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Aminocidos y
protenas
Duodcima prctica de Lab. Qumica Orgnica
Los ensayos que se realizaron en esta prctica son: reaccin de ninhidrina para identificar la
presencia de aminocidos libres, reaccin xantoproteica, prueba de Millon para identificar restos
fenlicos, prueba para aminocidos azufrados y la reaccin de Biuret.
1. Introduccin
La protena, como su nombre indica, han sido consideradas durante muchos aos como
el componente primario de la materia viviente. Hasta mucho mas tarde no se reconoci la
gran importancia de los cidos nucleicos y han constituido materia de discusin a lo largo
de las ltimas dcadas. El principio bsico de la estructura de las protenas es bastante
simple. Consisten en largas cadenas de aminocidos enlazados unos a otro mediante
enlace pptidos. No obstante aparecen complicaciones:1) procedentes de la presencia de
alrededor de veinte tipos diferentes de radicales de aminocidos en las cadenas pptidas;
2) procedentes de la larga longitud de estas cadenas.
2. Objetivo
3. Metodologa
Materiales/Solventes:
Triptfano
Glicina
Cistena
Albumina
Tirosina
Muestra problema
Solucin de ninhidrina
Procedimiento:
Materiales/Solventes:
Triptfano
Glicina
Cistena
Albumina
Tirosina
Muestra problema
Solucin de acido ntrico concentrado.
Procedimiento:
I. Colocar en 6 tubos de prueba 1 mL de la muestra a ensayar.
II. Aadir a los tubos de ensayo 1 mL de acido ntrico concentrado.
III. Llevar a bao mara durante 3 minutos.
IV. Agregar 1 mL de hidrxido de sodio al 20% a cada uno de los tubos.
Observar y anotar.
Materiales/Solventes:
Triptfano
Glicina
Cistena
Albumina
Tirosina
Muestra problema
Reactivo de Millon
Procedimiento:
Triptfano
Glicina
Cistena
Albumina
Tirosina
Muestra problema
Solucin de NaOH al 40%
Acetato de plomo al 10%
Procedimiento:
I. En cada uno de seis tubos de ensayo agregar 1 mL de: triptfano,
glicina, cistena, albumina, tirosina y MP.
II. Adicionar a todos los tubos 8 gotas de NaOH al 40% y llevar a bao
mara.
III. Aadir 5 gotas de acetato de plomo al 10%. Observar si existe algn
cambio de color.
Muestras a ensayar Color antes de la reaccin Cambio de coloracin
Triptfano Translcido Translucido
Glicina Translcido Translucido
Cistena Translcido Marrn suave
Albumina Blanco lechoso Marrn intenso
Tirosina Translcido Translucido
MP Translcido Marrn dbil
Materiales/Solventes:
Albumina
Glicina
Muestra problema
Solucin de NaOH
Sulfato de cobre CuSO4
Procedimiento:
I. En cada uno de 3 tubos de ensayo agregar 1 mL de: glicina, albumina,
y MP.
II. Aadir 20 gotas de NaOH al 10%.
III. Luego adicionar 2 gotas de CuSO4. Observar el color que se forma.
Muestras a ensayar Color antes de la reaccin Cambio de coloracin
Glicina Translcido Celeste
Albumina Blanco lechoso Violeta
MP Translcido Violeta
F. Desnaturalizacin de la albumina:
Materiales/Solventes:
Albumina
Etanol
Acido clorhdrico HCl
Acido ntrico HNO3
Hidrxido de sodio NaOH al 40%
Procedimiento:
Materiales/Solventes:
Agua
Albumina
Acido clorhdrico
Hidrxido de sodio
Solucin de CuSO4
Procedimiento:
I. Agregar a 6 tubos las siguientes soluciones:
a. 3 mL de H2O
b. 3 mL de albumina
c. 3 mL de H2O + 3 gotas de HCl
d. 3 mL de albumina + 3 gotas de HCl
e. 3 mL de H2O + 3 gotas de NaOH
f. 3 mL de albumina + 3 gotas de NaOH
II. Importante: observar que se formaron 3 parejas de tubos. Los ensayos
sin albumina son necesarios para observar si el efecto observado en
los tubos de prueba con albumina se debe a la precipitacin de la
protena o es el hidrxido metlico el que esta precipitando.
III. Adicionar 20 gotas de sulfato de cobre (CuCO4) al 10%.
IV. Hacer las comparaciones por parejas. Anotar los tubos donde se formo
precipitados.
Tubo de prueba Formacin de p.p. Reaccin
a No No hubo formacin de p.p.
pero si cambio de color.
b No Solo se evidencia un
cambio de color (celeste).
c No No hay formacin de p.p.
pero si hay cambio de color.
d No Cambia de color (azul
caribeo)
e Si Hay precipitacin del agua
f Si Se precipita la protena y
hay cambio de color.
