COLEGIO PERUANO NORTEAMERICANO ABRAHAM

LINCOLN

PROGRAMA DEL DIPLOMA

Biologa Nivel Medio: Informe de Laboratorio #3

Efecto de un factor limitante en la actividad enzimtica de la catalasa

Alumno: Sebastian Perez

Profesor: Rosa Dvalos

IVC
 La concentracin de perxido de hidrogeno como estimulante
de la produccin de oxigeno

I. Introduccin
Las enzimas son protenas, que actan como catalizadores y controlan los procesos metablicos
de la clula. Una enzima hace que una reaccin qumica, transcurra a mayor velocidad, que sin la
presencia de la enzima. En estas reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas
denominadas sustratos, las cuales se convierten en molculas diferentes denominadas
productos. Casi todos los procesos en las clulas necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas
significativas. Existen factores fsico-qumicos que pueden modificar la actividad enzimtica tales
como: la temperatura, pH y la concentracin del substrato.
II. Objetivos
Demostrar que la produccin de oxigeno es afectada por la concentracin del perxido de
hidrogeno
Se medir la produccin de oxgeno gaseoso a medida que se destruye el perxido de
hidrgeno por la accin de la enzima catalasa

III. Marco terico

Las enzimas
Las enzimas son protenas* globulares que funcionan como catalizadores biolgicos o
biocatalizadores: aceleran espectacularmente la velocidad de las reacciones bioqumicas sin
alterarse ellas mismas. Adems, las sustancias sobre las que actan y que se transforman en
productos se denominan sustratos.
Enzima catalasa:
La catalasa en una enzima que la podemos encontrar en muchos organismos vivos, y cataliza
la reaccin de descomposicin del perxido de hidrgeno en agua y oxgeno.

Actividad enzimtica
La catlisis enzimtica implica desplazamientos de molculas y la colisin de los sustratos con
el sitio activo.
Los sustratos y los enzimas se mueven continuamente en todas direcciones en un medio
acuoso.
 Si el movimiento al azar de las molculas hace que la trayectoria y la orientacin del sustrato
se aproxime y se coloque cerca del sitio activo del enzima, la unin ES se producir.
Para que la catlisis tenga lugar, el sustrato o sustratos de la reaccin tienen que unirse
temporalmente a la enzima formando el complejo enzima-sustrato (ES).

Enzimas, sustratos y sitios activos

Sustrato: reactivo en una reaccin bioqumica.
Enzima: protena globular que acta como catalizador en las reacciones bioqumicas
acelerando su velocidad.
Sitio activo: regin de la superficie del enzima a la que se unen los sustratos y que cataliza la
reaccin.

Actividad enzimtica afectada por la concentracin de sustrato

Las enzimas no pueden catalizar reacciones hasta que el sitio activo quede libre, ya que las
molculas de sustrato han de unirse a l.
Al aumentar la concentracin de sustrato las colisiones con los sitios activos de las enzimas
tambin aumentarn, y la velocidad de la reaccin se incrementar. Pero cada vez habr ms
sitios activos ocupados con otras molculas de sustrato (suponiendo que la cantidad de
enzima no vare), por lo que la velocidad de la reaccin comienza a disminuir hasta llegar un
momento en que todos los sitios activos de las enzimas estn bloqueados, y la velocidad de
reaccin llega a un mximo que no se puede superar llega a causar que el enzima se sature.
Recientemente, el Sistema Internacional de unidades1 (SI) ha definido la unidad de actividad
enzimtica como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta
unidad se llama katal (kat).

Perxido de hidrogeno
El perxido de hidrgeno es uno de los productos del metabolismo celular en diversos
organismos, pero dada su potencial toxicidad, es transformado enseguida por la enzima
catalasa, es por eso que se destruye el perxido de hidrogeno transformndolo en agua y
oxgeno.

1
http://www.sc.ehu.es/sbweb/fisica/unidades/unidades/unidades.htm Sistema Internacional de Unidades
 Caractersticas del perxido hidrogeno de (Na2O2)
Es un compuesto qumico que viene representado por la frmula H2O2. En su forma pura,
no muestra color, adems de encontrarse en estado lquido, pero es ligeramente ms viscoso
que el agua, debido a la cantidad de puentes de hidrgeno que se pueden formar.2

Produccin de oxigeno
La funcin de la catalasa es la descomposicin del perxido de hidrogeno en agua y oxigeno
como una funcin protectora contra determinados microorganismos patgenos ya que las
bacterias anaerobias mueren al estar en contacto con oxgeno.
IV. Pregunta de Investigacin
De que manera la produccin de oxigeno vara dependiendo de la concentracin de perxido de
hidrogeno en el extracto de la enzima catalasa?

V. Variables

1. Variable Independiente:
La variable independiente ser la concentracin de perxido de hidrogeno en el extracto de la
enzima catalasa, porque debido a su toxicidad la enzima cataliza la descomposicin y a medida
que su concentracin aumente el oxgeno producido va a ser mayor.

2. Variable Dependiente:
Para este experimento la variable dependiente ser la produccin de oxgeno, ya que esta
depende de la concentracin de perxido de hidrogeno ya que si uno aumenta el otro tambin
como medida de la enzima.

3. Variable controlada:

Variable de Importancia
control

2
https://www.lifeder.com/peroxido-de-hidrogeno/
 Cantidad de la Al ser siempre la suma entre la cantidad de agua y de perxido de hidrogeno la
solucin de misma(10ml) permitir que la concentracin sea el nico valor que afecte a la produccin
perxido de de oxgeno.
hidrogeno
preparada (10ml)

Tiempo (60) El tiempo tiene que ser igual para todas las repeticiones ya que as es como se puede ver
una diferencia entre las concentraciones de sustrato.

Cantidad de La cantidad de enzimas es un valor que afecta a la velocidad de reaccin y por lo tanto a
extracto de la produccin de oxigeno as que al controlar esta variable ser ms fcil medir la
enzima 5 (ml) produccin de oxigeno solo afectado por la concentracin.

VI. Materiales

Los materiales utilizados en este experimento fueron:

- 1 computadora de escritorio
- 1 sensor Vernier, ms el sensor de produccin de oxigeno
- 1 probeta 100ml
- H2O2, perxido de hidrogeno
- Hielo
- 1 mortero con piln
- Gasa
- 1 embudo
- 1 vaso de precipitado 100ml
- 1 envase, reemplazando al matraz de 100ml
- Pinzas
- Papel toalla
- Mandil
- Guantes de seguridad
- Sensor de oxigeno
- Calculadora
- Cuchillo
- 50g de hgado
- Agua destilada

VII. Descripcin del mtodo

1. En una probeta preparar series de diluciones del sustrato perxido de hidrgeno, usando
la siguiente tabla:

Concentracin final de Perxido de hidrgeno

Volumen final. Agua (mL)
la solucin (mL)

10 mL 0% 0 10

10 mL 10% 1 9

10 mL 20% 2 8

10 mL 30% 3 7

10 mL 40% 4 6

10 mL 50% 5 5

10 mL 60% 6 4

10 mL 70% 7 3

10 mL 80% 8 2

10 mL 90% 9 1

10 mL 100% 10 0

2. La enzima se prepara de la siguiente manera: 50 g hgado se mezcla con 50 mL de agua

destilada helada y se homogeniza en una licuadora durante 30 segundos. Luego esta
solucin se coloca en un vaso de precipitado dentro de una cubeta con hielo triturado.
Este extracto se filtra a travs de una gasa y se repite hasta completar un volumen total
de 100 mL. La concentracin del extracto es arbitrariamente fijada en 100 unidades / mL
La enzima debe mantenerse en hielo en todo momento.
3. Utilizar el plumn y anotar las soluciones del sustrato en las 11 repeticiones, tal como
sigue: 0%, 10%, 20%, 30%, 40% y 50%, 60%, 70%, 80%, 90% y 100%
4. Agregar a cada envase los 10 ml de la solucin de perxido de hidrgeno preparada en
la probeta, tomando en cuenta la concentracin indicada en el matraz.
5. Usando una pipeta de goteo limpia, aadir 5 ml del extracto de la enzima a cada matraz.
Nota: Asegrese que la enzima no caiga por los lados del matraz.
6. Colocar el tapn en el matraz cada vez que agregas la enzima y agtelo bien para lograr
la mezcla completa del contenido. Debe comenzar la reaccin. El prximo paso debe
realizarse lo ms pronto posible.
7. Hacer clic en el botn Iniciar toma de datos para comenzar la adquisicin de datos.
La toma de datos terminar en 1 minuto.
8. Luego se lava el envase y luego seca.
 9. Hacer 5 repeticiones para cada solucin de perxido de hidrgeno. Para ello debes repetir
los pasos 1 al 8 a excepcin del 2.

VIII. Resultados
Datos cualitativos:
Entre los datos cualitativos podemos ver que la reaccin empez con un pequeo
burbujeo y a medida que la concentracin aumento el burbujeo fue ms violento hasta
un cierto punto. Es decir, empez violento en un inicio y luego fue disminuyendo hasta
quedar una solucin acuosa. Esta es un lquido no combustible, pero el calor y el oxgeno
liberados durante la descomposicin pueden inflamar los materiales combustibles.
Datos cuantitativos:

Datos brutos:

Tabla#1: Muestra los datos brutos obtenidos de la produccin de oxigeno por cada
porcentaje de perxido de hidrogeno

Porcentaje de Produccin de oxigeno (0.01%)

Perxido de
hidrogeno (%)
R1 R2 R3 R4 R5

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

10 1.35 1.22 1.05 0.68 0.74
20 1.35 1.95 0.89 2.00 1.79
30 2.38 1.44 1.95 1.73 2.24
40 3.80 3.26 2.86 3.08 4.53
50 2.54 3.72 3.50 3.56 4.39
60 4.44 3.78 4.30 5.53 4.80
70 9.5 8.22 9.18 7.45 7.28
80 12.53 12.53 12.50 12.41 12.36
En la siguiente tabla se pueden ver los valores brutos los cuales fueron 5 repeticiones por cada
porcentaje de perxido de hidrogeno empezando de 0% hasta 80% teniendo muchos valores
pero que finalmente se haya una correlacin entre estos.

Datos procesados:

Tabla #2: Muestra la media y desviacin estndar de la produccin de oxigeno por

cada porcentaje de perxido de hidrogeno

Porcentaje Produccin de oxigeno (0.01%) Desviacin

de Perxido estndar
de
hidrogeno R1 R2 R3 R4 R5

(%)

0 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

10 1.35 1.22 1.05 0.68 0.74 1.00 0.262
20 1.35 1.95 0.89 2.00 1.79 1.60 0.470
30 2.38 1.44 1.95 1.73 2.24 1.95 0.340
40 3.80 3.26 2.86 3.08 4.53 3.51 0.599
50 2.54 3.72 3.50 3.56 4.39 3.54 0.593
60 4.44 3.78 4.30 5.53 4.80 4.57 0.581
70 9.5 8.22 9.18 7.45 7.28 8.33 0.892
80 12.53 12.53 12.50 12.41 12.36 12.47 0.077

En cuanto a la tabla#2 nos muestra los datos procesados del experimento los cuales son la
media y la desviacin estndar de las 5 repeticiones por cada porcentaje de perxido de
hidrogeno. Podemos ver que entre el 0% y el 40% que aumento de 0 a 3.51 la produccin de
oxigeno va aumentando de a pocos en comparacin entre el 40% y el 80% que aumento 8.96
entre los valores de 3.51 a 12.47. La diferencia entre estos dos es de 5.45, es decir entre 40%
y 80% aumento 5.45 ms que entre 0% y 40%. En cuanto a la desviacin estndar las
 repeticiones por cada porcentaje de perxido de hidrogeno fueron cercanas, pero hubo un
porcentaje que si tuvo una desviacin alta el cual fue 70% teniendo el valor de 0.892.

Grafico #1:

Concentracion de H2O2 vs Produccion de oxigeno

14
12.47
12

10
Produccion de oxigeno

8.33
8

6
4.57
3.51 3.54
4

1.6 1.95
2 1
0
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80
-2
Concentracion de H2O2(%)

Del grafico se puede concluir que la produccin de oxigeno fue aumentando, al igual que la
concentracin de H2O2 pero sin embargo, a partir del 50% fue aumentando de manera
violenta.

IX. Anlisis

En el grafico realizado, se puede observar una correlacin entre los datos tomados en cuenta para
realizarlo que son la concentracin de H2O2 y la produccin de oxgeno, desde el 0% de la
concentracin fue aumentando la produccin logrando llegar de 0 a 12.47 en el 80% de concentracin.
Sin embargo, estos valores tuvieron un comportamiento extrao ya que hasta el 40% fue aumentando
en una magnitud baja, despus aumento de una manera violenta ya que cuando hay una mayor
concentracin de catalasa se puede observar una reaccin violenta. Estos datos tuvieron correlacin
porque al momento de aumentar la concentracin de H2O2 tambin aumentaba la cantidad del
producto que en este caso viene a ser H2O y O2, es por eso que ocurre una mayor produccin de
oxgeno. Aplicando las formulas siguientes se hallaron la media y la desviacin estndar de los datos
 obtenidos y podemos ver que los datos no fueron tan distantes entre ellos por lo que la validez de
estos es correcta.

Promedio ( ):
+ + + +
=

1. 10% de perxido de hidrogeno:

(1.35+1.22+1.05+0.68+0.74) 5 = 1.00
De la misma manera se aplic la misma frmula para las dems soluciones.

Desviacin estndar ():

( ) + ( ) + ( ) + ( ) + ( )
=

. =

1. 10% de perxido de hidrogeno:

D.E=((1.35 1) + (1.22 1) + (1.05 1) + (0.68 1) + (0.74 1))/5 =

0.262
De la misma manera se aplic la misma frmula para las dems soluciones.
X. Conclusin
En el experimento realizado se pudo demostrar que a mediad que la concentracin del perxido
de hidrogeno fue aumentando la produccin de oxigeno tambin porque este al ser
descompuesto catalizado por la catalasa libera oxgeno y agua y si su concentracin es mayor el
producto tambin va a ser mayor. Es por eso que se pudo apreciar la presencia de burbujeo
cuando aumento la concentracin porque aumento el oxgeno de manera violenta. Hasta donde
pudo llegar la concentracin se vio que siempre fue aumentando y no paro, no obstante, solo se
lleg hasta el 70% de la concentracin del perxido de sodio. Podemos ver que el agua en este
experimento cumpli un rol importante al diluir el perxido de sodio para poder llegar a demostrar
que la produccin de oxigeno si es afectada por la concentracin de hidrogeno y mientras este
crece el otro tambin.
 Resultados:
En cuanto a los resultados pude encontrar una relacin entre la produccin de oxigeno con la
concentracin del perxido de sodio ya que mientras la concentracin aumentaba la produccin
tambin y progresivamente. Sin embargo, hubo casos en los que los valores fueron cercanos a
iguales y que entre estos la diferencia era muy grande, pero es parte de la experimentacin as
que son vlidos los datos en general
Limitaciones:
1. Primero la limitacin ms grande fue que no todos los datos empezaron con la misma
produccin de oxigeno haciendo que esta no sea una variable controlada dificultando medir
de manera eficaz la produccin de oxigeno dependiendo nicamente de la concentracin de
solucin
2. Luego no se midi la temperatura de cada solucin generando la posibilidad que sea otro
factor que afecte a los datos, por lo tanto, no fue controlada y fue tomada como temperatura
ambiente sabiendo que la temperatura es un factor fundamental de la velocidad de reaccin.
3. El envase que reemplaza al matraz al momento de lavarlo para utilizarlo en la siguiente
repeticin tiene como residuo agua el cual puede afectar en la reaccin.

Recomendaciones:

1. La produccin de oxigeno puede empezar igual para todos si es que es un envase especial y si
se aplica una forma de poder tapar el envase en un cierto tiempo para que esta sea una
variable controlada.
2. La temperatura se puede controlar o bien calentando y enfriando la solucin para que estn
todos a una misma temperatura.
3. Se recomienda utilizar un matraz por cada repeticin para evitar el agua como residuo,
XI. Bibliografia

BIOMOLECULAS, actividad enzimtica y Clculo de la KM y de la Vmax de un enzima (en lnea)

http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz3.htm#ae
(Citado el 18 de noviembre, 2017)

SIMULADOR DE CINTICA ENZIMTICA, Bionova (en lnea)

http://www.bionova.org.es/animbio/anim/cinetica.swf
(Citado el 18 de noviembre, 2017)