dos dois indivduos de
duas populaes. As barras horizontais so o DNA, com diferenas na seqncia de DNA
indicado por diferentes tons de cinza. modificaes epigenticas em um determinado gene
so indicados por tringulos negros. Variao epigentica natural pode ser encontrada
dentro (A1 x B1) ou entre (A2/B2 vs C2/D2) populaes. Variao epigentica pode ser
independente (A1 x B1) ou confundida com (C1 x D1) a variao gentica. Algumas
variaes epigenticas em populaes naturais podem resultar da plasticidade fenotpica,
podendo ser no hereditrias, ou seja, no persistir em um ambiente comum (C2 versus
D2). Se a variao epigentica independente persistir em um ambiente comum (como no
A1/B1), esta uma evidncia para a herana epigentica. Esta variao epigentica
hereditria traduzida em diferenas fenotpicas e de valor adaptativo (como ilustrado
acima), ecolgica e evolutivamente relevante (Fonte: Bossdorf et al., 2008).

24
PARTE 2 - MARCADORES GENTICOS
1-INTRODUO
Marcador gentico uma caracterstica que capaz de detectar diferenas
(polimorfismos genticos) entre dois ou mais indivduos ou organismos. Entre suas
propriedades um marcador gentico deve:
(i) ser capaz de diferenciar os progenitores e
(ii) ser reproduzido com preciso na prognie.

Do ponto de vista molecular, um marcador gentico (ou loco marcador) serve para
identificar um local ou uma regio de um cromossomo. Um marcador gentico ideal deve
apresentar uma srie de atributos:
(i) alto nvel de polimorfismo
(ii) estabilidade em diferentes ambientes
(iii) detectar grande nmero de locos no ligados
(iv) herana mendeliana simples
Entretanto, a simplicidade e os baixos custos do mtodo so fatores determinantes
no uso de forma rotineira de um marcador molecular. Aqui ser apresentada uma descrio
resumida dos principais tipos de marcadores genticos bem como suas principais
aplicaes no melhoramento de plantas.
Todo e qualquer fentipo molecular proveniente de um gene expresso, como no caso
de isoenzimas , ou de um segmento especfico de DNA (correspondendo a regies
expressas ou no do genoma) chamado de marcador molecular.

2-MARCADORES MORFOLGICOS
At os meados da dcada de 60, os marcadores utilizados em estudos de gentica e
melhoramento eram controlados por genes associados a caracteres morfolgicos, Em geral,
caractersticas fenotpicas de variao discreta so utilizadas como marcadores
morfolgicos desde os tempos de Mendel, como fentipos de fcil identificao visual
(Ex.: nanismo, deficincia cloroftica, cor de ptala ou morfologia foliar). Um nmero varivel
de marcadores morfolgicos existe para as diferentes espcies de plantas, contudo
insuficientes para mapeamento gentico ou outras aplicaes. Alm disso, esses
marcadores freqentemente so afetados pela ao gnica de dominncia, efeito
ambiental, pleiotropia e epistasia. O reduzido nmero e a natureza dos marcadores
morfolgicos restringiram os estudos dos caracteres quantitativos (QTs) s espcies onde
havia sido alcanada uma caracterizao gentica substancial. Sax (1923) verificou em
feijo que as diferenas nas mdias do peso de gros estavam associadas a cor das
sementes. Foi a primeira tentativa de caracterizao individual dos locos (QTL) envolvidos
na expresso de um carter quantitativo (QT) com auxlio de marcadores morfolgicos.
Marcadores morfolgicos apresentam a desvantagem de serem somente
identificados em sua maioria, na planta inteira ou adulta demandando de bastante tempo e
esforo na parte de campo.

3-MARCADOR DE PROTENAS DE SEMENTES

As protenas das sementes podem ser classificadas de acordo com a sua
solubilidade em quatro diferentes grupos. Numerosos mtodos tm sido utilizados in vitro
para caracterizar as protenas de sementes. Polipeptdeos variantes que apresentam
distintos pesos moleculares podem ser separados em gel de poliacrilamida (Figura 2.1)
atravs do processo de eletroforese (ver Quadro 2.1 e Figura 2.2)). A eletroforese de duas
dimenses (SDS-PAGE) tem habilidade de separar protenas pelo ponto isoeltrico (carga)
e pelo peso molecular (tamanho). Diferentes variantes aparecem como distintas bandas

25
num gel. Embora o nmero de variantes de uma protena (polimorfismo) seja relativamente
alto, o nmero de protenas de sementes que podem ser analisados baixo. Apesar da
base gentica complexa (normalmente so famlias de genes) a interpretao
relativamente simples (Observar foto abaixo, Guimares et al., 2002).

Figura 2.1: Perfil eletrofortico

de protenas extradas pelo
calor em sementes de
cafeeiros nos estgios de
desenvolvimento verde (A),
verde-cana (B) e cereja (C),
com diferentes tratamentos de
secagem.

QUADRO 2.1: ELETROFORESE

O termo eletroforese (eletro: carga eltrica; forese: deriva) foi criado por Michaelis em
1909, para descrever migrao de colides sob a influncia de um campo eltrico. Seu
princpio simples: molculas de carga negativa migram para o plo positivo, e
molculas com carga positiva migram para o plo negativo.
A eletroforese visa a separao de molculas em funo de suas cargas eltricas,
de seus pesos moleculares e de suas conformaes, em suportes porosos (gis) e
solues - tampes (estabilizam o pH do meio e permitem o fluxo de corrente eltrica).
Ou seja, na prtica a eletroforese consiste da extrao de amostras, seja de protenas,
RNA ou DNA obtido de um tecido e da migrao destas num gel (amido, agarose,
acrilamida) submetido a uma corrente eltrica contnua. O sentido e a velocidade de
migrao so determinados pelo tamanho e carga das protenas. Por exemplo,
quanto maior a carga eltrica de uma protena, mais rpido a sua migrao no gel em
direo ao eletrodo de carga contrria, como observado na figura 1.
A passagem de corrente eltrica atravs de uma soluo-tampo segue a Lei de Ohm:

V = R. I onde, V = voltagem
R= resistncia
I = amperagem

A eletroforese pode ser conduzida ora sob voltagem, ora sob amperagem (corrente) ou,
ento, wattagem (potncia) constantes reguladas pela fonte eltrica. bom observar
que para cada tipo de marcador a ser utilizado diferencia grandemente na corrente
eltrica a ser utilizada.
A eletroforese pode ser desenvolvida em suportes como papel-filtro, slica gel,
membranas de acetato de celulose e gis de agarose, de amido ou de poliacrilamida.
Para enzimas, gis de amido e poliacrilamida oferecem melhor separao do que outros
suportes. Para marcadores DNA os mais utilizados so gis de agarose e poliacrilamida.

26
Quadro 1: Continuao

Figura 2.2a: Princpios gerais do sistema de eletroforese.

A B

Figura 2.2b: Exemplos de aparatos de eletroforese. A) Cuba de

eletroforese horizontal submersa para gel de agarose. B) Cuba de
eletroforese vertical para gel de acrilamida.

27
4-ISOENZIMAS
Na dcada de 1960, um novo tipo de marcador gentico foi desenvolvido: as
isoenzimas, ento denominados de marcadores bioqumicos. Isoenzimas foram definidas
como diferentes formas moleculares (variantes) de uma mesma enzima, apresentando
funo idntica ou similar, presente num mesmo indivduo (Markert & Moller, 1959). o
resultado da presena de mais de um gene codificando cada uma das enzimas.
As vantagens sobre os marcadores morfolgicos so a insensibilidade pleiotropria
e epistasia, alm de sua natureza co-dominante (possibilita a identificao de indivduos
homozigotos e heterozigotos). Desde a sua resoluo pelos mtodos histoqumicos, a
principal aplicao das isoenzimas nos estudos de diversidade gentica e evoluo,o que
tm sido extremamente importantes para as investigaes sobre variao intraespecfica,
gentica de populaes, tambm na evoluo e mapeamento gentico, j realizadas
em centenas de espcies. Apesar de estar sendo utilizada em vrios programas de
melhoramento, o reduzido nmero de sistemas enzimticos polimrficos impe limitaes
variveis dependendo do objetivo do estudo ou atividade.
Comumente muitas enzimas existem em mltiplas formas moleculares, mas
apresentando a mesma especificidade. O princpio bsico da tcnica reside no uso de
eletroforese em gel de amido ou poliacrilamida e na visualizao do produto enzimtico por
mtodos histoqumicos (Hunter e Market, 1957). As distintas bandas observadas no gel,
representam diferentes formas moleculares que apresentam diferentes propriedades de
mobilidade eletrofortica. Subsequentemente, a posio de uma enzima no gel de amido
pode ser verificada pela sua atividade que detectada por um sistema de revelao
colorimtrica. Este sistema inclui reagentes especficos para revelar uma determinada
enzima. A conseqncia o aparecimento de uma ou mais bandas no gel. Portanto, as
distintas formas de uma mesma enzima, as isoenzimas, codificadas por diferentes
alelos, podem ser detectadas em diferentes regies do gel, caso apresentem
diferentes mobilidades eletroforticas. Com esta tcnica o estudo da variabilidade
gentica de populaes de uma dada espcie ser baseada na variao observada nas
isoenzimas. Cada banda revelada no gel se constitui num marcador gentico, j que
por marcador gentico entende-se a constituio genotpica de um loco num determinado
indivduo. As isoenzimas comearam a ser utilizadas como marcadores genticos somente
a partir de 1966 (Lewontin & Hubby, 1966).

4.1-Vantagens das isoenzimas em relao aos marcadores morfolgicos:

a) determinao genotpica dos locos em qualquer parte da planta,
b) ocorrncia de um nmero razovel de alelos e ausncia de alelos nulos;
c) ausncia de efeitos deletrios associados com alelos isoenzmicos,
d) herana Mendeliana simples com codominncia entre alelos na maioria dos locos,
e) ausncia de efeitos epistticos, pleiotrpicos e ambientais.

4.2-Aplicabilidade das isoenzimas:

A propriedade mais expressiva a base gentica simples envolvida na expresso
destas enzimas (Soltis & Soltis, 1989), o que torna a identificao de polimorfismos rpida e
simples (Brewer, 1970). A maioria das enzimas j reveladas em gel de amido tem mais de
uma isoenzima. Como consequncia, uma grande quantidade de sistemas isoenzimticos
so potencialmente informativos. A eletroforese de enzimas tem proporcionado dados teis
na abordagem de questes importantes em sistemtica e evoluo de plantas. Do ponto de
vista da variao intraespecfica, as isoenzimas tm contribudo para o estudo da
organizao da variabilidade gentica e a identificao de raas (Singh et al., 1991).
Alm da caracterizao da diversidade gentica de populaes naturais e gentipos
cultivados, as isoenzimas tm sido utilizadas com bastante freqncia em outros estudos.

28
Ligao gentica entre sistemas enzimticos ou destes com outros locos tem aumentado a
resoluo de mapas genticos em vrias espcies. As isoenzimas tambm tm sido
utilizadas na identificao de genes que controlam caracteres quantitativos em feijo,
milho, soja e tomate.

4.3-Base gentica dos marcadores isoenzimticos

A premissa bsica de se utilizar dados enzimticos que diferenas na mobilidade
de isoenzimas em um campo eltrico so resultantes de diferenas nas seqncias de DNA
que codificam tais enzimas. Assim, se os padres de bandas de dois indivduos diferem,
assume-se que estas diferenas possuem base gentica e sejam herdveis. O controle
gentico de isoenzimas ocorre atravs de vrios genes, que podem ser alelos de um mesmo
loco, ou estar situados em diferentes locos.
Isoenzimas codificadas por genes allicos so tambm chamados de aloenzimas. A
expresso das isoenzimas co-dominante, isto , em um indivduo diplide ambos os alelos
de um loco so expresso e visualizados, ou seja, discrimina o heterozigoto do homozigoto.

5-RFLPs (Restriction Fragment Length Polymorphism)

As variaes nos nucleotdeos do DNA devido mutao, deleo, insero e
inverso, podem ser detectadas se ocorrerem num stio de corte das enzimas de restrio.
Se o DNA de plantas diferindo num ou vrios desses nucleotdeos forem expostos a essas
enzimas, fragmentos de diferentes tamanhos, portanto polimrficos, so gerados e podem
ser identificados e clonados. Tais fragmentos so denominados de RFLPs ('Restriction
Fragment Length Polymorphims'; polimrfismo no comprimento de fragmentos restrio) e
foram desenvolvidos por Botstein et al. (1980). Os polimorfismos de comprimento de
fragmentos de restrio ou polimorfismo de tamanho de fragmento so locos no DNA que
podem ser identificados e mapeados. Os RFLPs tm sido suficientemente numerosos na
maioria dos cruzamentos e tm permitido uma cobertura adequada do genoma,
proporcionando a construo de densos mapas genticos de ligao, que possibilitam a
realizao de anlises genticas e moleculares e vrias aplicaes no melhoramento de
plantas, como clonagem de genes e mapeamento de QTLs (Nodari et al., 1993). O elevado
custo e o tempo necessrio na gerao destes marcadores restringem drasticamente seu
uso de forma frequente, principalmente em pases como o Brasil.
A obteno de RFLPs envolve vrias etapas. Em primeiro lugar preciso extrair e
purificar o DNA de um indivduo. Aps, este DNA deve ser digerido (cortado) por enzimas
de restrio (ER) que so capazes de reconhecer um pequena seqncia de pares de
bases (pb) e ento cortar o DNA neste stio de reconhecimento ou clivagem. Entretanto, a
maioria das plantas contm mais de um bilho de pb. Como consequncia, a digesto do
DNA de uma planta com apenas uma ER produz milhares de fragmentos que variam em
comprimento de acordo com a distribuio dos stios de clivagem. Tal quantidade
impossibilita a anlise de todos de uma s vez.
A terceira etapa do processo consiste em separar esta mistura de fragmentos de
diferentes comprimentos pela eletroforese em gel de agarose. A migrao dos fragmentos
de DNA num gel dependente do seu tamanho, migrando mais rapidamente, os menores.
Subsequentemente, os fragmentos de DNA na condio de fita simples (aps tratamento
com hidrxido de sdio), so transferidos para uma membrana de nylon ou celulose
(carregada positivamente), tcnica que denominada de Southern blot, e que proporciona
um suporte slido para o DNA que passa a ser imobilizado neste suporte. Agora possvel
analisar individualmente cada um destes fragmentos.
A prxima etapa do RFLP a hibridizao do DNA destas plantas j imobilizados
em membranas com uma sonda radioativa de DNA (que pode ser um fragmento de DNA da
prpria planta, um clone) complementar ao fragmento de interesse. Para que haja

29
hibridizao, h a necessidade que pelo menos parte da sonda seja complementar ao
fragmento de interesse. Existem alternativas de marcao de sondas que no a radioativa.
A ltima etapa, a autoradiografia, consiste da exposio da membrana hibridizada
com a sonda radioativa a um filme de Raio X, que queimado somente onde houve as
hibridizaes. A sonda sendo radioativa, emite radiao que pode ser detectada por filmes
de Raio X. J que a sonda s hibridiza com fragmentos complementares, a preciso
elevadssima. Portanto, as cpias nicas (genes) normalmente aparecem uma vez s no
genoma, e, portanto apenas uma banda pode ser detectada nos indivduos homozigotos.
Assim, a associao enzima de restrio e sonda identifica um loco RFLP, que tem herana
mendeliana.
Admitindo-se que duas plantas diferem em um stio de reconhecimento,
apresentaro fragmentos de diferentes comprimentos, com relao a uma sonda
complementar. Tais fragmentos localizam-se em diferentes posies na membrana.
Consequentemente apresentaro bandas ocupando diferentes posies no filme, indicando
a existncia do polimorfismo ao nvel de DNA, portanto genotpico. Os fragmentos de
diferentes tamanhos so denominados de alelos, e apresentam herana mendeliana. A
principal caracterstica da tcnica do RFLP a sua habilidade em detectar tais diferenas.
As seqncias genmicas de duas plantas de uma mesma espcie so muito
parecidas. Entretanto, as plantas sofrem freqentes alteraes ao nvel de DNA: mutaes
simples, rearranjamentos e recombinao; as quais podem ocasionalmente alterar a
seqncia ou substituir bases nitrogenadas em um ou mais stios de reconhecimento de
uma determinada ER. Numa populao, estas variaes podem ocorrer numa planta e no
em outra. Tais diferenas (que normalmente so denominadas de variao gentica)
produzem fragmentos de DNA de diferentes tamanhos (polimorfismo de comprimento de
fragmento) quando o DNA exposto a estas enzimas.
Para o desenvolvimento das sondas, o DNA de uma planta precisa ser digerido por
uma ER ou quebrado mecanicamente e os fragmentos inseridos em um vetor (geralmente
plasmdeo), uma espcie de carregador. Este plasmdeo recombinante pode ser amplificado
ilimitadamente, aps sua incluso numa bactria ou mesmo in vitro. A denominao de
sonda ocorre quando uma certa quantidade amplificada deste DNA marcada com
radioistopos, ou ligada a reagentes que posteriormente podem ser coloridos, portanto
identificveis. As sondas desta forma so utilizadas para detectar seqncias
complementares a elas.
Os RFLPs mais informativos so aqueles cuja seqncia ocorre somente uma vez no
genoma, denominados de cpia nica. Desta forma, os RFLPs so especficos. Como as
isoenzimas, os RFLPs nucleares exibem codominncia. Pleiotropia e epistasia que afetam a
resoluo dos marcadores morfolgicos, no tm o menor efeito sobre os RFLPs. Alm
disso, os RFLPs apresentam alta estabilidade. O DNA a ser analisado pode ser extrado de
qualquer parte da planta. Outra caracterstica fundamental a de que a herdabilidade deste
tipo de marcadores virtualmente 1. Isto possibilita a realizao da seleo indireta, cuja
teoria foi desenvolvida h bastante tempo, mas sua implementao no existiu por falta de
marcadores com as caractersticas dos RFLPs. Por sua segura informao genotpica e
ocorrncia em grande nmero, estes marcadores possibilitam o desenvolvimento de mapas
genticos de ligao altamente saturados. Estes so a ferramenta bsica para estudos de
gentica, evoluo e melhoramento de plantas.

6-MINISSATLITES
Os minissatlites ou locos VNTR ('Variable Number of Tandem Repeats') so regies
dispersas no genoma que contm um nmero varivel de seqncias repetidas e
enfileiradas (tandem) de DNA que tm um ncleo comum de 10 a 15 pares de bases
(Jeffreys et al., 1985). Podem ser analisados tanto atravs de RFLPs ou PCR (reao em
cadeia da polimerase, Quadro 2). Muitos dos minissatlites so altamente polimrficos,

30
produzindo um grande nmero de bandas. Por estarem espalhadas por todo o genoma e
apresentarem um nmero varivel de repeties em diferentes indivduos em relao a uma
mesma regio cromossmica (loco), os minissatlites simultaneamente proporcionam um
conjunto de marcadores genticos que se constitui no que tem sido denominado de
impresses digitais de DNA (DNA fingerprinting), conseqentemente, indivduo-especficos.

31
QUADRO 2.2: A REAO EM CADEIA DA POLIMERASE (PCR)
Esta reao foi concebida em 1983 por Kary Mullis (Prmio Nobel em 1993),
publicada em 1985, mas utilizada de forma rotineira a partir de 1988 (Saiki et al., 1988).
Esse mtodo tem a habilidade de amplificar um fragmento de DNA, normalmente de at
4000pb, mas at 30 kb em condies especiais, com a utilizao de DNA polimerases de
alta eficincia e fidelidade. Para amplificar, o primer (ou iniciador) utilizado, que um
oligonucleotdeo de aproximadamente 10 nucleotdeos, precisa anelar com sequncias
complementares e invertidas com relao s duas fitas que foram previamente separadas
pelo aumento da temperatura (92-94C). O anelamento entre os primers e as seqncias
complementares efetuado a uma temperatura de 45 a 55C. Uma Taq DNA polimerase
estende (ou sintetiza) as cadeias originadas pelos primers, cuja temperatura tima de
catlise de 72C.
Existem mquinas programveis de PCR, os termocicladores, capazes de
modificar a temperatura rapidamente. Na realidade cada ciclo da PCR composto de trs
etapas: a separao das fitas ou desnaturao (92-94C), o anelamento ou
hibridizao do primers com o DNA (45 a 55C) e a extenso ou polimerizao da
cadeia (72C). Os tempos utilizados em cada fase so aproximadamente de 1 min, 1 min
e 2 min, respectivamente. A rigor, uma vez atingida as temperaturas de cada fase, so
necessrios poucos segundos para que a reao ocorra. E as mquinas de PCR tm a
capacidade de alterar a temperatura de forma rpida e repetir o ciclo tantas vezes quantas
ordenadas. O nmero de fragmentos amplificados duplica a cada ciclo. Sucessivos ciclos
de separao, anelamento e de sntese produzem milhes de fragmentos virtualmente
idnticos, em apenas algumas horas. Os produtos da PCR podem ser facilmente
visualizados num gel de agarose. Esta visualizao possvel com auxlio do brometo de
etideo, que quando presente no gel se interpe entre as duas fitas do DNA e se torna
avermelhado com absoro da luz ultravioleta.
A tcnica da PCR tem dezenas de aplicaes. A amplificao de fragmento(s) a
partir de primers arbitrrios (sequncia de bases completamente casualizadas) foi
denominada de RAPD. Em plantas, os RAPDs tm facilitado a realizao de estudos em
gentica e melhoramento, at ento, considerados inexequveis com as tcnicas
tradicionais. Uma diferena entre duas plantas ao nvel de DNA que ocorra na regio de
anelamento do primer identificada pela ausncia da referida banda em uma delas e
presena da banda na outra. No caso de indivduos heterozigotos, estes produzem as
mesmas bandas que os homozigotos. De fato, os marcadores RAPDs so dominantes.
Combinando DNA de plantas segregantes com uma grande quantidade de sondas,
possvel a identificao de dezenas, centenas e mesmo milhares de RFLPs e/ou
RAPDs. Quanto mais prximas as diferenas no DNA, maior ser o grau de co-
segregao entre elas. A anlise da segregao destes alelos permite o estabelecimento
da relao da ordem e da distncia entre eles nos cromossomos, o que pode ser
visualizado num mapa gentico de ligao.
Na rea da sade, a tcnica da PCR est sendo utilizada intensamente (Vosberg,
1989). Uma das aplicaes na diagnose de doenas causada por vrus como Hepatite,
AIDS, etc. Nestes casos, utilizam-se os primers que anelam a regies especficas do DNA
ou RNA do vrus causador da doena. Portanto, primers com sequncia conhecida e pr-
estabelecida. Se houver amplificao de uma banda a partir do DNA de uma pessoa,
porque existe DNA ou RNA do vrus nas clulas humanas. Este diagnstico, rpido e
confivel, j est sendo feito em vrias cidades brasileiras. Existe um esforo integrado
entre a Secretaria da Sade e a UFSC no desenvolvimento deste sistema aqui em
Florianpolis.

32
 Quadro 2.2: continuao
O mais fascinante, entretanto, a amplificao de DNA de espcies extintas
fossilizadas ou conservadas na forma de mmia, o que denominado de DNA
ancestral (ancient DNA). Atualmente possvel amplificar segmentos de DNA
extrado de ossos e outros tecidos macios, o que tem permitido conhecer seqncias
de DNA de vrios mamferos fsseis. Outra maneira de conhecer o DNA dos fsseis
ou espcies extintas seria a de decodificar o DNA extrado de insetos sugadores,
embebidos em amber a milhes de anos atrs. Amber a designao dada resina
solidificada de rvores antigas e tem a capacidade de proteo contra gua e o ar.
Tais insetos podem carregar nas estruturas que usam para sugar ou no aparelho
digestivo, o sangue de animais. Estas descobertas auxiliaram a realizao do filme
Jurassic Park.
Em maio de 1995, do interior de uma abelha envolta de amber e que teria
vivido h 20-25 milhes de anos atrs, foi isolada uma bactria que est se
reproduzindo normalmente e de cujo DNA, foram amplificados vrios fragmentos via
PCR. A sequncia destes fragmentos mostrou grande similaridade com o DNA da
bactria Bacillus.

7-RAPDs (Randomly Amplified Polymorphic DNA)

Na dcada de 80, surgiu um novo tipo de marcador molecular denominado de
RAPDs ('Randomly Amplified Polymorphic DNA'; DNA polimrfico amplificado ao acaso;
Welsh & McClelland, 1990; Williams et al., 1990). O uso da reao da polimerizao em
cadeia (PCR) proporciona a amplificao de um segmento de DNA, delimitado por dois
iniciadores (ou primers), comumente com 10 pares de bases, que so complementares a
dois stios de nucleotdeos: um em cada fita do DNA, posicionados inversamente a uma
distncia geralmente no superior a 4kb. Os produtos resultantes da amplificao podem ser
visualizados como bandas em gis de agarose ou poliacrilamida. Diferenas ao nvel do
DNA so inferidas pela presena ou ausncia de um determinado fragmento amplificado
(banda no gel). Em relao aos RFLPs, os RAPDs so mais baratos, requerem pouco
tempo e no necessitam de radioistopos. Nos ltimos anos, alguns mapas desenvolvidos
com RFLPs e isoenzimas, se tornaram altamente saturados com RAPDs, como em soja,
tomate, milho, feijo, ervilha, amendoim, Arabidopsis e em muitas outras espcies
domesticadas ou no. Outros mapas foram desenvolvidos somente com marcadores
RAPDs.

Figura 2.3: Padro de bandas polimrficas (indicadas por setas) e

monomrficas de marcador RAPD em Araucaria angustifolia. As
bandas so separadas em gel de agarose e visualizadas sob luz
ultra-violeta aps colorao com brometo de etdeo. (Fonte: Stefenon
et al., 2004).

33
 O princpio dos RAPDs est igualmente baseado na identificao de diferenas ao
nvel do DNA. Entretanto a metodologia totalmente diferente daquela dos RFLPs e
minissatlites e se baseia na PCR. Uma desvantagem dos RAPDs sua natureza
dominante (incapacidade de discriminar entre homozigotos e heterozigotos) e tambm o
desconhecimento da localizao das marcas no genoma.. As bandas observadas no gel
aps a eletroforese so codificadas como presentes ou ausentes (1 e 0, respectivamente)
em cada indivduo.

8-MICROSSATLITES
Entre as diversas sequncias repetidas em tandem, algumas so simples, formadas
por um ou poucos nucleotdeos. Tais repeties curtas em tandem so denominadas de
microssatlites. Microssatlites, tambm chamados STR ('Short Tandem Repeat'), SSRP
('Simple Sequence Repeat Polymorphisms') ou STMS ('Sequence Tagged Microsatellite
Sites') so sequncias repetidas de um, dois, trs ou quatro nucleotdeos e que esto
espalhadas pelo genoma de um indivduo. So altamente polimrficos em plantas, animais e
microorganismos. Em plantas seria mais fcil utilizar microssatlites GA (ou CT) e GT (ou
CA), pois os AT, embora frequentes, causam problemas. Assim, cada regio genmica que
contenha um determinado nmero de repeties de uma destas sequncias constitui-se
num loco gentico, altamente varivel entre indivduos e multiallico, portanto, altamente
informativo (Ferreira e Grattapaglia, 1995).
Comparativamente aos RFLPs, os microssatlites proporcionam 3 a 4 vezes mais
polimorfismo ou informao. Entretanto, para o uso rotineiro dos microssatlites, h a
necessidade de primeiro amplificar uma regio, posteriormente sequenci-la e em terceiro
lugar, sintetizar os iniciadores especficos para cada loco. Uma vez feito isto, o loco
marcador pode ser utilizado indefinidamente naquela espcie. Desta forma, existe um custo
elevado e trabalho no incio, mas o custo subsequente baixo e a simplicidade a posteriori,
muito grande. O mapeamento gentico e a caracterizao varietal para fins de proteo e
de germoplasma para fins de conservao de vrias espcies est sendo feito com o uso
dos marcadores microssatlites. Seu uso est associado principalmente caracterizao
varietal para fins de proteo e de conservao germoplasma. O alto polimosfismo e a
natureza co-dominante dos marcadores microssatlites permitem sua utilizao em estudos
de gentica populacional e evoluo de espcies selvagens, como na caracterizao de
estrutura gentica intra-populacional (Stefenon et al., 2008a) e reconstruo da histria
demogrfica (Stefenon et al., 2008b) do pinheiro brasileiro.

34
Figura 2.4. Exemplo de marcador microssatlite, que detecta diferenas entre dois parentais
e na prognie.

9-AFLPs (Amplified Fragment Length Polymorphism)

Os polimorfismos de comprimento de fragmentos amplificados (AFLPs; Zabeau,
1993) resultante do uso combinado de enzimas de restrio e da reao da polimerizao
em cadeia. Suas principais caractersticas so a alta especificidade e resoluo e poder de
amostragem. Nos protocolos dos AFLPs constam pelo menos sete etapas importantes: 1)
digesto do DNA, 2) ligao dos adaptadores, 3) primeira amplificao, 4) segunda
amplificao, 5) preparo do gel, 6) a corrida do gel e 7) o processamento do gel (Figura 2.5).
O DNA e digerido por duas enzimas de restrio, uma que corta stios de seis pares
(corte raro) de base (geralmente a EcoRI) e a outra que corta seqncias de 4 pares de
bases (corte freuente)(geralmente a MseI). Este processo de clivagem gera milhes de
fragmentos de distintos tamanhos. O DNA utilizado deve ser de alta qualidade. De
preferncia utilizar um protocolo ou etapa que inclua fenol. A qualidade (quantidade,
integridade e ausncia de contaminantes) do DNA a base de todo o processo.
O processo de ligao dos adaptadores envolve o uso de ligases que permite que
os fragmentos de DNA que foram cortados se liguem a pequenos oligonucleotdeos de DNA
de seqncia conhecida.
Subseqentemente feita a primeira amplificao, que consiste na amplificao
dos fragmentos agora ligados aos adaptadores atravs da reao da polimerizao em
cadeia com o uso de iniciadores, complementares aos adaptadores com uma extra base a
mais na extremidade 3. Isto importante, pois somente 25% dos fragmentos sero
amplificados (aqueles com a base complementar ao nucleotdeo final da extremidade 3 do
iniciador), caso contrrio todos os fragmentos cortados seriam amplificados e a resoluo no
gel seria virtualmente impossvel. Neste ponto do protocolo importante verificar se a
reao foi bem feita. Para tanto deve-se rodar um gel com parte da reao de amplificao.
Dependendo do resultado se continua ou no o processo.
A segunda amplificao feita com uma pequena amostra da primeira
amplificao. Neste caso so utilizados iniciadores que so compostos de todas as bases
dos primers da primeira amplificao, mais duas a trs bases na extremidade 3,
dependendo do nvel de polimorfismo da espcie ou da populao. Caso isto no seja
conhecido, h a necessidade de experimentar diferentes combinaes de iniciadores. Para
os laboratrios que usam radioistopos, neste quarto passo tambm feita
simultaneamente a marcao radioativa dos produtos da PCR, para posterior deteco em

35
filme de raio X. Na realidade se marca s um dos iniciadores porque o sinal suficiente para
deteco.
O preparo do gel (geralmente de poli-acrilamida) uma etapa delicada. A completa
limpeza do material, os tipos de molduras, a maneira de colocar as solues nos moldes, a
qualidade dos reagentes, etc., afetam a qualidade do gel. Qualquer defeito no gel pode
causar a perda de reao completa. Existem diferentes aparatos para corrida. Nos
diferentes laboratrios, h diferentes equipamentos. Todos com suas vantagens e
desvantagens.
A corrida do gel envolve o carregamento e a corrida propriamente dita. O
carregamento das amostras um passo crucial. Os cuidados vo desde a limpeza das
cavidades no gel, o uso adequado das pipetas, a preciso na liberao das amostras e o
acompanhamento na fase inicial da corrida. Como o gel submetido a alta voltagem, h a
necessidade de acompanhar a temperatura que no pode ultrapassar a 55C, sob pena de
desnaturar o sistema e danificar os instrumentos.
A fase final consiste no processamento do gel. Existem basicamente trs formas de
visualizao das bandas. A primeira delas com nitrato de prata. A segunda envolve a
utilizao de radioistopos e a terceira utiliza terminaes coloridas. De maneira geral, a
maioria dos laboratrios usa o fsforo y-33P radioativo, por vrios motivos. Em primeiro lugar,
a nitidez dos gis bastante alta com radioatividade. Em segundo lugar, o filme um
documento importante. O uso dos radioistopos gamas como o 33P possibilita o seu
manuseio sem grandes riscos para as pessoas, uma vez que este tipo de radiao no vai
alm de alguns centmetros. Outra vantagem deste radioistopo que a sua meia vida
maior que a do 32P. A principal desvantagem que o aparecimento de sinal no filme requer
um tempo maior que os outros istopos. Entretanto, j existem cmaras intensificadoras de
sinal, mas cujo preo muito alto. A outra maneira consiste na utilizao de kits comerciais
com molculas fluorescentes (fluorforos ou dyes) com terminadores coloridos (dyes) e
utilizar sequenciadores automticos. Desta forma, evita-se a radioatividade. A ltima forma
de visualizar as bandas atravs da colorao do gel de poli-acrilamida com nitrato de
prata. Entre as principais vantagens esto a ausncia de radioatividade e o baixo custo.
Entretanto, a resoluo no to boa quanto os outros dois mtodos. Empresas qumicas j
esto anunciando o desenvolvimento de dyes para a utilizao direta em gis. Desta forma,
por colorimetria ser possvel visualizar bandas, no futuro, diretamente no gel sem qualquer
outro tratamento. Contudo, no sabe-se ainda o preo que custaro tais kits.
A reao de digesto do DNA permite a obteno de fragmentos grandes, pequenos
e uma combinao de grandes de pequenos, respectivamente. Com isto, um grande nmero
de fragmentos podem ser amplificados e resolvidos num s gel. Desta forma, esta estratgia
permite que sejam analisadas num nico gel o maior nmero de marcadores
comparativamente s outras metodologias. Embora robusto e de alta reproducibilidade, os
marcadores AFLPs so dominantes no se distinguindo heterozigotos de um dos
homozigotos. As principais restries deste grupo de marcadores referem-se a necessidade
do uso de radioistopos, da alta qualidade do DNA e da proteo por patente desta
tecnologia.
Marcadores AFLP tm sido utilizados na construo de mapas genticos, estudos de
filogenia (Stefenon et al., 2006), gentica populacional (Stefenon et al., 2007) e identificao
de variao somaclonal em clones de plantas micropropagadas (Steinmacher et al., 2007).

36
 Figura 2.5: Etapas da gerao de marcadores AFLP.

10-SCARs (Sequence characterized amplified RAPD)

As etapas principais no desenvolvimento de um SCAR so: 1) identificao de um
iniciador que confere polimorfismo a dois bulks de DNA com fentipos contrastantes, 2) o
isolamento e a clonagem do fragmento amplificado em um vetor (plasmideo), 3)
sequenciamento do fragmento isolado, 4) desenho dos iniciadores de tamanho maior que os
decmeros e 5) o teste final (Paran e Michelmore, 1993).
Para a identificao de um iniciador que confere polimorfismo a dois bulks
contrastantes, necessrio a extrao de DNA de plantas da gerao F2. Posteriormente,
estas plantas F2 ou a sua prognie (F2:3) so testadas com relao a uma caracterstica,
resistncia a uma raa de uma doena por exemplo. Desta forma, as plantas F2 so
agrupadas em duas classes fenotpicas ou alternativamente se for utilizado as plantas F2:3
em trs classes fenotpicas. Misturando-se quantidades equimolares de DNA de seis plantas
de mesmo fentipo (ex: resistncia), pode-se dizer que os seis gentipos tm uma
seqncia de DNA em comum, que em relao ao gene que confere o referido fentipo e
talvez um conjunto adicional de pares de bases. Da mesma forma se constri o outro bulk,
com base no fentipo contrastante (susceptibilidade). Desta forma, os dois bulks s so
diferentes, genotipicamente com relao a caracterstica analisada. Testando iniciadores
que amplificam seqncias arbitrrias de DNA, por pura chance, possvel encontrar
iniciadores de 10 pares de bases (decmeros) capazes de amplificar o DNA de um bulk e
no o do outro. Quando se testa este iniciador em todos os DNAs das demais plantas F2 e a
seqncia realmente est ligada, ou seja, quando todas (ou a maioria) das plantas
resistentes apresentam a banda e todas ou uma minoria das plantas susceptveis no

37
apresentam a banda, conclui-se que o segmento amplificado est ligado ao gene de
interesse. Pela quantidade de recombinao entre o local do anelamento do iniciador e o
fentipo das plantas pode-se estimar a distncia entre o marcador e o gene de interesse. O
Ideal que o marcador deve estar o mais prximo possvel do gene, para que possa ser
utilizado como critrio de seleo.
O segundo passo o isolamento e a clonagem do fragmento amplificado em um
vetor, geralmente um plasmdeo. Posteriormente, os plasmdeos contendo os fragmentos de
DNA desejados so utilizados para transformar bactrias. Das colnias transformadas
preciso separar as que contm o fragmento daquelas que no contm o fragmento de DNA
desejado. Posteriormente deve se crescer as colnias selecionadas e extrair o DNA do
plasmdeo. Como o DNA vai para sequenciamento, h a necessidade de alta pureza.
Existem vrios mtodos e kits comerciais disponveis para clonar este fragmento. O melhor
purificao em kits com colunas de slica. O melhor seria a purificao com cloreto de
csio, mas o mtodo trabalhoso. Aps a obteno do DNA plasmidial, deve verificar se os
plamdios contm o fragmento desejado. Ento digere-se com uma enzima de restrio
capaz de cortar o plamdio em stios que flanqueiam o inserto. Corre-se um gel e verificam-
se quais os plamdios com insertos.
O terceiro passo o sequenciamento do fragmento isolado. O sequenciamento
necessrio para se conhecer a sequncia do fragmento, ou seja, as bases que esto entre
os iniciadores. De posse da sequncia, se desenham os iniciadores (quarto passo) com
comprimento varivel entre 16 e 24 pares de bases. A idia de um iniciador mais comprido
surgiu de clculos feitos sobre o comprimento mnimo de um iniciador capaz de amplificar
uma seqncia nica num genoma da maioria das plantas. Desta forma, espera-se a
presena de uma nica banda com o uso dos referidos iniciadores. Existem critrios que so
levados em considerao no desenho de iniciadores: a incluso do decmero que originou a
banda, uma percentagem mnima de 50% de C e G, tamanho mnimo que proporciona uma
temperatura de anelamento maior que 56 C, a terminao em C ou G e a possibilidade de
formao de diemres de inicaidores e estruturas secundrias (hairpin ou loopback). Existem
programas de computador que auxiliam a tomada de deciso, j que proporcionam valiosas
informaes comparativas a respeito de diferentes iniciadores que so gerados quando
fornecida ao programa uma determinada seqncia de bases.
Finalmente, de posse nos iniciadores, se fazem os testes incluindo-se tanto os bulks
como tambm um certo nmero de amostras da populao F2 e de outras plantas da mesma
espcie.

11-SNPs (Single Nucleotide Polymorphism)

Diferenas em um nico nucleotdeo em um ponto particular do genoma so
chamadas polimorfismo de simples nucleotdeo (single nucleotide polymorphism ou SNP).
Esse tipo de polimorfismo ocorre aproximadamente uma vez a cada 1000 bases no genoma
humano. SNPs so caracterizados atravs do sequenciamento de fragmentos de DNA,
sendo detectados principalmente por PCR qualitativa (qPCR). Nas quatro seqncias
hipotticas abaixo existem dois SNPs, um na seqncia 3 e outro na seqncia 4.

SEQUNCIA CONCENSO: A C T T T G A C C A A A T T G
SEQUNCIA 2: A C T T T G A C C A A A T T G
SEQUNCIA 3: A C T T T G A C C C A A T T G
SEQUNCIA 4: A C T T T G A G C A A A T T G
Em alguns casos, a base mutada pode vir a deslocar a fase de leitura no momento
da traduo do mRNA para peptdeos, assim produzindo um peptdeo diferente do tipo

38
selvagem (normal). Este peptdeo mutado pode no exercer sua determinada funo,
tornando ineficiente ou interrompendo determinado processo metablico.

12-ESCOLHA DO MARCADOR
A escolha do marcador a ser utilizado depende de diversos fatores, como o tipo de
estudo, as facilidades laboratoriais e os custos envolvidos. As caractersticas mais
importantes a serem considerandas quando se comparam marcadores para um determinado
estudo so a capacidade multiplex (nmero de locos aplificados em uma nica reao), o
nmero de alelos por locos) e a proporo de locos polimrficos. A natureza dominante ou
co-dominante do marcador tambm crucial para alguns estudos (Tabela 3).

13-APLICAES DOS MARCADORES MOLECULARES

Especificamente no melhoramento de plantas os marcadores moleculares tm
muitas aplicaes. Em primeiro lugar, o desenvolvimento de mapas de ligao, altamente
saturados com marcadores. Estes mapas servem de base para o mapeamento de outras
caractersticas de importncia agronmica, principalmente as de natureza quantitativa e
governadas por muitos genes. Desta forma possvel verificar as associaes (ligaes
genticas) entre os marcadores moleculares e os genes que afetam um carter quantitativo.
Quando isto est estabelecido, o critrio de seleo agora pode ser um ou vrios
marcadores (bandas) e no mais o fentipo, j que selecionando-se um marcador,
teoricamente seleciona-se os genes prximos a este. Assim possvel se fazer uma seleo
genotpica ao invs de seleo fenotpica, que muito menos eficiente. A seleo indireta
faz sentido mesmo para um carter qualitativo, quando este muito caro ou difcil para ser
avaliado, como o caso de resistncia a nematides ou produo de uma determinada
protena ou substncia de interesse industrial ou farmacolgico.
Os marcadores moleculares ainda tm outras utilidades como a identificao de
germoplasma, a identificao de variedades, o controle de qualidade na produo de
sementes hbridas, a caracterizao gentica de populaes, o monitoramento nos
retrocruzamentos e auxlio na identificao e clonagem de genes, entre outras.
* Construo de mapas genticos - Em primeiro lugar o grande volume de
marcadores disponveis possibilita o desenvolvimento de densos mapas de ligao, uma
ferramenta tanto para pesquisa bsica quanto aplicada. Os marcadores de DNA segregam
em propores mendelianas e no interferem na segregao de outros genes. Quando em
grande quantidade segregando num cruzamento, possvel a construo de um mapa
gentico de ligao, cuja densidade depende da quantidade de marcadores. Mapas
genticos de alta densidade eram praticamente utopia numa fase anterior ao
desenvolvimento desses marcadores. Nos ltimos anos foram construdos mapas genticos
de ligao das principais espcies vegetais cultivadas, de animais domesticados e de
espcies utilizadas como modelo em laboratrio.
Alm de mapas, os marcadores facilitam o mapeamento de genes especficos. cDNA
uma molcula de DNA sintetizada a partir do mRNA. Portanto, o cDNA seria um gene
(DNA) sem os introns. Quando o cDNA obtido de um mRNA de um gene conhecido, sabe-
se a funo deste cDNA.
* Caracterizao da variabilidade gentica - Entre 1966 e 1984 (18 anos) a
eletroforese foi utilizada em mais de 1000 espcies, para estudos de gentica e evoluo.
De maneira geral, foram avaliados em mdia de 23 locos em mais de 200 indivduos. Uma
vez caracterizado o germoplasma disponvel, o melhorista pode escolher genotipicamente
os progenitores para um cruzamento tanto com o objetivo de maximizar a segregao de
genes de importncia agronmica como restringir esta segregao a poucos genes. Alm da
escolha dos progenitores, ser possvel identificar os recombinantes desejados.

39
 * Monitoramento - Monitorar a recuperao do genoma do pai doador nos
retrocruzamentos (intra e interespecficos) atravs de marcadores especficos pode diminuir
o tempo e a quantidade de trabalho necessrios para a introgresso de um ou poucos
genes. A avaliao genotpica atravs de marcadores moleculares de 120 linhagens BCF6
de tomate, provenientes do cruzamento entre L. pennellii e L. esculentum e retrocruzadas
para o L. esculentum, foi verificado que 21 delas cobrem 95% do genoma da espcie L.
pennellii.
* "Fingerprinting" - Fingerprinting ou a caracterizao gentica de um gentipo
outra aplicao dos marcadores moleculares. Isoladamente os mini ou microssatlites ou
em conjunto com outros marcadores moleculares, podem ser utilizados para caracterizar e
distinguir uma variedade de outra. Para a diferenciao varietal trs requisitos bsicos so
essenciais: 1) distino - diferentes gentipos devem apresentar distintos padres de
bandas; 2) uniformidade - o mesmo padro de bandas deve ser obtido se o procedimento
for repetido e 3) estabilidade - o padro de bandas no se altera mesmo que o gentipo for
cultivado em diferentes ambientes. Dependendo da legislao brasileira de proteo s
cultivares e regras de patenteamento a ser definida, as impresses digitais de DNA
('fingerprinting') podero ter grande utilidade.
* Mapeamento de QTLs - A maioria das caractersticas relacionadas com os
processos de crescimento em plantas dependem da expresso de muitos genes.
Historicamente, a biometria possibilitava a anlise em massa desses genes, sem a
caracterizao da contribuio individual de cada um dos componentes do sistema. Com o
advento dos mapas genticos de ligao, altamente saturados, foram criadas as condies
para o estudo individualizado dos QTL (Quantitative Trait Loci), pois tais mapas
proporcionam marcadores moleculares em todas as regies do genomas, em alguns casos
espaados apenas de menos de 2 cM.
Neste caso, a prognie oriunda do cruzamento entre plantas que diferem para um
QT (Quantitative trait), so agrupadas com base num marcador molecular e ento estimada
a mdia e varincia da caracterstica fenotpica das plantas de cada classe. Uma diferena
significativa entre as mdias das classes, indica a relao entre o marcador e a
caracterstica, mais especificamente, uma ligao entre o marcador de DNA e um dos alelos
que afeta este carter.
Vrios QTL relacionados com as caractersticas do fruto em tomate (Paterson et a.,
1988, 1991) e com as interaes entre bactria e feijo comum (Nodari et al., 1993). No
primeiro caso, foram identificados seis QTL afetando o tamanho do fruto e explicando 58%
da variao fenotpica do carter. Alguns desses QTLs demonstraram efeito sobre o carter
em dois ou mais ambientes e outros em apenas um s ambiente.
Cinco QTLs associados com a tolerncia a baixo teor de fsforo foram identificados
em milho com auxlio de um mapa de RFLP. Todos os cinco QTLs apresentaram efeitos
apenas aditivos. Entretanto, uma interao entre dois QTLs foi significativa. Alelos que
contribuem para a tolerncia foram detectados em ambos os progenitores.
O mapeamento de QTLs proporciona a identificao no s de alelos envolvidos na
expresso do carter, mas o que mais importante, as possveis interaes entre os QTLs,
proporcionado ao melhorista informaes que podem ser teis na escolha dos progenitores
para a realizao dos cruzamentos. Proporciona ainda condies para o desenvolvimento
de estoques genticos com diferentes composies genticas. Tais combinaes permitiro
a comprovao dos efeitos individuais dos QTLs, anteriormente estimados.
Existem programas que permitem determinar as distncias genticas entre
marcadores como o caso do Fstat (Goudet, 1995), GDA (Lewis e Zaykin) e outros que
facilitam a construo de mapas como o MAPMAKER (Lander et al., 1987).
* Seleo assistida por marcadores (MAS) - A prtica da seleo indireta para
caracteres de baixa herdabilidade poder ser intensamente explorada desde que os genes
de interesse estejam fortemente ligados a marcadores moleculares. A seleo indireta e

40
genotpica (marcador molecular como critrio de seleo), possibilita ainda a seleo de
alelos com efeitos positivos provenientes dos dois ou mais progenitores envolvidos na
gerao da populao segregante. A ligao entre o alelo Aps1 da fosfatase cida e o gene
Mi (distncia de 1cM) que codifica a resistncia ao nematide, tem possibilitado a seleo
de plantas de tomate resistentes em populaes segregantes atravs da eletroforese desde
1974, quando foi iniciado por Charles Rick. O alelo Aps1 que est ligado do gene Mi que
causa resistncia ao nematide em L. esculentum foi transferido do L. peruvianum atravs
do sistema por retrocruzamento (mais de 30 retrocruzamentos para o L. esculentum). Um
segundo exemplo relaciona-se com a incorporao de trs genes de resistncia ferrugem
em feijo realizada por James Kelly, da Universidade de Michigan, utilizando marcadores
RAPDs, altamente ligados aos 3 principais genes de resistncia.
O procedimento 'Bulked Segregant Analysis' (BSA) (Michelmore et al., 1991) em
conjugao com a PCR uma alternativa eficiente de mapear genes especficos e
selecionar indiretamente gentipos desejados.
* Clonagem de genes - Em stimo lugar, os marcadores auxiliam na clonagem e
transferncia de genes de interesse agronmico. Entre os mais freqentemente citados
encontram-se os genes de resistncia a pragas e doenas. Entretanto, outros genes podem
causar profundo impacto nos produtos finais das plantas. Trata-se dos genes que podem
proporcionar s plantas o uso de rotas metablicas alternativas, resultando em produtos
novos ou modificados, em muitos casos de alto valor econmico.
Os genes j caracterizados pela gentica clssica,tm seu fentipo conhecido, mas
normalmente seu produto desconhecido. Um marcador de DNA que est prximo de um
desses genes, pode ser o ponto de partida para o sua identificao e clonagem. Uma das
alternativas pela tcnica denominada de 'caminhar no cromossomo (chromosome
walking). Esta tcnica compreende o isolamento de vrios clones com sobreposio parcial.
O marcador de DNA utilizado inicialmente como sonda para identificar um desses clones.
Pela sub-diviso desse clone identificado, possvel a identificao de um segundo clone,
adjacente ao primeiro, e similar a este na regio de sobreposio. Este segundo clone
ento utilizado como sonda para identificar um terceiro clone e assim por diante. Esta
'caminhada' pode eventualmente atingir o gene de interesse, que estaria contido num dos
clones.
Assim, vrios genes foram isolados com auxlio deste 'caminhar no cromossomo'.
Entretanto esta tcnica difcil, cara e demorada. Ainda apresenta alguns problemas como
seqncias repetidas de DNA que podem estar em um grande nmero de clones,
impossibilitando a 'caminhada' na direo exata do gene de interesse. O outro problema,
refere-se a grande distncia entre um marcador e o gene de interesse.
Avanos como a possibilidade de clonar fragmentos de grande tamanho (YAC; Yeast
Artificial Chromosome e BAC; Bacterial Artificial Chromosome) e de separar grandes
molculas de DNA (PFGE; Pulse Field Gel Electrophoresis) facilitaro a clonagem de um
gene a partir de um marcador molecular
* Estudos de crescimento e desenvolvimento das plantas - O crescimento e o
desenvolvimento das plantas esto sob o controle de muitos genes. Vrios desses genes j
foram identificados, inicialmente atravs da gentica clssica e mais recentemente com
auxlio da gentica molecular. Exemplos: fitocromo e genes que afetam o padro de cor das
plantas. O gene Phs responsvel pela produo da faseolina como a principal protena de
reserva das sementes de feijo foi mapeado com auxlio de marcadores moleculares (Nodari
et al., 1993). O gene nts (nodulao tolerante ao nitrato) foi mapeado com auxlio de
marcadores moleculares numa populao F2 (10cM).
* Modificaes na organizao do genoma - Existem amplas evidncias do
surgimento de variantes durante a regenerao a partir de cultura de tecidos. Variao
somaclonal que ocorre ao nvel do DNA, tanto nos stios de reconhecimento de uma
enzima de restrio ou na regio de anelamento de um primer podem ser detectadas via
RFLP, AFLP ou RAPD, respectivamente. Variao no nmero de cpias tambm pode ser

41
detectadas pela intensidade de hibridizao, via RFLP. Os RFLPs tambm tm potencial
para detectar variao fenotpica decorrente de alteraes no padro de metilao, j
verificado em milho. Variao somaclonal em milho foi atribuda a variao ocorrida ao nvel
do DNA.
Alm disso, os marcadores moleculares so extremamente teis na diagnose de
doenas, sexo, oncogenes, etc. Neste caso, os marcadores com base na PCR so os mais
adequados, considerando-se rapidez, distino, custos e praticidade e reproducibilidade em
outros laboratrios.

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Tabela 2.1 - Anlise comparativa entre os marcadores moleculares
Protenas
Atributos Isoenzimas de sementes RFLPs RAPDs Microssatlites AFLPs
Nvel de Polimorfismo baixo alto baixo-alto baixo-alto muito alto muito alto
Estabilidade moderada alta alta alta alta alta
ambiental
Nmero de locos moderado (<50) baixo (<10) alto alto alto alto
Expresso gentica co-dominate co-dominante co-dominante dominante co-dominante dominante
Nmero de alelos por 2-5 multiallico multiallico 2 multiallico 2
loco
Distribuio no regies de cpia regies de cpia vrias ao acaso ao acaso ao acaso
genoma nica nica
Acessibilidade baixa muito baixa mdia mdia mdia mdia
tecnolgica
Aplicabilidade no rpido, rpido, lento, rpido, baixo lento, custo alto rpido, custo
melhoramento baixo custo baixo custo custo mdio custo baixo

Identificao de baixa baixa mdia muito alta muito alta muito alta
gentipos
Avaliao de mdia baixa alta alta alta muito alta
germoplasma
Mapeamento baixa muito baixa alta alta muito alta alta
gentico
Mapeamento de baixa inadequado mdia muito alta mdia muito alta
regies especficas
Mapeamento baixa inadequado muito alta baixa alta baixa
comparativo
Gentica de baixa baixa mdia alta muito alta muito alta
Autgamas
Gentica de mdia baixa mdia alta muito alta muito alta
Algamas
Anlise Filogentica mdia baixa muito alta mdia alta mdia
Adaptado de Gepts (1993) e Ferreira & Grattapaglia (1995).
 PARTE 3 - ORGANISMOS GENETICAMENTE MODIFICADOS

1. INTRODUO
Organismos transgnicos (ou Organismos Geneticamente Modificados - OGM) so
organismos (plantas, animais ou microrganismos) que tm inserido em seu genoma, uma
sequncia de DNA manipulado em laboratrio por tcnicas moleculares ou biotecnolgicas. O
DNA inserido pode ser da mesma, de outra espcie ou ainda sinttico. Tais tcnicas,
desenvolvidas nos ltimos 20 anos, possibilitam o corte e a ligao de fragmentos de DNA de
uma forma altamente precisa. Particularmente, seqncias de DNA (genes) podem ser
removidas de um organismo, ligadas a seqncias regulatrias e inseridas em outros
organismos. A fonte destes genes pode ser qualquer organismo vivo (microorganismo, planta,
animal) e o organismo receptor, nesse caso especfico, uma variedade de uma espcie de
planta cultivada.
As plantas, animais e microrganismos transgnicos possibilitam tanto (i) estudar
questes biolgicas fundamentais a nvel molecular como tambm (ii) materializar aplicaes
da biologia celular e molecular, como por exemplo ingroduzir em plantas uma nova
caracterstica (ex: resistncia a herbicidas). Em tese, a tecnologia tem potencial para modificar
o cdigo gentico dequalquer espcie visando a prou de uma nova protena, outro produto
ou mesmo alterar a regulao de um ou mais genes.
A expresso tecnologia do DNA Recombinante surgiu em 1973 quando molculas DNA
de diferentes espcies foram recombinadas in vitro. Basicamente, trata-se do uso de dois
grupos de enzimas: as de restrio (do tipo II) que so capazes de reconhecer uma pequena
seqncia de pares de bases e ento cortar o DNA neste stio de reconhecimento ou as de
corte, conhecidas como ligases, que so enzimas capazes de ligar dois fragmentos de DNA.
Para obter uma planta transgnica a tecnologia desenvolvida aps 1973 consiste de
construir um vetor com as sequencias de DNA recombinante desejveis (cortar e colar) que
pudesse transferir tais sequencias a um hospedeiro. O primeiro vetor foi utilizar um
plasmideeo evinserir nele tais sequncias recombinantes (transgene). Plasmideo uma
molcula de DNAcircular, de tamanho pequeno, que habitam em bactrias, e que so
facilmente manipouladas em laboratrio. O primeiro plasmdeo modificado in vitro (Cohen et
al, 1973) foi construdo a partir do corte de DNA com enzimas de restrio e a ligao de
fragmentos especficos (transgene) com as enzimas ligases. Surge ento o que se
convencionou denominar de tecnologia do DNA recombinante, posteriormente denominada
de engenharia gentica. Posterrmente, o trsngene deste plasmidio em contacto com clulas
de um hospedeiro, pode transferir tal DNA recombinate para clulas do hospedeiro e integrar-
se em seu genoma, tcnica denominada de transformao gentica. uma tentativa de se
fazer in vitro o que ocorre na natureza: a recombinao de fragmentos de DNA. Contudo, na
natureza, dificilmente o DNA de uma espcie pode ser cortado e ligado ao DNA de outra
espcie.
No entanto, 25 anos antes do clssico trabalho de Watson e Crick sobre a estrutura do
DNA e 55 anos antes da tecnologia do DNA recombinate, j havia sido descoberta a
transformao gentica. Em 1928 Frederick Griffith conseguiu transformar uma cepa de
Streptococcus pneumoniae atenuada e no encapsulada (denominada na poca de
pneumococcus Tipo II) em uma cepa, agora virulenta e com capacidade de encapsulamento
(Tipo III). Para tal, Griffith inoculou simultaneamente em um rato uma pequena quantidade de
uma cultura viva de pneumococcus Tipo II (R) e uma grande quantidade de uma cultura Tipo
III (S), morta pelo calor (Susuki et al., 1986). No s o rato morreu como as clulas
recuperadas foram igualmente virulentas em inoculaes subseqentes. O fato de que o Tipo

44
II (R) se tornou virulento foi considerado uma prova da aquisio desta caracterstica a partir
do outro tipo. Este fenmeno foi chamado na poca de transformao.
De l para c, o avano no conhecimento da gentica, bioqumica e fisiologia de
procariotos possibilitou ao ser humano a manipulao do DNA, a molcula cuja funo
carregar a informao gentica que lida pela maquinaria celular durante o desenvolvimento
de um organismo ou vrus. A manipulao do DNA e de sistemas celulares possibilitou o
desenvolvimento de vrios produtos e processos, permitindo ao homem reprogramar a vida
dos seres vivos e de vrus (Nodari e Guerra, 2003).
A introduo de uma molcula de DNA recombinante numa planta se constitui na
transformao de plantas. Para tal, utiliza-se de um vetor para que a construo gentica feita
em laboratrio seja inserida no genoma da planta. As tcnicas de engenharia gentica
possibilitam a transferncia de genes por via no sexual.

2. TECNOLOGIA DO DNA RECOMBINANTE

A construo de uma molcula de DNA recombinante depende da ao de enzimas de
restrio e enzimas ligases. As enzimas de restrio so nucleases capazes de clivar (cortar)
o DNA em stios especficos, ou seja, a partir de seqncias nucleotdicas especficas
reconhecidas por estas enzimas. A utilizao de enzimas de restrio (tesouras qumicas)
de extremo interesse pois a partir da ao delas existe a possibilidade de se clivar seqncias
de interesse, ou seja, genes e elementos regulatrios de interesse para a transformao
gentica de organismos. Portanto, quando se separam os fragmentos de DNA de interesse
com enzimas de restrio, falta a ao das enzimas ligases para fazer a juno destes
fragmentos. Como o DNA e uma molcula universal para todos os organismos vivos, as
ligases so capazes de unir DNA de origens diferentes (diferentes espcies) ou mesmo
sinttica (seqncia nucleotdica sintetizada em laboratrio).
O transgene essa sequncia de interesse, construda a partir da utilizao de
enzimas de restrio e ligases, que inclui no apenas o gene de interesse em si, mas tambm
todas as sequncias que o regula, como promotores, terminadores e genes reprteres ou de
seleo (Figura 3.1).

Figura 3.1. Ilustrao de um transgene.

A tecnologia do DNA recombinante tem interesse especial quando este transgene est
inseridoema um plasmdeo, que tem funo de vetor. Um vetor pode ser descrito como um
veculo utilizado na construo do transgene ou mesmo na transformao de plantas e outros
organismos.

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3. GENES MARCADORES E GENES REPRTERES PARA SELEO
Os genes marcadores so utilizados para possibilitar a discriminao entre clulas
transformadas e no transformadas e, consequentemente, a seleo das primeiras. Tais
genes so introduzidos para facilitar o trabalho de identificao das mesmas, pois so uma
minoria em relao ao total de clulas submetidas a transformao.
Os genes marcadores so geralmente genes de resistncia a antibiticos. Assim, no
momento da regenerao das plantas a partir de uma clula, a adio de antibitico ao meio,
permitir apenas o crescimento daquelas clulas transformadas que expresses a referida
protena.
Os genes marcadores (e suas respectivas protenas) mais utilizados so: gene neo,
isolado do transposon Tn5 de Escherichia coli, codifica para neomicina fosfotransferase
(NPTII), que confere resistncia a kanamicina, e o gene hpt, tambm isolado de Escherichia
coli, codifica para higromicina fosfotransferase (HPT).
Genes de resistncia a herbicidas tambm esto sendo utilizados. Dentre eles,
destacam-se: gene bar, isolado de Streptomyces hygroscopicus, codifica para fosfinotricina
acetiltransferase (PAT) que induz a resistncia a herbicidas a base de fosfinotricina; gene
aroA, isolado de Salmonella typhimurium, que induz a resistncia a herbicidas a base de
glifosato e o gene csr1, que induz a resistncia a herbicidas a base de imidazolidonas e
sulfonilureas.
Genes reprteres codificam para protenas que so facilmente detectveis. Dentre os
genes reportes, os mais utilizados so: gene uidA, extrado de Escherichia coli, codifica para a
glucuronidase (GUS), detectada por mtodos histoqumicos; gene gfp, extrado da medusa
Aequorea victoria, codifica par a protena fluorescente verde (GFP); gene luc, isolado do
vagalume Photinus pyralis, codifica para a luciferase.

4. MTODOS DE TRANSFORMAO DE PLANTAS

A transformao de plantas consiste na introduo de um fragmento de cido nuclico
em um genoma. Existem duas estratgias para transformar plantas: direta e indireta. A
estratgia indireta aquela que utiliza um vetor como a Agrobacterium tumefaciens (o mtodo
mais usado para a obteno de plantas transgnicas) ou A. rhizogenes como veculo de
entrega do DNA planta. Mtodos qumicos e fsicos possibilitam a transformao direta de
genomas. Dentre eles, destacam-se: mtodos fsicos como a biobalstica (ou
acelerao/bombardeamento de partculas), eletroporao e microinjeo; alm dos mtodos
qumicos, como polietilenoglicol-PEG.
Agrobacterium tumefaciens - Pertencente ao grupo das bactrias gram-negativas, tipo
bacilo aerbico, A. tumefaciens causa em algumas plantas uma doena chamada de galha-
da-coroa, uma espcie de tumor. Este tumor causado por genes bacterianos, que
naturalmente so transferidos pela bactria e inseridos no genoma nuclear da planta
hospedeira. O segmento de DNA transferido planta denominado de T-DNA, que faz parte
do plasmdeo bacteriano, chamado de plamdeo Ti (tamanho varivel de 120 a 250 kb). O
processo de transferncia ocorre aps a infeco, que tem incio aps a liberao de
determinados compostos pela planta. Imediatamente vrios genes da regio vir do plasmdeo
so expressos, os causadores da virulncia, O T-DNA transferido est contido entre duas
sequncias terminais de 25 pares de bases, denominadas de extremidades esquerda e direita.
A extremidade direita imprescindvel para a transferncia. As demais sequncias que
naturalmente so transferidas s plantas no so necessrias ao processo em si de
transferncia. Desta forma, um plasmdeo pode ser engenheirado, com a substituio de
todas as bases, exceo quelas que compem as extremidades, por genes de interesse.
Assim, a A. tumefaciens se encarrega de transferir e inserir no genoma nuclear das plantas

46
uma construo quimrica contendo genes de interesse. O mtodo bastante eficiente,
entretanto, esta bactria no consegue infectar um grande nmero de espcies vegetais, o
que limita bastante seu uso, como no caso das monocotiledneas em geral. A primeira planta
transformada com Agrobacterium tumafasciens foi em 1983 e s 11 anos mais tarde, a
primeira variedade transgnica foi liberada para cultivo, o tomate longa vida (Flavr Savr).
A similaridade entre os mtodos diretos de transformao de plantas consiste na
capacidade de romper a parece celular e do envelope nuclear. Estes mtodos so mais
adequados do que os indiretos para transformao de plen, embrio e meristemas (Brasileiro
e Dusi, 1999). Sero descritos, agora, brevemente alguns mtodos.
Biobalistica ou acelerao de partculas/ bombardeamento - um mtodo que utiliza
microprojteis em alta velocidade envoltos por DNA, com objetivo de superar a parede celular
pela fora, na esperana que algumas molculas de DNA atinjam o ncleo e se integrem ao
genoma nuclear. Os microprojteis so constitudos principalmente de partculas esfricas de
ouro ou tungstnio, de 1 mm de dimetro. O DNA adere facilmente e fortemente a estas
partculas, pois tais metais so carregados positivamente. Geralmente os equipamentos
utilizam o gs hlio, eletricidade ou propulso a ar e alta presso na acelerao das
partculas. Esta estratgia empregada em plantas que normalmente no conseguem ser
infectadas por A. tumefaciens. Por utilizar a fora bruta para penetrar no ncleo da clula, esta
estratgia pode a rigor ser utilizada em qualquer tecido e planta. A obteno de uma planta
transformada depende da regenerao de uma clula transformada.
Eletroporao - Mtodo que consiste em submeter protoplastos misturados com DNA a
uma descarga eltrica controlada opor um curto espao de tempo. Esta descarga cria poros
na membrana nuclear, facilitando a entrada de DNA no ncleo. Nesta soluo de protoplastos,
clulas sem a parede celular (ncleos com citoplasma) tambm esto presentes plasmdeos
contendo genes de interesse. Com a criao de poros pela descarga eltrica, um ou mais
plasmdeos podem penetrar no ncleo e se integrarem no genoma da clula. A obteno de
uma planta transformada tambm depende da regenerao de uma clula transformada.
Qumicos Existem vrias substncias qumicas que facilitam a entrada no ncleo de
construes quimricas bem como a sua integrao no genoma de clulas de plantas. O
polietilenoglicol (PEG), um poliction, um dos mais utilizados, mas de baixa eficcia. O
PEG tambm utilizado conjuntamente com outras estratgias. Polivinil lcool (PVA) tambm
utilizado.
Lipossomas Neste mtodo o DNA envolto pelos lipossomas, que so vesculas
fosfolipdicas, que so misturadas com protoplastos previamente tratados com PEG. De
eficncia muito baixo, pouco utilizado.
Microinjeo - Tubos microcapilares (microsseringas) so utilizados para injetar o DNA
no ncleo das clulas, sem causar danos severos. Este mtodo mais comum em animais. O
uso de agulhas permite ultrapassar a parede celular e tambm o envelope nuclear. Outros
mtodos incluem o uso de fibras (de Silicon Carbide) ou laser, para perfurar a parece celular.
Neste processo, so misturados os plasmdeos contendo os genes de interesse com fibras de
silicon carbide e as clulas a serem transformadas. Sob agitao, as fibras de silicon carbide
conseguem abrir poros nas clulas vegetais, o que permite a entrada de DNA.
Alternativamente, microrraios laser podem perfurar a parede celular.
Tambm a embebio de uma soluo de DNA com sementes e tubo polnico podem
levar a transformao de clulas.

4.1-CONCEITO DE OGM OU TRANSGNICO

A transformao gentica de plantas consiste na insero no seu genoma de uma ou
mais seqncias, geralmente isoladas de mais de uma espcie, especialmente arranjadas, de
forma a garantir a expresso gnica de um ou mais genes de interesse. Neste contexto, o
prefixo trans era plenamente justificado, pois exprimia a idia de alm de, neste caso,

47
significando o rompimento da barreira da espcie. Com o estabelecimento de normas gerais
de biossegurana que se comeou a utilizar a expresso Organismo Geneticamente
Modificado - OGM. Em tese, a expresso Organismo Geneticamente Modificado causa certa
confuso, porque alguns cientistas dizem que todos os organismos so geneticamente
modificados. Entretanto a Lei de Biossegruana no Brasil, define claramente o que so OGMs.
Quando se utiliza a transgenia, uma nova sequncia gnica introduzida, geralmente
no nativa daquela espcie. Em muitos casos, a sequncia inserida formada por partes de
diferentes genes de diferentes espcies ou sequncias semi-sintticas. O conjunto destas
seqncias chamada de quimera. Assim, a Soja RR transgnica resistente ao Round-up,
herbicida base de glifosato, contm material gentico de pelo menos quatro diferentes
organismos: promotor do vrus-do-mosaico-da-couve-flor (CaMV), peptdeo sinal da petnia,
gene EPSPS da Agrobacterium CP4 e a sequncia 3 (NOS) da Agrobacterium tumefasciens.
Do ponto de vista legal, no Brasil, OGM o organismo cujo material gentico
(ADN/ARN) tenha sido modificado por qualquer tcnica de engenharia gentica. A Lei 8.974,
de 5/01/95, definiu ainda engenharia gentica como a atividade de manipulao de molculas
ADN/ARN recombinantes. Esta lei foi subsituida pela nova lei de biossegurana (Lei n
11.105, de 24/03/2005), que manteve a mesma definio de OGM. Pela legislao brasileira,
ento, qualquer planta que tenha seqncia(s) de DNA ou RNA engenheiradas (neste texto
ADN e DNA sero utilizados como sinnimos, assim como ARN e RNA), deve ser considerada
OGM, e est, portanto, submetida aos efeitos da referida lei, mesmo porque ela tambm
regulamenta os produtos obtidos pelo processo do DNA recombinante. No presente trabalho,
OGM ser utilizado como sinnimo de transgnico, embora no haja concordncia absoluta a
respeito desta sinonmia.
No artigo 3 da Lei 11.105, a definio de um OGM (Organismo geneticamente
modificado) feita por meio de trs incicos: III molculas de ADN/ARNrecombinante: as
molculas manipuladas fora das clulas vivas mediante a modificao de segmentos de
ADN/ARN natural ou sinttico e que possam multiplicar-se em uma clula viva, ou ainda as
molculas de ADN/ARN resultantes dessa multiplicao; consideram-se tambm os
segmentos de ADN/ARN sintticos equivalentes aos de ADN/ARN natural; IV engenharia
gentica: atividade de produo e manipulao de molculas de ADN/ARN recombinante; V
OGM: organismo cujo material gentico ADN/ARN tenha sido modificado por qualquer
tcnica de engenharia gentica.
Desta forma, pode-se definir plantas transgnicas (ou OGM) como plantas que tm
inserido em seu genoma, uma ou mais seqncias de DNA manipulado em laboratrio por
tcnicas de DNA recombinante ou engenharia gentica. Alternativamente, plantas
transgnicas poderiam ser definidas como organismos que tiveram seu material gentico
alterado por mtodos que no aqueles naturais, considerando-se como mtodos naturais em
plantas o acasalamento sexual e a recombinao gentica.

A induo mutagnese uma outra maneira de alterao gentica de uma planta.

Neste caso, o gentipo do indivduo alterado tambm diretamente in vivo. Um exemplo disto
a exposio de sementes a agentes qumicos, como o metil sulfonato, ou fsicos, como raios
de cobalto ou X, na esperana de que alguma modificao benfica ocorra no gentipo
previamente escolhido. No sentido conceitual de modificao no-natural, a transgenia
equivaleria mutagnese, pois tambm provoca uma alterao gentica no oriunda de
cruzamento. Tambm h similaridade entre ambas quanto aleatoriedade no loco onde
ocorrer a modificao, o que impossibilita, com o que se conhece hoje, antecipar o que vai
acontecer.
Contudo, existem vrias diferenas entre ambas. Enquanto na mutagnese as
modificaes podem ser de substituio de uma base por outra, deleo ou duplicao de
uma ou mais bases e rearranjos diversos. Na transgenia, as seqncias externas introduzidas
so adicionadas no todo ou em parte do genoma hospedeiro.

48
 Esta diferena crucial, pois na tecnologia est embutida a possibilidade da aplicao
de leis de propriedade industrial que permite o patenteamento das seqncias engenheiradas,
bem como do processo de transgenia. Esta possibilidade baseia-se naquilo que adicionado,
uma vez que conhecido, engenheirado e patenteado. O mesmo no ocorreu com a tcnica
da mutagnese de plantas, embora uma cultivar desenvolvida com esta estratgia possa ser
protegida por leis de proteo intelectual.
Outra tcnica desenvolvida para terapia gentica na espcie humana, a
quimeroplastia, foi adaptada para plantas (Beetham et al., 1999; Zhu et al., 1999). Ela
possibilita a substituio ou a adio de uma base, em uma seqncia conhecida. Neste caso
a diferena em relao transgenia clssica a utilizao de oligonucleotdeos quimricos.
Seu alcance, contudo, menor, restringindo-se a alterar ou adicionar uma ou poucas bases.
Com o objetivo de confundir a opinio pblica, freqentemente dito por cientistas que
o homem vem produzindo transgnicos h milnios com a seleo artificial de plantas. Como
possvel perceber pela definio de OGM na legislao, os agricultores que domesticaram
as plantas cultivadas ou os melhoristas no conseguiram alterar um gentipo in vivo.
Selecionavam sim, as novas combinaes (prognies), oriundas da recombinao gentica da
gerao anterior. preciso no esquecer que o processo evolutivo composto de foras que
criam ou amplificam a variabilidade gentica e outras que afetam o destino desta variao,
como bem destacou Charles Darwin, em sua obra A origem das espcies (1859). O efeito
conjunto das mutaes, aqui includas todas as modificaes de DNA em condies naturais,
e das recombinaes entre mutantes, promove o surgimento de uma ampla gama de
associaes allicas (Allard, 1960; Fehr, 1987), cujo destino ento dependente das diversas
foras evolutivas como seleo, migrao e deriva. Os primeiros agricultores selecionaram
estas novas associaes allicas que melhor se adaptavam a sua maneira de cultivar em
cada situao. Assim, no cabe aqui falar de transgenia, mas sim de processo evolutivo.

4.2- CARACTERIZAO DE UM EVENTO

Um evento transgnico caracterizado quando uma seqncia especfica de DNA
recombinante, ou transgene, inserida num genoma hospedeiro. Ou seja, cada planta
transgnica liberada para uso comercial num pais considerada um evento diferente. Se o
mesmo transgene inserido em mais de um genoma hospedeiro, se consideram eventos
diferentes. Isto porque como no existe controle sobre o local da insero, o nmero de cpias
a integridade das cpias inseridas, e a composio deste organismo geneticamente
modificado pode ser diferente.

5-DIFERENAS ENTRE OS MTODOS DE MELHORAMENTO CONVENCIONAIS E

BIOTECNOLGICOS
Os agricultores, assim como os melhoristas, utilizam os princpios da diversidade
gentica quando fazem cruzamentos, e da segregao quando selecionam plantas ou animais
considerados superiores. O melhoramento gentico pode ser considerado uma forma de
biotecnologia, empregada h milnios para diversos propsitos, incluindo a introduo novas
variedades de plantas no ambiente. De fato, o melhoramento envolve a manipulao gentica,
mas no envolve as tcnicas da engenharia gentica conforme ficaram conhecidas desde
1973.
Por meio dos mtodos de melhoramento, agora tambm chamados de convencionais,
tradicionais ou clssicos, novas combinaes genticas so geradas por meio de cruzamentos
sexuais entre plantas que apresentam as caractersticas consideradas como desejadas.
Cruzamentos so feitos entre plantas da mesma espcie e, ocasionalmente, quando a
variao gentica desejada no existe dentro da espcie, alelos ou genes so transferidos ou
substitudos de outras espcies do mesmo gnero. Juntamente com os genes desejados,

49
outros segmentos de DNA do gentipo doador, podem tambm ser transferidos ou
substitudos e podem expressar caractersticas indesejveis. Desta forma, a amplitude do
estoque gentico (gene-pool) para o melhoramento determinada pela compatibilidade sexual
de uma espcie e espcies aparentadas. Tcnicas radicais como resgate de embrio e o
cultivo de embries tm contribudo para aumentar o gene-pool, mas de forma muito limitada.
Quando se utilizam mtodos de melhoramento, os cruzamentos sexuais possibilitam a
substituio de alelos via recombinao homloga e no a adio de uma quimera como na
transgenia.
Das metodologias utilizadas pelo melhoramento de plantas, a introgresso de genes,
feita por retrocruzamentos sucessivos do F1 para o gentipo recorrente, a que mais se
assemelha transgenia, em termos de obteno de uma nova associao allica. Contudo,
existem muitas diferenas entre ambas, que esto explicitadas na Tabela 3.1.
Na transgenia, seqncias de DNA (genes) podem ser removidas de um organismo,
modificadas ou no, ligadas a outras seqncias, incluindo as regulatrias, e inseridas em
outros organismos. A fonte destes genes pode ser qualquer organismo vivo (microorganismo,
planta, animal) ou vrus.
Uma das principais implicaes da transgenia o rompimento da barreira sexual.
Desta forma, a transformao gentica possibilita uma alternativa de introduo de genes em
plantas. A rigor, isto implica que, teoricamente, qualquer gene, natural ou sinttico, pode ser
introduzido numa espcie vegetal. Assim, o pool gnico de uma espcie se torna
extraordinariamente grande. As oportunidades para o melhoramento aumentam
drasticamente, pois alm dos recombinantes produzidos naturalmente pela meiose, possvel
obter recombinantes no convencionais. Desta forma, problemas de difcil soluo ou mesmo
a expresso de caractersticas em outros organismos poderiam ser adequadamente
resolvidos.

Tabela 3.1. Comparao entre o mtodo do retrocruzamento e a transgenia.

Retrocruzamento Transgenia
Objetivo Alterar ou introduzir uma Alterar ou introduzir uma
caracterstica caracterstica
Natureza Substituio de alelos Introduo de seqncias novas
(quimera)
Tempo 3 a 6 anos Varivel
Tecnologia Simples Sofisticada
Pool gnico Limitado Ilimitado
Custo Baixo Elevado
Resultados Previsveis Imprevisveis
Limitados Ilimitados
Efeitos adversos Raros Freqentes
Ex: alelos indesejveis Ex.: genes marcadores, promotores
e outras seqncias
filogeneticamente bem distintas;
efeitos pleiotrpicos
Distribuio dos Instituies pblicas e privadas, Grandes empresas, grandes
benefcios pequenos agricultores, agricultores, melhoristas
consumidores.
Fonte: Nodari e Guerra (2001)

Neste cenrio, e considerando-se o ponto de vista cientfico, duas limitaes

restringem o uso de genes via transgenia: a criatividade e o julgamento inadequado do valor

50
de um gene, desde que h disponibilidade de tecnologias de isolamento e transformao de
uma dada espcie. Esta ltima limitao refere-se a situaes em que o pesquisador no
consegue perceber ou no tem informaes sobre a utilidade de um gene num programa de
melhoramento de uma espcie.
Alm dessas limitaes, j esto sendo adicionadas outras, como: a real necessidade
de um determinado OGM (comparao com alternativas) e a magnitude das implicaes que
ele possa apresentar se cultivado e ou consumido em larga escala.
A transgenia introduz novos genes exticos, e muitas vezes de sequncias
rearranjadas e diferentes das originais, criando recombinaes no naturais cujas localizaes
no genoma do organismo so imprevisveis. Ou seja, a tecnologia ainda no permite o
controle do local da insero, nem da integridade da sequncia inserida. Isto pode resultar em
efeitos imprevisveis no metabolismo, fisiologia e bioqumica do organismo receptor. O
relatrio do Governo da Noruega, divulgado em 1999, denominado Too early maybe too late:
ecological risks associated with the use of naked DNA as a biological tool for research,
production and therapy, concluiu que qualquer OGM deve sofrer avaliao de impacto
ambiental antes de ser liberado. Este relatrio refuta a ideia de que a transgenia em plantas
similar ao melhoramento gentico convencional (Traavik, 1999).
O desenvolvimento de OGMs pode ser denominado de tecnologia? Tradicionalmente
uma tecnologia est associada com (i) previsibilidade, (ii) controle e (iii) reproducibilidade.
Contudo, o atual estgio das tecnologias utilizadas na obteno de OGMs pode ser
caracterizado como (i) sem previsibilidade; (ii) sem controle dos stios de insero; (iii) sem
controle do destino do transgene ou partes dele; (iv) sem controle nas mudanas de
expresso gnica; (v) sem controle dos transgenes no ecossistema e (vi) de difcil
reproducibilidade.
Ou seja, ainda no existe tecnologia disponvel para a insero da construo
quimrica num loco especfico do genoma da espcie recipiente. Um exemplo disto o fato de
que duas sequncias de DNA (72 e 250 pb) derivadas da transformao original foram
inesperadamente encontradas na Soja RR (The Scientist 14[15]:20, Jul. 24, 2000). Elas esto
separadas do transgene que condiciona a resistncia ao herbicida Roundup. Posteriormente,
outros artigos demonstraram que em todos os eventos de transformao gentica o transgene
inserido no est como desenhado e construdo. Isto demonstra que a modificao gentica
inerentemente imprevisvel.
Tampouco construdo os resultados das transformaes so previsveis, sendo que
algumas do o resultado esperado, outras no. Tambm no possvel controlar a expresso
gnica do gene inserido. Um exemplo disso que diferentes variedades de milho com o
mesmo gene de Bt produzem diferentes quantidades de toxina nos diferentes rgos
estudados e comparados. Outro aspecto importante que no se consegue controlar o
transgene inserido, uma vez que ele pode se disseminar para outras espcies e causar
poluio gentica, e como tal enormes e irreparveis danos. Exemplo disto foi a contaminao
de vrias plantaes de milho nos Estados Unidos provocada pelo cultivo de uma variedade
transgnica, StarLink, que causou enormes prejuzos aos agricultores, aos consumidores e
empresa.

6-APLICAES
PLANTAS
Como aproximadamente 90% das calorias provem de plantas, no reino vegetal que
existe um grande potencial de oportunidades para as diversas biotecnologias, incluindo-se a
transgenia, especialmente na produo de alimentos e energia. Contudo, na rea da sade
so esperados investimentos financeiros elevados e o desenvolvimento de muitos produtos,
muitos deles, de aplicao praticamente pessoal.

51
 O aumento da resistncia de plantas a pragas e molstias pela ao de produtos
naturais com auxlio da Tecnologia do DNA Recombinante a oportunidade importante. No
entanto, a maioria dos genes inseridos em plantas inclui aqueles que conferem resistncia a
herbicidas e a poucos insetos, ou ambos. Outros genes, como por exemplo controlando o teor
de protenas e leos em plantas esto sendo testados. A partir de 1994, foram identificados,
clonados e sequenciados vrios genes de resistncia a doenas. O conhecimento pleno
destes genes possibilitar um melhor entendimento de como ocorrem as reaes de
resistncia ou susceptibilidade de plantas fungos, bactrias e vrus, bem como desenhar
estratgias apropriadas de melhoramento e seleo de plantas resistentes.
Oportunidades agrcolas projetas por parte da comunidade cientitifca incluem ainda
genes que conferem tolerncia a estresses climticos (altas temperaturas e seca) e de solo
(baixos teores de nutrientes e altos teores de elementos txicos). Embora, no se saiba ao
certo o mecanismo de tolerncia, novas abordagens para a manipulao gentica visando a
tolerncia aos estresses esto sendo desenvolvidas h muito tem, mas ainda sem xito.
Uma segunda rea de grande atividade da tecnologia do DNA Recomninante
relacionada com o aumento do valor de certas espcies agrcolas pode ser alcanado atravs
de modificaes genticas que alteram a quantidade ou composio de compostos de
reservas no proticos, os quais podem substituir inclusive certos produtos derivados do
petrleo. Estes novos produtos ainda so promessas.
As plantas tambm podero se tornar fbricas de produtos ou substncias, j que, na
maioria dos pases, a produo de uma substncia em cultura de clulas ou em determinados
microrganimos tem inmeras restries. Exemplo disto so os testes em andamento para a
produo de produtos como o hormnio do crescimento humano em milho, vacinas,
anticoagulantes entre outros.
Vacinas comestveis produzidas por plantas, advogam alguns cientistas, um sistema
bastante apelativo, pois apresenta inmeras vantagens sobre as formas convencionais:
armazenamento em condies menos sofisticadas, simplicidade de aplicao, custos
reduzidos, fcil produo e diminuio dos riscos de transmisso de outras doenas com
equipamentos e materiais contaminados. Contudo, uma questo ainda pendente a
segurana e a eficincia destas vacinas produzidas por plantas. Outra preocupao relaciona-
se com a quantidade da fruta ou alimento a ser ingerido, bem como o controle da produo
dos mesmos. Embora o assunto complexo e polmico, vrios laboratrios em muitos pases
esto desenvolvendo este tipo de vacinas utilizando estratgias diferentes. Embora muitas
promessas foram feitas desde 1995, ainda (estamos em 2016) no existe nenhuma vacina
contida em tecidos de plantas (ex: folhas) ou em frutos (ex: banana).
Outra aplicao relacionada com a manipulao dos metablitos secundrios a
produo de polmeros biodegradveis. Tais polmeros so na realidade uma mistura de
amido e polietileno. Quando o amido o maior componente, temos os plsticos complexos, j
em comercializao como Novon e Fertec. (Novon - 80% amido mais etileno-acetato de vinil
ou co-polmero etileno-cido acrlico; Fertec - 50% amido e polmeros). Os filmes so
resultantes de misturas com baixos teores de amido.
Do ponto de vista alimentar, novas promessas continuam sendo anunciadas. So as
chamadas segunda e terceira ondas, cujas aplicaes da engenharia gentica esto
relacionadas com o aumento da qualidade dos produtos alimentcios. Como exemplo
menciona-se que esto sendo desenvolvidos OGMs com alto teor de aminocidos, protenas
ou alta qualidade do leo e plantas que produzem altas quantidades de vitaminas, como
experimentalmente j obtido em cenoura e arroz. Tais alimentos so chamados de
nutracuticos.
Um programa resultando do esforo mundial de proponentes da transgenia com apoio
financeiro de empresrios (ex: Fundao Bill Gates) denomina-se biofortificao. O programa
visa o desenvolvimento de variedades com altos teores de um ou mais nutrientes. Esta viso
reducionista uma estratgia que visa resolver problemas nutricionais em vrias partes do

52
mundo. Esta deficincia nutricional resultante de vrios fatores: falta de acesso a
alimentao, desenvolvimento de novas variedades com menores teores de nutrientes ou
vitaminas, estreitamento da base alimentar No Brasil, este programa gerenciado pela
EMBRAPA e recebe o nome de biofortificao. Neste contexto, muitas propostas sugerem o
uso da transgenia ou para inserir genes ou para modificar rotas metabolcias visando a maior
produo de um ou outro nutriente.

ANIMAIS
A primeira leva de animais transgnicos foi destinada a produzir substncias para uso
na sade humana ou para fornecer rgos para transplante, tambm para a espcie humana.
Dentre as protenas humanas produzidas em animais transgnicos destaca-se o fator de
coagulao, necessrio no tratamento da hemofilia, a eritropoietina, que utilizada para
estimular a medula ssea quando deprimida por outras drogas e a alfa-1 antitripsina, utilizada
no tratamento de enfisema pulmonar.
A transgnia em animais engloba aqueles que tiveram transgenes adicionados
(transgnicos por adio), genes modificados (knockin) ou genes retirados (knockout). A
primeira linhagem de camundongos transgnicos em 1982, foi produzida por Palmiter, da
Universidade da Pensilvnia e colaboradores. Cinco anos depois, foi desenvolvido o primeiro
rato para produzir um medicamento de uso humano tPA (Tissue Plasminogen Activator) no
tratamento de sangue.
Os possveis benefcios mais diretos e biotecnolgicos do uso de animais transgnicos
podem ser divididos em pelo menos trs grupos: agricultura, medicina e indstria. Segundo
Pereira (2008) na agricultura, "a transgnia pode permitir a criao de animais de grande porte
com caractersticas comercialmente interessantes, cuja produo por tcnicas clssicas de
cruzamentos e seleo so extremamente demoradas. Assim, existem vacas transgnicas
que produzem mais leite, ou leite com menos lactose ou colesterol, porcos e gado
transgnicos com mais carne e ovelhas transgnicas que produzem mais l. Alm disso, h
um grande esforo no sentido de se produzir animais resistentes a doenas, como a gripe
suna ou a febre aftosa em bovinos. Porm, isso depender da identificao de genes
responsveis pela resistncia a essas doenas".
A mesma autora menciona ainda que a transgenia em animais de grande porte vem
sendo utilizada para a produo de frmacos. Produtos como insulina, hormnio de
crescimento e fator de coagulao podem ser obtidos do leite de vacas, cabras ou ovelhas
transgnicas.
Alm disso, os animais transformados com genes humanos destinados produo de
rgos para xenotransplantes, ou seja, o transplante de rgos animais para o ser humano,
como o caso de sunos, esto sendo alvo de inmeras discusses, no s do ponto de vista
tico, mas tambm biolgico. Os porcos transgnicos imuno-compatveis com o ser humano
foram produzidos pela tcnica de nocaute (knockout), e os animais produzidos no expressam
uma protena imunognica em seres humanos. Em relao a sade humana, os riscos dos
xenotransplantes esto basicamente centralizados na disseminao de vrus ou outras
entidades (micoplasmas e partculas infecciosas) que tambm podem causar doenas ou
injrias sade humana. Do ponto de vista tico e religioso, pertinente uma discusso mais
ampla com os diversos segmentos da sociedade, uma vez que este assunto extremamente
polmico. No entanto, importante ressaltar que, se por um lado o xenotransplante resolveria
a questo da disponibilidade de rgos para transplantes, ele cria uma outra questo sria de
biossegurana, criando o risco de transmisso de patgenos sunos para o ser humano
(Pereira, 2008).
A aplicao da transgenia na indstria transforma os animais em bio-reatores atravs
da transgenia. Um exemplo a cabra transgnica que produz em seu leite uma protena da
teia de aranha. A purificao em grande escala desses polmeros a partir do leite permite a

53
criao de um material leve e flexvel com enorme resistncia, que poder ser usado em
aplicaes militares (coletes e uniformes a prova de bala) e mdicas (fio de sutura), entre
outras (Pereira, 2008).
Peixes transgnicos j esto prestes a chegar mesa do consumidor americano. A
liberao de salmo transgnico j foi aprovado pela FDA, a agncia que regula a entrada de
alimentos e medicamentos no mercado americano. No entando, a mesma agncia suspendeu
a entrada e criao do freferiudo Salmo em territrio americano, o que causou estranheza.
Quando isto acontecer de fato, ser a primeira vez que um animal transgnico estar
disponvel para consumo humano. A diferena entre os salmes naturais e os transgnicos
que nestes foi inserido um gene que acelera seu crescimento, isolado de outro peixe, a
lampria. Os genes introduzidos estimulam a produo contnua de hormnios de
crescimento.
Mais recentemente, galinhas transgnicas foram desenvolvidas para render mais carne
como o caso da Terminator Chicken da empresa AviGenics. A mesma empresa
engenheirou galinhas com genes humanos para produzir medicamentos. Em ambas, a
empresa inseriu tambm uma seqncia de DNA que considera segredo e que possibilita ser
detectada, visando a rastreabilidade para fins comerciais, ou seja, impedir que algum use as
galinhas sem pagar pela tecnologia. Animais de outras espcies tambm j foram modificados
via transgenia como vacas, ovelhas e ratos.
Um dos mtodos mais utilizados na produo de animais transgnicos a microinjeo
pronuclear, que consiste na injeo de uma soluo de DNA, contendo o transgene de
interesse, no proncleo de um vulo recm-fertilizado. Esta metodologia faz com que vrias
cpias do transgene injetado se integrem em tandem em um stio aleatrio no genoma e
sejam transmitidas de forma mendeliana (Pereira, 2008).
Segundo esta autora, apesar de ser uma importante ferramenta de pesquisa, esse
mtodo apresenta algumas limitaes. Por causa do stio aleatrio de integrao do
transgene, este poder no estar sob o controle de todos os elementos em cis (no mesmo
cromossomo) que controlam a expresso do gene endgeno. Assim, a expresso temporal e
espacial do transgene no seguir o padro de expresso do gene endgeno. Alm disso, no
que diz respeito a modelos de doenas genticas, a introduo de um terceiro alelo, o
transgene mutante, cria uma situao artificial no que diz respeito proporo entre os
transcritos normais e mutantes. Enquanto uma pessoa com uma doena gentica dominante
possui um alelo normal e um mutado, o camundongo transgnico possuir os dois alelos
endgenos normais e diversas cpias do alelo mutante (transgene). Esta proporo pode ser
crtica em doenas suscetveis a efeitos de dosagem gnica.
No entanto, a maior aplicao da tecnologia do DNA Recombinante em animais foi o
desenvolvimento de milhares de ratos transgencicos portadores de transgenes que causam
alguma deficincia, anomalia ou mesmo doena,. Tais ratos, so utilziados como cobaias para
aprofucndar os estudos sobre tais deficincias edoenas bem como a cura das mesmas.
Enquanto os cientistas buscam formas de justificar e convencer a opinio pblica sobre
a utilizao de animais em experimentao animal, movimentos sociais cada vez mais
intensos e numerosos so completamente contra a utilizao de animais em experimentos
cientficos. A questo, segundo Ndia Farage, professora do Departamento de Antropologia
da Unicamp, no discutir formas de usar estes animais e sim no us-los.

MICRORGANISMOS E PRODUTOS DERIVADOS

Com relao aos microorganismos (especialmente bactrias e fungos) existe grande
potencial para obteno de produtos industrializados, como por exemplo para a medicina
humana, pois podem ser produzidos aminocidos e vitaminas nestes microrganismos.
Bactrias geneticamente transformadas podem ser usadas para produzir muitas proteinas
importantes, hormnios de crescimento humano (hGH), interferons e vacinas (como contra a

54
Hepatite B) para imunizao contra viroses. O uso dos microorganismos tambm se estende
para a fermentao Lctea e alcolica e a degradao de poluentes. Nestes casos, os
microrganismos so transgnicos, produzem produtos que posteriormente so purificados e
utilziados, diretamente por humanos ou como reagentes de processos fermentativos ou de
transformaao (ex: queijo). Desta forma, os OGMs no so consumidos diretamente pelos
humanos, mas sim seus produtos derivados.
O primeiro produto comercial decorrente do uso da tecnologia do DNA Recombinante
foi a insulina, comercializada a partir de 1982 nos Estados Unidos, justamente a partir de uma
microorganismo transgnico. O gene humano responsvel pela insulina foi isolado na espcie
humana e introduzido na bactria Escherichia coli, que passou a produzir e excretar este
produto. Aps a purificao, a insulina produzida em laboratrio passou a substituir a insulina
extrada de pncreas de animais, uma vez que proporciona menos riscos aos diabticos, que
dependem deste medicamento. No Brasil, a insulina tambm j vem sendo produzida com
microrganismos transgnicos. Cabe destacar que o produto no transgnico, uma vez que
a expresso do prprio gene humano, mas somente o organismo que o produz.
Outro aspecto importante, que estes produtos destinados sade humana oriundos
de microrganismos transgnicos passam pelos mesmos testes que passam os medicamentos
convencionais. Sendo assim, a expectativa de que estes produtos apresentam mais riscos
relacionados a contaminaes do que propriamente decorrentes do uso per se da tecnologia
do DNA Recombinante.

TERAPIA GENTICA
A terapia gentica ou gnica uma forma de tentativa de tratamento para doenas,
geralmente hereditrias, que consiste na insero de um transgene funcional dentro da clula
humana a fim de conferir uma nova funo ou melhorar os efeitos de um gene anormal ou que
no esteja funcionando normalmente. Na espcie humana, a terapia gnica se constitui
tambm numa das reas de pesquisa.
Trata-se de uma estratgia que visa disseminar no corpo humano ou num rgo
especfico, um transgene que contm um gene normal para que o mesmo possa expressar
seu produto adequadamente, naqueles casos onde um ser humano portador de defeito
gentico. Dependendo do alvo, as tcnicas de terapia gentica so de dois tipos: a
germinativa, na qual ocorre a introduo do material gentico nos espermatozides ou vulos
(clulas germinativas), e a somtica, que compreende as demais clulas nas quais
introduzido o material gentico.
So dois os principais fatores limitantes: O primeiro o vetor que deve levar os
transgenes at o tecido ou rgo onde a terapia deve ocorrer. O segundo fator, expressar o
transgene somente no tecido ou rgo alvo e no nas demais clulas do organismo.
Os elementos que auxiliam o transporte e expresso destes transgenes so
previamente modificados in vitro de forma a garantir sua inocuidade como elementos
transportadores de sequncias gnicas. Mesmo os retrovrus, modificados in vitro para carrear
genes codificadores de protenas de amplo interesse mdico, como a expresso de adenosina
deaminase - ADA, cuja ausncia impede a maturao dos linfcitos e, conseqentemente,
leva ausncia de qualquer resposta imunolgica, espera-se no causarem doenas nos
pacientes que esto recebendo este tipo de vrus transgnico como carreador de um gene de
interesse.
Na dcada de 1990, o panorama das fases dos protocolos clnicos aprovados em curso
foi bastante desfavorvel. Nos Estados Unidos, neste perodo, menos de 1% dos protocolos
clnicos (apenas quatro at o momento) avanaram pelas fases I e II que testam a segurana
e a eficcia do mtodo, respectivamente (Nardi, 2002).
Vrias experincias resultaram em mortes de pacientes ou de aparecimento de
doenas como a leucemia, aps o tratamento com terapia gentica. A terapia gentica, que

55
causou duas mortes entre 1998 e 2006, acusada de causar uma terceira morte em 2007
(Science, 2007). A possvel causar seria o vetor popular usado neste experimento, o vrus
adeno-associado (AAV). No entanto, permaneceram dvidas quo bem o paciente foi
informado e como ela foi selecionada para a terapia gentica. O estudo envolveu a injeo
nas articulaes de AAV que carregava um transgene que codificava para uma protena que
inibe uma citocina pr-inflamatria. A paciente recebeu uma injeo inicial em seu joelho
direito em 26 de Fevereiro de 2007 e uma segunda em 02 de julho do mesmo ano. Aps a
segunda injeo, ela desenvolveu sintomas semelhantes aos da gripe. Dez dias depois, ela foi
internada no hospital e faleceu l depois de falncia mltipla dos rgos, em 24 de Julho.
O tratamento de terapia gentica feito em 2005 para severe combined immune
deficiency (SCID) ligada ao cromossomo X, no Great Ormond Street Hospital / Instituto da
Criana Sade em Londres, causou em uma criana uma forma de cncer (Nature, 2002). Os
cientistas que conduziram a terapia lamentaram informar que uma das 10 crianas tratadas
desenvolveu uma leucemia de clulas T aps a utilizao da terapia gnica.

7-EVOLUO DO DESENVOLVIMENTO E CULTIVO DAS PLANTAS

TRANSGNICAS
Nos Estados Unidos os testes de campo iniciaram em 1987 e o primeiro cultivo
comercial s ocorreu em 1994 com a liberao do tomate FLAVR SAVR, que apresenta a
caracterstica de retardar a maturao. A insero do gene da poligalacturonase (do prprio
tomate) no sentido anti-senso retarda a o acmulo desta enzima em quantidades suficientes
para a degradao das paredes celulares, causando um atraso na maturao.
No h uma estatstica oficial da rea cultivada com transgnicos no mundo. Assim,
utilizam-se dados de uma organizao mantida pelas empresas interessadas. A rea plantada
com plantas transgnicas saltou de pouco mais de 1,7 milhes de hectares em 1996 para 43
milhes de hectares em 2000 (Tabela 2). Embora o nmero de pases que plantaram
transgnicos no ano de 2000 era 12, os trs pases responsveis por 98% da produo
mundial de gros transgnicos so os Estados Unidos, a Argentina e o Canad (Tabela 2). A
rea total com transgnicos em 2000 foi de 43 milhes de ha. Em 2013 a rea cultivada com
plantas transgnicas alcanou 175 milhes de ha.
Estima-se que a safra de 2013 as variedades transgnicas alcanaram 79% da rea de
soja cultivada no mundo, para o algodo 70%; para o milho 32%, e finalmente para a canola,
24%. Embora cultivado em 27 paises, 10 deles (Estados Unidos, Brasil, Argentina, India,
Canad, China, Paraguay, frica do Sul, Pakisto e Uruguai) produzem praticamente 98% de
toda a aproduo transgncia no mundo. Atuamente pouco mais de 10% da rea cultivada no
planeta so com variedasdes transgnicas. Mas, 171 pases do mundo (85%) no cultivam
transgnicos. Portanto, o cultivo destas variedades ainda um fenmeno restrito. Extra
oficialmente sabe-se que na China existem dezenas de cultivares transgnicas em cultivo,
carregando diferentes caractersticas. Contudo, as cifras oficiais so desconhecidas.
Dentre as caractersticas introduzidas nestas variedades mais cultivadas destacam-se
resistncia a herbicidas, plantas inseticidas (produtoras de toxinas danosas a insetos) ou
ambas. Projetos de alterao na composio nutricional esto em andamento. Um exemplo
disto o arroz dourado, assim chamado porque foi introduzido numa variedade de arroz um
gene que dever produzir vitamina A. A produo em grandes quantidades da pr-vitamina A
no arroz ainda no est garantida, razo pela qual, uma pessoa deveria ingerir quantidades
elevadas de arroz (estimativas riam de 1,9 a 4,3 kg/dia) para satisfazer as necessidades
dirias deste componente alimentar.
Este quadro no se alterou muito nos ltimos anos, pois os dois principais genes so
os de resistncia a herbicidas ou de produo de toxinas mortais a insetos. Estas cifras
sugerem que a tecnologia no se alastrou como se esperava, nem tampouco alcanou a
maioria dos paises ou das espcies.

56
Tabela 3.2. Principais pases produtores de plantas transgnicas.
rea (milhes de ha)/Ano
Pas 1966 2000 2005 2011 2014
Estados Unidos 1,7 30,0 (70%) 49,8 (55%) 69,0 (43%) 70,1
Brasil 9,4 (10%) 30,3 (19%) 40,3
Argentina 9,0 (21%) 17,1 (19%) 23,7 (18%) 24,4
ndia 1,3 (1,4%) 10,6 (6,7%) 11,0
Canad 3,0 (7%) 5,8 (6,4%) 10,4 (6,5 %) 10,8
China 3,3 (3,7%) 3,9 (2,4%) 4,2
Paraguai 1,8 (2%) 2,8 (1,8%) 3,6
Pakisto 2,6 (1,6%) 2,8
frica do Sul 0,1 0,5 2,3 (1,4%) 2,9
Uruguai 0,3 1,3 (0,8%) 1,5
Bolivia 0,9 1,0
Filipinas 0,1 0,6 0,8
Austrlia 0,1 0,3 0,7 0,6
Burkina Faso 0,3 0,5
Myanmar 0,6 0,3
Espanha 0,1 0,1 0,1
Mxico 0,1 0,2 0,1
Colombia 0,1
Sudo 0,1
Outros 8 paises <0,1
Total 1,7 43,0 90 160 181.5

Fonte: ISAAA, 2015 (https://isaaa.org/resources/publications/pocketk/16/default.asp)

Na rea total cultivada esto includas cultuvares de soja, algodo, milho e canola, cuja
percentagem de transgnicos do total para dada uma das espcies de 82, 68, 30 e 25,
respectivamente. As principais razes pela baixa proporo d evraiedades transgnicas de
milho e canola em frelaao ao total devido a presso dos consumidores e o alto custo das
mesmas.
No ano de 2015 houve uma diminuioo na rea cultivada de variedades transgnicas
comparativamente ao ano de 2014.
Na Europa existe uma grande controvrsia a respeito de plantas transgnicas que
tambm apresentam genes de resistncia a antibiticos esto sendo proibidas para cultivo. No
inicio, vrios eventos foram aprovados. Posteriroemnete devido a presso dos consumidores,
durante vrios anos, nenhuma nova variedade transgnica foi aprovada para plantio ou
consumo na Europa.
Alguns eventos que foram autorizados foram depois proibidos como os milhos Bt176 e
GA21 x MON810 e as canolas MS1, RF1, MS1xRF1; MS1, RF2, MS1xRF2 e TOPAS19/2. H
pases em que proibido o cultivo (ex: Hungria, Noruega, Itlia, Irlanda, outros) ou variedades
so proibidas (ex: MOn 810 na Frana).

E o Brasil ?

57
 No Brasil a Soja Roundup Ready (Soja RR), da Monsanto, foi aprovada pela CTNBio
(em setembro de 1998), registrada no o Ministrio da Agricultura e Abastecimento (junho de
1999), mas como o cultivo e consumo foram suspensos por deciso judicial at que sejam
feitos os estudos de impacto ambiental e relatrio de impactos no meio ambiente (EIARIMA) e
cumpridas outras exigncias como elaborao de normas de fiscalizao e rotulagem, ela s
veio a ser cultivada legalmente a partir de 2003. Para tal, o Governo Federal, desreipeitando
as leis ambientais, por meio de Medidas Provisrias, posteriormente aprovadas pelo
Congresso Nacional aprovou a colheita da safra ilegal de 2002/2003 e o plantio e colheita da
safra 2003/2004. Por fim, a nova Lei de Biossegurana (Lei n 11.105, de 24 de maro de
2005) incluiu artigos que aprovaram o cultivo e o consumo da Soja RR. Mesmo assim, o
processo judicial no est concludo (Ferment et al., 2010). possvel que na safra 2009/2010
o cultivo com soja RR alcanou os 50% da rea total de soja cultivada no pas. Contudo, no
h cifras oficiais a este respeito.
Os testes com plantas transgnicas no Brasil anteriormente ao cultivo comercial, em
geral, foram destinados para avaliar a performance agronmica ou para melhoramento
gentico. Pouqussimos foram destinados a avaliao de risco. O agravante que foram
aprovados testes em grandes reas experimentais, as vezes em propriedades de agricultores
inexperientes no trato com plantas transgnicas, eu ficaram margem de qualquer
fiscalizao. Variedades transgnicas de poucas espcies tm sido utilizadas na
experimentao no Brasil. Elas se restringem s lavouras de algodo, cana-de-acar, fumo,
batata, arroz, eucalipto, mamo, milho e soja. As empresas notadamente esto apostando em
trs espcies: milho, soja e algodo, mas de fato concentram-se em duas: milho e soja.
At 2015 foram aprovadas variedades transgnicas listadas na Tabela 3.3.
Tabela 3.3. Eventos de transformao gentica em plantas aprovadas pela CTNBio.

Espcie Evento de Transgene(s) Ano Resitncia a

transformao
gentica
Soja GTS 40-3-2 cp4 epsps 2005 Glifosato
Algodo 531 Cry1Ac 2005 Alguns insetos
Milho T25 ou LL25 Pat 2008 Glufosinato de Amnio
Milho MON 810 Cry1Ab 2008 Alguns insetos
Milho BT 11 Cry1Ab, pat 2008 Alguns insetos/ Glufosinato
de amnio
Algodo LL25 Pat 2008 Glufosinato de Amnio
Milho NK 603 Mepsps 2008 Glifosato
Milho GA 21 mepsps 2008 Glifosato
Algodo MON 1445 cp4 epsps 2008 Glifosato
Milho TC 1507 Cry1F 2008 Alguns insetos
Algodo 281-24-236/3006- Cry1F, Cry1Ac 2009 Alguns insetos
210-23
Algodo MON 15985 Cry1Ac, Cry2Ab 2009 Alguns insetos
Milho BT11 x GA21 Cry1Ab, mepsps 2009 Alguns insetos/ Glifosato
Milho MON 810 x NK603 Cry1Ab, mepsps 2009 Alguns insetos/ Glifosato
Milho MIR 162 Vip3A 2009 Alguns insetos
Algodo MON 15985 cry1Ac, cry2Ab2, nptII, 2009 Alguns insetos
aad e uidA
Algodo MON 531 x MON Cry1Ac, cp4 epsps 2009 Alguns insetos/ Glifosato
1445
Milho MON 89034 Cry1A.105, Cry2Ab 2009 Alguns insetos
Milho TC 1507 x NK603 Cry1F, mepsps 2009 Alguns insetos/Glifosato
SojaCV127 BPS-CV127-9 Csr1-2 2009 Imidazolinonas
Soja A5547-127 Pat 2010 Glufosinato de amnio
Soja A2704-12 Pat 2010 Glufosinato de amnio
Soja Soja MON 87701 x Cry1Ac e cp4 epsps 2010 Alguns insetos/ Glifosato

58
 MON 89788

Milho TC1507 x MON810 Cry1F, Cry1Ab 2010 Alguns insetos

Feijo Embrapa 5.1 Rep e AHAS 2011 BGMV e herbicidas
imidazolinonas
Milho MON 89034 x MON Cry1A.105, Cry2Ab 2011 Alguns insetos
88017
Milho TC1507 x MON810 Cry1F, PAT e Cry1Ab 2011 Alguns insetos e tolerante
ao herbicida glufosinato de
amnio
Milho TC1507 x MON810 Cry1F, PAT, Cry1Ab e 2012 Alguns insetos e tolerante
x NK603 cp4 epsps aos herbicidas glufosinato
de amnio e glifosato
Algodo Eventos GHB 614 x 2mepsps, bar, cry1Ab 2012 tolerante a herbicidas e
T304-40 x GHB119 e cry2Ae resistente a insetos
Algodo GHB614 x 2mepsps e bar 2012 tolerncia aos herbicidas
LLCotton25 glifosato e glufosinato de
amnio
Algodo MON 15985 x MON cry1Ac e cry2Ab2 2012 Alguns insetos e tolerante
88913 ao glifosato
Milho TC1507 DAS- Cry1F/pat e 2013 Alguns insetos e tolerante
59122-7 Cry34Ab1/Cry35Ab1/p aos herbicidas glufosinato
a de amnio
Milho Bt11xMIR162xMIR6 Cry1Ab, PAT, 2014 Alguns insetos e tolerante
04xGA21 VIP3Aa20, mcry3A e aos herbicidas glufosinato
mEPSPS de amnio e glifosato
Milho MIR604 mcry3A 2014 Alguns insetos e tolerante
aos herbicidas glufosinato
de amnio e glifosato
Milho DAS-40278-9 aad-1v3 2015 tolerante aos herbicidas
2,4-D
Milho NK603 x T25 CP4-EPSPS e PAT 2015 tolerante aos herbicidas
glufosinato de amnio e
glifosato
Milho TC1507 x MON810 cry1F, cry1Ab, PAT, 2015 Alguns insetos e tolerante
x MIR162 x NK603 VIP3Aa20 e CP4- aos herbicidas glufosinato
EPSPS de amnio e glifosato
Milho TC1507xMIR162xN cry1F, PAT, VIP3Aa20 2015 Alguns insetos e tolerante
K603 e CP4- EPSPS aos herbicidas glufosinato
de amnio e glifosato
Milho TC1507xMIR162 cry1F, PAT e 2015 Alguns insetos e tolerante
VIP3Aa20 aos herbicidas glufosinato
de amnio
Milho MIR162xNK603 VIP3Aa20 e CP4- 2015 Alguns insetos e tolerante
EPSPS aos herbicidas glifosato
Milho MON810xMIR162 Cry1Ab eVIP3Aa20 2015 Alguns insetos
Milho TC1507 x MON810 Cry1F, pat, VIP3Aa20 2015 Alguns insetos e tolerante
x MIR162 e cry1Ab aos herbicidas glufosinato
de amnio
Milho DAS-40278-9xNK60 AAD-1 e epsps 2015 tolerante aos herbicidas
2,4-D e glifosato
Milho MilhoBt11xMIR162x eCry3.1Ab, cry1Ab, 2015 Alguns insetos e tolerante
MIR604xTC1 Vip3Aa20, cry3A, aos herbicidas glufosinato
507x5307xGA21 cry1F, pat e mepsps de amnio e glifosato
Milho SPT 32138 zm-aa1, ms45, 2015 Restaurao de fertilidade
dsred2(ALT1) para producao de sementes
Eucalipto H421 cell1 2015 aumento volumetrico de
madeira
Soja DAS-68416-4 aad12 e pat 2015 tolerante aos herbicidas

59
 glufosinato de amnio e
2,4-D
Soja FG72 hppd e 2mepsps 2015 tolerante aos herbicidas
HPPD e glifosato
Soja DAS44406-6 aad-12, v1, pat e 2015 tolerante aos herbicidas
2mepsps glufosinato de amnio, 2,4-
D e glifosato
Soja FG72 x A55547-127 hppd, 2mepsps e pat 2015 tolerante aos herbicidas,
HPPD, 2,4-D e glifosato
Milho MON89034xTC1507 Cry1A.105, Cry2Ab2, 2016 Alguns insetos e tolerante
xNK603xDAS Cry1F, PAT, CP4- aos herbicidas glufosinato
40278-9 EPSPS e aad-1 de amnio, 2,4-D e
glifosato
Fonte: CTNBio (http://ctnbio.mcti.gov.br/liberacao-comercial/-
/document_library_display/SqhWdohU4BvU/view/1684467?_110_INSTANCE_SqhWdohU4BvU_redirect
=http%3A%2F%2Fctnbio.mcti.gov.br%2Fliberacao-comercial%2F-
%2Fdocument_library_display%2FSqhWdohU4BvU%2Fview%2F614405%3F_110_INSTANCE_SqhWd
ohU4BvU_redirect%3Dhttp%253A%252F%252Fctnbio.mcti.gov.br%252Fliberacao-
comercial%253Fp_p_id%253D110_INSTANCE_SqhWdohU4BvU%2526p_p_lifecycle%253D0%2526p_
p_state%253Dnormal%2526p_p_mode%253Dview%2526p_p_col_id%253Dcolumn-
2%2526p_p_col_count%253D3#/liberacao-comercial/consultar-processo)

Atualmente, a nica restrio legal que existe de transgnicos que contenham

tecnologias genticas de restrio de uso, tambm denominadas de GURTs. Alguns tipos de
GURTs so conhecidos como Terminator pelo fato que as plantas produzem os gros com o
embrio defeituoso. Isto impede a sua germinao e, assim, o agricultor obrigado a comprar
sementes, que so patenteadas, todos os anos.
Das decises da CTNBio cabe recurso ao Conselho Nacional de Biosegurana
(CNBS), rgo formado pro 11 Ministros. At hoje, houve apenas recursos contra a deciso
de aprovao para fiuns comerciais de trs eventos transgegnicos. Mas o CNBS decidiu no
dar provimento aos recursos do IBAMA e da ANVISA contra a deciso da CTNBio de liberar
os seguintes milhos transgnicos:
Evento T25 ou milho LL 25, da Bayer, contendo uma verso sinttica do gene pat
isolado de Streptomyces viridochromogenes, raa T 494, que codifica para a sntese da
enzima fosfinotricina N acetiltransferase (PAT), enzima esta que catalisa a
converso de L-fosfinotricina, inativando o ingrediente ativo Glufosinato de Amnio e,
deste modo, conferindo planta a resistncia ao referido herbicida.
Evento MON 810 ou milho Yeldgard da Monsanto, que contm o gene cry1Ab,
proveniente de Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, que codifica a protena Cry1Ab
com efeito txico sobre os insetos da ordem Lepidoptera lagarta-do-cartucho, lagarta-
da-espiga e lagarta-do-colmo;
Evento Bt 11 da Syngenta, contendo os genes (i) cryIA(b) que expressa uma forma
truncada da toxina; (ii) o gene pat que codifica a enzima fosfinotricina-N-acetil
transferase que confere resistncia ao herbicida glufosinato de amnia (L-
Fosfinotricina, PPT - Phosphinothricin), obtido da bactria de solo Streptomyces
viridochromogenes.
Dentre as razes aprresentadas, cabe destacar:
ausncia de normas efetivas de monitoramento e de coexistncia;
no realizao de estudos suficientes para assegurar que no haver danos aos
meio ambiente, notadamente em ecossistemas brasileiros;
apresentao de estudos inconclusivos ou sem sustentao cientfica (baixa
qualidade dos dados aportados);
afirmativas sem comprovao cientifica;

60
 no apresentaes de dados ou informaes solicitadas;
no incluso de dados da literatura cientifica obtidos por pesquisadores
independentes;
insuficincia dos dados apresentados pelos proponentes para garantir a segurana
alimentar;
Insuficincia de dados sobre a caracterizao do produto de expresso gnica
toxinas de Bt;
Insuficincia de dados que garantam a ausncia de efeitos epistticos e
pleiotrpicos resultante do evento de insero do transgene;
Insuficincia de estudos toxicolgicos para comprovar a segurana dos milhos
transgnicos acima referidos para o consumo humano.
Alm de plantas genetocamente modificadas a CTNBio aprovou para uso comercial
outros organismos geneticamente modificados como vacinas, microrganismos e outros. As
vacinas recombinantes aprovadas so: Vaxxitek MD/IBD contra a doena de Marek e
Gumboro (Merial Sade Animal Ltda), ProteqFlu e ProteqFlu TE que possui como agentes
imunognicos os poxvrus recombinantes da bouba de canrio, carregando o gene da protena
HA do vrus da influenza equina, cepas vCP1533 e vCP2241(Merial Sade Animal Ltda),
INNOVAX ND para aves contra a Doena de Marek e a Newcastle (Intervet do Brasil
Veterinria Ltda), contra a bouba aviria, laringotraquete aviria e encefalomielite aviria
VECTORMUNE FP-LT+AE (Ceva Sade Animal Ltda), VECTORMUNE FP-LT, contra a bouba
aviria e laringotraquete aviria (Ceva Sade Animal Ltda), VECTORMUNE HVT-IBD contra a
Doena de Marek e Doena de Gumboro (Ceva Sade Animal Ltda), VECTORMUNE HVT-
NDV contra a Doena de Marek e Doena de Newcastle (Ceva Sade Animal Ltda),
VECTORMUNE FP-MG contra a Bouba aviria e Mycoplasma gallisepticum (Ceva Sade
Animal Ltda), VECTORMUNE FP-MG+AE contra a Bouba aviria, Mycoplasma gallisepticum e
Encefalomielite Aviria (Ceva Sade Animal Ltda), INNOVAX ILT contra a doena de Marek
e a Laringotraqute infecciosa das aves (Intervet do Brasil Veterinria Ltda), Poulvac ST contra
Salmonella typhimurium (Fort Dodge Sade Animal), Poulvac E. coli contra Escherichia coli
(Fort Dodge Sade Animal), Suvaxyn PCV2 One Dose contra Circovirose Suna (Fort Dodge
Sade Animal), Ingelvac Circoflex contra Circovirose Suna (Boehringer Ingelheim do Brasil
Qumica e Farmacutica Ltda),
Os microrganismos geneticamente modificados aprovados so: linhagem RN1016 de
Levedura Saccharomyces cerevisiae para produo de etanol (Bio Celere Agroindustrial
Ltda.), Prototheca moriformis para a produo de triglicerdeos e bioprodutos (Solazyme Brasil
leos Renovveis e Bioprodutos Ltda), levedura (Saccharomyces cerevisiae) para produo
de farneseno pela cepa Y5056 (Amyris Brasil SA) e levedura (Saccharomyces cerevisiae)
geneticamente modificada para produo de farneseno cepa Y1979 (Amyris Brasil SA), para
produo industrial da enzima Fitase e para obteno da enzima Achromobacter
lyticus protease (Novozymes).
Alm disso foi autorizado a comercializao de 203 produtos derivados (enzimas) de
diferentes organismos geneticamente modificados (Uniscience do Brasil).

8-LIMITAES

Uma das principais limitaes da modificao de plantas a dificuldade de identificar e

isolar genes teis. A maioria dos genes inseridos em plantas proveniente de bactrias e
vrus porque o reduzido genoma desses organismos facilita a identificao e clonagem de
genes. Intensivos estudos em vrios laboratrios esto sendo feitos para sequenciar
genomas, com diversas finalidades.
Outro fator limitante da transgenia a necessidade de obteno de uma planta adulta
a partir de uma clula transformada. A regenerao no ocorre em todas as espcies. Nestes
casos, a transformao feita em tecidos cotiledonares. Embora existam muitos mtodos de

61
transformao de plantas, algumas espcies so bastante recalcitrantes. Em geral, pode-se
transformar a maioria das dicotiledneas com Agrobacterium tumefasciens. O mesmo no se
pode dizer das monocotiledneas. Para este grupo de plantas utiliza-se um dos mtodos
diretos. Contudo, para cada espcie ou tecido a ser transformado, h a necessidade de testes
sobre o mtodo e o protocolo de regenerao das clulas ou tecidos transformados.
Embora h preciso no isolamento do gene, no h possibilidade de controlar a
integrao do inserto no genoma. O local da insero da construo quimrica pode ser
qualquer ponto do cromossomo. Como consequncia, poder ocorrer a interrupo da
expresso gnica de um gene da planta se o inserto se integrar no referido loco. Ou ainda, a
insero do gene transferido poder ocorrer numa regio rica em heterocromatina, onde a
expresso gnica poder ser reduzida ou insignificante. Alm disso, uma vez inserido, a nova
sequncia poder ser alvo de metilao e a consequente inativao em termos de transcrio.
Outras vezes, o gene pode ser silenciado ou ocorrer a interferncia de outro gene ou insero
(Brasileiro e Dusi, 1999).
Como o nmero de cpias inseridas varivel, muitas plantas so descartadas por
possurem um nmero elevado de cpias. Nenhum mtodo controlvel a ponto de
possibilitar apenas uma insero.
Alm disso, a insero do trnsgene no genoma do hospedeiro provoca rearranjamentos
tanto no transgene como o genoma do hospedeiro.
Existem vrios casos, onde o gene isolado de uma espcie no se expressa
adequadamente em outra, em geral devido a diferena na preferncia de uso de cdons pelas
diferentes espcies. Tem-se ento, os genes semi-sintticos. O uso de genes semi-sintticos
cada vez mais freqente. Um exemplo o uso de um gene do Bt (-endotoxina) que foi
sintetizado in vitro a partir do molde natural e que proporciona resistncia a lagarta Heliotis em
milho. Testes com plantas transgnicas (com estes genes, parcialmente sintetizados in vitro)
j foram concludos e variedades comerciais j esto sendo cultivadas em vrios pases.
Aps 20 anos do cultivo com plantas transgnicas o quadro que caracteriza a
transgenia a absoluta falta de controle. Em primeiro lugar, as tcnicas de modificao
transgnica so adequadas para a introduo, mas provocam rearranjamentos porque o DNA
transgnico exgeno transferido nas plantas elcita uma resposta, a qual ativa nucleases e
enzimas de reparao de DNA (Travik e Heinemann, 2007). Praticamente, em todas as
plantas transgnicas em cultivo, o transgene inserido diferente daquale contido no vetor de
transformao. As vezes o transgene inserido menor, outras vezes h insero de mais de
uma cpia ou pedaos do transgene, e assim por diante. Um exemplo emblemtico o
rearranjamento que ocorreu no milho transgnico GA21. Neste, ocorreu a insero de seis
cpias do transgene:
duas cpias idnticas ao transgene contido no vetor de transformao (cpias 3 e 4);
cpia do transgene com mutao Citonina no lugar de Guanina (cpia 2);
cpia do transgene com mutao Citonina no lugar de Guanina, alm de uma
deleo de 696 pb no promotor na regio 5 (cpia 1);
cpia incompleta, contendo as primeiras 288 (ou 291) pb ou faltando 1050 (ou 1047)
pb do gene mepsps, alm de no possuir a terminao NOS (cpia 5) e
cpia contendo o promotor e o primeiro exon truncado da actina do arroz (cpia 6).

Desta forma, a transformao gentica de plantas uma tecnologia no precisa.

9- BIOSSEGURANA - REGULAMENTAO
Segiundo o dicionrio Aurlio, Biossegurana. [De bi(o)- + segurana] S. f. Md. O
conjunto de estudos e procedimentos que visam a evitar ou controlar os eventuais problemas
suscitados por pesquisas biolgicas e/ou por suas aplicaes (Dicionrio Aurlio (2000).
Editora Nova Fronteira, pgina 302-303).

62
 Do ponto de vista tcnico, Biossegurana o conjunto de aes voltadas para a
preveno, minimizao ou eliminao dos riscos inerentes as atividades de pesquisa,
produo, ensino, desenvolvimento tecnolgico e prestao de servios, riscos que podem
comprometer a sade do Homem, dos animais, das plantas, do meio ambiente Valle e
Teixeira (1996).
Na viso da FAO, biossegurana significa o uso sadio e sustentvel em termos de
meio ambiente de produtos biotecnolgicos e aplicaes para a sade humana,
biodiversidade e sustentabilidade ambiental, como suporte ao aumento da segurana
alimentar global. Desta forma, normas adequadas de biossegurana, anlise de riscos de
produtos biotecnolgicos, mecanismos e instrumentos de monitoramento e rastreabilidade so
necessrios para assegurar que no haver danos sade humana e efeitos danosos ao
meio ambiente.
Em outubro de 1991 a 'European Community' emitiu um documento, o qual inclui os
procedimentos para o manuseio dos testes e liberao de organismos transgnicos. Cada
Estado membro foi obrigado a estabelecer sua regulamentao (ou legislao) em harmonia
com as diretrizes emitidas pela EEC.
A Unio Europia decidiu, desde 1999, rever as diretrizes de liberao de transgnicos.
Contudo, vrios pases j decretaram ou esto em fase de adotar uma moratria comercial,
at que novos estudos sobre biossegurana dos produtos transgnicos indiquem riscos
aceitveis para a sade humana e ao meio ambiente. Como resultado disto, no houve
nenhuma nova liberao para plantio comercial desde junho de 1999. Contudo, as presses
das grandes empresas comeam a surtir efeitos e j h indcios de que o processo de
liberao de novas variedades transgnicas seja retomado, embora, a contrariedade dos
Ministros de Meio Ambiente.
O Brasil aprovou sua primeira norma de biossegurana em 1995. A lei que trata do
assunto, Lei n 8.974 (DOU de 6/1/95), foi votada pelo Congresso Nacional em dezembro de
1994 e sancionada pelo Presidente da Republica em 05 de janeiro de 1995. A lei estabelecia
normas de segurana e mecanismos de fiscalizao no uso das tcnicas de engenharia
gentica na construo, cultivo, manipulao, transporte, comercializao, consumo, liberao
e descarte de Organismos Geneticamente Modificados (OGMs), visando proteger a vida e a
sade do homem, dos animais e das plantas, bem como o meio ambiente. O aspecto mais
relevante da lei brasileira diz respeito que o que est sob regulamentao o produto oriundo
da engenharia gentica, ou seja, a lei regulamente o produto se oriundo de um processo
especfico.
No dia seguinte, muitas criticas foram feitas referida lei (inclusive a do prof Silvio
Valle da Fiocruz), em particular porque o Presidente da Repblica, quando sancionou a lei,
vetou dois artigos e outros dispositivos. Um dos artigos vetados criava a CTNBio - Comisso
Tcnica NAcional de Biossegurana. Outro dispositivo vetado dava poder aos rgos de
Registro e Fiscalizao (IBAMA, ANVISA e MAPA) para emitir autorizaes sobre o uso de
OGMs.
Em 2005, foi aprovada a nova Lei de Biossegurana, a Lei n 11.105, de 24 de maro
de 2005. Regulamenta os incisos II, IV e V do 1 do art. 225 da Constituio Federal,
estabelece normas de segurana e mecanismos de fiscalizao de atividades que envolvam
organismos geneticamente modificados OGM e seus derivados, cria o Conselho Nacional de
Biossegurana CNBS, reestrutura a Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana
CTNBio, dispe sobre a Poltica Nacional de Biossegurana PNB, revoga a Lei n 8.974, de
5 de janeiro de 1995, e a Medida Provisria n 2.191-9, de 23 de agosto de 2001, e os arts. 5,
6, 7, 8, 9, 10 e 16 da Lei n 10.814, de 15 de dezembro de 2003, e d outras providncias.
O fato mais relevante foi a incluso do Principio da Precauo no Artigo 1 da lei,
embora ele no observado pela CTNBio:

63
 Esta Lei estabelece normas de segurana e mecanismos de fiscalizao sobre a
construo, o cultivo, a produo, a manipulao, o transporte, a transferncia, a
importao, a exportao, o armazenamento, a pesquisa, a comercializao, o
consumo, a liberao no meio ambiente e o descarte de organismos geneticamente
modificados OGM e seus derivados, tendo como diretrizes o estmulo ao avano
cientfico na rea de biossegurana e biotecnologia, a proteo vida e sade
humana, animal e vegetal, e a observncia do princpio da precauo para a proteo
do meio ambiente.
A lei traz ainda artigos sobre definies, proibio, composio e atributos do Conselho
Nacional de Biossegurana (CNBS) e da Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana
(CTNBio), alm das atribuies dos rgos e entidades de registro e fiscalizao.
Outra importante incluso foi o principio da publicidade. Na gesto das informaes de
biossegurana, h que ser observada a transparncia. Da mesma forma, a Legislao, atos
administrativos; processos em andamento; decises da CTNBio, do CNBS e dos rgos de
registro e fiscalizao; atas das reunies e outras informaes consideradas no sigilosas,
bem como os votos fundamentados de cada membro devero ser tornados pblicos.
Entretanto, este dispositivo ainda no foi implementado.
Poucos pases da Amrica do Sul tm legislao referente aos testes e a
comercializao de produtos oriundos da engenharia gentica. Na Argentina no existe uma
lei de Biossegurana semelhante a do Brasil. Apenas um decreto. No Paraguai, uma portaria
do governo criou uma comisso de biossegurana que tem tambm representantes da
universidade e de organizaes no governamentais. Em um de seus primeiros atos, a
Comisso de Biossegurana no autorizou a introduo da Soja RR da Monsanto no
Paraguai.
Nos Estados Unidos tambm no existe uma lei especfica. Basicamente as leis j
existentes foram emendadas para tratarem tambm dos produtos transgnicos. Como neste
pas, o processo de transgenia no considerado relevante, pois considerado similar ao
melhoramento gentico de plantas. Se um produto transgnico considerado equivalente a
um no transgnico, os testes exigidos so de comum acordo entre as agencias
governamentais e as empresas, estando os consumidores totalmente fora das decises. O
sistema aps anlise desregulamenta o produto. O processo de concesso de autorizao
baseado no fentipo da planta, na segurana ambiental, utilizao do produto e risco do
produto.
Uma pergunta frequente tem sido: a liberao destas plantas nos EUA foi precedida
por testes rigorosos e anlises rigorosas das agncias americanas Food and Drug
Administration - FDA, Environmental Protection Agency - EPA e United States Department of
Agriculture - USDA?
Basicamente, a agncia americana encarregada da alimentao, a FDA, no aprova,
nem autoriza, simplesmente afirma o que o proponente do OGM menciona. Abaixo est um
exemplo. Pontos mencionados na carta para o evento MON 810 (milho Bt), datada de 26 de
Setembro de 1996, enviada pela FDA a Monsanto:
Monsanto submeteu um resumo da avaliao do milho contendo o evento de
transformao MON 810 em 6 de Junho de 1996;
Baseado na avaliao de segurana e nutricional que vocs conduziram, nosso
entendimento que a Monsanto concluiu que os produtos derivados desta nova
variedade de milho no materialmente diferente em composio, segurana, e outros
parametros relevantes de outros milhos que esto no mercado, e que o milho
geneticamente modificado no levanta questes que requerem uma reviso antes da
comercializao e sua aprovao por parte da FDA.
www.cfsan.fda.gov/~acrobat2/bnfL034.pdf.

64
 Estas duas sentenas acima podem ser encontradas em todas decises da FDA como
respostas s consultas sobre desregulamentao de plantas transgnicas. Portanto, ao
contrrio do que afirmado com frequncia, a FDA no requer avaliao de risco na fase de
pr-comercializao e no emite sua prpria opinio a respeito da segurana da variedade
transgnica.
As plantas transgnicas, aprovadas para o cultivo comercial nos Estados Unidos,
tiveram sua liberao baseada no princpio da equivalncia substancial. Assim, a soja RR foi
considerada equivalente a sua antecedente natural, a soja convencional, porque no difere
dela nos aspectos cor, textura, teor de leo, composio e teor de aminocidos essenciais e
de nenhuma outra qualidade bioqumica. Desta forma, no foram submetidas rotulagem pela
agncia americana encarregada de sua liberao, a FDA.
Este conceito de equivalncia substancial tem sido alvo de crticas, entre outras,
porque a falta de critrios mais rigorosos pode ser til indstria, mas inaceitvel do ponto
de vista do consumidor e da sade pblica (Millstone et al., 1999). H dificuldades prticas no
conceito de equivalncia entre plantas engenheiradas e naturais, ou obtidas por tcnicas
convencionais de melhoramento gentico. Equivalncia significa dispor de igual valor ou outro
atributo, normalmente expresso em unidades ou parmetros: um grama do produto Y equivale
a X calorias. Equivalncia se refere sempre a quantidade ou algo mensurvel a que
corresponde um sentido tecnicamente comparvel (Momma, 1999). A rigor, em termos de
genoma, elas no so equivalentes nem iguais. S seriam iguais se uma fosse originria da
outra por multiplicao vegetativa ou micropropagao. A construo gentica inserida na
planta contm elementos bastante distintos daqueles naturais encontrados nas plantas, que
proporcionam novos produtos gnicos e que podem desencadear efeitos pleiotrpicos
substanciais, para que sejam considerados desprezveis.
Por este critrio, a vaca louca seria equivalente, em termos de segurana, a vaca
sadia, j que a diferena entre ambas apenas da conformao espacial de uma proreina.
Uma das criticas se originou da anlise da documentao que foi utilizada pela FDA
para considerar a Soja RR substancialmente equivalente a soja convencional. Segundo
Barbara Keeler que fez a anlise, existem diferenas significativas entre soja no transgnica
e Soja RR: em 3 dos seis macronutrientes; em um cido graxo; 29% menos de choline; mais
(27%) de inibidor de tripsina, um potente alergnico. Para chegar a concluso de que ambas
variedades eram equivalentes, no foram aplicados testes estatsticos nas comparaes.
Alm disso, em um dos 3 experimentos feitos em Porto Rico foi omitido da publicao no
Journal of Nutrition, mas os dados foram submetidos ao FDA. Estes revelaram que a Soja RR
apresentou menor nvel de protena e de fenilalanina; o inibidor de tripsina foi 18% maior nas
tortas tostadas a base de Soja RR que nos controles e as lectinas apareceram em dobro.
Neste caso, por esta anlise a soja convencional e a Soja RR no seriam equivalentes.
Quando se utiliza a equivalncia substancial, nenhum teste requerido para excluir a
presena de toxinas prejudiciais, carcinognicas e mutagnicas. Este critrio da equivalncia
substancial equivocado, carece de base cientfica e deveria ser abandonado em favor de
testes biolgicos, toxicolgicos e imunolgicos mais aprofundados e eficazes (Guerra e
Nodari, 1999). Com base nesta equivalncia, o FDA exige apenas testes de curta durao
com animais e testes bioqumicos para avaliar, entre outros, a alergenicidade. Esta
insuficincia de dados, que no consegue subsidiar cientificamente a anlise da segurana
alimentar, est sendo questionada no s pela populao em geral, mas tambm por grande
parte da comunidade cientfica e agora (outubro de 2000) pelos governos, como o caso da
Itlia.
Como o transgene , na verdade, uma nova caracterstica em geral desconhecida
introduzida num genoma cultivado que vem sendo lapidado pelas selees natural e artificial,
ainda no h experincia acumulada, nem conhecimento suficiente para tratar
adequadamente este assunto. Contudo, a comunidade cientfica e os agricultores j tm
experincia acumulada com os agroqumicos ou agrotxicos que foram liberados, aps a

65
Segunda Guerra Mundial para uso, sem a realizao de testes adequados de biossegurana.
S posteriormente, parte dos efeitos nefastos causados por eles se tornaria conhecido. Foi
preciso a morte e a dor de inmeras pessoas contaminadas para que as restries de uso
aumentassem. At hoje no houve reparao alguma por partes das empresas fabricantes
destes produtos s vitimas intoxicadas ou mortas (Nodari e Guerra, 2001).
A equivalncia substancial utilizada tambm pelo Canad e Argentina. Nestes pases
a rotulagem no obrigatria. A rigor, todos os processos de solicitao de liberaes
comerciais j provadas pela CTNBio foram tqmbm julgados pela equivalncia substancial,
contrariando a norma legal brasileira. Nem mesmo os princpios e a metodologia
estabelecidos no Anexo III do protocolo de Cartagena sobre Biossegurana tm sido seguido.
De um lado as empresas no fazem os estudos recomendados, de outro lado a CTNBio no
exige. Assim, nem a comunidade cientifica dispe de informaes tcnico-cientficas a
respeito dos riscos. Isto contribui para um debate na sociedade, vazio de informaes
cientficas e tcnicas.

Protocolo de Cartagena sobre Biossegurana

Os pases membros da Conveno sobre Diversidade Biolgica (CDB) em janeiro de
2000. Os dois principais pontos so: (i) o princpio da precauo deve ser adotado em caso de
dvida ou falta de conhecimento cientfico e (ii) os produtos transgnicos devem ser rotulados
(art. 18a). O referido protocolo tem cerca de 40 artigos e trata basicamente da movimentao
de transgnicos entre pases, com atribuio de responsabilidades em caso de danos.
Garante ainda, que o pas importador recuse o produto caso no esteja acompanhado de
estudo de risco adequado. Um terceiro aspecto, explicitado no artigo 15 e anexo II, impe que
a anlise de risco seja conduzida cientificamente pelo exportador. Na ausncia desta anlise,
os importadores podem se negar a receber os produtos.
J foram realizadas seis reunies (denominadas de MOP), nas quais foram tomadas
decises consensuadas sobre vrios temas, sendo o mais polmico os requisitos em termos
de informao sobre o OGM que deve acompanhar o documento fiscal nos carregamentos de
OGM em movimentos transfronteirios.
At o final de 2015, 170 pases haviam ratificado o Protocolo de Cartagena sobre
Biossegurana, incluindo o Brasil. Mas no ratificaram o Protocolo, Estados Unidos e
Argentina, por exemplo.

Situao em Santa Catarina

A primeira a Lei Promulgada N 11.403, de 10/05/2000, que dispe sobre pesquisas,
testes, experincias ou atividades nas reas de Biotecnologia e Engenharia Gentica e adota
outras providncias.
Seu Art. 1 diz As empresas nacionais ou estrangeiras, que desenvolverem no Estado
de Santa Catarina pesquisas, testes, experincias e outras atividades nas reas da
biotecnologia e engenharia gentica, envolvendo Organismos Geneticamente Modificados
(OGMs), bem como os produtos advindos desta tecnologia, devero notificar o Poder
Executivo na forma disposta nesta Lei. J o Art. 3 probe a comercializao em todo o
Estado de Santa Catarina dos produtos advindos da tecnologia.
A segunda a Lei Promulgada 11.643, de 4/06/2000, que cria o Conselho Tcnico
Catarinense de Biossegurana CTCBio e adota outras providncias. Seu Art. 1 diz: Fica
criado o Conselho Tcnico Catarinense de Biossegurana CTCBio , rgo normativo-
jurisdicional, consultivo e de assessoramento vinculado diretamente ao Poder Executivo, com
a finalidade de deliberar sobre matria relacionada a sua rea de competncia.

66
 Ambas as leis embora vigentes ainda no foram totalmente implementadas at esta
data. O CTCBio chegou a ser criado, mas poucas vezes se reuniu ou foi demandado.
Decorrente da mobilizao da sociedade civil e da sensibilidade dos governantes e dos
legisladores na poca foi possvel aprovar uma lei de consenso no estado de Santa Catarina,
a Lei n 12.128, de 15 de janeiro de 2002. No Art. 1 consta:

No Estado de Santa Catarina, durante cinco anos, a partir da publicao desta Lei, fica
vedado o plantio e cultivo para fins industriais e comerciais de organismos
geneticamente modificados - OGM - e seus derivados, que tenham como finalidade a
alimentao humana ou animal.

1 Decorrido o prazo de cinco anos, a Assemblia Legislativa verificar a necessidade

ou no da prorrogao do perodo de moratria.

Embora previsto, a lei no s no foi cumprida como tambm o plebiscitoo que deveria
ter ocorrido no foi realizado.
Esta lei tambm contm outros dispositivos de interesse dos consumidores. Em seu
Art. 2 diz:
Os produtos alimentcios que contenham ou provenham de organismos geneticamente
modificados e seus derivados somente sero industrializados e/ou disponibilizados em
estabelecimentos comerciais, no Estado de Santa Catarina, caso expressem no
recipiente, embalagem e rtulo, a informao de que no seu processo produtivo
utilizaram-se tcnicas transgnicas.
Com base neste dispositivo a rotulagem obrigatria, independente da quantidade de
OGM nos alimentos. Questionado na justia pela empresa NESTL, o judicirio manteve o
entendimento de que em Santa Catarina osalimentos que so OGMs ou feito a partir destes,
indpendente do percentual, devem ser rotulados.
Este movimento da sociedade civil organizada foi muito ativo no perodo de 2000 a
2004, estando atualmente sem atividades. Disso resultou o avano do poder poltico ligao aos
interesses dos proponentes de atividades com os transgnicos. Exemplo disso foi a revogao
do inciso IV do art. 8 da Lei n 12.128, de 15 de janeiro de 2002, pela Lei n 14.675, de 13 de
abril de 2009, que criou o polmico Cdigo Ambiental de Santa Catarina, ainda sob ao de
inconstitucionalidade no Supremo Tribunal Federal.
Dizia o inciso IV do art. 8 da Lei n 12.128:
IV - realizao do Estudo e do Relatrio de Impacto Ambiental EIA/RIMA relativo s
atividades desenvolvidas, devidamente aprovado.
Ou seja, uma conquista da sociedade civil foi descumprida pela Assemblia Legislativa
que deixou de exigir estudos nos ecossistemas catarinenses para avaliar ou no seus
impactos.

10-FISCALIZAO
Apesar da Legislao Brasileira de Biossegurana ter sido promulgada desde 1995 e
da CTNBio ter sido implantada em 1996 e re-implantada em 2005, a operacionalizao da
fiscalizao dos produtos transgnicos nas Unidade da Federao tem enfrentado vrias
dificuldades. A fiscalizao tanto de experimentos quanto de rea plantada clandestina no
est sendo feita a contento.
Mesmo com a nova lei em 2005, pouco ou nada mudou. Fatos comprovados por
jornalistas e mesmo pela fiscalizao comprovaram a existncia de algodo e milho
transgnicos antes de terem sido liberados no pas. Assim, a fiscalizao praticamente
ineficiente para proteger o pas de cultivos ilegais e de contaminao por transgenes.

67
 A manchete de capa do jornal Folha de So Paulo de 10/05/2009 dizia: Brasil no tem
controle sobre milho transgnico.

Figura 3.2. O agricultor Ademir Ferronato em sua plantao de milho convencional, no

Paran; ele teme contaminao por lavoura transgnica (Fonte: FSP, 10/05/2009).

11-ANLISE DE RISCO
As Biotecnologias tm sido utilizadas por milnios para diversos propsitos, incluindo
as fermentaes para produo de alimentos e bebidas e a seleo de novas variedades de
plantas ou animais. Na ltima metade do sculo passado, novas biotecnologias foram
desenvolvidas, dentre as quais merecem destaque a micropropagao, a fuso de
protoplastos, os marcadores moleculares, a clonagem de animais, DNA recombinante e a
transgenia. Conseqentemente, a preciso e o poder de manipulao dos organismos vivos
aumentoaram consideravelmente com o avano da gentica molecular. De todas elas, o que
causa maior apreenso a transgenia, no em si pela tecnologia, mas pelas implicaes que
seus produtos podem apresentar sade humana e ao meio ambiente.
Se um transgnico diferente de uma variedade comum e o transgene nele inserido
pode apresentar um determinado risco, h a necessidade da avaliao do risco, tanto para a
sade humana como para o meio ambiente. A razo disto est no fato de que os genes
transferidos de fora do gene-pool de uma espcie produzem produtos com os quais temos
pouca ou nenhuma experincia. No se conhecem as implicaes que podem ser provocadas
pela introduo desses genes em plantas. Desta forma, h um consenso entre os
pesquisadores que a sociedade precisa desenvolver regras para o desenvolvimento, testes e
comrcio de OGMs.
Embora a transformao gentica transfira somente sequncias curtas de DNA,
comparativamente ao genoma de uma variedade, o fentipo resultante, que inclui a
caracterstica transgnica, possivelmente acompanhado de mudanas nas caractersticas e
pode produzir um organismo novo em termos de relaes ecolgicas (Wolfenbarger e Phifer,
2000). Segundo estes autores, os ecossistemas so complexos e nem todo o risco associado
com a liberao de um OGM pode ser identificado e considerado. Os testes a serem
realizados, os protocolos mais apropriados, os termos de referncia, os instrumentos mais
adequados ainda so pouco conhecidos e esto sendo discutidos e desenvolvidos.
Risco pode ser definido como uma medida dos efeitos de uma ocorrncia em termos
de sua probabilidade e da magnitude de suas conseqncias. Assim, a avaliao de risco
(risk assessment) como sendo o processo com base cientfica que consiste na identificao e
caracterizao dos perigos, da avaliao da exposio e da caracterizao dos efeitos dos

68
riscos. Por perigo entende-se a propriedade de uma substncia ou processo que cause dano.
Ou seja, dano a materializao do perigo. Ento, se o potencial de dano elevado, mesmo
uma baixa probabilidade pode significar um risco inaceitvel.
A avaliao de segurana deve ser baseada nos riscos potenciais impostos pelo
produto obtido (Fontes et al., 1996). Assim, a avaliao deve levar em considerao as
caractersticas do doador, do recipiente, ou quando apropriado, do organismo parental. Devem
ainda ser avaliadas as caractersticas e a utilizao pretendida do OGM, incluindo a escala e a
freqncia das introdues e consideraes ambientais e de sade.
O manejo dos riscos deve levar em conta as alternativas decorrentes da avaliao de
riscos e, se necessrio, a seleo e implementao de opes de controle apropriadas,
incluindo normas regulatrias. Os danos podem ser diretos ou indiretos, intencionais ou
involuntrios, imediatos ou no. Segundo o Dr. Chris Glidon, espera-se, ao final do processo,
eliminar ou reduzir o risco que possa causar um dano de fato. A diretriz maior a de que o
produto deve ser seguro e sadio para a espcie humana e para o meio ambiente. Portanto, o
impacto de um transgene no ambiente e na sade humana deve ser criteriosamente avaliado
(Glidon, 1999).
Pode-se tambm definer Risco como sendo a medida dos efeitos (injrias, ambientais,
econmicos) de uma ocorrncia em termos de probabilidade e da magnitude de suas
conseqncias. Neste caso, um OGM poderia ser POTENCIALMENTE PERIGOSO, em razo
de apresentar, como propriedade, uma substncia ou processo que causa dano (injria ou
perda). Assim, DANO seria a manifestao de uma substncia ou processo perigoso. Tais
danos podem se diretos ou indiretos, imediato ou longo prazo, naturais ou tecnolgicos e
intencionais ou imprevisveis.
Em tese, os riscos no esto relacionados ao que os cientistas sabem, mas ao que
eles no sabem (Caruso, 2006). Desta forma, riscos esto associados a incertezas. Neste
mesmo sentido no contexto da incerteza que viceja a esperana, o juzo e a valorao da
subjetividade, capaz de concretizar o inusitado, segundo Lieber e Romano-Lieber (2003).
J em 1989, pelo menos 15 anos antes da liberaao no meio ambiente da primeira
planta transgenica, o tomate Flavr Svr, Tiedje et al. (1989) anteciparam os sete principais
riscos ambientais:
criao de novas pragas e plantas daninhas;
um aumento das pragas j existentes por meio da recombinao gnica entre a planta
transgnica e outras espcies filogeneticamente relacionadas;
a produo de substncias que so ou poderiam ser txicas a organismos no-alvos;
o efeito disruptivo em comunidades biticas e o desperdcio de valiosos recursos
genticos, seguido de contaminao de espcies nativas com caractersticas
originadas de parentes distantes ou de espcies no relacionadas e efeitos adversos
em processos dos ecossistemas;
origem de substncias secundrias txicas aps a degradao incompleta de qumicos
perigosos;
efeito adverso nos processos ecolgicos;
extravagncia de recursos biolgicos valorosos.

Praticamente todos os efeitos adversos previstos ocorreram com os OGMs liberados.

Portanto, no correto dizer que os mesmo so imprevistos, pois os efeitos adversos ou os
danos foram alertados por parte da prpria comunidade cientifica.
A Resoluo Normativa N 2 da CTNBio, de 27 de novembro de 2006, dispe sobre a
classificao de riscos de Organismos Geneticamente Modificados (OGM) e os nveis de
biossegurana a serem aplicados nas atividades e projetos com OGM e seus derivados em
conteno. Para efeitos desta Resoluo Normativa (Art. 3), considera-se Risco
"possibilidade de promoo de evento negativo, cientificamente fundamentada, para a sade

69
humana e animal, os vegetais, outros organismos e o meio ambiente, decorrente de
processos ou situaes envolvendo OGM e seus derivados".
A norma definiu ainda as classes de risco que os transgenicos devem ser enquadrados
em seu Art. 8 - As classes de risco dos OGM sero assim definidas:
I Classe de Risco 1 (baixo risco individual e baixo risco para a coletividade): O OGM
que contm seqncias de ADN/ARN de organismo doador e receptor que no causem
agravos sade humana e animal e efeitos adversos aos vegetais e ao meio ambiente;
II Classe de Risco 2 (moderado risco individual e baixo risco para a coletividade): O
OGM que contm seqncias de ADN/ARN de organismo doador ou receptor com
moderado risco de agravo sade humana e animal, que tenha baixo risco de
disseminao e de causar efeitos adversos aos vegetais e ao meio ambiente;
III Classe de Risco 3 (alto risco individual e risco moderado para a coletividade): O
OGM que contm seqncias de ADN/ARN de organismo doador ou receptor, com alto
risco de agravo sade humana e animal, que tenha baixo ou moderado risco de
disseminao e de causar efeitos adversos aos vegetais e ao meio ambiente;
IV Classe de Risco 4 (alto risco individual e alto risco para a coletividade): O OGM que
contm seqncias de ADN/ARN de organismo doador ou receptor com alto risco de
agravo sade humana e animal, que tenha elevado risco de disseminao e de causar
efeitos adversos aos vegetais e ao meio ambiente.

Mas foi s em maro de 2008 que a CTNBio elaborou e aprovou a RESOLUO

NORMATIVA N 05, que dispe sobre normas para liberao comercial de Organismos
Geneticamente Modificados e seus derivados. Cabe destacar que nesta norma esto
explicitados os procedimentos e os tpicos que os proponentes devem avaliar para solicitar a
liberao de um transgnico no pas. Dentre os dispositivos desta norma cabe destacar:
Art. 6. Para efeitos desta Resoluo Normativa considera-se:
I avaliao de risco: combinao de procedimentos ou mtodos, por meio dos quais se
avaliam, caso a caso, os potenciais efeitos da liberao comercial do OGM e seus
derivados sobre o ambiente e a sade humana e animal.
Art. 19. A avaliao de risco, conforme definida no art. 4, inciso I, desta Resoluo
Normativa, dever identificar e avaliar os efeitos adversos potenciais do OGM e seus
derivados na sade humana e animal, no ambiente e nos vegetais, mantendo a
transparncia, o mtodo cientfico e o princpio da precauo.

Riscos sade humana e animal

A maioria das plantas transgnicas desta primeira gerao de OGMs contm genes de
resistncia a antibiticos, cuja funo possibilitar a seleo das clulas transformadas. O
que os genes de resistncia a antibiticos tem a ver com a sade humana? Nos ltimos 20
anos, mais de 30 novas doenas ocorreram na espcie humana (AIDS, ebola e hepatites,
entre outras). Alm disso, houve o ressurgimento de doenas como a tuberculose, malria,
clera e difteria com muito mais agressividade por parte dos microrganismos patognicos.
Paralelamente, houve um decrscimo na eficincia dos antibiticos. Nos anos 40, um
antibitico tinha uma vida til de 15 anos. Nos anos 80, a vida til passou para cinco anos, ou
seja, trs vezes menos. Os estudos comprovam de que tanto a recombinao como a
transferncia horizontal entre bactrias acelerara a disseminao de regies genmicas
destes organismos causadores de doenas, bem como a disseminao de genes de
resistncia a antibiticos (Ho et al., 1998). bem conhecido o exemplo da estreptomicina em
sunos. Aps um ano de aplicao aos animais (1983), genes de resistncia a estreptomicina
estavam presentes nos plasmdeos de bactrias que viviam na garganta e estmago dos

70
sunos. Um ano mais tarde, bactrias humanas dos familiares que lidavam com estes animais
tambm apresentaram resistncia a estreptomicina. Esta uma prova inequvoca de
transferncia lateral de genes entre bactrias. Em 1990, este antibitico foi retirado de
circulao.
Embora a frequncia de transformao e, consequentemente, a transferncia
horizontal em bactrias extremamente baixa, os genes de resistncia a antibiticos inseridos
em plantas transgnicas, podero ser transferidos para bactrias humanas, o que se constitui
num risco a ser considerado. Tem sido sugerido o desenvolvimento de OGMs sem genes de
resistncia a antibiticos para evitar os riscos acima mencionados. Cabe ento o
aperfeioamento do sistema de seleo tanto via desenvolvimento de outras formas de
seleo ou utilizao de outros genes.
Um segundo tipo de risco relaciona-se com as reaes adversas dos alimentos OGMs
ingeridos, que podem ser agrupadas em duas categorias: alergnicos e intolerantes. Neste
grupo esto os alimentos que causam hipersensibilidade ou alergia. No segundo grupo esto
as alteraes fisiolgicas, como reaes metablicas anormais, toxicidade, reaes
farmacolgicas e idiossincrticas (Finardi, 1999).
Os resultados dos primeiros experimentos sobre os efeitos da incluso de derivados de
OGM na rao animal feitos por pesquisadores independentes comeam a ser analisados.
Segundo o jornal britnico The Guardian, de 04/11/2000, os pesquisadores Steve Kestin e
Toby Knowles, da University of Bristol, verificaram que a mortalidade de frangos alimentados
com milho transgnico foi praticamente o dobro (7,14%) comparativamente mortalidade de
frangos tratados com milho convencional (3,57%). Os cientistas questionaram ainda os
mtodos e concluses dos estudos da Aventis submetidos para anlise das autoridades
britnicas visando liberao do milho transgnico. Contudo, estes resultados ainda devem
ser validados cientificamente, pois este tipo de experimento deve ser efetuado para diferentes
combinaes de nutrientes, raas e condies climticas.
ilustrativo o caso do milho transgnico StarLink (da Aventis CropScience) um tipo de
Bt que contm o gene rCry9C, aprovado pela Environmental Protection Agency (EPA). Dos
Estado Unidos, para alimentao animal mas no para consumo humano. Este milho contm
uma protena (Cry9C) que pode causar reaes alrgicas em humanos, uma vez que ela no
foi quebrada imediatamente nos testes de digesto. Tanto gros quanto subprodutos foram
misturados com gros no-transgnicos, conforme anlise de produtos alimentcios de
consumo humano. Alm disso, houve tambm a contaminao de colheitas que deveriam ser
no-transgnicas devido disseminao do plen.
Para os transgenes que produzem toxinas recombinantes (rCry) a partir da bactria
Bacillus thuringiensis (Bt) transferido para o milho, Sagstad et al. (2007) constatou que o
salmo alimentado MON 810 tinha uma grande proporo de granulcitos, moncitos,
crescimento somtico, com uma menor proporo de linfcitos, as mudanas nas atividades
das protenas de estresse e alteraes nas populaes de leuccitos associada a resposta
imune.
Do ponto de vista de efeitos pleiotrpicos, Zolla et al. (2008) verificaram diferenas na
expresso de protenas entre o evento Mon810 (que contm o transgene rCry1Ab) e o seu
isognico no GM. Os autores constatam alteraes estatisticamente significativas em 43
protenas. Dentre elas, uma nova protena expressada no milho GM corresponde a gama
zeina (50 kDa), uma protena alergnica conhecida.
Recentemente, Andreassen et al. (2015), constataram que a exposio a rCry1Ab
purificada resultou em reao especfica IgG1 anti-Cry1Ab e produo de IgE, indicando
imunogenicidade inerente e alergenicidade. Ratos expostos a extratos de folhas de ambos
MON810 e milho no modificado demonstraram influxo de linfcitos e eosinfilos no lavado
broncoalveolar, bem como no aumento da liberao de citocinas em clulas de ndulos
linfticos do mediastino. Os autores tambm concluram que os resultados indicaram que a
exposio das vias respiratrias s protenas rCry1Ab pode ser uma via de relevncia prtica.

71
 Ento faz sentido saber se uma nova variedade transgnica intensifica ou no a
alergia. No caso da Soja RR, os testes realizados no foram suficientes para discriminar as
possveis variaes nas 16 protenas alergnicas desta espcie. Os testes revelaram que
houve um aumento (26,7%) do inibidor de tripsina, tambm alergnico e antinutricional
(Padgette et al., 1996), alm de uma maior reatividade de uma banda relativa a uma protena
alergnica. Segundo a anlise feita por uma pesquisadora independente, Barbara Keeler, a
documentao que a empresa forneceu a FDA demonstra que em um dos experimentos
tambm o teor de lectina, que alergnico, produzido pela Soja RR foi maior (o dobro) que na
convencional. O desafio neste caso sabe quais os tipos de ensaios que fornecem os dados
mais inequvocos sobre alergenicidade.
Estudos em ratos alimentados com soja RR (Malatesta et al., 2002) na Itlia, mostrou,
por exemplo, a formao de microncleos, ncleos de forma irregular e tambm um grande
nmero de poros nucleares, sugerindo uma alta taxa metablica. A publicao deste estudo
custou o emprego da pesquisadora.
Em um estudo recente de toxicidade a longo prazo de um herbicida e de milho
geneticamente modificado tolerante Roundup, os resultados demonstram claramente que os
nveis mais baixos de formulaes comerciais de herbicidas de glifosato, em concentraes
bastante abaixo dos limites de segurana estabelecidos oficialmente, induzem graves
distrbios hepticos e renais, dependentes de hormonio (Seralini et al., 2012). A relevncia
deste estudo baseia-se: (i) os tumores cancergenos aparecem aos 4 meses em ratos machos
e aos 7 meses e ratas femeas.Todavia, as agncias exgem estudos de apenas 3 meses; (ii)
as alteraes bioqumicas e s falhas fisiolgicas so mais graves em ratos alimentados com
milho transgnico ou com Glifosato que quando alimentados com milho convencional. Assim,
o critrio da equivalncia substancial no tem sustentao cientfica. (iii) As alteraes
bioqumicas e as falhas fisiolgicas elevaram a probabilidade de desenvolvimento de tumores
em ratas. Em razo da grande presso de cientistas favorveis a transgenia e das grandes
empresas de biotecnologia a revista decidiu retirar o referido artigo com base no argumento de
que o estudo era inconclusivo. Esta atitude foi a primeira na histria da Cincia.
Posteriomente, o artigo foi publicado pela Revista Environmental Sciences Europe.
Dentre os muitos avanos cientficos cabe destar dois estudos. O primeiro refere-se a
constatao feita por Agapito-Tenfen et al. (2013) de que h protenas expressas a mais ou a
menos e tambm novas protenas expressas no milho transgnico (MON 810, que carrega o
transgene rCry1Ab) comparativamente variedade no transgnica. Neste estudo, foram
constados, entre outros, que houve (i) uma ntida reduo de nveis de transcrio para todos
os trs transgenes empilhados (EPSPS, Cry1A.105 e cry2Ab2) e (ii) alterao na expresso
de 17 protenas, sendo cinco presentes em um ou dois dos genomas estudados. No entanto,
as alteraes nos nveis de expresso dos transgenes de um evento empilhado podem afetar
a sua segurana e utilidade. Assim, no h dados suficientes sobre a correlao entre a
acumulao de mRNA e os nveis de protenas transgnicas, o que impede de fazer
inferncias sobre os possveis riscos deste tipo de evento.
Em soja, os estudos feitos po Bohn et al. (2013) demonstraram que a soja RR no
equivalente a soja convencional, pois examinando mais de 30 variedades cultivadas em
sistema orgnico, convencional e transgnicas, os teores de elementos da composio
centesimal das sojas foram estatisticamente diferentes. Alm disso, no graos das variedades
transgnicas foram encontrados entre 10 e 20 ppm de glifosato ou AMPA, comparativamente
a zero nas variedades cultivadas convencionalmente ou no sistema orgnico.
Em 2013 houve a comprovao de que tanto toxinas de Bt produzidas em plantas
transgnicas quanto resduos do glifosato aplicado sobre plantas estavam presentes em fetos
de mulheres grvidas (Aris e Leblanc, 2011). Isto significa que esta tecnologia j est
provocando exposio de pessoas no nascidas a substncias txicas. Embora o assunto
de grande relevncia, as autoridades governamentais esto ignorando completamente as
consequncias desta exposio em humanos intrauterinos.

72
 Existe ainda uma srie de outros riscos sade humana que devem ser analisados
com protocolos adequados. Um deles o efeito txico que um alimento transgnico pode
causar sade humana.

Riscos ao meio ambiente

A avaliao de risco ambiental a avaliao sistemtica dos riscos associados sade
e segurana humana e ambiental. Os procedimentos devem incluir a identificao dos
perigos e a estimativa de suas magnitudes e freqncias de ocorrncia, bem como das
alternativas ao OGM. Como os riscos associados a uma variedade transgnica dependem das
interaes complexas decorrentes da modificao gentica, da histria natural dos
organismos envolvidos e das propriedades do ecossistema no qual o OGM liberado
(Peterson et al., 2000; Wolfenbarger e Phifer, 2000), estes procedimentos devem ser
aplicados em escala ampla, em termos espaciais e sociais (ver Figura 3.2).
O conhecimento dos riscos tambm indispensvel porque possibilita a elaborao de
planos de seu gerenciamento. O manejo dos riscos um processo que envolve a anlise das
alternativas decorrentes dos resultados alcanados com a avaliao destes. Quando
requerido, o manejo seleciona e implementa opes apropriadas de controle, incluindo normas
reguladoras (Glidon, 1999). Assim, o manejo de riscos deve tambm fazer parte do estudo de
impacto ambiental para fins de licenciamento de atividades com plantas transgnicas.
Na ausncia de efeitos pleiotrpicos, os efeitos diretos do transgene numa planta
seriam razoavelmente previsveis. Quando os bilogos moleculares dizem que foram feitos
estudos e no foram detectados efeitos adversos, eles normalmente esto se referindo
primeira das vrias clulas possveis de serem analisadas (Figura 3.2). Existem tambm
estudos de parcela (segunda clula da Figura 3.2), associados predominantemente
performance agronmica do OGM, e que, a rigor, no podem ser tomados como estudos de
impactos e riscos ambientais. No h estudos cientficos relacionados a todas as clulas
relevantes desta matriz. Existem sim, relatos cientficos de estudos isolados com algumas
espcies e que sero apresentados mais adiante.
A complexidade da avaliao decorrente do fato de que os riscos e os benefcios
associados a uma cultura especfica mudam e tornam-se mais difceis de serem avaliados na
medida que a rea de cultivo aumenta e outros aspectos so considerados. Impactos indiretos
nos ecossistemas so muito mais difceis de investigar, monitorar e, portanto, predizer
(Peterson et al., 2000). Segundo estes autores, esta uma das origens da controvrsia
estabelecida entre os ambientalistas e os bilogos moleculares. Enquanto os primeiros
referem-se aos impactos sociais e nos ecossistemas, os ltimos fazem meno aos testes
feitos com uma ou poucas plantas em laboratrio ou em casa de vegetao.
A complexidade tambm decorrente do fato de que inmeros trabalhos cientficos
demonstraram que o padro de variao fenotpica, sua base gentica e a seleo natural
sobre eles variam em diferentes condies ambientais (Griffiths et al.,2015; Ackerly et al.,
2000). O problema da biologia que, em contraste com outros ramos do mundo fsico, nos
quais poucas grandes foras dominam os fenmenos, o organismo vivo resultante de um
grande nmero de caminhos fracos causais determinantes, fazendo com que seja
extremamente difcil proporcionar explanaes completas (Lewontin, 2000). Em seu recente
texto, o autor afirma ainda que um organismo vivo num momento qualquer de sua vida a
conseqncia nica da histria do desenvolvimento que resulta de interaes e determinaes
de foras internas e externas.

73
Figura 3.2. Efeitos diretos e indiretos de variedades transgnicas (OGM) e as interaes
complexas que fazem parte da avaliao de risco ambiental (Adaptado de Peterson
et al., 2000).

Entre os riscos ambientais, a poluio gentica, por meio da transferncia vertical e da

transferncia horizontal, a ameaa considerada mais importante. Em decorrncia disto,
espcies que adquirirem certos transgenes podero alterar seu valor adaptativo e,
conseqentemente, a dinmica de suas populaes e de outras espcies as quais interagem
estar desafiada. Contudo, outros riscos so possveis como efeitos danosos em espcies
no-alvo (aves, minhocas, peixes, entre outros), contaminao de solo e gua, cujas
dimenses tambm so impossveis de prever antes dos estudos a serem realizados (Nodari e
Guerra, 2000a).
Nestes 20 anos de cultivo de plantas transgnicas j foram observados danos aos
organismos no alvo, contaminao de variedades crioulas, aumento no uso de agrotxicos,
aumento no nmero de plantas resistentes a herbicidas, aparecimento de novas pragas, entre
outros.

Contaminaao genetica
Refere-se ao acasalamento entre indivduos sexualmente compatveis, geralmente da
mesma espcie e, raramente, de espcies afins. O acasalamento uma via para o fluxo
gnico, entre plantas da mesma espcie, como entre plantas de diferentes espcies. Assim,
de longa data tm sido observados cruzamentos entre indivduos de populaes em estado
incipiente de especiao ou de espcies aparentadas. Exemplos disso so os cruzamentos
entre o arroz cultivado e o arroz perene, milho e teosinto, um de seus possveis ancestrais
(Doebley, 1990), beterraba cultivada e beterraba no domesticada e entre espcies cultivadas
e inos do gnero das abboras (Wilson, 1990).
Os impactos ecolgicos da transferncia de plen, um mecanismo reprodutivo pelo
qual a introgresso pode ocorrer, dependem da capacidade dos hbridos em sobreviver e
reproduzir. Taxas de sobrevivncia ou de reproduo indicam a oportunidade da introgresso
de transgenes em populaes naturais, dependendo do fluxo gnico subseqente e da
presso de seleo (Wolfenbarger e Phifer, 2000). Estes autores relataram 11 casos de
formao de hbridos entre variedades transgnicas e plantas aparentadas e/ou daninhas.
Para se tornar uma ameaa, como uma planta invasiva, os hbridos precisam ser viveis e
competitivos, alm de frteis quando dependem da reproduo sexual para propagao. Com
base no se conhece hoje, nem todos os hbridos vo atingir a ltima fase.
Os poucos estudos associados introgresso de transgenes e suas conseqncias
ecolgicas em populaes naturais ainda no permitem fazer previses confiveis. Contudo, a
experincia anterior com plantas de lavoura sugere que os efeitos negativos so possveis.
Para doze das treze espcies de maior importncia econmica mundial, a hibridizao com
parentes selvagens contribuiu para a evoluo de algumas espcies de ervas daninhas. Em
alguns casos, os elevados nveis de introgresso a partir de parentes cultivados ou

74
introduzidos eliminaram a diversidade gentica e contriburam para sua extino (Ellstrand et
al., 1999).
Quando so viveis e havendo fertilidade, mesmo baixa, a sobrevivncia dos hbridos
interespecficos se torna possvel, e estes podem cruzar com plantas de qualquer uma das
duas espcies parentais. Caracteriza-se, ento, o processo de introgresso de genes de uma
espcie para outra. No caso do cruzamento entre canola transgnica e a mostarda silvestre, o
nmero de sementes da segunda gerao do hbrido foi dez vezes maior do que o F 1.
Algumas plantas descendentes do cruzamento produziram 10 mil sementes e o gene de
resistncia ao herbicida ainda permanecia numa grande quantidade de plantas. Isto
demonstra que a transferncia de genes que condicionam resistncia a herbicidas pode
ocorrer com maior intensidade e facilidade do que se imaginava antes desta descoberta
(Chvre et al., 1998).
Uma vez dentro de populaes silvestres, os transgenes podero tornar estas plantas
mais invasivas e, portanto, potencialmente perigosas para a agricultura ou a biodiversidade
(Fontes et al., 1996). Mas tambm pode ocorrer, segundo as autoras, que a presena do
transgene diminua a adaptao natural, o que tornaria a populao vulnervel extino. No
caso de transferncia de outras caractersticas para outras espcies afins, praticamente nada
pode ser antecipado, devido ausncia de dados. Contudo, se o valor adaptativo de um
hbrido interespecfico for aumentado com a presena deste gene transferido, factvel que tal
gene se mantenha via introgresso.
O nmero de contaminaes de variedades crioulas ou mesmo convencionais por
transgenes aumenta todo o ano. Um conjunto de organizaes da sociedade civil vem
acompanhando e registrando estas contaminaes
(www.gmcontaminationregister.org). Entre 1997 e 2006 ocorreram 107 contaminaes
genticas; 24 cultivos ilegais e 8 efeitos colaterais agrcolas negativos. Destes 144 casos
comprovados, envolveram 44 pases, sendo a media de 14,2 ao ano. O mais espantoso que
35% ocorreram com milho, que um alimento nobre.
A liberaao da soja RR no Brasil prejudica quem nada ter a ver com isso: os produtores
orgnicos, por exemplo. Abaixo est o relato de um entre centenas de casos j comprovados.
Dedicado ao cultivo de produtos orgnicos, sem agrotxicos e com sementes naturais,
por mais de 30 anos, o agricultor Max Enro Dockhorn, de 73 anos, desistiu, no ano
passado, da lavoura de soja que mantinha em uma rea de 70 ha no municpio gacho
de Trs Passos. "Na safra de 2005 para 2006 perdi metade da minha produo
orgnica. No momento de vender, testes identificaram protena transgnica na minha
soja", conta Dockhorn, desapontado com os meses de dedicao lavoura. Alm da
perda de valor, que superava os 10 reais por saca, ele teve de pagar royalties por ter
sido acusado de usar sementes transgnicas. ...bastou que, ao redor de minha
propriedade, outros produtores usassem sementes transgnicas para haver a
contaminao". Os riscos da omisso, Revista Carta Capital, p.22-29, 18/07/2007
Diante disso comearam as preocupaes com a coexistncia. A coexistncia significa
a possibilidade efetiva, para os agricultores, de escolherem entre o modo de produo
convencional ou biolgico, ou ainda a produo de culturas GM, no respeito das obrigaes
legais em matria de rotulagem ou de normas de pureza. A rigor, impossivel ocorrer a
coexistncia sem contaminao.
A CTNBio baixou a Resoluao Normativa n 4, de 16 de agosto de 2007 e publicada no
DOU, n 163 de 23/08/2007, p.19. Nela esta estabelecido que Para permitir a coexistncia, a
distncia entre uma lavoura comercial de milho geneticamente modificado e outra de milho
no geneticamente modificado, localizada em rea vizinha, deve ser igual ou superior a 100
(cem) metros ou, alternativamente, 20 (vinte) metros, desde que acrescida de bordadura com,
no mnimo, 10 (dez) fileiras de plantas de milho convencional de porte e ciclo vegetativo
similar ao milho geneticamente modificado (art. 2).

75
 Ironicamente ou intrigantemente, no mesmo dia a CTNBio aprovou o evento MON810,
milho transgenico, por meio do Parecer Tcnico n 1.100/2007, de 16 de agosto de 2007.
Nele, est escrito que Comparando-se as concentraes a 1 m da cultura fonte sob ventos
baixos a moderados estimou-se que, aproximadamente, 2% de plen so anotados a 60 m,
1,1% a 200 m e 0,75-0,5% a 500 m de distncia. Ou seja, a RN n 4 totalmente ineficiente
para garantir a coexistncia sem contaminaao caso o que est contido no prprio parecer da
CTNBio, o pollen do milho deve se disseminar pelo menos a 500 m de distncia.
No s o cultivo de variedades melhoradas no-transgnicas, mas a agrodiversidade,
que pode ser definida como a diversidade de espcies agrcolas, composta de variedades
crioulas mantidas pelos agricultores, tambm pode ser ameaada pelo cultivo dos
transgnicos. Na anlise dos riscos est sendo ignorada uma realidade fundamental: o plen
de milho pode ser carregado pelo vento at 9,6 km. Segundo o professor Walter Fehr,
melhorista da Iowa State University, "no somente o que voc faz. tambm o que seu
vizinho faz", ressaltando que agricultura vizinhana, quando se trata de identificao,
segregao e rotulagem de cultivos transgnicos. Com esta mobilidade do plen, uma simples
lavoura de transgnicos pode contaminar vrias outras no-transgnicas, numa rea
relativamente grande.
Em diversos municpios do Sul do Brasil, esto sendo organizadas anualmente Feiras
de Sementes. Na segunda edio de uma delas, realizada em 15 de julho de 2000 em Porto
Unio (PR), 49 representantes de comunidades situadas em 13 municpios expuseram
amostras de 41 variedades crioulas de milho e 46 de feijo, para citar apenas duas das 51
espcies identificadas na referida feira. Surpreendentemente, formas de teosinte tambm so
mantidas pelos agricultores daquela regio. Assim como esta, uma ampla diversidade de
espcies e formas dentro de espcies exposta ano a ano nestas feiras de sementes.
Ensaios com variedades crioulas feitas por tcnicos da Emater/RS, em David Canabarro,
revelaram que seu potencial chegou a mais de seis toneladas por hectare (Dados no
publicados). Alm do rendimento, estas variedades crioulas contm uma ampla gama de
caractersticas, com alta variabilidade gentica, estando continuamente submetidas ao
processo evolutivo e gerando, anualmente, novas recombinaes.
Estudos recentes feitos pro professores e estudantes do Programa de Ps-graduao
em Recursos Genticos Vegetais detectou tanta diversidade gentica no Oeste de Santa
Ctarina, que a regio pode ser enquadrada como um micro centro de diversidade gentica de
milho (Costa et al., 2016). A equipe de estudos encontrou 1513 variedades crioulas, sendo
1078 de oipoca e 337 de milho. Alm disso, tipos ancestrais do milho, os tesosintes, tambm
foram encontrados na regio.
Esta agrodiversidade deve ser considerada nas avaliaes de riscos ambientais. O
mnimo que se pode fazer informar aos agricultores o que poder acontecer com seus
materiais, caso transgnicos sejam cultivados nas proximidades e levar em considerao a
opinio deles. Toda esta rica diversidade est ameaada em razo dos interesses de uns
poucos.

Transferncia horizontal ou lateral (TH)

Quando existe transferncia de genes entre espcies filogeneticamente diferentes, na
ausncia do acasalamento sexual, configura-se a transferncia lateral ou transferncia
horizontal. Neste caso, o material gentico transmitido de uma espcie para outra,
provavelmente com auxlio de vetores (plasmdios, transposons e vrus). Elementos similares
a transposons so veculos para cortar e ligar DNA genmico de um organismo noutro. Vrus
tambm poderiam ser responsveis pela transmisso de genes entre eucariotos. Na verdade,
os mecanismos de transferncia lateral so pouco estudados e, portanto, praticamente
desconhecidos.

76
 Diversos casos de absoro de DNA por parte de clulas eucariotas foram tambm
registrados (Tappeser et al., 1999). Num deles, foi demonstrado que o DNA fornecido na
alimentao de ratos no s no era totalmente destrudo no trato gastrointestinal, mas
tambm poderia alcanar a corrente sangnea e temporariamente ser detectado nos
leuccitos ou clulas do fgado. Outros exemplos de deteco de DNA de eucariotos em
bactrias e animais, como DNA de milho transgnico em bactrias de intestino de abelhas ou
DNA de milho transgnico em vrios rgos de galinhas, esto sendo noticiados pela
imprensa, mas necessitam aparecer em publicaes cientficas ou serem validados
cientificamente. A transferncia horizontal bem mais conhecida em bactrias, sendo os
eventos menos comuns em animais e no homem comparativamente a plantas e
microrganismos.
Experimentalmente, Nielsen et al. (2000) verificaram que o DNA de beterraba
transgnica pode ser transferido para Acinetobacter sp. Strain BD413, uma bactria de solo.
Neste caso, a TH ocorreu de um extrato celular para plasmdeos de bactrias. Casos de
transferncia via recombinao homloga so mais freqentes do que se imaginava (Nielsen
et al., 1998).
Uma pergunta comumente feita relaciona-se com as conseqncias da introduo em
plantas de genes (intactos ou modificados) originados de vrus patognicos. Trocas de
material gentico tambm podem ocorrer entre plantas e vrus. A primeira evidncia
experimental sobre a recombinao entre uma planta transgnica contendo genes virais e um
vrus foi obtida por Greene e Allison, em 1994, embora este tipo de recombinao j fosse
conhecido desde os anos 80. A introduo de genes que codificam a capa protica originada
de vrus patognicos, ou outras seqncias virais, utilizada para conferir s plantas
resistncia aos prprios vrus doadores. difcil estabelecer as conseqncias, caso este
gene seja transferido para outras plantas. Contudo, um vrus poder infectar um planta
transgnica que tem a protena do encapsulamento de outro vrus. Neste caso ocorrer uma
transencapsidao, cujas conseqncias so totalmente desconhecidas.
Recentemente tambm, um estudo com arroz transgnico, conduzido no John Innes
Institute, da Inglaterra, corroborou a evidncia de que o promotor do vrus do mosaico-da-
couve-flor (CaMV), que tambm est presente na maioria das plantas transgnicas e nas suas
prognies, um stio de alta freqncia de recombinao gnica. Recombinao gnica a
troca de material gentico entre duas molculas de DNA, altamente similares geneticamente,
que pode resultar numa terceira molcula diferente das duas parentais, e, portanto, um
variante. O mais intrigante, entretanto, que os autores verificaram que a maioria dos eventos
era do tipo de recombinao ilegtima ou no-homloga e no requeriam uma similaridade
substancial na seqncia de bases. Tais eventos podiam ocorrer mesmo na ausncia de
genes virais (Kohli et al., 1999). Alm disso, a seqncia de bases do promotor do CaMV,
usado em vrias plantas transgnicas, como a soja e o milho, similar a regies de vrus
patognicos espcie humana. Desta forma, no se pode descartar a possibilidade de
recombinaes entre o transgene e outros vrus, resultando em novas combinaes genticas,
cujas propriedades no so conhecidas, mas que necessitam ser estudadas antes do cultivo
em larga escala de plantas que contm estas seqncias. A priori, no se pode descartar,
ento, que a inseroinsero de seqncias virais em plantas poder tornar os vrus mais
promscuos e com isto provocar mais doenas em plantas.
Embora no se conhea a magnitude da contribuio da engenharia gentica para a
transferncia horizontal, possvel levantar a hiptese de que o cultivo em larga escala de
plantas transgnicas deve favorecer a TH. Geralmente, as plantas transgnicas contm
elementos mediadores da transformao in vitro, ou parte deles, e tambm da TH, como
plasmdeos, transposons e vrus. Os vetores utilizados para a obteno de plantas
transgnicas freqentemente apresentam na construo quimrica origem de replicao,
seqncias de transferncia, promotores fortes e genes de resistncia a antibiticos. Todos
estes elementos facilitam a recombinao e a transferncia de genes. Plasmdeos e vrus
quimricos esto sujeitos a instabilidades estruturais, o que facilita tambm a recombinao

77
(Ho et al., 1998). Na natureza, a poluio com metais pesados pode se constituir em fator
benfico para a transferncia de genes. Como parte das seqncias introduzidas so
homlogas a muitos procariotos, a transferncia de material gentico para eles via
recombinao factvel. Dependendo das seqncias introduzidas na planta transgnica,
haver uma maior ou menor probabilidade de favorecimento para a TH.
Outro aspecto importante est relacionado com a freqncia de ocorrncia da TH.
-17
Embora, algumas estimativas sejam baixas, como 2x10 , o nmero de cpias em cultivo
poder ser muito alto. O fato de que uma planta pode conter mais de dois trilhes de clulas, e
um hectare de soja mais de 300 mil plantas, permite supor a probabilidade da existncia de
-18
mais de 1,2 x 10 de cpias por hectare, de um transgene. Considerando o cultivo em pelo
menos cinco milhes de hectares, no difcil concluir que uma ou mais recombinaes
podem de fato ocorrer, mesmo porque, a probabilidade de sua ocorrncia, embora baixa,
finita, ou seja, tem um valor que influenciado por vrios fatores.
So duas, ento, as principais implicaes da TH. A primeira refere-se maior
probabilidade de transferncia horizontal de genes a partir de plantas transgnicas
comparativamente s variedades tradicionais. A segunda refere-se ao fato de que os genes
com potencial de disseminao podem dar vantagem seletiva aos organismos receptores, o
que poder alterar dramaticamente a dinmica das populaes e a paisagem. Como ainda
no possvel determinar a probabilidade de um evento de TH ocorrer, bem como suas
conseqncias, torna-se praticamente impossvel fazer qualquer previso realstica na
ausncia de novos estudos.

Ameaas diretas aos componentes da biodiversidade

As ameaas aos componentes da biodiversidade so mltiplas, pois, em um
ecossistema devem ser considerados no somente os organismos vivos, mas tambm os
processos ecolgicos.
Um trabalho que causou grande impacto na comunidade cientfica avaliou o efeito do
plen de milho transgnico em lagartas da borboleta monarca (Danaus plexippus). A taxa de
mortalidade destas lagartas atingiu 44% quando se adicionaram ao seu alimento natural folhas
de Asclepias curassavica, plen de uma variedade de milho transgnico, que contm um gene
de Bacillus thuringiensis (Bt) que codifica para uma toxina, que txica a vrios insetos.
Entretanto, todas as lagartas que receberam plen de milho no-transgnico ou nenhum
plen, sobreviveram (Losey et al., 1999). O trabalho recebeu crticas metodolgicas, porm,
um ano depois, resultados semelhantes foram obtidos em experimentos no campo. Neste
caso, o plen das variedades de milho transgnicas KnockOut (evento 176) e YieldGard (Bt
11), ambos da Novartis Seeds, tambm provocou mortalidade (Hansen Jesse e Olbrycki,
2001).
Tambm se conhece pouco sobre as possveis alteraes na associao entre plantas
e fungos micorrzicos. O primeiro estudo sobre os exudatos na rizosfera de plantas
transgnicas foi publicado recentemente (Saxena et al., 1999). Nesse trabalho observou-se
que as toxinas inseticidas Bt podem permanecer ativas no solo, onde se ligam a argila e
cidos hmicos. Mesmo ligadas a estes componentes do solo, as toxinas mantm suas
propriedades inseticidas e so protegidas contra a degradao por microrganismos porque
esto ligadas s partculas do solo, onde podem persistir por pelo menos 234 dias. Quais so
as implicaes destes fatos?
Nas regies de ocorrncia natural de alta diversidade gentica de uma espcie ou
espcies afins, como o caso de algodo, milho ou amendoim no Brasil, o cultivo de plantas
transgnicas destas espcies merece anlise mais rigorosa. No Mxico, por exemplo, ainda
no foi liberado o cultivo comercial de milho transgnico, devido existncia de extensas
reas com populaes ancestrais e parentes silvestres da espcie. O Brasil ainda bero de
vrias espcies cultivadas ou apresenta regies com alta variabilidade gentica nas

78
populaes crioulas ainda em cultivo, situao esta que requer muita cautela. Como avaliar
adequadamente este tipo de risco sem dvida um grande desafio.
A determinao de riscos de plantas transgnicas que contm inseticidas complexa.
No se conhece ainda profundamente o efeito destas sobre insetos ou outros organismos
benficos. Tampouco, os poucos estudos sobre pssaros ou outros animais que se alimentam
de insetos que se alimentam de plantas transgnicas no proporcionam um conhecimento
amplo do assunto.
J h considervel literatura cientifica sobre os efeitos adversos do produto expresso
do transgene rCry1Ab em organismos no alvos. Alguns exemplos so aqui resumidos.
Hilbeck et al. (1998) estudaram a toxicidade da toxina rCry1Ab em um agente de controle
biolgico Chrysoperla carnea. O estudo demonstrou que 57% das larvas de C. carnea
morreram quando alimentadas com uma dieta contendo toxina Cry1Ab. Em um estudo com
camundongos alimentados com milho GM MON863, observou-se que eles mostraram-se
fracos, com sinais de toxicidade hepatorrenal, com 24-40% de aumento dos triglicerdeos nas
fmeas e diminuio de 31-35% da excreo de sdio e fsforo na urina em machos (Seralini
et al., 2007). Abelhas (Apis mellifera) expostas a diferentes concentraes da protena
rCry1Ab (3 e 5000 ppb) mostraram comportamento alterado depois de expostas a maior
concentrao de protena rCry1Ab e levavam mais tempo para absorver o xarope
contaminado com a protena rCry1Ab (Ramirez-Romero et al., 2008). Um estudo
ecotoxicolgico com Daphnia magna alimentada com milho MON810, que contm uma verso
do transgene rCry1Ab, demonstrou que esta sofre uma reduo significativa do valor
adaptativo (fitness) comparado com as alimentadas com o milho isognico. A mortalidade dela
foi maior, a proporo de fmeas que alcanaram a maturao sexual foi menor e a proporo
de ovos foi menor em comparao a D. magna alimentada com milho isognico no GM
(Bhn et al., 2008). Bhn e colaboradores (2010) realizaram outro estudo com a mesma
espcie alimentada com milho MON810. Os autores observaram que nas populaes de D.
magna alimentadas com rao contendo milho GM a taxa de crescimento, sobrevivncia e a
fecundao nos primeiros estgios de vida foram desfavorecidas. Rosi-Marshall et al. (2007)
detectaram uma diminuio na taxa de crescimento ou mesmo mortalidade de espcies
anfbias aquticas. Desta forma, neste momento seria recomendvel que a empresa
proponente realizasse estudos similares com os transgenes envolvidos nesta proposta nos
distintos backgrounds genticos. Rosi-Marshall et al. (2007) detectaram uma diminuio na
taxa de crescimento ou mesmo mortalidade de espcies aquticas. Desta forma, neste
momento seria recomendvel que a empresa proponente realizasse estudos similares com os
transgenes envolvidos nesta proposta nos distintos backgrounds genticos.
Em resumo, existe ameaa a diversidade biolgica decorre da liberao de um OGM
devido as propriedades do transgene ou de sua transferncia e expresso em outras
espcies. A adio de um novo gentipo numa comunidade de plantas pode proporcionar
vrios efeitos indesejveis: deslocamento ou eliminao de espcies no domesticadas,
exposio de espcies a novos patgenos ou agentes txicos, poluio do pool gnico,
eroso da diversidade gentica e interrupo da reciclagem de nutrientes e energia.

Riscos socioeconmicos, com nfase na agricultura

Dentre eles, os mais relevantes seriam o aumento da populao de pragas e
microrganismos resistentes e/ou patognicos, o aumento ou promoo de plantas
espontneas (indevidamente denominadas de plantas daninhas) resistentes a herbicidas, a
contaminao de variedades crioulas mantidas pelos agricultores, a contaminao de
produtos naturais como o mel, a diminuio da diversidade em cultivo com o aumento da
vulnerabilidade gentica, a dependncia dos agricultores a poucas empresas produtoras de
sementes, igual ou menor produtividade e os altos preos das novas variedades.
Um fato inquestionvel: os insetos que so susceptveis a toxinas de Bt por ocasio
do lanamentp das variedades transgnicas, sero no futuro resistentes a uma ou mais

79
toxinas de Bt. Resta saber em quanto tempo. Se houver uma grande rea plantada com
variedades transgnicas resistentes a um inseto, somente os resistentes sobrevivero,
gerando prognies recombinantes, que eventualmente apresentaro maior nvel de resistncia
toxina. Aps vrios ciclos de recombinao, devero aparecer insetos resistentes ao gene
Bt. No caso de esta resistncia ser condicionada por genes dominantes, a velocidade do
aumento da freqncia dos alelos de resistncia extraordinariamente maior,
comparativamente quela observada para alelos recessivos. J existem mais de 500 insetos
resistentes a inseticidas. Porque ento as toxinas recombinantes de Bt tambm no iriam
selecionar insetos resistentes? Mas esta foi a promessa, sem base cientitica. Veja abaixo.
Com o cultivo em larga escla de plantas produtoras de toxinas, cria-se uma
superpraga, como j ocorreu com o uso de agrotxicos. O fato de que a resistncia da
lagartas de lepidpteras s formulaes comerciais de Bt (ex: Dipel) seja controlada por um
gene parcialmente dominante (Huang et al., 1999) indica que o sistema de refgio s ser
efetivo por poucos anos, porque a maioria da prognie dos insetos ser resistente toxina e,
portanto, atacar as variedades Bt. Conforme j era esperado do ponto de vista cientifco, o
aumento de frequncia de insetos pragas resistentes as toxinas de Bt vem aumentando
proporcionalmente ao aumento da rea em cultivo das variedades transgnicas que produzem
estas toxinas. Em levantamento feito e publicado plea Revista Nature Biotechnology,
Tabashnik et al. (2013) j relataram a ocorrncia de cinco espcies de insetos praga
resistentes as toxinas BT.
O que de fato acontece com a frequncia dos insetos resistentes, alvos e no-alvos,
nas condies nas condies de cultivos de plantas transgncias que produzem toxinas
recombinantes j est constatado pelos estudos cientficos. A resistncia a campo s toxinas
Bt em cultivos GM foi relatada pela primeira vez em 2006 para S. frugiperda em Puerto Rico
(ex: Storer et al., 2010). Muitos outros casos de resistncia a campo foram confirmados
posteriormente (ex: Huang et al., 2011; Gassmann et al., 2011; Kruger et al., 2011). As causas
da resistncia foram atribudas principalmente falta de cumprimento dos produtores que no
seguem estritamente as exigncias para o plantio de reas de refgio com variedades no-
GM. Entretanto, segundo os autores dos quatro estudos acima referidos, a dose de toxina
poderia ter sido muito baixa ou varivel para matar consistentemente insetos resistentes
heterozigotos. Por exemplo, estudos anteriores revelaram que a variao sazonal e espacial
do teor de toxinas rCry em algodo GM tem sido frequentemente ligada a caractersticas das
plantas e s condies ambientais (ex: Showalter et al., 2009). Neste mesmo ano, outro
estudo demonstrou em milho Bt, que concentraes da toxina Cry diminuram medida que
as plantas avanaram no estdio de crescimento, mas as mudanas sazonais na
concentrao de toxina so variveis entre toxinas e cultivares (Nguyen et al., 2009). As
razes para a reduo sazonal da concentrao da protena rCry permanecem obscuras, mas
podem estar relacionadas com a instabilidade do mRNA, a declnio da atividade do promotor,
a reduo do metabolismo do nitrognio, a menor produo global de protenas, e as
interaes de toxina (ex: Chen et al., 2005; Olsen et al., 2005). Neste ano de 2015, um novo
estudo (Reisig e Reay-Jones, 2015) concluiu que no houve reduo em peso larval, nmero
de insetos ao entrar no estdio pupal, peso de pupas, tempo para ecloso e nmero de pupas
capaz de eclodir com sucesso para a vida adulta de Helicoverpa zea no hbrido expressando
rCry1Ab em comparao com um hibrido isognico. Como as toxinas de rCry1Ab vem
afetando estes insetos desde 1996, H. zea pode estar desenvolvendo resistncia a rCry1Ab
no milho, embora esses resultados no so abrangentes, pois os dado so limitados ao
perodo de amostragem (que foi de dois anos), tamanho e geografia da rea cultivada. Os
autores tambm verificaram que os impactos negativos sobre o crescimento e
desenvolvimento larval foi maior no milho hbrido com empilhado comparativamente aos
eventos simples.
O aumento dos custos de produo j uma realidade em vrios pases. Na China, por
exemplo, a estratgia de refgio para algodo Bt transgnico no foi empregada pelos
agricultores. Como resultado, as pragas secundrias se tornaram importantes e o custo com
inseticidas aumentou a tal ponto de que a rentabilidade das tecnologias convencional ou

80
transgnica se equivalem cinco anos aps sua implementao (Wang et al., 2006). O aumento
do uso dos agrotxicos nos cultivos transgnicos foi decorrente da alterao do status de
algumas pragas que eram secundrias e passaram a ser primrias e predominantes.
Sobre a rpida evoluo de pragas secundrias tornarem-se primrias na China, a
empresa atribui o fato inexistncia de um programa de manejo de insetos. Segundo o
mesmo artigo, em certas regies da China, o custo com inseticidas em lavouras de algodo
Bollgard aumentou a tal ponto que a rentabilidade das tecnologias convencional ou
transgnica se equivaleram cinco anos aps sua implementao.
Uma prtica sugerida pelos proponentes da tecnologia o uso de refgio, que consiste
no plantio de uma bordaura que varia de 10 a 20% da rea cultivada com variedades no
transgnicas e, portanto, variedades susceptveis a algumas pragas, o que permitiria o
acasalamento entre insetos susceptveis e resistentes. Uma das premissas para que o sistema
seja duradouro, que a resistncia dos insetos toxina Bt deve ser recessiva. Em caso
contrrio, rapidamente os alelos de resistncia sero prevalentes. Com o aumento rpido da
frequncia de insetos resistentes ao Bt, o uso atual de formulaes comerciais base de Bt
em lavouras orgnicas fica comprometido, como tambm a produo de produtos com este
tipo de inseticida, considerado muito menos txico que os demais.
O cultivo de plantas transgnicas tambm podem provocar o aparecimento de novas
pragas. Exemplo disso, foi o cultivo sucessivo de uma ou poucas variedades em grandes
reas levou a uma grande epidemia da Helicoverpa armigera nos plantios de variedades
transgnicas de algodo e soja, notadamente nos estados do nordeste. Este espcie no era
considerada praga nem da soja nem do algodo anteriormente ao cultivo de variedades
transgnicas.
A transgnia tambm pode levar ao aumento de pragas de solo. Na cultivar
transgnica de algodoeiro, Paymaster 1560 BG, resistente ao glifosato, observou-se um
aumento na susceptibilidade ao nematide-das-galhas (Meloidogyne incognita Kofoid e
White), quando comparado com o parental no-transgnico Paymaster 1560 (Colyer et al.,
2000). Outro estudo nos Estados Unidos, indicou que as variedades transgnicas que
carregam a toxina rCry3Bb1 ou a mCry3A foram atacadas pela Diabrotica virgifera, a larva
ocidental do milho (Western Corn Rootworm)(Grassman et al., 2013). Os resultados destes
trabalhos tambm indicam a necessidade de estudos sobre a reao de plantas transgnicas
s pragas e doenas antes da liberao para cultivo.
A dinmica das populaes de microrganismos de solo tambm poder ser afetada
pelo cultivo de plantas transgnicas. O uso de glifosato combinado ou no com outros
herbicidas nas doses recomendadas sobre o cultivo de Soja RR apresentou maior incidncia
de fusarium nas razes uma semana aps a aplicao, comparativamente soja no-
transgnica que no recebeu (Kremer et al, 2000). Os testes que foram realizados no campo
no perodo 1997-2000 revelaram que a freqncia de fusarium nas razes aumentou de 0,5 a
5 vezes entre a segunda e a quarta semana aps a aplicao dos herbicidas. O fusarium
causa a sndrome da morte repentina (SDS) em soja.
Outro impacto negativo o aumento de plantas resistentes aos herbicidas. Desde o
inicio do cultivo de variedades transgnicas tolerantes a herbicidas o nmero de espcies ou
populaes de plantas resistentes resistentes ao glifosato tem aumentado dramaticamente, o
que tambm tem provocado um aumento no uso do referido herbicida. Na pagina da internet
da Weed Science (www.weedscience.org) j foram registrados estudos que confirmaram
dezenas de populaes de plantas pertencentes a mais de 25 espcies que so comumente
denominadas de plantas daninhas e j resistentes a um ou mais herbicidas (ex: glifosato). Isto
requer o uso de outros herbicidas que por sua vez causam danos ambientais significativos nos
elementos da biodiversidade e de processos ecolgicos.
O processo submetido pela empresa proponente da Soja RR, menciona que a
liberao da variedade no era prov;avel que plantas daninhas resistentes a herbicidas a base
de glifosato se tornasse um problema. Entretanto, nenhum estudo foi aportado. Al;em disso,

81
j na poca da deciso da liberao comercial da soja RR, a CTNBio contatou que dentre as
mais de 100 plantas resistentes a herbicidas, trs delas so plantas daninhas resistentes a
formulaes comerciais base de glifosato: poaia-branca (Richardia brasiliensis), trapoeraba
(Commelina virginica) e erva-quente (Spermacoce latifolia) (CTNBio, 1998).
Mais do que isso, a prpria soja RR se tornou uma planta invasora, porque os gros
que ficam na susperficie do solo aps a colheita germinam e so resistentes ao glifosato.Isto
est obrigando os agricultores a utilziar outros herbicidas igualmente ou mais txiucos que o
glufosato. O fato de empresas produtoras do herbicida 2,4-D terem solicitado registro para uso
deste produto visando p controle da soja RR como planta invasoa a demonstrao do fato.
A soja RR tambm comou a perder a competitividade para a soja convencional ainda
em 2008 no Brasil. Pela primeira vez, os produtores de soja convencional tiveram mais
rentabilidade do que os de soja transgnica. A Confederao Nacional da Agricultura (CNA)
revelou que, este ano de 2008, a comercializao da saca de soja convencional dever render
ao produtor R$ 0,27 a mais do que a da convencional no Mato Grosso. A explicao para a
inverso o aumento de 46,2% no preo do glifosato, principal herbicida utilizado na cultura.
No Brasil, a Monsanto praticamente a nica empresa a comercializar o glifosato, com cerca
de 90% do mercado. Apesar do aumento do custo, vamos insistir na produo do transgnico.
No podemos perder este mercado, porque h oportunidades para os dois produtos - disse
Fbio de S Meirelles, da CNA. Com o aumento do preo, o custo de produo ficou
extremamente alto - disse Meirelles. O preo do litro do glifosato no Mato Grosso passou de
de R$ 8,00 para R$ 11,63 o litro na safra 2007/2008, o que gerou uma acrscimo de 23% nas
despesas em lavouras transgnicas e de 14,3% nas convencionais. O resultado foi um
aumento de 7,5% no custo operacional da soja geneticamente modificada e de 3,8% no da
convencional. (Cludia Dianni Viviane Monteiro - Jornal do Brasil 19/12/2007).
Posteriormente, a anlise dos custos de produo realizados pela EMBRAPA no Mato
Grosso do Sul para a safra 2010/2011 tambm indicou que a soja convencional tem menores
custos de produo que a soja transgnica. As estimativas de custo consideram dois sistemas
de produo, sendo um com soja convencional e outro com soja transgnica (RR). Os custos
de produo da soja convencional foram estimados em R$ 1.187,60 e os da soja transgnica
(RR) em R$ 1.219,86. O custo de produo na soja transgnica maior, tendo em vista que a
semente transgnica mais cara que a convencional e tambm porque sobre ela incide o
pagamento da taxa tecnolgica, que era de R$ 0,30 por quilograma em 2010 (Richetti, 2010).
Alm de herbicidas causarem aumento na frequncia de plantas resistentes aos
mesmo, em razo do grande aumento de seu uso provicado pela expansoo do cultivo de
variedades transgnicas, certas plantas transgnicas tem transferido, por meio de
cruzamentos, genes de resistncia a herbicidas para outras plantas da mesma espcie ou de
espcies afins (exemplos na Tabela 3.4). Um dos exemplos mais emblemticos a
contaminao de brassicas nativas ou naturalizadas nos Estados Unidos. Genes de
variedades transgnicas foram encontradas em 45% das amostras. Aproximadamente 80%
das amostras contaminadas com um transgene, 41% era com o transgene cp4 epsps, 39%
com o gene pat, que proporcionam resistncia ao Roundup e ao Glufosinato de amnio.,
respectivamente (Schafer et al., 2011). Alm disso, 0,7% apresentaram os dois transgenes.
Assim, este impacto tem consequncias de difcil mensuraoo, mas certamente impacta no
aumento dos custos da agricultura.

Tabela 3.4. Exemplos selecionados de transferncia de genes de resistncia a herbicida de

plantas transgnicas para suas plantas daninhas.
Cultura Planta espontnea (daninha) Herbicida Autor
Canola Mostarda silvestre Basta Chvre et al., 1998;
Schafer et al., 2011
Trigo Aegilops cylindrica Roundup Steven et al.,1998
Sorgo Johnson grass Roundup Arriola e Ellstrand,
1998

82
 Beterraba Beterraba no domesticada Roundup New Scientist,
21/10/2000
Agrostis stolonifera A. canina, A. capillaris, A. Roundup Wipff e Fricker, 2000;
castellana, A. Gigantea e A. Snow, 21012
Pallens.
Arroz Arroz vernelho Glufosinato de Busconi et al., 2013
amnio

O artigo More "Funny" Honey, publicado no FOEE Biotech Mailout, aborda aquesto da
perda de status do mel como alimento sadio e natural, como resultado da poluio causada
pelos OGM. Anlises efetuadas no mel indicaram a presena de plen de canola transgnica
tolerante a um herbicida. Este mel, coletado na Inglaterra em 1999 e analisado no Austrian
Federal Laboratory em Vienna revelou a presena de DNA do gene de resistncia ao mesmo
herbicida. Os apicultores do Canad tambm esto tendo problemas com a comercailizao
do mel, pois anlises feitas na Europa detectaram contaminao com plen de canola de
variedades transgnicas. Agora, diante das novas normas da Europa, os apicultores se
sentem sem o menor poder de reao e os preos do mel (contaminado) despencaram.
O comportamento das abelhas foi afetado quando exposto a alta concentrao de
protena rCry1Ab, sendo que as abelhas levaram mais tempo para absorver o xarope
contaminado com a toxina Bt. Alm disso, as abelhas expostas a 5000 ppb de Cry1Ab tiveram
sua aprendizagem perturbada. As abelhas continuaram a responder a um odor condicionado,
mesmo na ausncia de uma recompensa do alimento (Ramirez-Romero et al., 2008). Os
resultados deste trabalho indicam que as plantaes transgnicas expressando a protena
rCry1Ab podem impactar a eficincia das abelhas no forrageamento. Anteriormente, trabalhos
efetuados em abelhas com inibidores de proteases demonstraram efeitos adversos quando
abelhas foram alimentadas com acar contendo os referidos inibidores (Pham-Delgue M.-
H., 1997).
No estudo conduzido por Rtolo et al. (2015) foram avaliados 12 sistemas de produo
de gros da Argentina, USA, Itlia,Brasil e Mxico, caracterizados por diferentes praticas
agrcolas e intensidades em uso de recursos. Os resultados mostraram uma clara
insustentabilidade de ambos padres de cultivo a base de hbridos convencionais e a base de
OGM. Sua fragilidade interna deriva de sua dependncia de alta intensidade de insumos, o
uso recursos no renovveis, de modo que o desempenho de seus indicadores a base de
emergia no diferem substancialmente entre si. Os sistemas baseados em OGM no
demonstraram melhor desempenho que o sistema padro que usa sementes hibridas
convencionais em termos de comercializao, ambiental e termodinmico. Comparado
agricultura de subsistncia, ambos os padres de hbridos convencionais ou GM esto longe
de serem sustentveis, quando se utiliza baseado indicadores ambientais. Alm disso, os
autores constataram que quando todos os custos de produo e inflao so apropriadamente
levados em conta, os sistemas que usam OGMs no confirmam maior rentabilidade
econmica reivindicada, nem mesmo quando o comrcio internacional analisado. Segundo
os autores. os resultados sugerem que as solues para atividades agrcolas sustentveis
no viro da intensificao de ferramentas de alta tecnologia e uso de recursos, mas, ao
invs, dependero do melhor equilbrio de no uso dos recursos locais renovveis e recursos
importados no renovveis e de tecnologias apropriadas.

As alternativas s plantas transgnicas

As principais demandas dos mais de seis milhes de pequenos agricultores familiares
no Brasil, os quais, historicamente, ainda produzem a maior parte dos alimentos que chega
mesa dos consumidores, no esto associadas necessidade das plantas transgnicas, mas,
sim, necessidade de polticas publicas como a agrcola e a agrria que visem

83
sustentabilidade e rentabilidade de suas atividades. Assim, a necessidade e a urgncia das
plantas transgnicas para a agricultura brasileira uma falsa questo. importante mencionar
que as plantas transgnicas desenvolvidas at o presente momento no atendem s
necessidades da pequena propriedade familiar, ainda preponderante no pas. As evidncias
cientficas da utilizao de plantas transgnicas com caractersticas de resistncias a
herbicidas (por exemplo, RR) ou portadoras de biocidas (por exemplo, Bt) na produo de
commodities agrcolas nas grandes propriedades revelam o aumento na freqncia de plantas
invasoras e insetos resistentes aos transgenes, implicando a vida curta dessas tecnologias.
Isto gerar demandas de novas tecnologias (variedades transgnicas e/ou agrotxicos), o que
aumentar o grau de dependncia dos agricultores. A avaliao de risco deve
necessariamente conter informaes sobre outras alternativas que poderiam ser utilizadas,
bem como um comparativo entre os riscos das diversas solues.
Assim, preciso avaliar simultaneamente alternativas sustentveis do ponto de vista
agrcola e ambiental. Uma delas seria a agrodiversidade, termo empregado para definir a
diversidade gentica (intra-especfica) e a diversidade de espcies (interespecfica) em cultivo
nas propriedades agrcolas. Recentemente, pesquisadores chineses demonstraram que a
heterogeneidade das culturas uma alternativa possvel vulnerabilidade das monoculturas
s doenas. Observou-se que variedades de arroz susceptveis doena bruzone, cultivadas
em mistura com variedades resistentes a esta doena, apresentaram 89% de acrscimo na
produtividade e uma reduo de 94% de severidade dessa molstia comparativamente
monocultura (Zhu et al., 2000). O sucesso dessa tcnica, que a simples mistura de
diferentes variedades, foi to significativo que, no segundo ano, no foi necessria a aplicao
de fungicidas. Os resultados mostraram que a diversificao intra-especfica das culturas
proporciona um ambiente adequado para o controle de doenas que pode ser efetivo em
grandes reas, podendo contribuir para a sustentabilidade da produo agrcola.
Dentre os vrios sistemas agrcolas sustentveis ou alternativos, a agroecologia surge
com muitas qualificaes: no uso de insumos qumicos, ambientalmente sustentvel, uso de
grande diversidade gentica em cultivo em geral scio-econmico associada, vizinhana, e
com produtos alimentcios de alta qualidade biolgica. No mbito da agroecologia e no da
agricultura industrial ou qumica, h inmeras oportunidades para a C&T desenvolver
pesquisas participativas, contextualizadas, que podem empoderar tanto a agricultura familiar,
quanto as comunidades tradicionais no aperfeioamento dos processos e princpios
agroecolgicos utilizados. Assim, muitas das externalidades negativas atualmente
inadmissveis poderiam ser evitadas (Nodari e Guerra, 2015).
O pas que detm a maior diversidade de espcies vegetais certamente deve ter um
nmero de espcies comestveis e agricultveis capaz de proporcionar diferentes dietas
balanceadas para as diferentes populaes, respeitando-se sua cultura e suas necessidades.
Vitamina A ou caroteno, por exemplo, so encontrados em dezenas de espcies comestveis.
O fato que as plantas transgnicas esto sendo consideradas como a nica maneira de
aumentar a competitividade. Mas anlises comparativas com outras matrizes de produo
agrcola ainda no foram feitas.

12-PRINCIPIO DA PRECAUO

importante ter em mente que a engenharia gentica opera com base na manipulao
do DNA de organismos vivos. Esta interveno ocorre em mbito muito mais complexo do que
qualquer outra tecnologia j anteriormente aplicada. Esta tecnologia aplicada em um nvel
de funcionamento da natureza a respeito do qual nossa base de conhecimento cientfico
ainda insuficiente (Griffiths, 1999).
Embora tenha havido avanos no conhecimento cientfico sobre os riscos associados
ao cultivo de plantas transgnicas, o desenvolvimento da tecnologia de OGM ainda se baseia
em processos do tipo tentativa e erro, portanto, imprecisos e pouco cientficos. Assim, os

84
cientistas tm poucas condies de prever o comportamento do novo gene no organismo
hospedeiro, sendo inadequado caracterizar-se a transgenia como science-based technology.
Em suma, a engenharia gentica encontra-se em seu estgio bsico de pesquisa e cincia,
sendo ainda prematura a liberao comercial de plantas transgnicas (Guerra e Nodari, 1999).
Desta forma, assume importncia a adoo do Princpio da Precauo, estabelecido
em acordos internacionais, como um princpio tico que afirma que a responsabilidade pelas
futuras geraes e pelo meio ambiente deve ser combinada com as necessidades
antropocntricas do presente. Adotado no prembulo da CDB-, o Princpio da Precauo
destaca que quando exista ameaa de sensvel reduo ou perda de diversidade biolgica, a
falta de plena certeza cientfica no deve ser usada como razo para postergar medidas para
evitar ou minimizar essa ameaa. Assim, a adoo do Princpio da Precauo, se constitui em
alternativa concreta a ser adotada diante de tantas incertezas cientficas. Desta associao
respeitosa e funcional do homem com a natureza, surgem as aes antecipatrias para
proteger a sade das pessoas e dos ecossistemas. Este princpio deve guiar as atividades
humanas, mas incorpora outros atributos, como justia, equidade, respeito, senso comum e
preveno (Raffensperger e Tikner, 1999). Tambm, este princpio admite que a adoo de
cautela poderia evitar conseqncias danosas que, eventualmente, um OGM possa
apresentar como resultado de sua liberao apressada ao meio ambiente.
As avaliaes, ainda iniciais, dos impactos ambientais potenciais, podem permitir uma
deciso balanceada entre os possveis benefcios e a extenso e irreversibilidade dos danos e
riscos. importante que a toxicidade ambiental relativa seja incorporada na anlise das
mudanas de padres de uso e quantidade de pesticidas, e que os impactos das culturas
tolerantes a herbicidas na conservao do solo sejam quantificados. Por outro lado, devem ser
tomadas medidas que possam prevenir a transferncia de genes para populaes selvagens,
bem como reduzir a evoluo da resistncia aos transgenes.
Como concluem Wolfenbarger e Phifer (2000), tanto os riscos quanto os benefcios dos
OGM podem variar temporal e espacialmente e devem ser analisados caso a caso. A
elucidao destes riscos e benefcios dos OGM envolve a necessidade de estudos
comparativos com outros sistemas e prticas agrcolas, tais como a agricultura orgnica.
Nossa capacidade de predizer os impactos ecolgicos de espcies introduzidas, incluindo
OGM, imprecisa e os dados empregados para avaliar impactos ecolgicos potenciais
apresentam limitaes. Esta inabilidade de predizer acuradamente as conseqncias
ecolgicas, especialmente no longo prazo, aumentam a incerteza associada avaliao de
riscos, exigindo modificaes nas estratgias de manejo destes riscos.
O intrigante neste momento de crise no uso das biotecnologias ditas modernas que
muitos dos riscos potenciais previamente anunciados esto de fato ocorrendo. Em 1989,
Tiedje e colegas, e Pimentel e colegas mencionaram que os principais riscos potenciais dos
OGM ao meio ambiente seriam: criao de novas pragas e plantas daninhas e um aumento
das pragas j existentes por meio da recombinao gnica entre a planta transgnica e outras
espcies filogeneticamente relacionadas; a produo de substncias que so ou poderiam ser
txicas a organismos no-alvos; o efeito disruptivo em comunidades biticas e o desperdcio
de valiosos recursos genticos, seguido de contaminao de espcies nativas com
caractersticas originadas de parentes distantes ou de espcies no relacionadas e efeitos
adversos em processos dos ecossistemas e origem de substncias secundrias txicas aps
a degradao incompleta de qumicos perigosos. Trabalhos publicados confirmaram os dois
primeiros. Quanto aos dois ltimos h a necessidade de estudos.
Princpio da precauo inseparvel da posio tica mais geral, segundo a qual
irresponsvel participar do tipo de pesquisa que leva a inovaes tecnocientficas, a no ser
que pesquisas rigorosas e sistemticas, de dimenses comparveis, sobre as consequncias
(riscos) ecolgicas e sociais em longo prazo de sua implementao sejam efetuadas.
imprescindvel levar em conta as condies socioeconmicas das implementaes
planejadas; a no ser que pesquisas adequadas, localizadas num espao de alternativas bem

85
escolhido e pertinente para a avaliao do valor social geral (benefcios) das implementaes,
seja conduzida (LACEY, 2005 e 2009).

O Principio da Precauo est estabelecido no artigo 1 da nova lei de biossegurana.

Portanto, obrigao de todos os brasileiros observarem.

13. ROTULAGEM

A rotulagem dos alimentos est prevista no Cdigo de Defesa do Consumidor (Lei n

8.078, de 11/09/90 art. 6, III e art. 8). Trata-se ento de uma norma, que garante ao
cidado ser informado sobre um produto, o que lhe permite o direito de escolha. Alm disso, a
rotulagem permite a rastreabilidade, pois em casos de efeitos na sade humana, os produtos
rotulados seriam facilmente identificados e recolhidos.
No Brasil, a fiscalizao sobre a rotulagem est a cargo da Vigilncia Sanitria.
Contudo, a deciso e mesmo o contedo e outras caractersticas do rtulo, est no mbito do
Ministrio da Justia.
O Decreto n 4.680, de 24 de abril de 2003, regulamenta o direito informao,
assegurado pela Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1990, quanto aos alimentos e
ingredientes alimentares destinados ao consumo humano ou animal que contenham, ou seja,
produzidos a partir de organismos geneticamente modificados, sem prejuzo do cumprimento
das demais normas aplicveis. Na comercializao de alimentos e ingredientes alimentares
destinados ao consumo humano ou animal que contenham, ou seja, produzidos a partir de
organismos geneticamente modificados, com presena acima do limite de um por cento do
produto, o consumidor dever ser informado da natureza transgnica desse produto. Tanto
nos produtos embalados como nos vendidos a granel ou in natura, o rtulo da embalagem ou
do recipiente em que esto contidos dever constar, em destaque, no painel principal e em
conjunto com o smbolo a ser definido mediante ato do Ministrio da Justia, uma das
seguintes expresses, dependendo do caso: "(nome do produto) transgnico", "contm (nome
do ingrediente ou ingredientes) transgnico(s)" ou "produto produzido a partir de (nome do
produto) transgnico". O consumidor dever ser informado sobre a espcie doadora do gene
no local reservado para a identificao dos ingredientes. A informao tambm dever constar
do documento fiscal, de modo que essa formao acompanhe o produto ou ingrediente em
todas as etapas da cadeia produtiva.
A rotulagem consitui-se em:
NECESSIDADE DE SABER - A rotulagem plena um requisito fundamental e
imprescindvel para se estabelecer uma efetiva vigilncia dos alimentos
contendo OGMs e seus derivados.
DIREITO DE SABER Direito previsto no Cdigo de Defesa do Consumidor. O
tipo de gene inserido, os aspectos religiosos e os valores culturais e pessoais
devem ser considerados.
CONVENINCIA DE SABER um requisito que considera o quantitativo de
ADN e de protena recombinante no produto final (Ex: acima de 1%).

Em termos de sade pblica, tudo tem que ser rotulado, no importa quanto tem dentro
da embalagem.
A nvel internacional existe um Grupo de Trabalho de Rotulagem que foi encarregado
de preparar uma verso preliminar a ser discutida na reunio do Codex Alimentarius.
Tomando-se em considerao o que houve na Conferncia de Partes da CDB, pode ser que
ainda no ano de 2000, a reunio do Codex tambm aprove as normas internacionais de
rotulagem dos alimentos transgnicos ou que contenham ingredientes de OGMs.

86
 14- NOVA TECNOLOGIA CRISPR
Adicionar, remover ou alterar sequncias de DNA tem sido essencial para realizar
estudos que buscam a compreenso gentica de caractersticas fenotpicas. Depois da
Tecnologia Recombinante, desenvolvida h pouco mais de 40 anos, surge com a promessa
de eficincia e facilidade de uso sem precedentes, a tecnologia de edio de DNA
denominada de CRISPR (clustered regularly interspersed short palindromic repeats), porque
baseada em repeties palindrmicas curtas intercaladas regularmente agrupadas). Se
associada a protena Cas9 (que uma nuclease) o sistema considerado pelos seus
proponentes como completamente revolucionrio em termos de engenheirar os genomas.
Este padro de sequncias CRISPR aparece em mais de 40% das bactrias e em 90 % dos
micrbios pertencentes a Archaea (The CRISPR Craze. Science, v. 341, 23 August 2013,
p.833-836).
Trata-se de processos naturais que incluem de corte da dupla fita do DNA por enzimas
e seus posterior reparo com possibilidade de inserir, deletar ou mesmo altera sequncias de
DNA. O sistema baseia-se na CRISPR bacterianas e de Archaeas, que parte do sistema
imune adaptativo para expurgar ou mesmo degradar o DNA virai ou plasmidial invasor, que se
baseia na atividade conjunta da endonuclease CRISPR e da protena Cas, com a
especificidade da sequncia dirigida por RNAs CRISPR (crRNAs).
In vivo, quando CRISPR entra em ao em resposta a um fago invasor, as bactrias
transcrevem os espaadores e o DNA palindrmico formando uma molcula de RNA longa
que a clula, em seguida, corta em RNAs curtos derivados de espaadoras, denominados de
crRNAs. Um segmento adicional de RNA, chamado tracrRNA, atua com Cas9 para produzir o
crRNA. Juntos, Cas9, tracrRNA e crRNA de alguma forma atacam o DNA exgeno (invasor)
que coincide (matches) com o crRNA.
A protena Cas9 uma nuclease, enzima especializada em cortar DNA, nos dois stios
(locais) ativos de corte, um sitio para cada fita da dupla hlice do DNA. Como possvel
desativar a habilidade da Cas9 de cortar em um ou nos dois stios de corte, sem interferir na
capacidade complexa de reconhecer o seu DNA alvo, permitiu que o sistema CRISPR/Cas9
pudesse ser desenhado para reconhecer alvos e alterar o genoma de outros organismos.
Assim, in vitro, o sistema foi adapatado da seguinte maneira. O sistema CRISPR tipo II
de Streptococcus pyogenes composto por trs genes, incluindo um que codifica para a
nuclease Cas9 e dois genes de RNA no-codificantes: trans-activao crRNA (tracrRNA) e
precursor crRNA (pre-crRNA). O pre-crRNA programvel, que contm sequncias de nuclease
guia (espaadores) interespaadas por repeties diretas idnticos, processado para se
tornar crRNA em combinao com tracrRNA. Os dois genes de RNA podem ser substitudos
por um gene de RNA recombinante de guia nica (gRNA), contendo um gancho (hairpin)
desenhado que imita o complexo crRNA- tracrRNA. A especificidade da ligao da Cas9 com
o DNA alvo determinada por ambos o emparelhamento de bases entre gRNA-DNA e um
domnio proto-espaador adjacente (PAM, sequncia: NGG) imediatamente a jusante
(downstream) da regio alvo. Ambos os domnios da nuclease Cas9 (HNH e RuvC-like)
cortaro uma fita de DNA da cadeia dupla no mesmo local (trs nucleotdeos [distante do
PAM), resultando em uma quebra (corte) na dupla fita. O sistema Cas 9/CRISPR tem sido
aproveitado para realizar a edio eficaz do genoma de uma variedade de organismos,
incluindo bactrias, leveduras, plantas e animais, bem como linhas de clulas humanas. Mais
importante, o uso desta tecnologia de endonuclease guiada por RNA, mltiplas mutaes de
genes e a sua transmisso nas linhas germinativas foram alcanados (Xing et al., 2014).
Com a tecnologia CRISPR/Cas9, os cientistas envolvidos com o desenvolvimenyto da
mesma, admitem que podem criar modelos de ratos que simulam doenas humanas muito
mais rapidamente do que antes, como tambm estudar genes individuais muito mais rpido e,
por fim, facilmente alterar mltiplos genes nas clulas de uma s vez para estudar suas
interaes.

87
 Atualmente, vrias empresas comercializam kit CRISPR/Cas9 para diferentes genes
como alvo de alterao ou sequencias alvos para insero de transgenes. Alternativamente,
possvel fazer o prprio sistema em laboratrio.
Como a tecnologia CRISPR / Cas9 funciona:
a) Uma molcula de RNA introduzido numa clula. Ele serve como um guia para localizar
um segmento (sequncia) especfico de DNA que contm um gene o pesquisador quer editar.
Quando a molcula de RNA encontra o gene correto, o RNA se liga na sequncia de DNA do
gene;
b. Cas9, uma enzima bacteriana ligada ao RNA guia (gRNA), corta a sequncia de DNA no
local desejado do genoma;
c. Uma vez que o genoma quebrado (cortado), a clula ir tentar reparar o corte, que pode
desativar ou nocautear um gene especifico. Ou inserir um novo segmento (sequncia) de DNA
no corte, essencialmente colando um gene no local desejado e alterar o genoma;
d. Mesmo pequenas mudanas no genoma normalmente far com que ele pare de funcionar;
isto seria til quando se tenta evitar a expresso de uma caracterstica indesejada.

88
 PARTE 4 DIREITOS DE PROPRIEDADE INTELECTUAL
1-DIREITOS DE PROTEO E PATENTES
A proteo propriedade intelectual incide sobre criaes do intelecto humano, no
abrangendo a descoberta de algo preexistente. Assim a patente a expresso legal do
privilgio temporrio (explorao comercial) concedido pelo Estado pessoa fsica ou jurdica,
pela criao de algo novo. Para ser patentevel o invento deve ser descrito de tal maneira que
possa ser reproduzido por qualquer pessoa que tem competncia na arte. Alm disso a
inovao deve ter uso prtico definido.
Para obter a patente, a inveno deve ser tambm novidade. Uma criao mecnica
nova quando ainda no foi divulgada publicamente. No caso de microrganismos, mesmo que
identificados recentemente, existiu previamente em estado natural e ento no seria novidade.
A maioria dos pedidos de patentes em biotecnologia se constituem em descobertas em no
em invenes, e ento no seriam patenteveis. Um invento no pode ser bvio: deve
expressar soluo inovadora, em relao ao estado da arte - distinto de descoberta, referente
a algo desconhecido, porm preexistente (Schneider, 1993). Neste caso, tanto as enzimas
quanto os genes utilizados em plantas transgnicas preexistiam na natureza assim como os
princpios ativos de organismos vivos usados na industrializao de produtos diversos.
O Congresso Nacional aprovou a lei n 9.279 de 14 de maio de 1996 (DOU de
15/05/96), que regula direitos e obrigaes relativos propriedade industrial. Apesar dos
quatro anos de tramitao, a discusso deste complexo projeto na comunidade cientfica e
mesmo na sociedade ocorreu de forma tmida, infreqente e superficial Sua aprovao
ocorreu num ambiente de divergncia de opinies e presses polticas e econmicas, as mais
diversas. Entre as caractersticas da lei, merecem destaque:
- A sua complexidade: a lei possui 243 artigos e complexa do ponto de vista tcnico
- Ao detentor de patentes so conferidos amplos direitos e praticamente nenhum dever;
- Uma vez concedida a patente, se cria o monoplio. A lei, ento restringe a soberania
com relao a proteo de determinados setores da economia nacional;
- patentevel a inveno que atenda aos requisitos de novidade, atividade inventiva
e aplicao industrial;
-No se considera inveno nem modelo de utilidade: o todo ou parte de seres vivos
naturais e materiais biolgicos, encontrados na natureza, ou ainda que dela isolados,
inclusive o genoma ou germoplasma de qualquer ser vivo natural e os processos biolgicos
naturais;
- No so patenteveis: o todo ou parte de seres vivos, exceto microorganismos
transgnicos que atendam aos trs requisitos de patenteabilidade - novidade, atividade
inventiva e aplicao industrial e que no sejam mera descoberta... Neste caso,
microorganismos transgnicos so organismos, exceto o todo ou parte de plantas e animais,
que expressem, mediante interveno humana direta em sua composio gentica, uma
caracterstica normalmente no alcanvel pela espcie em condies naturais;
O patenteamento de genes poder vir a conflitar com o registro de uma nova cultivar,
nos pases onde adotado o esquema de Direito de Proteo de Cultivares. Caso o gene seja
isolado por um laboratrio mas inserido em plantas por uma outra instituio, o direito de
comercializar e cultivar a nova variedade provavelmente dever reembolsar duas novas
operaes at agora no feitas no Brasil. Como conseqncia, o custo da semente dever
aumentar significativamente, dependendo do gene transferido. Nos pases da Europa, a
companhia de melhoramento pagar os 'royalties' pelo uso do gene nos seu programa e

89
cobrar 'royalties' sobre o uso e comrcio de eventuais OGMs que desenvolver com tal gene.
O tipo de acordo entre as partes ainda est sendo estudado. A regulamentao nos pases
europeus vai ainda prever a transferncia de genes inseridos de PTs para outras cultivares.
Muitas patentes 'amplas' (ex: qualquer mtodo de modificao de genes de Bacillus
thuringiensis) tem sido concedidas nos Estados Unidos. Em decorrncia disso, est havendo
uma srie de aes na Justia de vrias empresas contra a empresa detentora da patente.
As patentes na rea da transgnia esto causando muitos embates juridicos e ticos.
Nos EUA, Michael Hansen, especialista da Associao dos Consumidores, de forma
consciente e crtica possibilidade de patentear sementes transgnicas, indaga-se com a
seguinte incongruncia: ao mesmo tempo em que dizem que no h necessidade de testar
as plantas transgnicas, pelo fato de serem similares s suas homlogas convencionais,
solicitam patentes, sob a alegao de que os OGMs representam uma criao nova.
"A possibilidade de patenteamento de tecnologias transgnicas inseridas em
variedades permite no s a cobrana de royalties, o que aumenta os custos de produo,
mas tambm o privilgio de disponibilizar ou no um recurso gentico aos agricultores, o
que ameaa a soberania alimentar. O fato de o governo garantir patentes em tecnologias
transgnicas inseridas em variedades, alm de garantir a continuidade do apoio ao modelo
agrcola industrial, com todas as suas consequncias adversas, gera um paradoxo tico
profundo. Ao permitir que uma variedade seja indiretamente patenteada, o pas garante
proteo a uma tecnologia transgnica, legaliza uma apropriao indbita, que a
associao do transgene com outros 30 a 40 mil genes, fruto no s do trabalho dos
melhoristas passados, mas tambm de inmeras geraes de agricultores que mantiveram
e selecionaram tipos mais adaptados, a partir dos quais, os melhoristas desenvolveram
novas variedades. Assim, num passe de mgica, este patrimnio dos povos foi apropriado
por empresas transnacionais, sem nenhuma compensao. Ao contrrio, os usurios ainda
tem que pagar royalties" (Nodari e Guerra, 2009).

2-LEI DE PROTEO DAS CULTIVARES

Um dos primeiros pases a adotar a proteo de cultivares foi os Estados Unidos em
1930, com o Plant Patent Act. Esta medida garantia ao melhorista o direito de propagar as
mudas de variedades protegidas por um perodo de 17 anos. A justificativa utilizada para a
implantao da medida foi incentivar o investimento em pesquisas com plantas de propagao
vegetativa. Somente 40 anos mais tarde os Estados Unidos implantaram o sistema de
proteo de cultivares com propagao sexuada, o Plant Variety Protection Act.
O desenvolvimento de novas cultivares e de outras tecnologias agrcolas provocou um
grande impacto na agricultura mundial. Concomitantemente a isto ocorreu uma grande
mobilizao para estabelecer sistemas de proteo nos pases industrializados. No ano de
1961, em Paris, ocorreu a primeira conveno internacional que resultou na criao da Unio
Internacional para a Proteo de Obtenes Vegetais (UPOV). A UPOV um organismo
internacional, que estabelece os direitos de melhorista ou de propriedade intelectual sobre as
variedades melhoradas. Posteriormente esta conveno foi revisada em 1972, 1978 e 1991. A
adeso a uma das duas ltimas convenes (1978 ou 1991) requer que o pas tenha
estabelecido uma legislao prpria e compatvel com as diretrizes estabelecidas. Alm disso,
a Organizao Mundial de Propriedade Industrial (WIPO ou OMPI) determinou que os pases
membros que no tivessem estabelecido legislao sobre o assunto no poderiam aderir
Conveno de 78, estando automaticamente includos na Conveno de 1991.
O Brasil, que agora tem sua Lei de Proteo de Cultivares (Lei n 9456 de 25/04/97),
solicitou adeso a Conveno de 1978, a qual tem a preferncia da maioria dos pases, uma
vez que este o sistema de proteo mais adequado para o desenvolvimento agrcola
mundial. Atualmente, j assinaram esta conveno mais de 20 pases, entre os quais Canad,
Estados Unidos, pases da Europa, Argentina, Uruguai e Chile. Especialistas do mundo inteiro

90
tem sido unnimes em afirmar que a conveno de 1991 satisfaz preferencialmente as
grandes empresas produtoras de sementes em detrimento do interesse social. Por isto
mesmo, poucos pases aderiram a esta ltima conveno.
Embora em alguns pases exista o direito de patente sobre variedades, o acordo
TRIPS permitiu aos estados membros o direito de excluir da patenteabilidade as cultivares de
plantas e as raas de animais. O Brasil utilizou esta prerrogativa. A nova lei de propriedade
industrial (Lei n 9.279), tambm chamada de Lei de Patentes, aprovada em maio de 1996,
prev em seu art. 18 que as variedades vegetais no so patenteveis. Com a lei 9456, as
cultivares melhoradas passaram a ser protegidas pelos direitos de melhorista. A diferena
entre o sistema de patentes e o de direitos de melhorista, est basicamente restrita aos efeitos
da proteo. Ou seja, a proteo no to severa com os pesquisadores, agricultores e
consumidores, como o caso das patentes. Nos pases onde as patentes de cultivares so
permitidas, a proteo abrange at a fase de industrializao do produto primrio.
Alm desta lei, existem outros instrumentos que afetam o uso de recursos genticos
vegetais como a Conveno da Biodiversidade Biolgica (de 5/6/1992) e a Lei de Acessos,
que ora tramita no Senado Federal (PLS n 306, de 1995).

Principais aspectos da Lei de Proteo de Cultivares

Em consonncia com a legislao disponvel, o rgo a quem compete a proteo das
cultivares o Servio Nacional de Proteo de Cultivares (SNPC), vinculado ao Ministrio
da Agricultura e Abastecimento. A lei n 9456 no especifica claramente a estrutura nem as
atribuies deste rgo, o que foi feito recentemente atravs do MAA.
Para o registro de uma determinada cultivar no SNPC, a mesma deve ter nome prprio
e apresentar as caratersticas de distinguibilidade, homogeneidade e estabilidade
(simbolicamente abreviadas por DHE). Portanto, a variedade a ser protegida no poder ser
idntica a uma j registrada no pas ou em pases com os quais o Brasil tem tratados. No caso
de cultivares de autofecundao ou hbridos, a cultivar tambm deve apresentar a
caracterstica de homogeneidade, ou seja no poder apresentar misturas. Finalmente, a
cultivar tem que ser estvel, ou seja manter suas caractersticas atravs das geraes.
A Lei de Proteo de Cultivares protege pelo perodo de 18 anos as videiras, plantas
frutferas, florestais e ornamentais e por 15 anos, as demais espcies. A ata vigente da UPOV
a de 1978, pela qual os Estados membros devem aplicar a Conveno para um mnimo de
24 espcies ou gneros num prazo de 8 anos, aps a entrada em vigor lei. Em seu artigo 4, a
lei prev a incluso das mesmas gradativa. Assim, num primeiro momento a Lei abranger 5
espcies, s quais sero acrescidas de mais 5 aps 3 anos da regulamentao da lei. Outras
14 espcies sero incorporadas at o oitavo ano aps a regulamentao. Quando protegida, o
detentor do registro, chamado de titular, detm os direitos de melhorista. Ou seja, o produtor
de sementes (ou mudas) que quer utilizar a cultivar em lavoura comercial de produo de
sementes (ou mudas) dever ter licena do titular, a ser obtida mediante acordo. Por ocasio
da compra de semente (ou muda) de cultivar protegida para o primeiro plantio de lavoura
comercial, o agricultor estar pagando os royalties referente a proteo no preo final do
produto.
A lei ainda prev salvaguardas que permitem a interferncia do Ministrio da
Agricultura na multiplicao e comercializao das cultivares protegidas. A primeira delas a
licena compulsria que permite a explorao de uma cultivar protegida sem a autorizao de
seu titular. Nos casos de emergncia nacional ou abuso do poder econmico, uma cultivar
protegida poder ser tornar de uso pblico restrito. Entretanto, em ambos os casos, o titular
ter assegurado a remunerao referente a explorao e o assunto ter especificidade em
regulamento posterior.

91
Principais Implicaes da Lei
Do ponto de vista do produtor, a lei tambm flexvel ao lhe permitir utilizar como
semente para a safra seguinte, material colhido no ano anterior, com exceo da cana-de-
acar. Para os pequenos produtores, a lei permite alm do uso da prpria semente, a troca
de material protegido com outros pequenos agricultores sem ferir a legislao. Para tanto, o
interessado deve atender o que est previsto nas normas do INCRA para seu enquadramento
como pequeno produtor rural.
No mbito do Mercosul a existncia de um mercado livre, num curto prazo de tempo,
implica na necessidade de compatibilizao das legislaes dos Estados membros, que hoje
apresentam diferenas marcantes. Dos pases membros do Mercosul, agora s o Paraguai
no tem legislao prpria. Atualmente variedades desenvolvidas no Brasil esto sendo
cultivadas nos diversos pases da Amrica Latina e vice-versa, sem nenhum pagamento de
royaties. Por certo, esta situao dever ser outra aps esta lei.
Do ponto de vista tcnico, a questo mais polmica a possibilidade de proteo de
cultivar essencialmente derivada. O problema estabelecer as diferenas mnimas entre uma
cultivar essencialmente derivada e a cultivar ancestral protegida. Estas diferenas mnimas
so difceis e onerosas de serem estabelecidas. A prpria lei no seu artigo 3 (incisos III e IX),
no determina com preciso qual a margem mnima que separa ambas, ao remeter para
rgo competente o estabelecimento dos critrios de diferenciao.
Embora a lei de patentes proba o patenteamento de plantas e animais, ela permite o
patenteamento de processos, inclusive os biotecnolgicos. Neste caso haveria a
possibilidade de uma planta transgnica ser duplamente protegida, pela lei de cultivares e
pela lei de patentes. No Brasil, esta tm sido a forma preferida por empresas do setor para
tentar obter o patenteamento de plantas transgnicas. Este aspecto vm gerando
controvrsias em vrios pases, inclusive no mbito da Comunidade Europia uma vez que
alguns pases membros aceitam a dupla proteo Guerra e Nodari, 1997).

3- IMPLICAES DAS NORMAS DE PROPRIEDADE INTELECTUAL SOBRE

TRANSGNICOS
A complexidade que envolve o tema da propriedade intelectual de organismos
geneticamente modificados e seus derivados, disciutido no artigo de Pellanda e Nodari (2010)
aqui apresentado de forma resumida.
As patentes dos transgnicos - alm de envolver uma tecnologia incerta quanto aos
impactos causados pela produo e consumo em longo prazo produz reflexos negativos sob
vrios aspectos, tais como: econmico, cultural, ambiental e no direito do consumidor.
A partir dos efeitos da patenteabilidade dos transgnicos desenvolvidos nessa
pesquisa, possvel concluir que:
a) as patentes de sementes transgnicas trazem prejuzos econmicos, principalmente
aos agricultores, os quais ficam refns dessa tecnologia, por meio da obrigatoriedade do
pagamento de royalties principalmente a grandes multinacionais do ramo da transgenia e a
proibio de reutilizao de sementes sem o pagamento dessa taxa de uso, onerando
pequenas e grandes plantaes;
b) as patentes servem como incentivo ao investimento de empresas e agricultores em
gros produzidos em larga escala, ou seja, contribui ao avano da monocultura, resultando na
perda de conhecimentos tradicionais e na eroso gentica da diversidade gentica
anteriormente em cultivo;
c) as patentes de sementes garantem que seus detentores recebam royalties pelo uso
de sua tecnologia, os quais podem ser cobrados inclusive de agricultores que a produzem de
forma involuntria em razo da polinizao cruzada ou mistura de sementes;

92
 d) a disseminao do plen ou das protenas expressas pelas plantaes transgnicas
resulta em efeitos adversos a organismos no alvo, como a perda da biodiversidade,
produzindo reflexos negativos ao meio ambiente;
e) perde-se em segurana alimentar, uma vez que a populao poder consumir com
maior frequncia gros que, em sua maioria, so transgnicos, sendo tal fato desconhecido
pela maioria dos consumidores.
Por todas essas razes, verifica-se que o sistema de patente e proteo de cultivares
estabelece o monoplio sobre certas variedades, alm da apropriao indevida de recursos
naturais. Entretanto, esses recursos provindos da natureza - bem de uso comum de todos,
porm objeto dessa apropriao, aliados ao conhecimento tradicional, desenvolvido de forma
milenar e reconhecidos internacionalmente - devem ser protegidos em prol da preservao do
meio ambiente e da manuteno das culturas agrcolas e tradies das populaes. Assim, a
legislao nacional deveria assegurar de forma eficaz a proteo ao conhecimento tradicional,
a participao na repartio dos benefcios e a participao nas tomadas de decises. Porm,
se a vontade poltica existir para tal, haver a necessidade de mudanas na legislao vigente
sobre direitos de propriedade intelectual, tanto em termos de proteo industrial quanto de
cultivares.

4- BIODIVERSIDADE, BIOTECNOLOGIAS E AGRICULTURA

A biodiversidade no seu conceito mais amplo compreende todas as formas de vida,
ecossistemas e processos ecolgicos, reconhecendo hierarquias nos nveis gentico,
taxonmico e do ecossistema. A magnitude da biodiversidade brasileira no conhecida
com preciso tal a sua complexidade. A estimativa de que no territrio brasileiro existam
mais de 2 milhes de espcies distintas de plantas, animais e microorganismos. O Brasil o
pas com a maior diversidade gentica vegetal do mundo, contando com mais de 55.000
espcies catalogadas de um total estimado entre 350.000 e 550.000. Cerca de 2/3 destas
espcies se encontram nos trpicos, estimando-se que o Brasil detenha cerca de 75% de
todas as espcies existentes nas grandes florestas. Apenas 8% das espcies vegetais tem
sido estudadas em termos de compostos fitoterpicos bioativos e apenas 1.100 espcies de
plantas foram exaustivamente estudadas em suas propriedades medicinais (Guerra e
Nodari, 1996).
O potencial de utilizao sustentvel da biodiversidade fruto da disponibilidade de
matria-prima, tecnologia e mercado. Por exemplo, um parente silvestre do trigo originrio
da Turquia proporcionou genes para a resistncia a doenas, que transferidos para
variedades comerciais de trigo resultam num ganho anual de US$ 50 milhes, somente nos
EUA. Uma variedade de cevada da Etipia forneceu um gene de resistncia a vrus que
transferido para variedades em cultivo na Califrnia, proporciona uma economia de US$ de
160 milhes. Outro exemplo elucidativo o de Catharantus roseus, originrio de
Madagascar. As vendas pela Eli Lilly das drogas anti-leucmicas vincristina e vinblastina,
derivadas desta planta, atingem valores anuais de US$ 200 milhes.
Apesar da riqueza da nossa biodiversidade vegetal, a maior parte das atividades
econmicas baseia-se em espcies exticas: cana-de-acar originada de Nova Guin, caf
da Etipia, arroz das Filipinas, soja da China, cacau do Mxico, citros da China, trigo da Asia
Menor, eucaliptos da Austrlia, pinheiros da Amrica Central e gramneas forrageiras da
frica, entre outras.
Afirma-se que desde o incio da agricultura, em torno de 90% de todas as variedades
vegetais desenvolveram-se pelas "foras da natureza"; 9,9% por meio dos esforos da
humanidade at o incio deste sculo e apenas 0,1% pela utilizao de mtodos modernos
de melhoramento gentico. Apesar de no ser possvel precisar com segurana, as
chamadas variedades hbridas modernas, geradas principalmente nos pases com pesquisa
mais avanada, respondem por uma grande parte da produo agrcola mundial e a

93
expanso de grandes reas de monocultura com estas variedades poderia colocar em risco
o total da diversidade gentica. Afirma-se tambm que as sementes so um reflexo do
cdigo gentico da sociedade que as desenvolvem, produzindo rplicas dos sistemas
agrcolas destas sociedades e colocando novamente em cena a diviso entre um Hemisfrio
Norte rico em tecnologia mas pobre em recursos genticos e um Hemisfrio Sul pobre em
tecnologia mas riquissimo em diversidade biolgica. Estima-se que um gene potencialmente
til do Sul pode representar negcios de US$ 1 bilho no Norte e que o germoplasma do Sul
contribua com valores estimados em US$ 66 bilhes por ano na economia dos EUA,
prevendo-se o advento da revoluo do gene com genes patenteados pelas grandes
corporaes transnacionais, associando os recursos genticos como estratgia central para
controle do suprimento mundial de alimentos.
Revoluo Verde, Biodiversidade e Biotecnologias
A emergncia das biotecnologias na produo agrcola mundial vem ocorrendo em
um contexto de esgotamento de um modelo de explorao agrcola baseado na chamada
"revoluo verde". Estas tecnologias fundamentadas no uso intensivo de energia e insumos
no beneficiaram todas as culturas e todos os agricultores, especialmente os pequenos
produtores. De uma maneira geral estas tcnicas visavam uma adequao do ambiente
variedade melhorada. Os programas de melhoramento vegetal baseados na utilizao
racional da biodiversidade e orientados a uma agricultura sustentvel consistem em um
processo de ajuste de uma determinada variedade a um determinado ambiente.
A chamada revoluo verde caracterizou-se por alguns equvocos merecedores de
reflexo. O primeiro diz respeito ao fato de que os geneticistas foram solicitados a criar
variedades altamente produtivas em condies de abundncia de fertilizantes e gua e
apesar do xito inicial, essas variedades demonstraram suscetibilidade a pragas e doenas,
necessitando-se agregar mais um componente oneroso ao sistema de produo, os
pesticidas. O segundo relaciona-se excessiva sub-estimao dos desgastes ambientais
causados por concentraes excessivas de fertilizantes e pesticidas que acabaram por
contaminar mananciais de gua implicando em riscos para a populao. O terceiro diz
respeito ameaa a diversidade gentica em consequncia da disseminao em escala
global de poucas variedades.
O fluxo relativamente livre de materiais e informaes entre pesquisadores agrcolas
em diferentes pases do mundo essencial para reduzir as disparidades na capacidade de
pesquisa destes pases. Uma das maiores diferenas entre o sistema de pesquisa durante a
revoluo verde e aquele que emerge das biotecnologias que, enquanto o primeiro
caracterizou-se pela predominncia do domnio pblico nos investimentos e resultados da
pesquisa e pelo fluxo relativamente livre de informaes, o segundo vem se caracterizando
pelo domnio privado de investimentos e pelas restries no fluxo de informaes.
Biotecnologias e Agricultura
Nos anos 90, os setores da agroindstria, florestal e pesqueiro respondem por 40%,
4% e 1% do PIB brasileiro, respectivamente. Produtos da biodiversidade respondem por
31% das exportaes brasileiras, especialmente atravs do caf, soja e laranja. A biomassa
vegetal atravs do lcool da cana-de-acar, da lenha e do carvo derivados de florestas
nativas e plantadas, responde por 17% da matriz energtica nacional.
A obteno de plantas transgnicas depende basicamente da possibilidade de
identificar, isolar, clonar, transferir e integrar caractersticas importantes, sendo que, em
ltima anlise, o sucesso das tcnicas de engenharia gentica baseia-se na expresso
adequada do gene inserido. O escasso conhecimento sobre estes genes o principal
entrave para a aplicao destas biotecnologias avanadas na agricultura brasileira e uma
vez eliminados os entraves relacionados com a lei de patentes e de biossegurana, os
produtos a serem ofertados no mercado sero as variedades transgnicas resistentes a
herbicidas e as que contm genes de Bacillus thuringensis para resistncia a insetos. Outro
entrave a grande dificuldade na resoluo e manipulao de caracteres quantitativos, os

94
de maior importncia do ponto de vista econmico. Estas abordagens so estratgicas para
a ampliao de mercado de grandes empresas do setor no Hemisfrio Norte. No por
acaso, no ano de 1994, nos EUA, foram realizados 1.500 testes de campo com plantas
transgnicas, 28% dos quais sobre resistncia a herbicidas e 23% sobres resistncia a
insetos.
Dado o avano das biotecnologias na agricultura mundial cabe uma apreciao de
sua pertinncia no modelo agrcola brasileiro. Por biotecnologias pertinentes entende-se
aquelas tecnologias que contribuem ao desenvolvimento sustentado por serem
tecnicamente factveis dentro do nvel de desenvolvimento tcnico-cientfico do pas, por
trazerem benefcios mensurveis aos destinatrios, por serem ambientalmente seguras e
por serem socioeconomica e culturalmente aceitveis. Desta maneira cabe questionar quais
as biotecnologias pertinentes ao atual estgio de desenvolvimento da agricultura brasileira.
Das chamadas biotecnologias avanadas nfase poderia ser dada s modificaes dos
constituintes dos produtos agrcolas, visando o aumento de sua qualidade, como por
exemplo a alterao da biossntese de carboidrato e protenas de reserva. Tcnicas de
engenharia gentica podem ser aplicadas para a produo de tipos especficos de amido ou
alterar outros carboidrato como celulose e pectina. Genes que regulam a produo de
amilose e batatinha j foram clonados, sugerindo que a produo deste composto pode ser
manipulada. A engenharia gentica tambm poder contribuir para minimizar os efeitos do
estresse abitico sobre as cultura agrcolas. Plantas submetidas a condies limitantes de
seca, temperaturas e salinidade acumulam compostos de baixo peso molecular e a insero
de genes originados de bactrias permite o acmulo compostos de alto peso molecular
elicitando mecanismos de tolerncia nestas plantas.
J as chamadas biotecnologias intermedirias apresentam um potencial maior de
aplicao a curto prazo na agricultura brasileira. Entre elas cabe citar o desenvolvimento de
variedades com capacidade de fixao biolgica do nitrognio e de biofertilizantes como
fungos micorrzicos. Tcnicas associadas produo de bioinseticidas j so rotineiramente
empregadas na agricultura brasileira como o caso da produo do fungo entomopatgeno
Beauveria bassiana. Com isto pode-se diminuir os custos de produo bem como eliminar
os impactos negativos dos pesticidas sobre o ambiente e sade humana. Entre as
biotecnologias intermedirias observa-se um grande potencial para a utilizao dos
marcadores moleculares no mapeamento gentico. Uma das principais aplicaes destes
mapas genticos relaciona-se com a seleo assistida por marcadores (MAS). Esta
metodologia se baseia na escolha do marcador molecular como critrio de seleo na
expectativa de selecionar-se de forma indireta os alelos de interesse a ele ligados.
nas tcnicas de cultura de tecidos vegetais ou de micropropagao que se
observa o maior impacto das biotecnologias hoje no Brasil, principalmente no que tange
espcies ornamentais, frutferas e florestais. A propagao clonal massal de variedades
melhoradas e isentas de patgenos vem sendo empregada rotineiramente nos setores mais
avanados destas reas no Brasil. No estado do RS, o emprego de variedades de
moranguinho originadas da cultura de meristemas a partir da metade da dcada de 80, foi o
ponto de partida para a melhoria do sistema de produo desta cultura permitindo que a
produtividade mdia passasse de 3,6 para 40 t/ha. Hoje em todo o Brasil empregam-se
mudas provindas desta tcnica relativamente simples e de baixo custo. Impacto similar vem
ocorrendo com a cultura da batatinha, cuja produtividade mdia elevou-se de 10,7 t/ha em
1980 para 15,2 t/ha em 1995. Este aumento de produtividade foi atribudo principalmente ao
plantio de batatas-semente certificadas, livres de vrus, produzidas pela Embrapa. Em Santa
Catarina, nos laboratrios da EPAGRI foram desenvolvidos protocolos para a
micropropagao de mudas de bananeira livres de nematides e da broca da bananeira,
reduzindo drasticamente a necessidade de aplicao de pesticidas de alto impacto
ambiental, humano e com possveis efeitos residuais no fruto. Paralelamente a isto, instalou-
se um laboratrio de produo do fungo entomopatgeno Beauveria bassiana, permitindo o
controle biolgico do moleque da bananeira.

95
 Os exemplos anteriores mostram que, paradoxalmente, as biotecnologias
intermedirias so as que vem tendo maior aplicao no atual estgio de desenvolvimento
agrcola do pas. Esta constatao tambm valida para diversos pases da Amrica Latina
e do Caribe. Na Costa Rica, Honduras, Colmbia e em Cuba, a maior parte das mudas de
abacaxizeiros e bananeiras so produzidas por tcnicas de micropropropagao. Em
laboratrios da Costa Rica, Honduras e Cuba, tcnicas biotecnolgicas relativamente
simples como a seleo de linhagens celulares resistentes permitiram a obteno de
variedades de bananeiras resistentes molstia fngica sigatoka-negra (Mychosphaerella
fijiensis) (Izquierdo, 1995). Nos bananais de Cuba estima-se um gastos de US$ 700,00/ha
para o controle desta molstia. Em pases da sia um programa da FAO intitulado "Do
laboratrio ao campo: biotecnologia agrcolas para pequenos produtores" identificou e
recomendou as biotecnologias que deveriam estar disponveis e seu custos passveis de
serem absorvidos pelos pequenos produtores. Estas biotecnologias incluem a cultura de
tecidos para a micropropagao de variedades sadias de razes e tubrculos, frutferas e
ornamentais, inoculantes derivados de bactrias, fungos e algas, bioinseticidas, produo de
fungos comestveis. Este projeto vem revelando timos resultados nos pases de sua
abrangncia: Bangladesh, India, Indonsia, Nepal, Filipinas, Sri Lanka, Tailndia e
Vietname.

96
 PARTE 5 - BIOTICA EM RELAO AOS TRANSGNICOS
1-INTRODUO
A expresso tica resultante da fuso de duas palavras gregas: ethos - modo de ser
ou carter; mos ou mores - costume ou costumes. Refere-se avaliao normativa das aes
e do carter de indivduos e grupos sociais. Usada alternativamente com moralidade para se
referir s obrigaes e deveres que governam a ao individual. "A tica a teoria ou cincia
do comportamento moral dos homens em sociedade" (Vazquez, 1980). O estudo da tica a
reviso crtica sobre valores. Para tal h necessidade de liberdade e ausncia de
preconceitos.
A BIOTICA um neologismo: bios e ethos - modo de ser (tica) da vida. Trata das
questes ticas da medicina, da sade pblica e das cincias da vida. A biotica pergunta-se
sobre a legitimidade dos projetos de efeitos biotecnolgicos.
Em 1948 o Cdigo de Nuremberg foi estabelecido e contm normas para a pesquisa
com seres humanos. Estabelece ainda a responsabilidade individual do pesquisador.
Posteriormente, em 1964 houve um aperfeioamento do mesmo com a Declarao de
Helsinque e suas verses seguintes com as revises de 1975 (Japo), 1983 e 1989
(Venezuela).
A primeira Conferncia de Biossegurana foi realizada em Asilomar no ano de 1975.
Foram estabelecidas recomendaes para manuseio, conteno e armazenamento de
produtos perigosos bem como protocolos laboratoriais e os procedimentos associados aos
diversos tipos de riscos. Tambm foi declarada uma moratria voluntria com relao s
pesquisas na espcie humana (Science, 188:991-994, 1975) porque as previses dos
impactos eram impossveis de serem adequadamente conhecidas. O maior saldo foi o
respeito do pblico pelo gesto de precauo dos cientistas.
Em 1992 foi realizada a Conveno sobre Diversidade Biolgica (CDB) no Rio de
Janeiro, a qual contemplou a necessidade de um protocolo de internacional de biossegurana
visando proteger a sade e o meio ambiente.
Uma segunda conferncia, 25 anos depois, ou seja, no ano 2000, foi realizada em
Asilomar. Nesta conferncia, foram enfatizados o estreitamento do investimento privado e o
avano da cincia; a ampliao e o fortalecimento das leis de proteo, notadamente a de
patentes; a pressa na comercializao dos produtos e servios da biotecnologia; a omisso de
resultados; a falta de precauo e o rompimento de valores ticos. Em decorrncia, os
cientistas comearam a perder a credibilidade da sociedade e uma reao aos produtos das
biotecnologias, em especial os transgnicos.
O paradigma biotico atual refere-se ao padro de reflexo e argumentao sobre os
valores e suas justificativas a respeito da vigncia de competncia biotecnocientfica em
reprograma a vida de qualquer ser vivo. O prprio conceito de doena est sendo alterado,
pois ele poder no mais se restringir a um conjunto de sinais e sintomas, mas estender-se a
predisposies genticas para a manifestao de futuras sintomatologias.
Como um interesse um interesse, seja l de quem for esse interesse (Singer,
1984), a discusso deve ocorrer num ambiente de liberdade e sem preconceitos. Desta
forma estaria garantido o pluralismo do espao pblico bem como o politesmo e a tolerncia,
caractersticas do espao privado.
Tambm importante no debate identificar os conflitos de interesse, pois do debate
participam tanto pesquisadores independentes quantos aqueles ligados direta ou
indiretamente aos proponentes das tecnologias.

97
2. PERCEPO PBLICA
Embora a existncia de discusso permanente na sociedade, a questo das plantas e
animais transgnicos quase que desconhecido da maioria da populao brasileira. Tambm
para a maioria das pessoas que tm um diploma de ensino superior, estes tpicos so
indecifrveis. preciso ento desenvolver aes junto a populao no sentido de desconstruir
esta novidade. Para tal, a mdia bem como os cientistas tm um papel preponderante, se
engajados num processo educativo, sem paixes ou crenas. H a necessidade do
envolvimento de pessoas que tm conhecimento sobre o assunto de participarem sem
preconceitos ou interesses alm daquele de desconstruir este assunto complexo.
Inmeras ONGs esto envolvidas na discusso desta questo. Dias globais de ao
contra a Biotecnologia foram organizados. Contudo, nem tudo o que dito ou escrito tem base
cientfica ou tcnica. Um posicionamento pessoal com base em crenas pode levar o processo
ao descrdito.
Vrios pases realizaram pesquisas de opinio publica. Existem diferenas bastante
expressivas entre as populaes de diferentes pases com relao a aceitabilidade de
produtos transgnicos. Enquanto na ustria, Luxemburgo e mesmo Inglaterra a maioria da
populao rejeita, os japoneses manifestam-se favorveis ao consumo destes produtos. Mas
querem que o produto seja sadio e seguro. Tanto em 1998, como em 2005, a Sua realizou
plebiscito para decidir se o pas deveria banir ou no os produtos transgnicos em seu
territrio. Em ambos plebiscitos, os suos decidiram moratria pelo no uso de OGMs.
No cenrio internacional, o International Rice Research Institute (IRRI), que co-
patrocina o arroz dourado (transgnico para produzir vitamina A), fez uma pesquisa de opinio
pblica agora em 2001 perguntando: voc comeria arroz que foi geneticamente modificado?
Dos 1815 entrevistados, 76,97% responderam que no. Mesmo assim, o institruto vem
tentando testar e comercializar este OGM, ainda sem sucesso.
A questo da transgenia causa profunda perplexidade nas pessoas por vrios motivos.
Em primeiro lugar, a passagem da doena da vaca louca do alimento para as vacas e destas
para as pessoas ocorreu de fato, embora cientistas e polticos afirmaram que isto no iria
ocorrer. Um outro aspecto que a tcnica muito poderosa e isto assusta as pessoas. O
homem pode reprogramar o cdigo gentico e as pessoas no tm idia das consequncias
disto. Um outro aspecto est relacionado com o tipo de produtos. Os primeiros transgenes
diminuem a qualidade dos alimentos. Os consumidores querem algo melhor.
As pessoas reagem de maneira diferente. A maioria boicota as compras. Outras
praticam atos de sabotagem nas reas cultivadas com variedades transgnicas. Tanto na
Irlanda quanto na Inglaterra, dezenas de propriedades tiveram suas lavouras destrudas ou
altamente danificadas por grupos contrrios a biotecnologia.
No Brasil, os debates pblicos sobre a transgenia e suas conseqncias desde 1998
vm possibilitando o conhecimento da questo pela sociedade. Mas o fato que, a maioria da
populao ainda no est suficientemente informada, nem mesmo tem conhecimento
suficiente para entender e opinar a respeito de plantas transgnicas. Da a responsabilidade
inadivel do poder pblico, das universidades e dos tcnicos de prestar este tipo de servio
populao brasileira.
Os consumidores brasileiros, na sua grande maioria, tambm mencionaram, 16 anos
atrs, que no queriam consumir alimentos transgnicos conforme pesquisas efetuadas no
ms de julho de 2000 pelos jornais O Globo (72%), Correio Brasiliense (70%) e Gazeta
Mercantil (60%). Embora outras oesquisas foram feitos pelo IBOPE, no h informaoo sobre
o que pensam os brasileiros nesta dcada sobre os OGMs.

3.OS INTERESSES ECONMICOS DA TRANSGNIA

98
 Na maior parte dos casos de liberao de plantas transgnicas predominou o interesse
comercial destas grandes empresas. Isto pode ser comprovado pelas investidas frequentes do
governo americano junto aos pases europeus e Japo. Para citar apenas um exemplo, os
EUA atacaram a Comisso Europia que havia decidido pela rotulagem dos produtos
transgnicos, em junho de 1997, argumentando que isto contrariava o livre comrcio. Na
poca Dan Glickman, Secretrio da Agricultura, disse que os Estados Unidos no tolerariam
a segregao de produtos geneticamente modificados dos tradicionais. A resposta americana
pode ser exemplificada pela atitude da companhia Monsanto que misturou os gros
transgnicos com no transgnicos, obrigando os europeus a comprarem apenas o bulk com
a mistura.
Um episdio que ocorreu no ano de 2000, cujas conseqncias ainda no findaram,
ilustra vrios tipos de conflitos. O maior fiasco da biotecnologia como j considerado, trata-
se do StarLink. StarLink, um tipo de Bt que contm o gene Cry9C, foi aprovada nos EEUU
para alimentao animal mas no para consumo humano, pois contm uma protena que pode
causar reaes alrgicas em humanos, uma vez que a protena Cry9C no quebrada
imediatamente nos testes de digesto. A empresa produtora desta variedade (Aventis),
distribuiu as sementes sem nenhuma ressalva. Assim, houve contaminao de lavouras
vizinhas com plen desta variedade. Tambm, os milhos foram colhidos e misturados com os
demais. Resduos desta protena foram detectados em produtos alimentcios e bebidas, tanto
nos Estados Unidos quanto em outros pases. Conseqncias: alergia detectada em 7 de 54
pessoas suspeitas, necessidade de recolher no s o milho colhido mas tambm os produtos
j processados que poderiam contem a farinha contaminada com este milho, indenizao dos
supermercados, indenizao dos compradores no pas e no exterior, indenizao de
agricultores que tiveram sua lavoura contaminada pelo plen do StarLink. Estima-se um gasto
entre 100 milhes e 1 bilho de dlares, o custo da operao.
Dentre as vrias lies, duas so relevantes: 1) no foi possvel localizar 12% da
produo desta variedade, o que demonstra que uma vez liberado no ambiente, dificilmente
existir controle sobre um OGM; 2) as empresas no esto preocupadas com a sade das
pessoas nem com os agricultores, mas em vender seus produtos. Um outro tipo de conflito
comercial poder ocorrer entre agricultores, basicamente devido a contaminaes pelos
transgnicos. Ocorrendo cruzamentos entre plantas transgnicas e no transgnicas espcie,
poder criar conflitos entre produtores que utilizam transgnicos e produtores de alimentos
chamados orgnicos, que so considerados de alta qualidade biolgica. Como ser resolvido
este impasse? Um caso nos Estados Unidos implicou no prejuzo de US$170.000 a um
produtor cuja produo orgnica foi contaminada por milho transgnico Bt. Na Inglaterra e
outros pases existem muitas aes tramitando na justia, sobre esta questo, que ainda no
tem soluo fcil. O que acontecer no Brasil? Pergunta ainda sem resposta.
Plen de plantas transgnicas esto sendo coletados pelas abelhas e espalhados no
mel. J em 1999, Friends of the Earth, uma ONG, descobriu plen de canola tolerante a
herbicida (Arventis, ex AgrEvo) em abelhas cujas colmias estavam localizadas a 4 km de
distncia do experimento de OGM mais prximo. Implicao da poluio gentica: o mel est
perdendo o status de alimento sadio e natural. Os apicultores esto sendo forados a se
retirar das reas prximas dos testes com OGMs: danos aos produtores de frutas e hortalias.
Carregamentos de mel orgnico enviados do Brasil a Europa retornam porque estavam
contaminados por polen de plantas transgnicas. Os danos so tanto para os apicultores
como para os produtores de frutas, cujas consequncias podero ser muito srias. A questo
da responsabilidade sobre a poluio ainda no est resolvida na Inglaterra.
Uma dessas suposies que, se algum investe em uma inovao tecnocientfica,
est autorizado a recuperar os custos do investimento e gerar um lucro. Assim, no processo
de implementao da tecnologia, os riscos (para a sade, para o ambiente etc.) tornam-se
secundrios, no por se ignorar os riscos conhecidos, mas por no se aceitar o nus de
chegar a antecipar teoricamente os possveis riscos e comprov-los e certamente para no
respaldar o nus dos custos de avali-los [...] (Lacey, 2006).

99
 Um dos impactos menos discutidos no mbito da transgenia em plantas refere-se
dependncia tecnolgica dos agricultores ao grande complexo industrial-gentico, expresso
utilizada por Berlan e Lewontin (1999) para designar as grandes empresas transnacionais do
setor biotecnolgico, que nos ltimos 20 anos passaram a atuar de forma agressiva na
apropriao dos recursos genticos.
Em seu artigo publicado no Le Monde Diplomatique (janeiro de 1999), os referidos
autores apresentam e discutem quatro argumentos sobre a apropriao dos recursos
genticos vegetais por parte deste complexo gentico-industrial, cuja sntese pode ser assim
descrita:
1) A riqueza das variedades agrcolas foi criada por agricultores de todo o mundo, em especial
aqueles do terceiro mundo. A domesticao e a seleo feita por agricultores por milhares de
anos gerou uma herana biolgica que beneficiou as naes industrializadas. A agricultura
norte-americana, por exemplo, foi construda em cima desses recursos, livremente importados
do resto do mundo. No justo que poucas companhias agora se apropriem dessa herana
biolgica universal.
2) O aumento (sem precedentes) nas colheitas do mundo industrializado, assim como do
terceiro mundo, pode ser atribudo ao livre movimento de conhecimento, aos recursos
genticos e pesquisa pblica. As colheitas aumentaram cinco vezes em duas geraes,
depois de serem necessrias 15 geraes anteriores para esta colheita dobrar. Na dcada de
70, quase todos os hbridos norte-americanos de milho resultaram do cruzamento de duas
linhagens, originadas de programas de melhoramento de universidade pblicas.
3) A experincia mostra que o custo de privatizar o progresso gentico e ser exorbitante.
Estudos feitos na Frana pelo Institut National de la Recherche Agronomique (INRA), mostram
que o custo adicional das sementes de trigo hbrido equivale a US$ 500 milhes (oramento
do INRA) para um ganho gentico que poderia ser mais facilmente obtido usando-se
variedades crioulas produzidas pelos agricultores.
4) Desistir dos direitos sobre essa herana significa liberar o complexo gentico-industrial para
direcionar o progresso tecnolgico unicamente para os lucros. Da forma como a questo vem
sendo conduzida pelas grandes empresas, no h uma demanda social para OGMs. O termo
somente uma cortina de fumaa para as demandas desse complexo gentico-industrial.
Como possvel perceber, so muitas as implicaes dessa tecnologia e estas
precisam ser profundamente avaliadas, explicitadas e discutidas, pois do interesse de toda a
sociedade a percepo clara dos seus possveis riscos e benefcios.

4. A RELAO DA COMUNIDADE CIENTFICA COM O GOVERNO

Para ilustrar a fealao entre parte da comunidade coientifica e o governo o episdio da
vaca louca muito ilustrativo. A investigao que ocorreu na Inglaterra visando elucidar o
veredicto final da comisso especialmente formada para aconselhar uma deciso do governo
a respeito da vaca louca, trouxe a tona, uma discusso a respeito da relao entre cientistas
e governo.
Em sua edio de 5 de agosto deste ano, a Revista Nature, alm de considerar o
assunto em seu editorial, informa na pgina 490, que os membros do Spongiform
Encephalopathy Advisory Committee (SEAC) foram pressionados por representantes
governamentais no sentido de endossar um parecer sobre a segurana da carne. Membros da
referida comisso declararam que foram procurados por membros de rgos governamentais
que solicitaram-lhes a aprovao de um texto que a carne bovina era segura. Segundo o
Presidente desta comisso, os membros se sentiram inconfortveis e apreensivos em ter que
aprovar uma nota to curta.
intrigante o fato de que as verses do parecer circulou por diversas autoridades
inglesas para comentrios. A temeridade da reao pblica expressada por autoridades

100
governamentais fez com que a comisso retirasse frases do parecer final tipo nenhum
cientista diria que no haveria risco em comer carne bovina.
A abdicao de se basear em dados puramente cientficos por parte de membros da
comunidade cientfica quando convocada para aconselhar o governo, como est sendo
constatado neste episdio, se constitui num perigo para a populao.
O balano feito em maio de 2001 indicou que mais de 100 pessoas j morreram na
Inglaterra e Frana, e que a doena j atingiu vrios pases europeus, tanto no gado quanto
na espcie humana. O fato de que carne e gado europeu foram importados por outros pases
nos ltimos anos, se constitui numa ameaa, pois os agentes infecciosos desta doena, os
prions, podem ter sido disseminados.
Ser que com a aprovao dos OGMs ocorre o mesmo que ocorreu com relatrio
sobre a vaca louca ?
Esta relao entre cientistas membros de comisses governamentais e governo deve
ser melhor definida. O recado vem da prpria populao, que j no acredita mais nas
decises governamentais sobre questes que envolvem riscos sade e ao ambiente. Este
fato no exclusividade da Inglaterra. A polmica em torno das implicaes dos alimentos
transgnicos um exemplo notrio em vrios pases.
No Brasil, a aprovao para liberao comercial da soja transgnica pela Comisso
Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio) tambm foi tomada de forma apressada? Algum
paralelo com a Inglaterra? A deciso se deu sem os dados dos estudos de impacto ambiental
nos diversos ecossistemas brasileiros e do efeito do herbicida a base de glifosate, que ser
aplicado na referida soja, na sade humana e meio ambiente.
legitimo (para a transgnia) inferir com base na ausncia de evidncia contra uma
teoria ou hiptese que aceitvel de acordo com a imparcialidade? (Lacey, 2005). Segundo
Traavik et al. (1999), este um paradoxo cientfico, pois a ausncia de evidncia jamais deve
ser tomada como evidncia da ausncia.
Os diversos interesses econmicos, o grande nmero de cientistas envolvidos e a
grande quantidade de estudos apontando, ao mesmo tempo, riscos e benefcios alimentam tal
polmica. Como assinala Lacey, a falta de clareza que envolve essas questes [relacionadas
aos OGMs] revela que esto em jogo valores, interesses e modos de vida fundamentalmente
opostos (Lacey, 2006). As consequncias das decises, ou indecises, polticas sobre
biossegurana dos transgnicos afetam diretamente a sociedade. Mais do que objeto
biolgico, os transgnicos tambm so objetos socioeconmicos, uma vez que configuram-se
em mercadoria com necessidade de propriedade intelectual (Lacey, 2007).
Neste momento, cabe uma reflexo acompanhada de um conjunto de aes, a respeito
do comportamento e das relaes entre cientistas e governo. Para evitar tais tipos de
episdios como o da vaca louca, h a necessidade de uma definio clara do papel destas
comisses, a forma de escolha, bem como transparncia nos trabalhos das mesmas.
possvel rejeitar o princpio da precauo quando a populao corre risco? Devem os
interesses maiores da populao no podem ser sobrepostos por interesses econmicos
imediatos?

5. A NECESSIDADE DE UM DEBATE PBLICO COM A SOCIEDADE

A ampla gama de implicaes que este tema dos OGM engendra, ultrapassa hoje os
limites da cincia. As questes ticas, sociais, econmicas e polticas no podem estar
dissociadas do tema e do eixo das discusses. Parte da sociedade comunga a percepo de
que este assunto est sendo conduzido de forma inadequada, como demonstram protestos de
grupos de presso e ONG. Esta percepo encontra respaldo nos episdios recentes da

101
doena da vaca louca, entre outros. Portanto, o dilogo deve ser social e extrapolar as
paredes dos laboratrios cientficos e gabinetes governamentais.
Por fim, tambm preciso avaliar os impactos sobre o domnio no acesso e uso dos
recursos genticos. Afirma-se, com freqncia, que o insumo mais importante para o novo
milnio o conhecimento. As tecnologias decorrentes deste conhecimento podero acentuar
assimetrias nas relaes econmicas e sociais entre as naes mais desenvolvidas e menos
desenvolvidas, caso no forem estabelecidos mecanismos compensatrios e regulatrios.
No se pode admitir que interesses econmicos de uma minoria se sobreponham aos
interesses maiores da sociedade.
Contudo, os recursos genticos no tero papel menos importante que o
conhecimento. Biotecnologias sem diversidade so mero exerccio acadmico, como afirma
um documento da FAO (1999). Desta forma, imperiosa a manuteno da diversidade bem
como fundamental tomar as medidas para evitar as ameaas sua eroso gentica.
As sociedades secularizadas e complexas esto dispostas a renunciar aos benefcios
da biotecnocincia? O fato que existem muitas biotecnologias e h a necessidade de avaliar
individualmente a aplicao de cada uma delas nos mais diversos aspectos.
importante ter em mente que a engenharia gentica opera com base na manipulao
do DNA de organismos vivos. Esta interveno ocorre em um nvel muito mais complexo do
que qualquer outra tecnologia j anteriormente aplicada. Esta tecnologia aplicada em um
nvel de funcionamento da natureza a respeito do qual nossa base de conhecimento cientfico
ainda insuficiente, porque deliberadamente os proponentes da tecnologia no procuram
avaliar todos os impactos, porque teriam dificuldades de lanar seus produtos.
Depois de quase 30 anos de desenvolvimento a tecnologia de OGM ainda se baseia
em processos do tipo tentativa e erro, portanto imprecisos e pouco cientficos. Assim, os
cientistas tm poucas condies de prever o comportamento do novo gene no organismo
hospedeiro, sendo inadequado chamar-se esta tecnologia de science-based. Em suma, a
engenharia gentica encontra-se em seu estgio bsico de pesquisa e cincia, sendo
prematura a liberao comercial de plantas transgnicas.

6-IMPLICAES DA CLONAGEM DE ANIMAIS E DE HUMANOS

A Dolly popularizou a questo e gerou problemas e dvidas. A Polly, que uma ovelha
com genes humanos, no recebeu ateno da mdia. A discusso sobre os xenotransplantes
(transplante de rgos de animais para seres humanos) ainda muito polmica.
A clonagem em animais mais recente que em plantas. Nos anos 60 foi obtida a
clonagem em sapos e 10 anos depois, em ratos. Em 1994 nasce Astrid, a porca transgnica
com genes humanos, que produzem uma protena de membrana, capaz de diminuir ou
mesmo eliminar os riscos de rejeio de transplantes de rgos do porco para seres
humanos. ("Porco-irmo"). Em 1997 a clonagem alcanou outros animais (ovelhas, vacas e
macacas).
A Clonagem humana vai acontecer num curto espao de tempo? Embora no seja
possvel responder esta questo de modo conclusivo, existem fatos relacionados ao assunto
que merecem reflexo:
gmeos so clones;
a clonagem animal pressionar a clonagem humana;
demandas individuais (ex: em So Paulo pai que perde filho em acidente quer um clone;
me doa vulo para filha gerar neto; mulheres podem gerar filho sem fecundao);
a terapia gnica com clulas somticas quase uma realidade;

102
 fertilizao in vitro (ou bebs de provetas) - Em 1780 na Inglaterra foi feita a primeira
tentativa de inseminao artificial com o esperma do marido. Mais tarde, em 1884 foi feita
a inseminao com esperma de um doador. Em 1978, o primeiro beb de proveta. No
Brasil, nasce em 1984 o primeiro beb (uma menina que hoje tem 17 anos. Os bebs de
provetas, uma realidade nos anos 1980 da realizao de uma idia surgida duzentos anos
antes.
doao de rgos - crianas so geradas para doao de medula a irmos;
clonagem de embries humanos no utilizados para reproduo (por serem defeituosos)
at o estdio de 32 clulas (Science, 262:652-653, 1993);
os xenotransplantes (transplantes de rgos de animais para humanos);
recomposio de rgos humanos via cultura de tecidos (clonagem);
bebs com material gentico de duas mulheres (impropriamente denominados de
geneticamente modificados) criana gerada com a fertilizao por um espermatozide de
um vulo contendo genoma nuclear da me e mitocndrias de uma doadora.
Entretanto tanto a engenharia gentica em clula germinal humana, zigoto humano e
embrio humano como a clonagem humana esto proibidos no Brasil, pelo Art. 6o da Lei da
Biossegurana (Lei n 11.105).
Em1996, a Resoluo 196/96 de 16/10/96 Cria Conselho Nacional de tica de
Pesquisa e Comits de tica de Pesquisa Institucional (CEPI) com pelo menos 6 membros. Os
CEPI passaram (i) a ser co-responsvel pelas decises e a ter as funes de (ii) consultoria e
(iii) educao. Cada comit deve ser registrado no Ministrio da Sade. Na UFSC foi criado o
Comit de tica em Pesquisa com Seres Humanos (CEPSH-UFSC), que um rgo
colegiado interdisciplinar, deliberativo, consultivo e educativo, vinculado Universidade
Federal de Santa Catarina, mas independente na tomada de decises, criado para defender
os interesses dos sujeitos da pesquisa em sua integridade e dignidade e para contribuir no
desenvolvimento da pesquisa dentro de padres ticos. Mais tarde, em 1999, a UFSC institui
a Comisso Interna de Biossegurana (CIBio) composta de 5 membros.

Porque a discusso continua?

1) que anteriormente no havia massa crtica para a discusso. No incio do sculo havia
em torno de 8 mil cientistas e qumicos na Europa. Nos anos 80 este nmero cresceu para
mais de 5 milhes, com a incluso dos engenheiros. Portanto, a cincia e a tecnologia so
consideradas dois dos principais componentes da cultura contempornea.
2) O potencial das tecnologias pode reprogramar o cdigo gentico, e conseqentemente a
vida dos organismos.
3) A existncia de vrios conflitos decorrentes de diferentes interesses.
4) A gerao da Dolly popularizou a questo, mas provocou problemas e dvidas.
5) A percepo pblica, aps o episdio da vaca louca;
6) Os possveis riscos associados aos alimentos transgnicos.

7- TERAPIA GENTICA COM VETORES RECOMBINANTES NA ESPCIE

HUMANA
Terapia gentica ou gnica - diz respeito possibilidade de corrigir defeitos ou
prejuzos para a qualidade de vida saudvel de indivduos e populaes. Na viso dos
defensores da tecnologia, a terapia gentica deve ser considerada como qualquer outra
terapia, e no us-la significaria infringir os prprios princpios da beneficncia e de no-

103
maleficncia que imperam desde Hipcrates. No haveria, portanto, nenhuma objeo
moralmente relevante contra o uso da terapia gentica, desde que seja tambm respeitados o
princpio da autonomia do consumidor e o princpio da justia (ou de eqidade).
Contudo, h objees de cunho religioso e de cunho naturalista, que no consideram
adequadamente o ponto de vista segundo o qual a natureza humana algo dinmico,
suscetvel de ser remoldado pela prpria competncia biotecnocientfica em rpida expanso.
H, contudo, uma objeo mais pertinente que refere-se a terapia gentica aplicada a linha
germinal. Neste caso, a alegao que as conseqncias a mdio e longo prazos so
amplamente desconhecidas. H tambm outras objees. Ainda no se conhecem os efeitos
colaterais da terapia gnica na espcie humama.
Cientistas como Richard Lewontin, diz em seu livro a Triple Helix (2000), que a
expresso fenotpica resultante da ontogenia de um indivduo. Ou seja, depende da
composio gentica, dos eventos ao acaso durante a ontogenia e do ambiente. No atual
estgio de conhecimento, pouco ou nada adiantar a disponibilidade de uma seqncia de 3
bilhes de pares de bases.
O primeiro teste de terapia gentico foi feito em 1999, por cientistas da Penn University
em Jesse Gelsinger, um jovem de 18 anos, com deficincia em uma enzima. O gene para
controlar o metabolismo da amnia (gene para ornithine-transcarbamylase - OTC) foi
introduzido no Vetor adenovirus. Este virus GM foi aplicaddo em Jesse. O gene invadiu no s
o fgado (alvo), mas muitos outros rgos, o que causou uma resposta sistmica inflamatria.
A temperatura do paciente alcanou 104,5 F. A dose do vetor foi de 38 trilhes de partculas
virais - somente 1% alcanaram as clulas do fgado que era o alvo. Os cientistas da Penn
University no compreenderam ainda o que aconteceu com Jesse Gelsinger, que veio a
falacer em 24h aps o inicio do tratamento (Science, 1999).
Trs anos mais tarde, outra tentativa. Um paciente francs de terapia gnica
desenvolveu uma forma de cncer. Este fato iniciou um debete global de como avaliar os
riscos que esto expostos os pacientes de terapia gentica. (Nature, 420, p.116-118,
14/11/2002).
Em outra tentativa, a pessoa sofria de artritis reumtica. Recebeu duas doses do vetor
- Vrus AAV (adeno-associated virus) que continha o gene que codifica para uma protena
que inibe o fator de tumor necrtico (TNF-a), uma citoquina pr-inflamatria. Esta paciente
tambm faleceu. A investigao sobre a morte de uma mulher de 36 anos num experimento
de terapia gnica revelou uma complexa tragdia, mas no conseguiu ser claramente
conclusivo se o experimento deveria ser condenado ou responsabilizado. Ela morreu 22 dias
aps tomar a segunda dose do gene curador (Science, v.317, 21/09/2007, p.1665).
Outras tentativas ainda foram feitas, at o momento sem grande sucesso.

8. O QUE SE ESPERA DOS PROFISSIONAIS DA BIOLOGIA E DA AGRONOMIA?

1) que se informe com base no acesso ao conhecimento cientifico de pesquisas
independentes;
2) uma atitude crtica e imparcial face aos riscos e s potencialidades;
3) uma atitude eticamente responsvel, engajada em acompanhar individual e publicamente
os atos da biotecnocincia e em praticar tanto uma "sabedoria prudencial" quanto uma
preveno eficaz;
4) obedincia as normas legais e precaucionrias.
Como as naes e os grupos internacionais movem-se na direo do desenvolvimento
ou evoluo das normas de biossegurana, essencial que existam mtodos cientficos para
avaliar os riscos associados com as introdues na agricultura (Barton et al., 1997). O estado
de valores do pesquisador to importante para a qualidade da cincia que produz quanto
sua titulao, competncia metodolgica e capacitao tcnica (Azevedo, 1995).

104
 A biotica deve identificar racionalmente e responsavelmente as implicaes sociais e
culturais das descobertas nas cincias da vida concernentes a sade, agricultura, alimentos,
ambiente e estratgias de desenvolvimento. As aplicaes da biotecnologia no podem ser
restritas a um territrio. Ento a biotica, inevitavelmente, tem uma dimenso internacional, o
que no quer dizer que a dimenso nacional deve ser relegada (Kutukdjian, 1997).
dever dos cientistas atuar como debatedores, decodificadores e facilitadores deste
debate abrangente e polmico, atual e de extrema importncia para o pas. Anlises com
bases em dados cientficos evitam a promiscuidade dos debates e permitem a distino entre
cincia e crena.

9. CONLUSES
No deve ses admitido que questes da mais alta relevncia como a vida, a sade e a
morte do homem e de componentes ambientais, sejam decididas por pequenos grupos de
cientistas, na presena de incertezas e interesses econmicos de uma minoria em detrimento
dos interesses maiores da sociedade..

105
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