Materiales/Solventes:
Albumina
Acido clorhdrico
Hidrxido de sodio
Solucin de ferricianuro
Procedimiento:
a. 3 mL de albumina
b. 3 mL de albumina + 3 gotas de HCl
c. 3 mL de albumina + 3 gotas de NaOH
4. Conclusiones
Keese R., Mller R.K., Toube T.P. Mtodos de laboratorio para Qumica
Orgnica. 1 edicin. Editorial Limusa. Mxico DF. 1990
Durst H.D. Qumica Orgnica Experimental. Editorial Revert. Espaa 1985.
Morrison Robert. Qumica Orgnica. 5 edicin. Addison Wesley
Iberoamericana. Estados Unidos. 1990.
Rodney Boyer. Conceptos en Bioqumica. International Thomson Editores.
Mxico. 2000.
Carey Francis. Qumica Orgnica. 3 edicin. editorial Mc Graw Hill. Espaa.
1999.
Holum John. Fundamentos de Qumica General, Orgnica y Bioqumica para
ciencias de la salud. Editorial Limusa. Mxico. 1999.
Solomons Graham. Qumica Orgnica. 2 edicin. Editorial Limusa Wiley.
Mxico. 2000.
Haurowitz Felix. Qumica y funciones de las protenas. Ediciones Omega.
Barcelona Espaa. 1969.
CUESTIONARIO
Ahora tenemos una protena en un medio neutro y se le aade soda (NaOH). Entonces
el medio de la protena cambia de neutro a bsico.
La queratina es una protena con estructura helicoidal, muy rica en azufre, que
constituye el componente principal de las capas ms externas de la epidermis de
los vertebrados y se encuentra en el cabello. El colgeno es una molcula
proteica que forma fibras, las fibras colgenos. Estas se encuentran en todos
los animales pluricelulares. Son secretadas por las clulas del tejido conjuntivo como
los fibroblastos, as como por otros tipos celulares. Es el componente ms abundante
de la piel y de los huesos. El acido ntrico produce una coloracin amarilla debido a la
presencia de aminocidos aromticos de la queratina y el colgeno.
Mediante la electroforesis: Las protenas son molculas cuya carga neta depende del
contenido de una serie de aminocidos (fundamentalmente acido glutamico, acido aspartico,
lisina, arginina e histidina) y del grado de ionizacin de estos al pH considerado.
La separacin depende de la densidad de carga de las molculas y, as, cuanto mayor sea la
densidad, mayor ser la velocidad de migracin en un campo elctrico hacia el polo que
determine su carga neta.
La primera etapa del proceso es la aplicacin de la muestra. En papel o acetato de celulosa,
esto se puede efectuar de forma puntual (permite el anlisis de varias muestras
simultneamente en pequeas cantidades) o longitudinalmente (permite el estudio de una sola
muestra pero en mayor cantidad). La muestra se aplica disuelta en el tampn de electroforesis,
del que est impregnado el soporte y que se encuentra en los reservorios de la cubeta, y se
deposita en una pequea zona, lo ms estrecha posible, en el centro o en un extremo del
soporte (si se conoce cul va a ser la direccin de desplazamiento de la misma) y de forma
perpendicular a la direccin del campo elctrico. Conviene evitar la proximidad de los bordes del
papel, ya que all el campo elctrico no es homogneo y se distorsionan las bandas segn
avanzan.
En los geles de agarosa, se perfora el gel con ayuda de un troquel o una pipeta de dimetro
adecuado y se elimina esa porcin por succin. La perforacin puede ser cilndrica o rectangular,
dependiendo del nmero y cantidad de muestra a analizar y la muestra se deposita en el orificio
practicado sin que llegue a rebosar. En este caso, el tampn esta embebido en el soporte
(agarosa).
La electroforesis termina cuando se haya producido la mxima separacin de los componentes
de la muestra, pero sin sobrepasar los lmites del soporte.
Todos los aminocidos que poseen un grupo amino libre reaccionan y forman dixido
de carbono, amonaco y un aldehdo que contiene un tomo de
Carbono menos que el compuesto original. Esta reaccin da lugar a la formacin de un
producto color azul o prpura (que posteriormente puede ser utilizado para cuantificar
el aminocido). En el caso de la prolina, que estructuralmente no posee el grupo amino
libre, sino un grupo imino, la
Coloracin final es amarilla. El amonaco, la mayora de los polipptidos y las protenas
pueden desarrollar coloracin en esta reaccin, pero a diferencia de los aminocidos,
no liberan CO2. Recuerde que la coloracin azulada o violeta ser proporcional a la
concentracin del aminocido.
La reaccin entre un aminocido y la ninhidrina es la siguiente: