INTRODUCCIN

Entre las caractersticas qumicas que rutinariamente realizamos a las muestras

de orina en el laboratorio clnico tenemos: pH, protenas, glucosa, urobilingeno,
bilirrubina, cuerpos cetnicos, nitritos, densidad, sangre (hemates/hemoglobina).
En los inicios del laboratorio clnico todas estas pruebas necesitaban mtodos
engorrosos y laboriosos para su determinacin, pero en la actualidad contamos
con las TIRAS REACTIVAS, las cuales son un recurso muy valioso, por ser
prcticas y de fcil ejecucin.

Aunque actualmente an se recorre a esos mtodos engorrosos cuando no se

dispone de las tiras reactivas o cuando se necesita una mayor sensibilidad
especificidad. Adems es necesario conocer estos procedimientos manuales a fin
de entender sus fundamentos que son esenciales en la interpretacin clnica de
los resultados obtenidos con estas tcnicas.

En esta prctica damos a conocer algunas de esas tcnicas manuales ms

usadas dentro del laboratorio clnico. Una de las primeras pruebas a estudiar es la
usada para la deteccin de sustancias reductoras (glucosa) en la orina, mediante
el test de Benedict.

La glucosa se determina habitualmente en un anlisis de sangre (glucemia) o en

un anlisis de orina (glucosuria).

La glucosa es la principal fuente de energa para el metabolismo celular. Se

obtiene fundamentalmente a travs de la alimentacin, y se almacena
principalmente en el hgado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento
de los niveles de glucosa en sangre (glucemia).

La determinacin de glucosa en orina (glucosuria), suele formar parte del anlisis

de orina rutinario. En condiciones normales, no debera hacer glucosa en la orina,
pero cuando la cantidad en sangre supera un determinado limite empieza a sr
eliminada a travs del rin con la orina.

Cuanto ms cantidad de glucosa haya en la sangre, ms se eliminar por la orina.

La determinacin en orina es menos exacta y menos til que la determinacin en

sangre.
OBJETIVOS

- Aprender la tcnica correspondiente al momento de usar una tira reactiva.

- Mediante la prueba de Benedict reconocer la presencia de glucosa en orina

(sustancia reductora), e identificar las variantes que tienen estas al evaluar un
paciente diabtico.

- Comparar la calidad de resultados de las diferentes pruebas empleadas y

analizar el porqu la prueba de Benedict tiene un nivel de especificidad superior al
de las tiras reactivas

IDENTIFICACIN DE AZUCARES REDUCTORES EN ORINA. PRUEBA DE

BENEDICT.

La glucosa es un monosacridos que no debe estar presente en las muestras de

orina, esto ocurre cuando se traspasa su umbral renal y es frecuente en los
pacientes diabticos o con trastornos en el metabolismo de los carbohidratos.

La prueba de Benedict es otra de las reacciones de oxidacin, que como

conocemos, nos ayuda al reconocimiento de azucares reductores, es decir,
aquellos compuestos que presentan su OH anomrico, como por ejemplo la
glucosa, lactosa, maltosa o celobiosa, en la reaccin de Benedict, se puede
reducir el Cu+2 presenta un color azul, en un medio alcalino, el in cprico
(otorgado por el sulfato cprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo
aldehdo del azcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observa como
un precipitado rojo ladrillo correspondiente al oxido cuproso (Cu2O), que precipita
de la solucin alcalina con un color rojo-naranja, a este precipitado se lo considera
como la evidencia de que existe en un azcar reductor.

El reactivo de Benedict est compuesto por:

- Sulfato cprico.
- Citrato de sodio.
- Carbonato anhidro de sodio.

La evidencia de la reaccin de Benedict es la formacin del precipitado Ion

Cuproso (Cu2O).

Cu+2 ------------------------------------ Cu+1

Ion cprico pasara ----------------------- Ion cuproso

Preparacin del Reactivo de Benedict.

1. Disolver los cristales de sulfato cprico por calentamiento en 100 ml de

agua destilada (solucin A).

2. Disolver el citrato trisdico y el carbonato sdico aproximadamente en 800

ml de agua (solucin B).

3. Aadir la solucin A lentamente a la solucin B, removiendo

constantemente.

4. Completar a 1000 ml.

PROCEDIMIENTO PARA PRUEBA DE BENEDICT

1. Colocar 5 ml de reactivo en un tubo de ensayo 13 x 100.

2. Agregar 8 gotas de orina y homogenizar.

3. Colocar el tubo en llamas hasta su ebullicin durante 1-2 minutos.

4. Dejar que se enfri lentamente.

La prueba por lo general se grada en intensidad de acuerdo con lo que

sigue:

Negativa Color azul claro, puede formarse un precipitado azul.

Trazas Color verde azulado.

1+ Color verde, precipitado verde o amarillo.

2+ Color amarillo o verde, precipitado amarillo.

3+ Color amarillo-anaranjado, precipitado amarillo-naranja.

4+ Color amarillo rojizo, precipitado rojo ladrillo o rojo.

 1. Este procedimiento es muy sensible, y puede detectar hasta
concentraciones de hasta 0.02% o del 0.05% de sustancias reductoras, y
en el otro extremo de hasta 4%.

2. Debido a su extrema sensibilidad, individuos sanos pueden presentar una

reaccin con trazas.

Resultados falsos positivos:

El reactivo de Benedict es tambin reducido por glucornidos y por el cido

homogenetstico.

Dosis masiva de diferentes frmacos incluyendo penicilina, estreptomicina,

salicilatos, oxitetraciclina, polivinilpirrolidona, dextrn y el cido para-amino
saliclico pueden dar reacciones positivas falsas.

Los conservadores urinarios, formalina y el formaldehdo, son sustancias

reductoras, de modo que su presencia puede dar lugar a resultados falsos
positivos, stos tambin son posibles, segn Bradley y colaboradores, con
la ebullicin prolongada durante el procedimiento.

Una proteinuria muy importante y considerables depsitos de urato pueden

tambin interferir la reaccin, dando resultados falsos positivos.

Las protenas pueden eliminarse mediante su precipitacin y filtrado de la

orina antes de realizar el procedimiento.

Resultados falsos negativos

Slo son posibles si el procedimiento no ha sido seguido correctamente.

Resultados de nuestra Prctica

Elva => 1+----- color verde, precipitado verde o amarillo.

Mirian => Negativo----- color azul claro.

Kathy => 1+ ----- color verde, precipitado verde o amarillo.

PROCEDIMIENTO PARA LA TIRA REACTIVA

1. Recolectar muestras de orina de distintas personas con diabetes.

2. Identificacin de:

Aspecto:

Kathy => transparente

Elva => turbio

Mirian => ligeramente turbio

Color:

Kathy => amarillo

Elva => amarillo claro

Mirian => amarillo claro

3. Transferir orina del depsito recolector hacia un tubo de ensayo de 13 x

100.

4. Llenar el tubo hasta antes de 1 cm.

5. Colocar la tira reactiva hasta que est total mente sumergida y retirar
inmediatamente y secar el exceso de orina en papel absorbente.

6. Inmediatamente realizar la lectura empezando por el parmetro de Ph y

Densidad y luego los que siguen pero dejando reaccionar por dos minutos
los parmetros de Sangre y Leucocitos.

Resultados:

Kathy Leucocitos: 500 leu/ul

PH: 6

Densidad: 1.005 Mirian

Leucocitos: 25 leu/ul PH: 6

Elva Densidad: 1.005

PH: 6 Leucocitos: 500 leu/ul

Densidad: 1.010

Protenas: trazas

Bilirrubina: ++
CONCLUSIONES

- El uso de las tiras reactivas es una gran ayuda en el examen de orina

pero que esto solo es un test rpido y da resultados no especficos.

- Para llegar a determinar la presencia de glucosa en orina la tcnica de

laboratorio ms efectiva es la prueba de Benedict.

CUESTIONARIO

1. Qu es el recuento de Addis y en qu consiste?

Es un anlisis de orina que permite valorar la funcionalidad renal

mediante el estudio microscpico de los sedimentos urinarios. La prueba
consiste en el conteo celular y de cilindros en la orina centrifugada,
donde el paciente es sometido a una dieta restrictiva de lquidos, para
luego recolectar la orina, la cual debe hacerse de forma cronometrada
en 2 h, 4 h o 24 h. La determinacin de proteinuria minutada debe
hacerse por el mtodo de Biuret. La prueba debe su nombre al cientfico
estadounidense Thomas Addis, que fue quien la desarroll en 1926.

Las cifras o valores normales son:

Protenas: menor a 0.03 mg/min.

Hemates y leucocitos: menor 1000/min.
Cilindros: menor 250/min.

2. Cmo se prepara el Reactivo de Exton y cul es su utilidad?

Solucin de 200 g de sulfato de sodio y 50 g de cido sulfosaliclico en

1.000 ml de agua destilada.

Se usa para la determinacin cualitativa de la albmina en la orina.

3. Qu pruebas bioqumicas se utilizan para determinar la presencia de

Urubilinogeno o Urobilina en orina? Describa el mtodo.

Se usa el Mtodo con reactivo de Ehrlich

Objetivo: Determinar cualitativamente urobilina y Urubilinogeno en

muestras de orina.
Fundamento: Se basa en la reaccin colorimtrica del Urubilinogeno en
presencia de paradimetilaminobenzaldehdo que origina un color rojo
brillante.
Reactivo necesario:
Reactivo de Ehrlich.
Solucin de cloruro de calcio al 10%.
Aparatos, utensilios y medios de medicin.
Tubos plsticos de 10 ml graduados de centrfuga.
Tubo de ensayo de 13 x 100 15 x 125 mm.
Gradilla para los tubos de ensayos.
Pipetas graduadas de 5 ml.
Gotero.
Centrfuga.
Muestra: Orina de miccin espontnea ms de 5 ml de la misma.

Procedimiento:
Si la muestra contiene pigmentos biliares, mezclar cuatro partes de
orina con una parte de solucin de cloruro de calcio al 10% y filtrar.
En un tubo para ensayo 2 ml de orina filtrada o centrifugada a 1500 rpm
durante 5 min.
Aadir 3 o 4 gotas de reactivo de Ehrlich.
Dejar reposar de 3 a 5 min.
Si la muestra contiene gran cantidad de urobilingeno, aparecer un
color cereza, si la cantidad es normal el color ser ligeramente rosado.
Si no aparecen dichos colores debe dejarse la reaccin en reposo ms
tiempo y calentarse. Si tampoco aparece el color rosado o cereza la
muestra no contiene urobilingeno.
Esta prueba puede hacerse semi-cuantitativa realizando diluciones
seriadas de la muestra de orina filtrada y realizando el proceder. Se
informa como positiva a la ltima dilucin.

Informe de los resultados:

Positiva: Si hay presencia del color caracterstico.
Negativa: Ausencia del color caracterstico.
Fuentes de Error.
1. No homogenizar bien las muestras de orina.
2. Nivel de adiestramiento del tcnico.
3. Limpieza de la cristalera.
4. No centrifugar la orina antes de proceder.